一種恩拉霉素的精制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種恩拉霉素（Enramycin)的精制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 恩拉霉素（Enramycin)是從土壤中分離出來的放線菌Streptomyces fungicidious NO. B5477發(fā)酵產(chǎn)生的一種由不飽和脂肪酸和十幾種氨基酸結(jié)合成的多肽類 抗生素。其中氨基酸分子構(gòu)成環(huán)狀多肽結(jié)構(gòu)，脂肪酸位于多肽結(jié)構(gòu)末端，根據(jù)其末端脂肪酸 種類不同，分為恩拉霉素 A(Cltl7H138Cl2N26O31)和恩拉霉素 B(Cltl8H14tlCl2N26O 31)。通常提及的恩 拉霉素則是主要由這兩種成分組成的混合物（結(jié)構(gòu)見式1)。該藥于1966年由日本武田藥 品工業(yè)株式會(huì)社研發(fā)，1974年在日本正式注冊(cè)，其后在許多國家被注冊(cè)和廣泛使用。其中， 1993年，該藥在我國成功注冊(cè)，用于藥物飼料添加劑。恩拉霉素對(duì)革蘭氏陽性菌有很強(qiáng)的抑 制作用，長(zhǎng)期使用后不易產(chǎn)生抗藥性而且恩拉霉素內(nèi)服極不易被吸收，藥物主要通過糞便 排出體外，殘留畜禽體內(nèi)較少。除此之外，它還能改變腸道內(nèi)的細(xì)菌群落分布，有利于飼料 營養(yǎng)成份的消化吸收，促進(jìn)動(dòng)物增重和提高飼料利用率，因此被世界上許多國家推薦作為 抗生素促生長(zhǎng)劑，是一種優(yōu)良的飼料添加劑。
[0003]
[0004]目前，市場(chǎng)上使用的恩拉霉素都是恩拉霉素預(yù)混劑，其中恩拉霉素都未經(jīng)過純化。 如專利ZL201010198230. 5和CN201210120843. 6公開的方法，其都是由含有恩拉霉素的發(fā) 酵液直接進(jìn)行預(yù)混劑的制備。隨著生產(chǎn)技術(shù)的不斷發(fā)展，科研工作者正在不斷的對(duì)恩拉霉 素的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行提高。如專利CN201210433028. 5公開了一種恩拉霉素粗品的制備方法， 其產(chǎn)品純度可達(dá)到70%左右；CN201210153458. 1公開了一種通過大孔吸附樹脂純化得到 90%以上純度恩拉霉素的方法；專利ZL201010213986. 2涉及一種利用大孔弱酸性陽離子 交換樹脂分離提取恩拉霉素的方法，該方法可以使得恩拉霉素的純度達(dá)到95%以上；專利 ZL201110344875. X涉及一種從恩拉霉素發(fā)酵液種提取、分離和純化恩拉霉素的方法，該方 法的流程為將恩拉霉素發(fā)酵液進(jìn)過熱處理后，過濾，離心，收集菌體；向菌體加入甲醇溶液 后，超聲，過濾；濾液先酸化后堿化，然后脫色，脫色液過大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，用甲醇洗 脫，收集洗脫液，經(jīng)濃縮結(jié)晶后，冷凍干燥得到恩拉霉素，該方法得到的恩拉霉素的純度達(dá) 到95%左右；CN201310730536. 4公開了一種通過弱酸性和弱堿性大孔吸附樹脂聯(lián)用的方 法純化得到99%以上的恩拉霉素的方法。除此之外，ZL201210433029. X涉及一種反相層析 制備高純度恩拉霉素 A和B的方法，ZL201210159394. 6涉及一種高壓液相制備恩拉霉素標(biāo) 準(zhǔn)品的方法。
[0005] 就目前已有的技術(shù)來看，對(duì)恩拉霉素的精制方法有的采用調(diào)酸（pH為2. 0以下） 沉淀后加熱烘干的方法以致其收率太低；有的采用冷凍干燥的方法以致其生產(chǎn)成本過高； 有的采用柱層析方法增加了操作步驟，這些方法都不適合工業(yè)化生產(chǎn)。為此，本發(fā)明提供了 一種恩拉霉素的精制方法，本發(fā)明的方法具有工藝簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)，成本低廉等特點(diǎn)，得 到產(chǎn)品的純度高、收率高，更適于工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)現(xiàn)有恩拉霉素精制工藝中存在的技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種適合 工業(yè)化生產(chǎn)的恩拉霉素的精制方法。
[0007] 本發(fā)明涉及一種恩拉霉素的精制方法，本發(fā)明的方法通過調(diào)整恩拉霉素溶液中恩 拉霉素的濃度、有機(jī)溶劑的體積百分含量及溶液的PH值使恩拉霉素產(chǎn)生沉淀，從而得到高 純度的恩拉霉素產(chǎn)品。
[0008] 本發(fā)明的方法是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0009] -種恩拉霉素的精制方法，所述方法包括：
[0010] (a)使恩拉霉素溶解在含有有機(jī)溶劑的酸性水溶液中；或者
[0011] (a'）使恩拉霉素溶解在含有有機(jī)溶劑和水的混合溶劑中，接著將所得溶液的pH 值用酸調(diào)節(jié)至酸性；以及
[0012] (b)用堿調(diào)節(jié)步驟（a)或（a'）所得溶液的pH值，從而得到恩拉霉素的沉淀物。
[0013] 其中，步驟（a)所述酸性水溶液的pH值為2. 0-5. 0,優(yōu)選2. 0-4. 0,更優(yōu)選 2. 5-3. 5〇
[0014] 其中，將步驟（a'）所得溶液的pH值調(diào)節(jié)至2. 0-5. 0，優(yōu)選2. 0-4. 0，更優(yōu)選 2. 5-3. 5〇
[0015] 其中，步驟（b)中，用堿調(diào)節(jié)步驟（a)或（a'）所得溶液的pH值至6. 5-9. 0,優(yōu)選 7. O-8. 5 〇
[0016] 其中，步驟（a)或（a'）所得溶液中恩拉霉素的濃度為100_150g/L，優(yōu)選為 110-140g/L〇
[0017] 其中，步驟（a)或（a'）所述的有機(jī)溶劑為醇類溶劑，包括但不限于甲醇，乙醇或 異丙醇，優(yōu)選為甲醇或乙醇，更優(yōu)選為甲醇，所述混合溶劑中醇類溶劑的體積百分含量為 60 % -90 %，優(yōu)選 65 % -88 %，更優(yōu)選 70-85 %。
[0018] 其中，步驟（a'）所述的酸選自鹽酸，硝酸或硫酸，優(yōu)選鹽酸。
[0019] 其中，步驟（b)所述的堿選自氫氧化鈉或氫氧化鉀，優(yōu)選氫氧化鈉。
[0020] 在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，步驟（a)或（a'）將溶液的pH值控制在 2. 0-5. 0,優(yōu)選2. 0-4. 0,更優(yōu)選2. 5-3. 5范圍，一方面是為了增加恩拉霉素的溶解度，另一 方面，也是為了提高恩拉霉素的穩(wěn)定性。
[0021] 本發(fā)明中，醇類溶劑的含量對(duì)沉淀的影響實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)醇類溶劑的體積百分含量 在50% -90%，優(yōu)選65% -88%，更優(yōu)選70% -85%時(shí)，有利于工藝操作及產(chǎn)品純度的提高。
[0022] 采用本發(fā)明的方法，最后得到的產(chǎn)品純度和收率都很高，而且本發(fā)明的方法操作 簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，成本低，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0023] 圖1實(shí)施例1中80 %的甲醇水溶液制備所得恩拉霉素的XRPD圖譜
【具體實(shí)施方式】
[0024] 以下通過實(shí)施例進(jìn)一步解釋說明本發(fā)明，但是，對(duì)本發(fā)明并不構(gòu)成限定。
[0025] 本發(fā)明所涉及的X-射線粉末衍射儀器及測(cè)試條件為：X-衍射儀器型號(hào)Rigaku D/ max-2200Cu靶；操作方法：掃描速度4° /min，掃描步寬0. 0Γ。
[0026] 本發(fā)明涉及的液相測(cè)試條件為：色譜柱為：Agilnet HC-C184.6X250mm 5 μπι; 流動(dòng)相為：緩沖液（3. Oml磷酸+500ml水，用NaOH調(diào)節(jié)pH = 3. 8)/甲醇/乙腈= 500/300/200 ;檢測(cè)波長(zhǎng)：232nm ;流速：1.0 ml/min ;柱溫：35°C。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 取3份恩拉霉素粗品（HPLC純度88. 6% )各450g，分別用80%的甲醇水溶液、80% 的乙醇水溶液和80 %的異丙醇水溶液（pH值都是3)各500mL溶解，接著用氫氧化鈉調(diào)節(jié)各 溶液的PH值至7. 5,析出恩拉霉素固體，過濾，收集所得固體并干燥，得到的恩拉霉素純度 和收率如表1所示。其中用80%的甲醇水溶液制備得到的恩拉霉素的XRPD圖譜如圖1所 不O
[0029] 表 1
[0030]
[0031] 實(shí)施例2
[0032] 取8份恩拉霉素粗品（HPLC純度88.6%)各450g，分別用50%，60%，65%，70%， 80 %，85 %，88 %和90 %的甲醇水溶液各500mL溶解，然后用鹽酸調(diào)節(jié)各溶液的pH值至 3. 0,接著用氫氧化鈉調(diào)節(jié)各溶液的pH值至7. 5,析出恩拉霉素固體，過濾，收集所得固體并 干燥，得到的恩拉霉素純度和收率如表2所示。
[0033] 表 2
[0034]
[0035] 實(shí)施例3
[0036] 取恩拉霉素粗品（HPLC純度88. 6 % )用80 %的甲醇水溶液（pH值為3)分別配制 成表3所示濃度的溶液各500mL，接著用氫氧化鈉調(diào)節(jié)各溶液的pH值至7. 5,析出恩拉霉素 固體，過濾，收集所得固體并干燥，得到的恩拉霉素純度和收率如表3所示。
[0037] 表 3
[0038]
[0039] 實(shí)施例4
[0040] 取12份恩拉霉素粗品（HPLC純度88. 6% )各450g，分別用80%的甲醇水溶液（pH 值為3)溶解配成溶液500mL，然后按照下表4調(diào)節(jié)各溶液的pH值，結(jié)果如下表4所示。
[0041] 表 4
[0042]
[0043]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種恩拉霉素的精制方法，其特征在于，所述方法包括： (a) 使恩拉霉素溶解在含有有機(jī)溶劑的酸性水溶液中；或者 (a'）使恩拉霉素溶解在含有有機(jī)溶劑和水的混合溶劑中，接著將所得溶液的pH值用 酸調(diào)節(jié)至酸性；以及 (b) 用堿調(diào)節(jié)步驟（a)或（a'）所得溶液的pH值，從而得到恩拉霉素的沉淀物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（a)所述酸性水溶液的pH值為 2. 0-5.O，優(yōu)選 2. 0-4.O，更優(yōu)選 2. 5-3. 5。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將步驟（a'）所得溶液的pH值調(diào)節(jié)至 2. 0-5. 0，優(yōu)選 2. 0-4. 0，更優(yōu)選 2. 5-3. 5。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（b)中，用堿調(diào)節(jié)步驟（a)或（a'） 所得溶液的pH值至6. 5-9. 0,優(yōu)選L0-8. 5。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟（a)或（a'）所得溶液中恩 拉霉素的濃度為100_150g/L，優(yōu)選為110-140g/L。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟（a)或（a'）所述的有機(jī)溶 劑為醇類溶劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述混合溶劑中醇類溶劑的體積百分含 量為 60 % -90 %，優(yōu)選 65 % -88 %，更優(yōu)選 70-85 %。8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述醇類溶劑為甲醇，乙醇或異丙醇， 優(yōu)選為甲醇或乙醇，更優(yōu)選甲醇。9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟（a'）所述的酸選自鹽酸、 硝酸或硫酸，優(yōu)選鹽酸。10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟（b)所述的堿選自氫氧化 鈉或氫氧化鉀，優(yōu)選氫氧化鈉。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種恩拉霉素(Enramycin)的精制方法，所述方法包括將恩拉霉素粗品配制成一定濃度的溶液，然后調(diào)節(jié)其pH值并最終實(shí)現(xiàn)沉淀，從而得到高純度的恩拉霉素。該方法工藝簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)，得到的產(chǎn)品純度和收率高，非常適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類】C07K1/14, C07K7/08
【公開號(hào)】CN104926926
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510078756
【發(fā)明人】張勇軍, 王繼棟, 張輝, 熊正軍, 吳志卿, 陳正杰, 陳姣, 白驊
【申請(qǐng)人】浙江海正藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年2月13日