專利名稱：環(huán)狀神經(jīng)激肽a的拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)狀肽衍生物，是神經(jīng)激肽A的拮抗劑。
P物質(zhì)和相關(guān)的速激肽類、神經(jīng)激肽A和神經(jīng)激肽B是一組天然存在的肽，在機(jī)體組織中有廣泛的分布並有多種生物作用。雖然P物質(zhì)和神經(jīng)激肽B的激動(dòng)劑和拮抗劑是已知的，而且雖然神經(jīng)激肽A的激動(dòng)劑也是已知的，但神經(jīng)激肽A的拮抗劑尚無報(bào)導(dǎo)。本申請(qǐng)者現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)了一組神經(jīng)激肽A的拮抗劑。這樣的化合物不僅從生化觀點(diǎn)看是重要的，而且也有有價(jià)值的藥理和醫(yī)學(xué)用途。
下面的結(jié)構(gòu)1的環(huán)狀肽衍生物或它們的藥用鹽是神經(jīng)激肽A的拮抗劑
式中A1是Gln，gln，His，his，Asn，asn或一個(gè)下式所示的基團(tuán)
式中R″是被氨基取代的C1-C5烷基；A2是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，Phe(4′-cl)，Npa，npa，Phe(4 ′-NO2)，或phe(4′-NO2)；A3是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)，phe(4′-NO2)，Val或valA4是Gly，Ala，ala或β-Ala；B是下式中的一個(gè)基團(tuán)
(b)-S-CH2-，(c)-O-CH2-，(d)-CH＝CH-，
(f)-CH2-CH(OH)-，和
式中R是氫原子或是C1～C4的烷基，或是一個(gè)苯基亞烷基，該亞烷基部分為直鏈或支鏈，含1～6個(gè)碳原子，苯部分基未取代或被C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、羥基或鹵素單取代；R1和R2各自獨(dú)立地是選自如下的基團(tuán)異丙基，異丁基，仲丁基，正丁基和2-(甲硫)乙基。
這些新的環(huán)狀肽衍生物是神經(jīng)激肽A的拮抗劑，因而用作抗哮喘，抗炎和抗關(guān)節(jié)炎藥物。
下面的氨基酸以及氨基和羧基端基的通用的縮寫用于本說明書的始終Gly(或G)-甘氨酸，Ala(或A)-丙氨酸，Val(或V)-纈氨酸，Leu(或L)-亮氨酸，Ile(或I)-異亮氨酸，F(xiàn)um-富馬酰，Orn-鳥氨酸，Pro(或p)-脯氨酸，Phe(或F)-苯丙氨酸，Trp(或W)-色氨酸，Met(或M)-甲硫氨酸，Ser(或S)-絲氨酸，Thr(或T)-蘇氨酸，Cys(或C)-半胱氨酸，Tyr(或y)-酪氨酸，Asn(或N)-天冬酰胺，Gln(或Q)-谷氨酰胺，Asp(或D)-天冬氨酸，Glu(或E)-谷氨酸，Lys(或K)-賴氨酸，Arg(或R)-精氨酸，His(或H)-組氨酸，Nle-正亮氨酸，Hyp-羥脯氨酸，Cha-環(huán)已丙氨酸，Glt-戊二?；?，Mal-馬來?；?，β-Ala-β-丙氨酸，Npa-β-(2-萘)丙氨酸，3，4-dehydroPro-3，4-脫氫脯氨酸，Phg-苯基甘氨酸，NMePgl-N-甲基苯基甘氨酸，Sar-肌氨酸(N-甲基甘氨酸)，PSubPhe-對(duì)位取代的苯丙氨酸，SubPhe-鄰、間、或?qū)ξ?單一或二取代的苯丙氨酸，Ac-乙酰基，Suc-琥珀?；琍he(4′-Cl)-對(duì)-氯苯丙氨酸，Phe(4′-NO2)-對(duì)-硝基苯丙氨酸，NMeVal-N-甲基纈氨酸。
在各個(gè)事例中若氨基酸的三字母編碼的第一個(gè)字母是大寫的，則表示為L(zhǎng)-構(gòu)型的氨基酸；同樣，若氨基酸的三字母編碼的第一個(gè)字母是小寫的，則表示為D-構(gòu)型的氨基酸。
烷基和烷氧基中的烷基部分包括有直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、仲戊基、環(huán)戊基、己基、異己基、環(huán)己基和環(huán)戊基甲基。本發(fā)明中的苯基亞烷基的亞烷基部分可含有1到4個(gè)碳原子，可以是直鏈或支鏈，例如，亞甲基，1，2-亞乙基，1，2-亞丙基，亞丁基，異亞丙基和仲-亞丁基。本發(fā)明的苯基亞烷基中的苯基可未被取代或在鄰位、間位、最好在對(duì)位被單取代。優(yōu)選的是未被取代的或?qū)αu基取代的苯基。酰基是含有2～10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈、環(huán)狀、飽和的和不飽和的每個(gè)基團(tuán)有1或2個(gè)羰基部分的?；?，乙酰基，苯甲酰基，琥珀?；?，馬來酰基和戊二?；?。鹵素是氟、氯、溴或碘。
本發(fā)明的化合物的B是
時(shí)，具有式1a的結(jié)構(gòu)
本發(fā)明的化合物的B是-S-CH2-基時(shí)，具有式1b的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的化合物的B是-O-CH2-基時(shí)，具有式1c的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的化合物的B是-CH＝CH-基時(shí)，具有式1d的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的化合物的B是-CH2-C(O)-基時(shí)，具有式1e的結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明的化合物的B是-CH2CH(OH)-基時(shí)，具有式1f的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的化合物的B是-C(O)NH-基時(shí)，具有式1g的結(jié)構(gòu)。
顯然，本發(fā)明的環(huán)狀肽衍生物是把天然存在的神經(jīng)激肽A的兩個(gè)C-端氨基酸的正常的肽酰胺鍵加以改造并經(jīng)環(huán)化而連結(jié)到A1氨基酸殘基上。應(yīng)用肽化學(xué)家使用的常規(guī)命名法，可把式1中R1和R2各自為仲丁基、B是-NHCH2-基的化合物(即連結(jié)A4殘基和A1殘基的部分是由被還原了的酰氨鏈連結(jié)的兩個(gè)亮氨酸殘基構(gòu)成的化合物)稱作Leuψ〔CH2NH〕Leu。這種命名法指出了倒數(shù)第二個(gè)Leu的酰胺的羰基被還原成亞甲基。用來說明本發(fā)明的肽衍生物的其它命名有ψ〔CH2S〕，ψ〔CH2O〕，ψ〔CH＝CH〕，ψ〔C(O)CH2〕，ψ〔CH(OH)CH2〕，和ψ〔NHC(O)〕。
這里所用的“任何種氨基酸”一語，包括有天然存在的氨基酸以及在制備天然存在的肽的合成的類似物時(shí)在肽化學(xué)領(lǐng)域中常用的其它的“非蛋白質(zhì)的”α-氨基酸。天然存在的氨基酸有甘氨酸，丙氨酸，β-丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，絲氨酸，甲硫氨酸，蘇氨酸，苯丙氨酸，鉻氨酸，色氨酸，半胱氨酸，脯氨酸，組氨酸，天冬氨酸，天冬酰胺，谷氨酸，谷氨酰胺，精氨酸，鳥氨酸和賴氨酸。“非蛋白質(zhì)的”α-氨基酸的例子有正亮氨酸，正纈氨酸，別異亮氨酸，高精氨酸，硫脯氨酸，脫氫脯氨酸，羥脯氨酸(Hyp)，高絲氨酸，環(huán)已甘氨酸(Chg)，α-氨基丁酸(Aba)，環(huán)己丙氨酸(Cha)，氨苯丁氨酸(Pba)，苯丙氨酸的苯基的鄰、間或?qū)ξ槐幌旅娴囊粋€(gè)或二個(gè)基團(tuán)取代(C1～C4)-烷基，(C1～C4)-烷氧基，鹵素或硝基，或被亞甲二氧基取代，β-2-和3-噻吩丙氨酸，β-2-和3-呋喃丙氨酸，β-2-，3-和4-吡啶丙氨酸，β-(2-和3-苯并噻吩)丙氨酸，β-(1-和2-萘)丙氨酸，絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸的O-烷基化衍生物，S-烷基化的半胱氨酸，酪氨酸的O-硫酸酯，3，5-二碘酪氨酸和天然存在的氨基酸的D-異構(gòu)體。
天然氨基酸除甘氨酸和β-丙氨酸外，都含有手性碳原子，除非特別指出，這里所提出的光活氨基酸都是L-構(gòu)型。如同常規(guī)那樣，這里書寫的肽結(jié)構(gòu)是氨基端在肽鏈的左側(cè)，羧基端在肽鏈的右側(cè)。
式I的多肽可與無毒的有機(jī)或無機(jī)酸形成藥用鹽?？缮蛇m宜的鹽的作為例證的無機(jī)酸有鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸，以及酸式金屬鹽，如磷酸氫二鈉和硫酸氫鉀?？缮蛇m宜的鹽的作為例證的有機(jī)酸包括有一元、二元和三元羧酸。這些酸中例如有乙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸和磺酸，如甲磺酸和2-羥基乙磺酸。
化合物的任何一般的基團(tuán)中，某些基團(tuán)是優(yōu)選的。本申請(qǐng)者優(yōu)選了式I的如下肽衍生物A1是Gln，gln，Asn或asn；A2和A3各自是Trp，trp，phe，phe，Tyr，tyr，Cha，cha，Phg或phg的那些肽衍生物；A4為Gly，Ala或ala的肽衍生物，更優(yōu)選的肽衍生物是A1為Gln，A2和A3各自是Trp或Phe，A4為Gly。
本發(fā)明的肽可用對(duì)本技術(shù)熟悉的人所已知的各種方法來制備。這些方法中包括有固相順序法，該法可用已建立好的自動(dòng)化方法實(shí)施，例如用肽自動(dòng)合成器。為了制備本發(fā)明的肽衍生物，連結(jié)在樹脂上的氨基酸相當(dāng)于A4，再順序加上的氨基酸相當(dāng)于A3，A2，A1，最后的氨基酸相當(dāng)于NH2CHR1CO2H。然后形成修飾的“B”酰胺鍵，即加入的氨基酸相當(dāng)于NH2CHR1CO2H，從樹脂上脫下，環(huán)合。用于制備各個(gè)修飾的肽鍵的方法是本領(lǐng)域皆知的方法，熟練的肽化學(xué)家可容易地實(shí)施。制備式I中B為-NHCO-基的肽衍生物(即ψ〔NHCO〕化合物)的方法是Chorev和Goodman在Int.J.Pept.Protein Res，21(3)，258～68(1983)中所述的已知方法。制備式I中B為-COCH2-或-CH(OH)CH2-基的肽衍生物(即分別是ψ〔COCH2〕和ψ〔CH(OH)CH2〕化合物)的方法是Holladay和Rich在Tetrahedron Letters，24(4)，4401～04(1983)中所述的已知方法。制備式1中B為-CH2NH-基的肽衍生物(即ψ〔CH2NH〕化合物)的方法是Sa saki和Coy在Peptides，Vol.8，PP 11g-121，1987中所述的已知方法，並將在下面詳細(xì)說明。制備式1中B為-CH2S-基的肽衍生物(即ψ〔CH2S〕化合物)的方法是Spatola和Darlak在Tetrahedron Letters，44(3)，821～33(1988)中所述的已知方法。制備式1中B為-CH2O-基的肽衍生物(即ψ〔CH2O〕化合物)的方法是TenBrink在J.OrgChem，1987，52，418～22中所述的已知方法。
然后從樹脂上除掉線型肽，並按要求除掉所有保護(hù)基，該線型肽用常規(guī)方法進(jìn)行環(huán)化，例如用三乙胺和二苯基磷酰疊氮化物在二甲基甲酰胺的混合液處理。環(huán)狀肽的粗品在用常法如用層析法精制之前，將所有存在的保護(hù)基和功能基的前體除去或轉(zhuǎn)變?yōu)樗Ｍ幕鶊F(tuán)。
特別要指出，本發(fā)明的B為-CH2N(R)-基的化合物的制備，是將式3的N-甲氧基-N-甲基酰胺還原成式4的醛。該還原作用可用各種皆知的方法實(shí)施，對(duì)本領(lǐng)域熟悉的人很容易實(shí)施，例如用氫化鋁鋰(LAH)還原。該還原作用可用常規(guī)法進(jìn)行，即把大約1摩爾當(dāng)量的LAH加到冷卻的(有代表性的是大約0℃)式3的化合物在非反應(yīng)活性的溶劑如醚類溶劑，像四氫呋喃(THF)或乙醚的溶液中。反應(yīng)基本完全后，一般是大約30分鐘后，反應(yīng)混合物中加入10％的硫酸氫鉀或鈉，然后加入水以中止反應(yīng)。然后產(chǎn)物用溶劑萃取水性混合物而分離出，溶劑例如用乙醚，醚相用冷的稀鹽酸水溶液洗滌，干燥，蒸除乙醚。
式4的醛然后與同樹脂相連的式6反應(yīng)，
式中R和R2的含義如式1所定義，代表肽的樹脂。起初生成的西佛堿加成物就地用例如氰基硼氰化鈉還原，生成式7的樹脂結(jié)合的修飾的二肽
式中R，R1和R2的含義與式1的相同，代表肽的樹脂。
式3的N-甲氧基-N-甲基酰胺用常規(guī)方法由相應(yīng)的N-Boc保護(hù)的酸制備。碳酰二咪唑加到N-Boc保護(hù)的氨基酸于醚類溶劑(如乙醚)的干燥溶液中。反應(yīng)混合物攪拌10分鐘到1小時(shí)，一般為大約15～20分鐘。N，O-二甲基-羥胺鹽酸鹽的DMF溶液和有立體障礙的胺例如二異丙基乙胺加入到上面的混合物中，室溫下攪拌大約6小時(shí)到24小時(shí)。蒸除溶劑后分出所要的化合物，粗品用例如硅膠快速層析，二氯甲烷洗脫進(jìn)行純化。
所用的樹脂支持劑可以是固相制備多肽技術(shù)中常規(guī)用的各種適用的樹脂，最好是用0.5～3％的二乙烯苯交聯(lián)的聚苯乙烯，它或者被氯甲基化，或者羥甲基化，以便對(duì)起始引入的α-氨基被保護(hù)的氨基酸提供生成酯的位置。
羥甲基化樹脂的一個(gè)實(shí)例是Bodanszky等在Chem Ind(London)38，1597～98(1966)中所敘述，氯甲基化樹脂有加里福尼亞州Richmond的Bio Rad Laboratories產(chǎn)品市售，這一樹脂的制備方法敘述于Stewart等，“固相肽合成”(Freeman & Co，舊金山1966)，第1章1～6頁。被保護(hù)的氨基酸可用Gisin，Helv Chem Acta，56，1476(1973)的方法連接在樹脂上。許多連接了被保護(hù)的氨基酸的樹脂可買到。例如，為了制備本發(fā)明的羧基端為Thr殘基的多肽，可用連接于芐基化的羥甲基化的苯乙酰胺甲基(PAM)樹脂上的叔-丁氧羰基(Boc)保護(hù)的Thr，它可買到。
α-氨基被保護(hù)的氨基酸耦聯(lián)到樹脂支持劑上以后，用任一適宜的方法除掉保護(hù)基，例如用二氯甲烷中的三氟乙酸，單用三氟乙酸或二噁烷中的Hcl。脫保護(hù)基作用在溫度為0℃到室溫下進(jìn)行。也可以用除掉特異的α-氨基保護(hù)基的其它的標(biāo)準(zhǔn)裂解試劑和條件，除掉α-氨基保護(hù)基后，其它的氨基保護(hù)的氨基酸以所要的次序分步耦聯(lián)上。另外，在同樹脂支持的氨基酸順序耦聯(lián)之前，可將多個(gè)氨基酸組成的片斷先用溶液方法耦聯(lián)起來。
引入到多肽序列中的每個(gè)氨基酸所用的α-氨基保護(hù)基可以是本技術(shù)領(lǐng)域中已知的任何一種保護(hù)基。α-氨基的保護(hù)基的分類有(1)?；捅Ｗo(hù)基，例如甲?；?，三氟乙?；?，苯二甲酰基，甲苯磺?；?tosyl)，苯磺?；趸?苯亞磺?；?，三苯甲基亞磺酰基，鄰-硝基苯氧乙?；挺?氯丁酰基；(2)芳香氨基甲酸酯型保護(hù)基，例如芐氧羰基和取代的芐氧羰基，如對(duì)氯芐氧羰基，對(duì)硝基芐氧羰基，對(duì)溴芐氧羰基，對(duì)甲氧基芐氧羰基，1-(對(duì)-聯(lián)苯基)-1-甲基乙氧羰基，α，α-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧羰基和二苯甲氧羰基；(3)脂肪族氨基甲酸酯型保護(hù)基，例如叔-丁氧羰基(Boc)，二異丙基甲氧羰基，異丙氧羰基，乙氧羰基和烯丙氧羰基；(4)環(huán)烷基氨基甲酸酯型保護(hù)基，例如環(huán)戊氧羰基，金剛烷氧羰基和環(huán)己氧羰基；(5)硫代氨基甲酸酯型保護(hù)基，例如苯硫羰基；(6)烷基型保護(hù)基，例如三苯甲基(trityl)和芐基；(7)三烷基硅烷基，例如三甲基硅烷。α-氨基的優(yōu)選的保護(hù)基是叔-丁氧羰基。
選擇適宜的耦聯(lián)劑是本技術(shù)領(lǐng)域的技巧。加入的氨基酸是Gln、Asn或Arg時(shí)，特別適用的耦聯(lián)劑是N，N′-二異丙基碳二亞胺和1-羥基苯并三唑。這些試劑的使用可避免腈和內(nèi)酰胺的生成。其它的耦聯(lián)劑有(1)碳二亞胺類(例如，N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺和N-乙基-N′-(r-二甲氨基丙基碳二亞胺)；(2)氨基氰類(如N，N-二芐基氨基氰)；(3)酮亞胺類；(4)異噁唑鹽(如N-乙基-5-苯基-異噁唑-3′-磺酸鎓鹽；(5)含有具有芳香性質(zhì)的單環(huán)雜環(huán)酰胺，雜環(huán)酰胺的環(huán)上有1到4個(gè)氮，如咪唑、吡唑和1，2，4-三唑的酰胺?？捎玫奶禺惖碾s環(huán)酰胺包括有N，N′-碳酰二咪唑和N，N-碳酰-二-1，2，4-三唑；(6)烷氧基化的乙炔(如乙氧乙炔)；(7)能與要進(jìn)行耦聯(lián)的氨基酸的羧基生成混合酐的試劑(如氯甲酸乙酯和氯甲酸異丁酯)，或使要進(jìn)行耦聯(lián)的氨基酸生成對(duì)稱酐的試劑(如Boc-Ala-O-Ala-Boc)；(8)含氮的雜環(huán)化合物，該化合物的環(huán)上氮連-羥基(例如，N-羥基苯二甲酰亞胺，N-羥基琥珀酰亞胺和1-羥基苯并三唑)。其它的活化試劑和它們?cè)陔鸟盥?lián)作用中的應(yīng)用在Kapoor，J.Pharm Sci，59，PP1～27(1970)中有記述。本申請(qǐng)者除Arg、Asn和Gln外的所有氨基酸都優(yōu)選用對(duì)稱酸酐作為耦聯(lián)試劑。
加入到固相反應(yīng)器中的各個(gè)保護(hù)氨基酸或氨基酸序列用大約4倍的過量，耦聯(lián)反應(yīng)在二甲基甲酰胺二氯甲烷(1∶1)或只在二甲基甲酰胺中、或最好只在二氯甲烷的介質(zhì)中進(jìn)行。若耦聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行得不完全，則在除去α-氨基保護(hù)基和在固相反應(yīng)器中耦聯(lián)下一個(gè)氨基酸之前，可重復(fù)進(jìn)行耦聯(lián)操作。每個(gè)階段合成的耦聯(lián)反應(yīng)的成功程度用茚三酮反應(yīng)監(jiān)測(cè)，如E.Kaiser等在Analyt.Biochem34，595(1970)中所述。
得到了所需的氨基酸序列之后，將肽從樹脂上除下。這可用水解法實(shí)現(xiàn)，例如用二甲硫醚、對(duì)-甲酚和硫代甲酚在無水氟氫酸的溶液處理連結(jié)多肽的樹脂。
皆如，在固相肽合成的技術(shù)領(lǐng)域中，許多氨基酸具有功能基，在肽鏈制備過程中需要保護(hù)。使用和選擇適宜的保護(hù)基是熟悉本領(lǐng)域的人的技巧，這取決于要保護(hù)的氨基酸和在肽鏈上的存在是否其它的被保護(hù)的氨基酸殘基。選擇這樣的側(cè)鏈保護(hù)基的關(guān)鍵是在裂解掉α-氨基的保護(hù)基時(shí)，它不會(huì)被除去。例如，對(duì)于賴氨酸的側(cè)鏈適宜的保護(hù)基是芐氧羰基和取代的芐氧羰基該取代基選自鹵素(如氯、溴和氟)和硝基，(例如2-氯芐氧羰基，對(duì)-硝基芐氧羰基，3，4-二氯芐氧羰基)，甲苯磺酰基，叔-戊氧羰基，叔丁氧羰基和二異丙基甲氧羰基。蘇氨酸和絲氨酸的醇性羥基的保護(hù)，可用乙?；?，苯甲?；?，叔丁基，三苯甲基，芐基，2，6-二氯芐基或芐氧羰基。天冬氨酸和谷氨酸的羧基的羥基保護(hù)可用芐基或環(huán)己基。優(yōu)選的保護(hù)基是芐基。
這些基團(tuán)可用本技術(shù)領(lǐng)域熟知的方法除去。保護(hù)基的除去一般是在完成了肽鏈合成之后進(jìn)行，但保護(hù)基也可以在其它任何時(shí)刻除去。
式1的肽衍生物作為神經(jīng)激肽A的拮抗劑的能力，可用它們能夠同化神經(jīng)激肽A競(jìng)爭(zhēng)哺乳類的神經(jīng)激肽A(NK2)受體得到證明，所用的方法是BuCK等在Seience 226987-989、1984中所述的方法。也可用這些化合物能夠刺激成抑制神經(jīng)激肽A-誘導(dǎo)磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)換，所用的方法為Bristow等于Britishj.Phcrmacol90211-21、1987所述。
由于本發(fā)明的肽衍生物能夠作為神經(jīng)激肽A的拮抗劑起作用，這些化合物可用作免疫抑制劑和治療關(guān)節(jié)炎，哮喘，疼痛，炎癥，腫瘤生長(zhǎng)，胃腸道運(yùn)動(dòng)過強(qiáng)，杭廷頓氏舞蹈病，精神病，神經(jīng)炎，神經(jīng)痛，頭痛，包括有偏頭痛，高血壓，尿失禁，蕁麻疹，類癌瘤綜合癥，流感和感冒?？诜蚍悄c道用藥的有效劑量很容易被熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的人所確定，是引起神經(jīng)激肽A(NK2)受體拮抗作用的劑量。例如，本發(fā)明的肽的有效劑量是按病人體重每天每公斤大約0.5μg到500mg。常規(guī)用的單位劑型中含活性化合物的劑量為大約1mg到大約500mg，每日用藥量為1到4個(gè)或更多的單位劑型。這里所用的“病人”一語，是指哺乳類，例如包括人在內(nèi)的靈長(zhǎng)類，羊、馬、牛、豬、狗、貓、大鼠和小鼠。
雖然某些肽類衍生物口服后經(jīng)過腸道時(shí)可以存留，但本發(fā)明者推舉非口服用藥，例如皮下、靜脈、肌肉、腹腔注射；貯庫注射劑，植入制劑，或用于粘膜，例如鼻、喉和氣管，例如本發(fā)明的肽衍生物可含在氣霧劑中以噴霧或干粉的形式使用。
為了非胃腸道用藥，以化合物的溶液或懸浮液的注射劑用藥，將化合物與生理上可接受的稀釋劑，及藥用載體合用，該藥用載體可以是滅菌液體，例如水和油劑，可加入或不加入表面活性劑和其它藥用賦形劑。這些制劑中可用的有代表性的油劑有石油、動(dòng)物油、植物油或合成來源的油，例如有花生油，豆油和礦物油。水、生理鹽水、葡萄糖水溶液和有關(guān)的糖溶液，乙醇和乙二醇類例如丙二醇或聚乙二醇通常被優(yōu)選為液體載體，特別是用于注射液。
化合物可以貯庫注射劑或植入制劑的形式用藥，制成這樣的制劑可使活性成分緩釋?；钚猿煞挚蓧褐瞥尚⊥杌蛐≈鶢钗?，作為貯庫注射劑或植入劑，植于皮下或肌肉內(nèi)。植入劑可以使用惰性物質(zhì)，例如可生物降解的聚合物或合成的硅酮，例如DOW-Corning公司制造的硅橡膠和硅酮橡膠。實(shí)施例如下的非限制性的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明加以說明。實(shí)施例1環(huán)狀GLN-TRP-PHE-GLY-LEUψ〔CH2NH〕LEU和環(huán)狀GLN-TRP-PHE-GLY-LEUψ〔CH2NCH3〕LEU對(duì)神經(jīng)激肽A受體的拮抗作用，是用與碘化神經(jīng)激肽A對(duì)受體的競(jìng)爭(zhēng)作用所證明將數(shù)個(gè)倉鼠的泌尿膀胱匯集切碎后，于4℃下同含有120mMNacl和5mM Kcl的50mM TRIS-Hcl(PH 7.4)勻漿后，于48000×g離心15分鐘。將塊狀物于4℃下再懸浮到含有10mM EDTA和300mM Kcl的50mM TRIS-Hcl(PH7.4)30分鐘。懸浮液同上法離心，塊狀物用單一的50mMTRIS-HCl(PH 7.4)洗滌兩次並離心。然后把膀胱組織再懸浮到培養(yǎng)緩衡液中。每個(gè)試管中加入一個(gè)等分試樣(約3～5mg組織)，並開始試驗(yàn)。試管中含有的培養(yǎng)緩衡液是由50mM TRIS-Hcl(PH7.4)，0.02％BSA，40μg/ml桿菌肽，4μg/ml抑凝乳蛋白酶素，4μg/ml leupeptin(乙酰-亮-亮-精氨醛)，2mM MnCl2，0.1nM125碘代組氨酰1-神經(jīng)激肽A(Amersham公司)組成的，標(biāo)題化合物或標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為0.03nM到100μM。試驗(yàn)的進(jìn)行是在室溫下平衡120分鐘。然后將每個(gè)試管中的內(nèi)容物迅速在Whatman GF/B濾器上過濾，該濾器預(yù)先在0.5％BSA中浸泡，並迅速用冰冷卻的單一的50mMTRIS-HCl(PH 7.4)洗滌二次。濾器結(jié)合的放射活性用咖瑪計(jì)數(shù)器定量測(cè)定。比結(jié)合性(最大值)定義為1μM未標(biāo)記的神經(jīng)激肽A(NKA)存在和不存在時(shí)結(jié)合性的差異。受試化合物或標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)碘代NKA結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)作用用該最大竟?fàn)幾饔玫陌俜致时硎?。本?biāo)題化合物的IC50值(使50％受體受到抑制時(shí)所需的濃度)證明為0.01～0.5nM(

圖1)。實(shí)施例2環(huán)狀GLN-TRP-PHE-GLY-LEUψ〔CH2NH〕LEU和環(huán)狀GLN-TRP-PHE-GLY-LEUψ〔CH2NHCH3〕LEU對(duì)神經(jīng)激肽A受體的拮抗作用，是用對(duì)磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)換的影響所證明數(shù)個(gè)倉鼠的膀胱匯集后用組織切碎機(jī)切成350μm碎塊。切碎的組織在37℃與Krebs-Hepes緩衡液保溫30分鐘，每15分鐘換成新鮮緩衡液。組織然后在含100～200μci的3H-肌醇的緩衡液中在37℃保溫，洗滌，然后在Krebs-Hepes(含10mM Li+)緩衡液中37℃再保溫30分鐘。每15分鐘換一次新鮮緩衡液。組織塊分份后(每個(gè)試管大約放10～20mg)置于Li+緩衡液中，每個(gè)試管加受試化合物25μl，然后加入各種濃度的NKA 25μl，最終的體積為250μl。要評(píng)價(jià)的受試化合物的濃度范圍為1nM到100μM，NKA的濃度范圍是1nM到10μM。受試化合物也用上述的濃度單獨(dú)作評(píng)價(jià)，以測(cè)定其激動(dòng)劑的活性。室溫下30分鐘后，加入940μl的氯仿-甲醇(1∶2)，以中止磷脂酰肌醇的轉(zhuǎn)換，然后加入310μl氯仿，再加310μl水。每個(gè)試管然后振蕩15秒鐘，于3000rpm離心10分鐘以分開各相。上層(水相)900μl加截到0.5mlBiorad AG-1×8(甲酸酯)的離子交換柱上。從每支試管的下層(氯仿)抽出50μl放入計(jì)數(shù)管內(nèi)，干燥后在閃爍液中計(jì)數(shù)。柱上的物質(zhì)依次用如下洗脫1)10ml水2)5ml的5mM四硼酸二鈉/60mM甲酸鈉3)10ml的1M甲酸銨于0.1M的甲酸溶液中。最后的(第三個(gè))洗脫液合并后，取1ml與6ml ACS閃爍體混合后計(jì)數(shù)。然后，每個(gè)樣品的這些計(jì)數(shù)(磷酸肌醇總量)與相應(yīng)的有機(jī)相中計(jì)數(shù)的比值加以計(jì)算。在有受試化合物和/或標(biāo)準(zhǔn)品存在的這種比值與對(duì)照管(即沒有刺激的激動(dòng)劑)的比值加以比較。繪制劑量-效應(yīng)曲線。用圖解分析法或用計(jì)算機(jī)程序來確定受試化合物刺激或抑制神經(jīng)激肽A誘導(dǎo)磷脂酰肌醇的轉(zhuǎn)換作用，于圖2到圖5說明了。實(shí)施例3環(huán)狀GLN-TRP-PHE-GLY-LEUψ〔CH2NCH3〕LEU對(duì)在大鼠泌尿膀胱就地制備的神經(jīng)激肽A的拮抗作用雌性Sprague-Dawley種150～200g大鼠用氯胺酮鹽酸鹽(腹腔注射100mg/kg)附以烏拉坦(腹腔注射1.2g/kg)使麻醉。暴露膀胱，按Dray的方法(J.pharmacolMethods 13157～165(1985))使膀胱排空。將針頭插進(jìn)膀胱圓弧面的頂端，將生理鹽水灌入膀胱中，速度為每分鐘100μl。膀胱的流出液是通過插進(jìn)尿道的聚乙烯插管收集的。膀胱收縮的監(jiān)測(cè)通過與灌流系統(tǒng)相連接的液流壓力傳感器。受試化合物于40～100μl生理鹽水或含有最低量的DMSO的生理鹽水中，放于膀胱圓弧部。用的賦形劑含DMSO高達(dá)75％時(shí)既沒有直接的作用，也不會(huì)對(duì)由于后來的NKA所引起的收縮有影響。NKA引起收縮的閾濃度約為10μg，此用量作常規(guī)應(yīng)用。拮抗劑同法用到膀胱上5分鐘后重復(fù)使用NKA。重復(fù)使用10μg NKA不會(huì)導(dǎo)致使任何快速減敏。連續(xù)記錄每個(gè)動(dòng)物每一分鐘間隔的收縮幅度(收縮力)。實(shí)例的顯示于圖6。實(shí)施例4I.Boc-Leu-醛的合成(Fehrentz.J.-A.和CastroB.Synthesis，1983，676～678)A.N-叔丁氧羰-亮氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺15.0mmole的叔丁氧羰-亮氨酸水合物溶解于30ml無水乙醚中。溶液用無水硫酸鎂干燥，過濾除去固體。將16.5mmol碳酰二咪唑加到此濾液中，反應(yīng)液室溫下攪拌20分鐘。向生成的溶液中加入22.5mmol O，N-二甲基羥胺鹽酸鹽于15ml二甲基甲酰胺和3.9ml二異丙基乙胺的混懸液。室溫下反應(yīng)混合液攪拌過夜。反應(yīng)物用75ml乙酸乙酯稀釋，用1N的冷Hcl溶液洗滌(3×40ml)，再用飽和NaHco3(3×40ml)和飽和NaCl(1×40ml)洗滌。有機(jī)相用MgSo4干燥，過濾后真空蒸除乙酸乙酯。分析數(shù)據(jù)Rf(硅膠F254)0.51(乙酸乙酯/己烷3/2)；′H-NMR(CDCl3)(TMS內(nèi)標(biāo))δ＝0.95ppm(二重峰，6H，J＝6.6Hz)；1.42(單峰11H)；1.64～1.80(多重峰，1H)；3.20(單峰，3H)；3.80(單峰，3H)；4.72(多重峰，1H)；5.10(雙重峰，1H，J＝7.5Hz)。質(zhì)譜M+H+理論值275，實(shí)測(cè)值275。B.丁氧羰-亮氨酸醛將2.5mmole的丁氧羰-亮氨酸的N-甲氧基N-甲基酰胺溶解在30ml無水乙醚中。該溶液中加入3.2mmole氫化鋰鋁(1M的四氫呋喃溶液)。反應(yīng)液室溫下攪拌20分鐘，然后小心加入0.6g NaHSO4于10ml水的溶液以中止反應(yīng)。反應(yīng)混合物加入75ml乙醚中，用冷的1N HCl(3×30ml)、飽和NaHCO3(3×30ml)和飽和NaCl(1×30ml)洗滌。有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥，過濾后真空蒸除溶劑。分析數(shù)據(jù)Rf(硅膠60 F254)0.68(乙酸乙酯/己烷3/2)。質(zhì)譜M+H+理論值216，實(shí)測(cè)值216。II.Leu-Gln-Trp(CHO)-Phe-Gly-PAM-樹脂的合成以Boc-Gly-PAM樹脂(0.5mmol)開始在肽自動(dòng)合成器中用標(biāo)準(zhǔn)的固相肽合成方法合成。其余的氨基酸依次加入(Phe，Trp(CHO)，Gln，Leu)。然后用三氟乙酸除掉Boc保護(hù)基，樹脂用二異丙基乙胺中和，然后用二甲基甲酰胺、二氯甲烷洗滌，干燥之。III.還原的酰胺鏈(Leuψ〔CH2NH〕Leu)的生成將2mmole Boc-Leu醛溶解于10ml 1％的乙酸于二甲基甲酰胺的溶液中。將此溶液加到含有肽樹脂(0.5mmole，見上II)的反應(yīng)器中。向此混合物中加入150mg NaCNBH3于2ml二甲基甲酰胺的溶液。混合物振搖4小時(shí)。將反應(yīng)器內(nèi)液體排出，樹脂先后用二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗滌。IV.環(huán)狀〔Leuψ〔CH2NH〕Leu-Gln-Trp-Phe-Gly〕的合成肽自樹脂上切割下后，用無水HF/苯甲醚(10∶1)完全脫保護(hù)基。部分肽粗品(77mg)溶解到15ml二甲基甲酰胺中，然后加入0.2ml三乙胺和0.08ml二苯基磷酰疊氮化物，使其環(huán)化。室溫?cái)嚢?2小時(shí)后，真空蒸除溶劑。將環(huán)狀肽粗品溶解在1∶1乙腈∶水(V/V)(60ml)，並加入2.0ml三乙胺，使Trp(CHO)殘基脫甲?；?。脫甲?；磻?yīng)是在室溫下攪拌12小時(shí)后，真空蒸除溶劑。環(huán)狀多肽的粗品用反相高效液相層析技術(shù)精制，得純凈化合物27.9mg，38.2μmole。分析數(shù)據(jù)氨基酸分析(Hcl水解)Glx(0.837)，Phe(0.97)，Gly(1.03)；質(zhì)譜(FAB)(M+H)+理論值731；實(shí)測(cè)值731；肽含量50.7％。V.環(huán)狀〔Leuψ〔CH2NCH3〕Leu-Gln-Trp-Phe-Gly〕的合成根據(jù)上面的II用Boc-N-甲基亮氨酸制備的N-甲基-Leu-Gln-Trp(CHO)-Phe-Gly-PAM樹脂與2.0mmole Boc-Leu醛反應(yīng)，方法如上面III中所述。然后如上面IV中所述完成該肽的合成。分析數(shù)據(jù)氨基酸分析(Hcl水解)Glx(0.72)；Gly(1.04)；Phe(0.96)。肽含量63.7％。質(zhì)譜(FAB)M+H+，理論值745，實(shí)測(cè)值745。VI.環(huán)狀〔Leuψ〔CH2NP〕Leu-Gln-Trp-Phe-Gly〕的合成按照上述的II和III方法制備Boc-Leu〔ψ(CH2NH)〕-Leu-Gln-Trp(CHO)-Phe-Gly-PAM-樹脂。然后如上III法所述，將此樹脂在NaCNBH3的存在下與2.5mmoleR-CHO于10ml的1％HOAC于二甲基甲酰胺反應(yīng)。然后如上面IV中所述完成該肽的合成。圖的解釋圖1說明了環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)和環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)對(duì)激動(dòng)劑結(jié)合NKA受體的拮抗能力，如同受試化合物對(duì)倉鼠泌尿膀胱的I125-標(biāo)記的NKA結(jié)合作用的競(jìng)爭(zhēng)能力所證明的那樣(實(shí)施例1)。橫軸(X-軸)指出的是神經(jīng)激肽A(NKA)的激動(dòng)劑或拮抗劑的濃度的對(duì)數(shù)?？v軸(Y-軸)為每個(gè)受試的激動(dòng)劑或拮抗劑觀測(cè)的比結(jié)合性，是以最大比結(jié)合度的百分率量度的。數(shù)值是6～12次實(shí)驗(yàn)的均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。IC50值是由50％抑制點(diǎn)從繪圖上估計(jì)出的，列于圖上。環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)是比環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)更強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)劑，並比激動(dòng)劑NKA本身的作用更強(qiáng)。
NKA
Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)
Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)圖2和圖3分別說明了環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)和環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)對(duì)倉鼠泌尿膀胱的受體調(diào)節(jié)的、NKA-誘導(dǎo)的PI轉(zhuǎn)換的劑量相關(guān)的拮抗作用的能力(實(shí)施例2)。橫軸(X-軸)是NKA受體的激動(dòng)劑或拮抗劑濃度的對(duì)數(shù)?？v軸(Y-軸)是觀測(cè)到的PI轉(zhuǎn)換百分率(與對(duì)照相比)。數(shù)值是一個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次的均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。圖中列出了每個(gè)肽的劑量-效應(yīng)曲線。環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)(圖2)濃度為10nM和100nM、環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)(圖3)濃度為100nM、1μM和10μM時(shí)，使NKA劑量-效應(yīng)曲線右移。這兩個(gè)化合物于濃度到10μM單獨(dú)用時(shí)，都不能對(duì)PI的轉(zhuǎn)換產(chǎn)生任何誘導(dǎo)作用。圖2
NKA
Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)
NKA+100nM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)
NKA+1μM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)
NKA+10μM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)
圖3
NKA
Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)
NKA+100nM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)
NKA+1μM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)
NKA+10μM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)圖4和圖5比較了環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)和環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)對(duì)倉鼠泌尿膀胱的受體調(diào)節(jié)的、NKA-誘導(dǎo)的PI轉(zhuǎn)換的拮抗能力(實(shí)施例2).橫軸(X-軸)是NKA濃度的對(duì)數(shù)?？v軸(Y軸)是觀測(cè)到的PI轉(zhuǎn)換百分率(與對(duì)照相比)。數(shù)值是一個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次的均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。圖中列出了每個(gè)肽的劑量-效應(yīng)曲線。這兩個(gè)化合物在100nM(圖4)和1μM(圖5)時(shí)都能使NKA劑量-效應(yīng)曲線平行右移。在每個(gè)拮抗?jié)舛葧r(shí)，這兩個(gè)肽相互之間都是等效價(jià)的。圖4
NKA
NKA+100nM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NH-Leu)
NKA+100nM Cyclo(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)
圖5
圖6.當(dāng)10μg NKA直接用到暴露出的麻醉大鼠的膀胱的圓弧部時(shí)，會(huì)產(chǎn)生持續(xù)的強(qiáng)力收縮，收縮頻率也增加。應(yīng)用25μg環(huán)狀(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-CH2NCH3-Leu)5分鐘后第二次同樣給NKA時(shí)，兩個(gè)不同的大鼠的NKA的作用顯著地變?nèi)趸蛲耆蛔钄唷Ｃ恐粍?dòng)物表示了連續(xù)的顯示。方法學(xué)如實(shí)施例3所述。
權(quán)利要求
1.一種制備下式的肽衍生物或其藥用鹽的方法
式中A1是Gln，gln，His，his，Asn，asn或一個(gè)下式所示的基團(tuán)
式中R″是被一個(gè)氨基取代的C1～C5烷基；A2是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)或phe(4′-NO2)；A3是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)，phe(4′-NO2)，Val或val；A4是Gly，Ala，ala或β-Ala；B是下式中的一個(gè)基團(tuán)
-S-CH2-，-O-CH2-，-CH＝CH-，
-CH2-CH(OH)-，和
式中R是氫原子或是C1～C4的烷基，或是一個(gè)苯基亞烷基，該亞烷基部分為直鏈或支鏈，含1～6個(gè)碳原子，苯基部分未被取代或被C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、羥基或鹵素單取代；R1和R2各自獨(dú)立地選自如下的基團(tuán)異丙基，異丁基，仲丁基，正丁基和2-(甲硫)乙基，該制備方法的特征是，將Boc-A4，Boc-A3，Boc-A2和Boc-A1依次連接到樹脂連接的，下式所示的修飾鍵二肽衍生物上，Boc是氨基丁氧羰保護(hù)基
式中R1，R2和B的含義如上所述，是樹脂。此種連接是在增長(zhǎng)肽鏈的末端氨基上，該氨基是當(dāng)除去氨基保護(hù)基團(tuán)的同時(shí)，暴露出來的。然后將產(chǎn)物自樹脂上切割掉，用三乙胺和二苯基磷酰疊氮化物將線性衍生物環(huán)合。
2.一種制備下式的肽衍生物或其藥用鹽的方法，
式中A1為Gln，gln，His，his，Asn，asn或下式的一個(gè)基團(tuán)
式中R″是被一個(gè)氨基取代的C1～C5烷基；A2是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)或phe(4′-NO2)；A3是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)，phe(4′-NO2)，Val或val；A4是Gly，Ala，ala或β-Ala；B是下式的一個(gè)基團(tuán)
式中R是氫原子或C1～C4烷基，或是苯基亞烷基，該亞烷基部分為直鏈或支鏈，含1～6個(gè)碳原子，苯基部分是未被取代的或被C1～C4烷基，C1～C4烷氧基，羥基或鹵素單取代；R1和R2各自獨(dú)立地是選自如下基團(tuán)異丙基，異丁基，仲丁基，正丁基和2-(甲硫)乙基，該制備方法的特征是a)將Boc-A3，Boc-A2，Boc-A1和下式所示的一個(gè)氨基酸依次連接到與樹脂相連的，通式為A4-的氨基衍生物上，
式中Boc是氨基丁氧羰保護(hù)基，A3、A2、A1和R2的含義如前所述，是樹脂，A4的含義如前所述，這種連接是在增長(zhǎng)肽鏈的末端氨基上，該氨基是當(dāng)除掉氨基保護(hù)基的同時(shí)被暴露出來，b)將下式的氨基醛(式中R1的含義如前所述)縮合到樹脂連接的中間產(chǎn)
物上，是通過混合該氨基醛在乙酸和二甲基甲酰胺的溶液而進(jìn)行的；c)自樹脂上切割肽，并通過與三乙胺和二苯基磷酰疊氮化物反應(yīng)，將線型的肽衍生物環(huán)合。
3.一種式1的肽衍生物或其藥用鹽作為藥用活性物質(zhì)，
式中A1是Gln，gln，His，his，Asn，asn或下式的一個(gè)基團(tuán)
式中R″是一個(gè)氨基取代的C1～C5烷基；A2是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)或phe(4′-NO2)；A3是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)，phe(4′-NO2)，Val或val；A4是Gly，Ala，ala或β-Ala；B是如下基團(tuán)之一
-S-CH2-，-O-CH2-，-CH＝CH-，
-CH2-CH(OH)-，和
式中R是氫原子或C1～C4烷基，或是苯基亞烷基，該亞烷基部分是直鏈或支鏈，含1～6個(gè)碳原子，苯基部分是未被取代或被C1～C4烷基，C1～C4烷氧基，羥基或鹵素單取代；R1和R2各自獨(dú)立地是選自如下基團(tuán)異丙基，異丁基，仲丁基，正丁基和2-(甲硫)乙基。
4.式1的一種肽衍生物或其藥用鹽作為神經(jīng)激肽A的拮抗劑的用途
式中A1是Gln，gln，His，his，Asn，asn或下式的一個(gè)基團(tuán)
式中R″是一個(gè)氨基取代的C1～C5烷基；A2是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)或phe(4′-NO2)；A3是Trp，trp，Phe，phe，Tyr，tyr，Phg，phg，Cha，cha，Phe(4′-Cl)，phe(4′-Cl)，Npa，npa，Phe(4′-NO2)，phe(4′-NO2)，Val或val；A4是Gly，Ala，ala或β-Ala；B是下式中的一個(gè)基團(tuán)
-S-CH2-，-O-CH2-，-CH＝CH-，
-CH2-CH(OH)-，和
式中R是氫原子或C1～C4烷基，或是苯基亞烷基，該亞烷部分是直鏈或支鏈，含1～6個(gè)碳原子，苯基部分是未被取代的或被C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、羥基或鹵素單取代；R1和R2各自獨(dú)立地選自如下的基團(tuán)異丙基，異丁基，仲丁基，正丁基和2-(甲硫)乙基。
全文摘要
本說明書敘述了神經(jīng)激肽A的拮抗劑，為天然存在的神經(jīng)激肽A的衍生物，該神經(jīng)激肽A的羧基端上連結(jié)兩個(gè)氨基酸的酰胺鏈被修飾了。用常規(guī)的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用和生化測(cè)定以及常規(guī)的生理試驗(yàn)證明了該拮抗作用，并敘述了這些衍生物在各種與神經(jīng)激肽A有關(guān)的狀態(tài)下的用途。
文檔編號(hào)A61P15/00GK1049353SQ9010697
公開日1991年2月20日 申請(qǐng)日期1990年8月9日 優(yōu)先權(quán)日1989年8月10日
發(fā)明者斯考特·L·哈伯森, 史帝芬·H·布克 申請(qǐng)人:默里爾多藥物公司