專利名稱：蛋白水解物,其制造方法以及含有該蛋白水解物的飲食品的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及蛋白水解物、其制造方法以及含有該蛋白水解物的飲食品。尤其涉及抗原性低、乳化性良好的蛋白質分解物和含有這種分解物的飲食品。本發(fā)明還涉及以高回收率制備得到這種蛋白質分解物的方法。
背景技術：
近年來，有關食物過敏的發(fā)生出現增高的趨勢，因此對有效的預防和治療過敏癥的重要性顯得越來越重要。
關于食品過敏的發(fā)生，其原因之一就是，嬰兒在飲用調制乳或調制乳粉等時，將不被完全消化的具有抗原性狀態(tài)的蛋白質吸收到體內。特別對那些可能為具有過敏癥因素的個體，為了預防過敏的發(fā)生，在嬰兒期攝取低抗原性的調制乳或調制乳粉是必要的。
為了達到上述要求，研究者們很早就開發(fā)了蛋白水解物，在開發(fā)的很多蛋白水解物中，對具有抗原性質的蛋白質如乳蛋白等進行水解，使其抗原性降低，殘余抗原活性為10-6以下(例如，可參考特公昭54-36235號公報，特公昭62-61039號公報，特公平7-73507號公報，特許第2959747號公報和特開平8-228692號公報)。但是，對這些蛋白水解物使用對殘余抗原活性高度敏感的測定法即夾心酶聯免疫吸附測定(ELISA)法，經過測定之后，發(fā)現抗原的殘余活性在10-7以上，這表明還殘留有一定的抗原性(后述)。
另一方面，由于增大水解力度可使蛋白質的乳化性降低，采用高度水解物質得到的調制乳中不能維持內部脂肪球的乳化狀態(tài)，這些脂肪球凝集析出。如此得到的脂肪析出的調制乳，不僅外觀，口味不好，而且脂肪的吸收率也低下。
為了解決這個課題，在特定的pH條件下的乳清蛋白質，通過特定的三種酶水解，得到了降低了殘余抗原活性，乳化性優(yōu)良的蛋白水解物(特開平7-203844號公報)。然而這種殘余抗原活性為10-5，其抗原性并沒有得到充分的降低(后述)。
現在，預防和治療過敏癥成為重要的課題，使食品中的殘余抗原活性降低接近于零可減少發(fā)生食品過敏的可能性并提供安全的飲食品。這才是社會賦予食品廠商的使命。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的就是得到改進了乳化性并進一步降低抗原性的蛋白水解物。具體地說，使蛋白質中的殘余抗原活性降低至用夾心酶聯免疫吸附測定(ELISA)法的檢出極限，和/或根據起始原料蛋白提高所述蛋白水解物的回收率。
對于各種蛋白水解物的制造方法，尤其是各種各樣的起始原料蛋白的水解條件以及與各種多孔型合成吸附劑的組合，還有關于所得蛋白水解物的特征，本發(fā)明人都做了深入細致的研究，最后終于完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的蛋白水解物中包含至少2種肽，所述蛋白水解物的特征是，它的水解率為30％-45％，數均分子量為不超過300，重均分子量與數均分子量之比為大于1，不超過2，它與現有的蛋白水解物相比抗原性低，乳化性良好。
本發(fā)明的蛋白質水解物的制造方法，其特征是將蛋白質起始原料進行水解到水解率為30％-45％，再將其同時或分別接觸2種多孔型合成吸附劑，所述吸附劑的平均孔徑分別為2-8nm和20-30nm，每1g(當量蛋白質)所得蛋白水解物對應的兩種多孔合成吸附劑總表面積為300-3000m2，回收未被吸附的成分。與現有的蛋白水解物的制造方法相比，本發(fā)明方法所得蛋白水解物具有抗原性低、乳化性良好，起始原料蛋白的蛋白水解物回收率高。
另外，該制造方法中，還優(yōu)選所用的平均孔徑為2-8nm的多孔型合成吸附劑與平均孔徑為20-30nm的多孔型合成吸附劑之間的表面積比在4∶6至6∶4的范圍內。
本發(fā)明飲食品含有所述的本發(fā)明蛋白水解物。本發(fā)明的飲食品可作為預防過敏或為過敏患者提供的飲食品，特別是可作為以乳蛋白質為原材料制備得到的調制乳或調制乳粉。
因此，在本發(fā)明的附加的實施方案中，蛋白水解物可用作預防過敏或為過敏患者提供的飲食品或者用于制造所述的飲食品。
實施本發(fā)明的最佳方案本說明書中除了水解率外，除非特別指出百分比為重量百分比。另外，有關本說明書的當量蛋白質，其值是氮量乘以6.38。
本發(fā)明的蛋白水解物中包含至少2種類型的肽，本發(fā)明不包含從蛋白水解物中分離純化得到單一肽。1)數均分子量和重均分子量一般來說，數均分子量和重均分子量的表示如文獻(社團法人高分子學會編「高分子科學的基礎」第116至119頁，株式會社東京化學同人，1978年)所述，是將高分子化合物的分子量的平均值按照下面不同的指標來表示。
即，蛋白水解物等的高分子化合物是非均質的物質，而且因為有分子量分布的原因，為了物理化學上的計算方便，從而用平均分子量表示蛋白水解物的分子量是必要的。其數均分子量(以下，簡稱為Mn)是關于分子個數的平均值，肽鏈i的分子量是Mi，其分子數為Ni，則用以下形式表示Mn。Mn=Σi=1∞MiNi/Σi=1∞Ni]]>還有，重均分子量(以下簡稱Mw)是重量的平均值，可用以下形式定義。Mw=Σi=1∞Mi2Ni/Σi=1∞MiNi]]>Mn和Mw的關系在上式已明確表明，通常的關系為Mn≤Mw，Mn對高分子化合物中的低分子量物質敏感，而Mw對高分子量物質敏感。
原來，在具有單一確定的氨基酸序列的未分解蛋白質分子中，是沒有分子量的分布，Mn＝Mw，但當蛋白質分子被水解時，水解形成的各種各樣的肽斷片，其分子量在分子量分布范圍上存在較大的差異。即，分子量分布越廣Mn與Mw之間的差異就越大。因此，重均分子量與數均分子量的比值，即Mw/Mn的比值用作蛋白水解物分子量分布范圍的指標。
在本發(fā)明中，數均分子量和重均分子量使用本領域技術人員周知的高效液相色譜和GPC分析系統(tǒng)測定的值(例如，宇井信生等編「蛋白質或肽的高效液相色譜」，化學增刊102號第241頁，株式會社化學同人，1984年)。
在本發(fā)明的蛋白水解物中，其數均分子量為不超過300，優(yōu)選200-300。另外，重均分子量與數均分子量之比為大于1，不超過2。2)蛋白質的水解率本發(fā)明所述的蛋白質水解率用蛋白水解物中的甲醛氮與總氮量之比表示?？偟靠刹捎帽绢I域技術人員眾所周知的凱氏(Kjeldahl)定氮法測定，具體的測定方法如「食品分析法」102頁，株式會社光琳，1984等所記載的，可在試驗材料中添加汞，氧化汞(II)，硫酸銅作為分解促進劑，在濃硫酸·硫酸鉀或硫酸或發(fā)煙硫酸中進行加熱分解使試驗樣品中的氮轉換為硫酸銨，再加入強堿進行水蒸氣蒸餾，將游離的銨用一定量的酸吸收，通過反滴定法用過量的酸求出所吸收的銨量，再從這個銨量中算出總氮量。甲醛氮量是用在標準堿溶液中對游離氨基酸定量用本領域技術人員周知的方法甲醛滴定法求出所需氨基酸的定量值。例如滿田等編「食品工學實驗書」上卷第547頁，養(yǎng)賢堂，1970年記載的，將試驗材料預先用0.1N氫氧化鈉或0.1N鹽酸中和(或者pH調整為7)，添加福爾馬林，則變成羥甲基(oxymethyl)衍生物，再用酚酞啉的指示劑或用電位計在0.1N氫氧化鈉標準溶液中滴定羥甲基衍生物。按照[1ml的0.1N NaOH]＝[1.4mg的α-氨基酸氮]求出的氮量為甲醛氮量。
這樣從所得到的總氮量和甲醛氮量的值可計算出水解率水解率(％)＝(甲醛氮量/總氮量)×100本發(fā)明的蛋白質的水解率是30-45％。
以下，對本發(fā)明進一步詳細的說明，為了充分理解本發(fā)明，首先說明本發(fā)明的蛋白水解物的制造方法(以下稱為本發(fā)明的方法)。
在本發(fā)明的方法中使用的起始原料蛋白無特別的限定，它們分別是來源于動物的乳汁，卵，魚肉，牲畜肉等的動物性蛋白質，來源于大豆，小麥等的植物性蛋白及來源于真菌，酵母，細菌等的微生物蛋白質以及它們之間的任意混合物。另外，可以使用這些蛋白質通過超濾、離子交換樹脂等濃縮處理后的蛋白質濃縮物。上述蛋白質經過輕微水解得到的分解物，以及具有比較大的分子量蛋白水解物也可用作起始原料。
該起始原料蛋白在水或熱水中分散溶解。對該溶解液的濃度無特別的限制，但通常從其效果和操作性上考慮優(yōu)選蛋白質濃度為5-15％。
其次，上述蛋白質溶液優(yōu)選65-90℃溫度下加熱殺菌，時間為1-30分鐘，這樣可防止雜菌的污染。
對本發(fā)明的起始原料蛋白水解的方法不做特定的限制，只要蛋白質的水解率可調整為30-45％，可按照蛋白質分解酶法的常規(guī)方法進行操作。具體的是蛋白質的水解率可調整為30-45％，按照酶的種類、用量、溫度、pH、水解時間等的蛋白質分解酶法水解條件按照預先實驗確定，然后制備蛋白水解物。
又，水解率作為水解程度的指標，其指標范圍為30-45％，如后述的試驗例中表明，若水解率低于30％時還存在抗原性，若水解率超過45％時其最終制備的產品的蛋白水解物乳化性降低。
在本發(fā)明的起始原料蛋白水解的方法中所使用的蛋白酶可列舉來源于動物(例如胰酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶等)；來源于植物(例如番木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶等)；來源于微生物(例如乳酸菌、酵母、霉菌、枯草芽孢桿菌，放線菌等)的內蛋白酶及外蛋白酶(肽酶)以及它們的粗制純化物和細胞碎片等。
根據上述起始原料蛋白蛋白酶的使用量與底物濃度、酶的滴度、反應溫度及反應時間有關。一般每1g的起始原料蛋白加入50-10000個活性單位的酶的比例單獨或組合起來進行水解反應。另外，所添加的酶可一次或少量多次，或根據酶種類的不同有序地添加。
另外，蛋白質水解反應按照其使用的酶的pH值應在2-10范圍內進行適當的選擇。具體地說，在加入所述蛋白質溶液中酶之前，根據使用的酶種類通過添加酸或堿性劑調整所需pH值為2-10的范圍以內。這時所使用的酸可舉例為鹽酸、檸檬酸、磷酸等，而堿性劑為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀等。
對蛋白質水解反應的溫度無特別的限制，通常選擇酶作用的最適溫度在30-70℃的范圍內。比酶促反應最佳的溫度低或高，例如維持在50-60℃的范圍內進行蛋白質水解反應，可防止其蛋白質的腐敗。
蛋白質水解反應的時間依據使用酶的種類及組合、反應溫度、最初pH等的反應條件其反應進行的狀態(tài)不同，如前所述，在預實驗中所設定的蛋白質水解率可調整為30-45％，在這個范圍內確定其持續(xù)反應時間。
酶促反應的終止依據在預實驗中所設定的水解條件其水解程度，當達到所述蛋白質的水解率在30-45％的范圍內時，通過酶的失活或除去酶來停止酶促反應?？赏ㄟ^加熱處理(例如，85℃15分鐘等)來實施酶失活?？赏ㄟ^超濾等實施除去酶的操作。水解液中的酶的滅活或除去之后，根據需要，利用硅藻土(如，鈰硅石等)、微濾、超濾、離心分離等操作從水解液中除去沉淀物。
所得到的含有蛋白水解物的溶液，可直接使用或根據需要，采用公知的方法如反滲透膜法使得到的溶液濃縮，并可使用該濃縮液，進一步按照公知方法可使?jié)饪s液干燥制成粉末并在還未通過多孔型合成吸附劑處理(以后進行)前，按預定的濃度溶于水中來使用。
在本發(fā)明方法中所使用的多孔型合成吸附劑是一種具有多孔質構造的所謂多孔型吸附劑，其表面含有很多直徑為數nm-數十nm的小孔。眾所周知，樹脂表面積大吸附性強。已知這些吸附劑基于范德化力疏水性地吸收物質，如臭氣成分、苦味成分、氨基酸等，因為除去吸附成分的再生工藝比較容易，它們是工業(yè)中常用的一種吸附劑。
另外，多孔型合成吸附劑的樹脂基體構造主要由苯乙烯和二乙烯基苯的共聚物或甲基丙烯酸酯系聚合物所構成。這些樹脂并不導入離子交換基團，它們可以耐受物理及化學上的處理如加熱、酸處理、堿處理等。因此，它們易于進行洗滌、殺菌，并適合于制造避免細菌污染的飲食品或醫(yī)藥品。
另外，作為多孔型合成吸附劑，市場上銷售的吸附劑根據樹脂的種類不同具有各種各樣的平均孔徑。由于平均孔徑的大小對吸附的目標物質的親和性存在很大的影響，所以平均孔徑的大小可作為選擇吸附劑的指標，為了與所需要的相一致，必須按照平均孔徑的大小選擇吸附劑。
有關本發(fā)明的方法，如后述的試驗例表明，為了有效地制備抗原性極低，乳化性能良好的蛋白水解物必需使用2種類型的平均孔徑分別是2-8nm及20-30nm的多孔型合成吸附劑。
在本發(fā)明方法中，只要吸附劑是具有平均孔徑為2-8nm的多孔型合成吸附劑均可使用，例如可使用市售的SEPABEADS SP-825、SEPABEADS SP-850、DIAION HP-21(均為三菱化學公司)、Amberlite XAD-4、AmberliteXAD-2000(均為Rohm & Haas)等。
在本發(fā)明方法中，只要所使用的吸附劑是具有平均孔徑為20-30nm的多孔型合成吸附劑均可，例如可使用市售的SEPABEADS HP-1MG、SEPABEADS SP-206、DIAION HP-20(均為三菱化學公司)等。
根據本發(fā)明的多孔型合成吸附劑的吸附處理按照下列方式進行。應用上述調制的水解率在30-45％的范圍內的蛋白水解制備5-20％濃度物溶液，用上述2種類型的多孔型疏水性合成吸附劑與該溶液同時或分別接觸，進行吸附處理。
吸附處理優(yōu)選以高效方式與上述蛋白水解物和上述2種類型的多孔型合成吸附劑接觸，具體的是在容器或反應罐中加入一定量的蛋白水解物溶液并添加一定量的已制成漿料狀的多孔型合成吸附劑，輕輕攪拌或靜置一定時間，或一定量的蛋白水解物溶液通過充填了一定量的多孔型合成樹脂的柱，從而達到所設定的接觸時間?？刹捎蒙鲜鰞煞N方法中的任一種進行吸附處理。
根據柱層析法進行吸附處理時，蛋白水解物溶液和吸附劑的接觸時間通常以空間速度(Space Volume，以下稱為SV)表示，一小時內一定體積的蛋白水解物溶液通過同等體積吸附劑的速度定為SV＝1(單位；h-1)。這個速度越慢表明蛋白水解物溶液和合成吸附劑接觸時間越長，吸附性越高。但速度極慢時可使生產效率很差，通常優(yōu)選SV＝0.5-5h-1的范圍，更優(yōu)選優(yōu)選1-3h-1的范圍。
另外，吸附處理的pH，因為吸附目標物到多孔型合成吸附劑的吸附機制一般為疏水性吸附，優(yōu)選吸附在目標物不帶電荷的pH中進行，通常優(yōu)選在pH5-7的范圍內進行吸附處理。
進一步，如果考慮到了蛋白水解物的物理特性、品味、細菌增殖等的衛(wèi)生條件吸附處理的溫度可無特定的限制。
在吸附處理中上述2種多孔型合成吸附劑可混合后同時使用或分別使用。即，可使用含有平均孔徑2-8nm的多孔型合成吸附劑或含有平均孔徑20-30nm的多孔型合成吸附劑其中之一進行吸附處理，然后繼續(xù)使用多孔型合成吸附劑的另一種進行吸附處理。
然而，多孔型合成吸附劑是多孔構造，其表面積大。根據吸附目標物的量調整多孔型合成吸附劑的使用量(接觸表面積)是必要的。即，如果按照吸附目標物量，多孔型合成吸附劑使用量過多時，除吸附目標物外甚至要回收的物質也被吸附，回收率會降低。反之，如果多孔型合成吸附劑用量太少，吸附目標物去除不足，抗原性沒有充分減低。
本發(fā)明方法中的吸附劑的使用量在后述的試驗例將明確闡明，為了高回收率地生產出抗原性低，乳化性良好的蛋白水解物，有必要對上述蛋白質水解率調整在30-45％的范圍內的每1g蛋白水解物(當量蛋白質)，使分別使用的2種類型平均孔徑在2-8nm及平均孔徑在20-30nm的范圍的多孔型合成吸附劑總表面積在300-3000m2的范圍內。
通過酸或堿洗滌可將吸附的目標物如吸附的抗原性物質去掉，很容易地使用過的吸附劑再生，這樣吸附劑可反復使用。
還有，本發(fā)明方法的平均孔徑為2-8nm的多孔型合成吸附劑與平均孔徑為20-30nm的多孔型合成吸附劑的表面積的比，可在3∶7-7∶3的范圍內。根據蛋白質的水解率優(yōu)選在這個范圍內改變表面積比。當對水解率高的蛋白水解物進行吸附處理時，優(yōu)選增大平均孔徑為2-8nm的多孔型合成吸附劑的表面積的比例。
另外，當本發(fā)明的方法中使用的吸附劑平均孔徑為2-8nm的多孔型合成吸附劑與平均孔徑為20-30nm的多孔型合成吸附劑的表面積的比為4∶6-6∶4時，后述的試驗例將有明確的闡明，這個針對起始原料蛋白的蛋白水解物的回收率更好，因此，它是優(yōu)選的。
優(yōu)選對所得到的含有蛋白水解物的溶液進行超濾等過濾處理。具體地使用為6000道爾頓以下，即使用市售的在1000-6000道爾頓截留分子量的超濾膜，進行過濾處理，除去部分可能被截留的高分子量物質，回收透過膜的級分。
所得到的含有蛋白水解物的溶液，可直接使用或根據需要，采用公知的方法如反滲透膜法使得到的溶液濃縮，并可使用該濃縮液。而且進一步按照公知方法可使?jié)饪s液干燥制成粉末使用。
通過以上的方法，可以使蛋白水解物中的抗原性物質有效地吸附到多孔型疏水性合成吸附劑上，還可根據起始原料蛋白很好地保持蛋白水解物的回收率。此外，本發(fā)明的方法制備的蛋白水解物與被分離純化的肽不同，與已知所有的技術相比較，其抗原性低很多，基本上沒有抗原性。
根據所述本發(fā)明的方法制備的本發(fā)明的蛋白水解物，其特征是水解率在30-45％，數均分子量不超過300及重均分子量與數均分子量之比大于1，不超過2。
下面將對本發(fā)明的蛋白水解物進行詳細的說明。本發(fā)明的蛋白水解物其水解率是在30-45％及數均分子量不超過300，且抗原性減低，具有良好的乳化性。蛋白水解物重均分子量與數均分子量之比不超過2，表現出與單一分布(single distribution)近似的分子量分布，其中吸附除去了如高分子抗原性物質等的雜質，基本上沒有抗原性并具有良好性質。
僅當蛋白水解物是單一分子量的物質，表示是一種純化分離的肽時，重均分子量與數均分子量之比才為1。因此，根據蛋白水解物的重均分子量與數均分子量之比大于1的定義，很容易理解本發(fā)明的蛋白水解物是至少含有2種分子量不同的肽的組合物。
本發(fā)明第一個方面的蛋白水解物被認為具有良好的乳化性，并與目前所有的技術相比，抗原性低得多，具有基本上沒有抗原性的優(yōu)良特征。
本發(fā)明的飲食品含有本發(fā)明所述蛋白水解物。
由于本發(fā)明的蛋白水解物基本上無抗原性，所以包含蛋白水解物的飲食品被優(yōu)選用于預防過敏的飲食品或過敏患者所用飲食品。
在本發(fā)明中所說用于預防過敏飲食品是指以預防過敏為目的的飲食品其用于嬰幼兒，孕產婦，免疫機能低下的病人，作為蛋白質的供給源，為了達到上述目的飲食品的抗原性必須充分減低。
另外，所述用于為過敏患者提供的飲食品是指作為蛋白質的供給源患者飲用后不引起過敏發(fā)作的飲食品，很明顯攝取了含有抗原性的飲食品這些患者會過敏發(fā)作，而這些飲食品的抗原性已足夠低，可用于此目的。
進一步，本發(fā)明的基本上無抗原性的蛋白水解物乳化性良好。因此，優(yōu)選用作調制乳粉或調制乳的原料。即，以本發(fā)明蛋白水解物為原料所得到的調制乳粉或調制乳不會存在傳統(tǒng)的抗原性調制乳的分離脂肪問題，而其具有外觀，品味及吸收率方面的優(yōu)點。
實施例用以下實施例和試驗例，對本發(fā)明進行詳細說明，但并非對本發(fā)明范圍的限定。
以下的試驗例中采用下面的試驗方法。(1)蛋白質水解率的計算方法采用凱氏法(日本食品工業(yè)學會編「食品分析法」，102頁，株式會社光琳，昭和59年)測定樣品中的總氮量，采用甲醛滴定法(滿田等編「食品工學實驗書」上卷，547頁，養(yǎng)賢堂，1970年)測定樣品中的甲醛氮量，根據這些測定值的水解率采用下式計算。
水解率(％)＝(甲醛氮量/總氮量)×100(2)數均分子量及重均分子量的測定方法根據高效液相色譜進行了測定(宇井信生等編「蛋白質或肽的高效液相色譜」，化學增刊102號，241頁，株式會社化學同人，1984年)。
具體的測定是使用多羥基乙基-天冬酰胺層析柱[Poly HydroxyethylAspartamide Column(Poly LC公司)；直徑4.6mm及長度400mm]，用20mM氯化鈉，50mM甲酸以0.5ml/分鐘洗脫速度洗脫。使用UV檢測儀(島津制作所；215nm吸光值)測定分子量的分布，采用GPC分析系統(tǒng)(島津制作所)分析數據，算出數均分子量及重均分子量。(3)殘余抗原活性的測定方法采用夾心酶聯免疫吸附測定(ELISA)法進行了測定(松橋直等著，「免疫學實驗入門」，160頁，學會出版中心，1985年)。
具體的測定是使用將抗原蛋白給與兔子免疫純化得到兔子抗血清的特異抗原IgG，用0.1M碳酸氫鹽緩沖液稀釋該特異IgG，在聚苯乙烯材料的微量培養(yǎng)板(Nunc公司)的各孔中分別注入100μl，37℃靜置2小時，然后用含有0.05％Tween20的PBS(以下，稱為PBS-Tween)洗滌。
接著，將含有1％明膠的PBS(Bio-Rad公司)分別以100μl注入上述的各孔中，37℃靜止30分鐘，然后用PBS-Tween洗滌。采用PBS-Tween分別稀釋樣品及標準蛋白質，分別以100μl注入上述的各孔中，37℃靜置1小時，用PBS-Tween洗滌。
通過PBS-Tween來稀釋生物素化的特異IgG，每孔分別注入100μl，37℃靜置1個小時，然后用PBS-Tween洗滌。將鏈抗生物素蛋白以及生物素化的過氧化物酶溶于PBS，每孔分別注入100μl，用PBS-Tween洗滌。
作為底物分別注入100μl的o-Pherenamine溶液于上述的孔中，使其在室溫避光下反應10分鐘，每孔中各添加3M硫酸50μl使反應停止。
接著，應用讀板儀測定反應產物492nm下的吸光度，比較標準蛋白質的測定值并計算出樣品的殘余抗原活性。(4)乳化性的評價方法樣品100g，玉米油(太陽油脂公司)200g及卵磷脂(味之素公司)4g添加溫水(60℃)300ml，用TK高速攪拌機(homo-mixer)(特殊機化工業(yè)公司)進行預乳化，調整添加水量至1000ml，用勻化器(homogenizer)(APV)在第一段的壓力為5MPa，第二段的壓力為15MPa的情況下使其乳化。所得到的乳化物用肉眼觀察有無脂肪的分離，乳化性采用下述的標準進行評價。
良 無脂肪分離不良有脂肪分離(5)蛋白質水解物的回收率的計算方法蛋白質水解物的回收率(A)，依據起始原料蛋白的干重(B)及所得的蛋白質水解物的干重(C)，用下式計算。
A(％)＝(C/B)×100
這樣的水解液，采用截留分子量20000的超濾膜(日東電工)過濾，凍干濾液，得到粉末狀的蛋白質水解物約1090g(當量蛋白質為840g)。
接著，將得到的全部的蛋白質水解物用9810g去離子水溶解，得到10.9kg的蛋白質水解物溶液，其濃度約10％。
使用的多孔型合成吸附劑有2種，它們分別為720g(表面積42萬m2)平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑[DIAION HP-21(三菱化學)；比表面積為583m2/g]和820g(表面積42萬m2)平均孔徑為26nm的多孔型合成吸附劑[DIAION HP-20(三菱化學)；比表面積為511m2/g]，以表面積的比為1∶1的比例混合，將混合的1540g吸附劑上樣于41容量的丙烯柱上。
將上面所得全部的蛋白質水解物溶液在上述多孔型合成吸附劑充填柱中10℃下過液，其流速為SV＝3h-1，上述2種類型的吸附劑同時與蛋白質水解物接觸，即每1g(當量蛋白質)蛋白質水解物與2種類型的多孔型合成吸附劑接觸時其總表面積應為1000m2?；厥瘴龀鲆?，凍干，得到約910g的蛋白質水解物(當量蛋白質為700g)。
按照上述試驗方法得到的蛋白質水解物，其數均分子量為260，重均分子量與數均分子量的比值為1.8，殘余抗原活性極低為10-8，乳化性良好，蛋白質水解物按照起始原料蛋白的回收率高達70％。
對這種水解液用硅藻土過濾除去不溶物質，凍干水解液，得到粉末狀的蛋白質水解物約93g(當量蛋白質為78g)。
接著，將得到的全部蛋白質水解物用837g去離子水溶解，得到約10％的蛋白質水解物溶液930g。
使用2種多孔型疏水性合成吸附劑，一種是63g(表面積為62,400m2)平均孔徑為4nm的多孔型合成吸附劑[SEPABEADS SP-850(三菱化學)。比表面積為995m2/g]，另一種是183g(表面積為93,600m2)平均孔徑為26nm的多孔型合成吸附劑[DIAION HP-20(三菱化學)；比表面積為511m2/g]，將這兩種吸附劑分別以表面積的比為4∶6的比例混合，再將混合的246g的吸附劑上樣于1,000ml容量的玻璃柱上。
將上面所得全部的蛋白質水解物溶液在上述多孔型合成吸附劑充填柱中25℃下流過，其流速為SV＝2h-1，上述2種類型的吸附劑同時與蛋白質水解物接觸。即每1g(當量蛋白)蛋白質水解物與2種類型的多孔型合成吸附劑接觸時其總表面積應為2,000m2?；厥障疵撘翰龈?，得到約78g的蛋白質水解物(當量蛋白質為65g)。
按照上述試驗方法得到的蛋白質水解物，其數均分子量為258，重均分子量與數均分子量的比值為1.7，殘余抗原活性極低為10-8，乳化性良好，按照起始原料蛋白蛋白質水解物的回收率高達65％。比較例1按照特公昭54-36235號公報(以下稱為現有技術1)的實施1所述的方法制備蛋白質水解物。
市售酪蛋白(Hammerstein Casein，Merck)1kg加水9kg，使其完全分散。加入2N氫氧化鈉水溶液調整pH為7.0，酪蛋白完全溶解，制備約10％的酪蛋白水溶液。該蛋白溶液在85℃中經過15分鐘殺菌，冷卻到50℃。，就酪蛋白溶液中每1g的蛋白質而言，分別加入瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)(Hansen公司出售的菌株)的凍干的破碎細胞(20,000個活性單位/g)，藥典胰酶(official pancreatin)[天野制藥，25,000個活性單位/g]和天野A[天野制藥，80,000個活性單位/g]各1,000個活性單位，相當于對每1g的蛋白質加入的3種酶的活性單位總和為3,000，在50℃下保持24小時，使酪蛋白分解。然后在80℃下加熱15分鐘使酶失活，冷卻后得到約9.51的酪蛋白分解液。比較例2按照特公昭62-61039號公報(以下稱為現有技術2)的實施例2所述的方法制備蛋白水解物。
使乳清蛋白在5,000截留分子量的超濾膜的酶反應器中進行連續(xù)的酶分解。條件是在40℃，pH8.5，初始蛋白質含量為84.4g/l，使用的堿為2HKOH，酶/底物的比為11.8％，預水解時間為2小時，供給反應器的溶液的蛋白質含量為45.5g/1。比較例3按照特公平7-73507號公報(以下稱為現有技術3)的實施例1所述的方法制備蛋白水解物。
用10％氫氧化鈉溶液調節(jié)市售的酪蛋白(200g)的pH為8.0，使溶解度為10wt％。在90℃下加熱10分鐘殺菌后，將溫度調整為45℃，分別加入胰酶F(天野制藥)10g、蛋白酶N“天野”(天野制藥)2g、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)菌體提取物(每1g相當于20,000個活性單位)4g，經過24小時45℃酶的水解。在90℃5分鐘加熱使酶失活后，過濾除去沉淀物。將濾液凍干得到凍干物170g。將該凍干物18g配制為20wt％水溶液，除去不溶物后，用Sephadex G-1010×20cm柱洗脫。在洗脫液中使用去離子水，其流速為10ml/分。分級洗脫液200-500ml，凍干，得到干燥物6g。比較例4按照特許第2959747號公報(以下稱為現有技術4)的實施例1所述的方法制備蛋白水解物。
將純度為75％的1kg牛奶乳清蛋白粉末(California Protein)用去離子水9kg溶解，在75℃下經過15秒殺菌，調整pH為9.0。添加蛋白酶N天野(天野制藥)180萬PUN單位(1個乳清蛋白相當于2,400PUN單位)和瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)的菌體破碎物6.8萬個活性單位(每1g乳清蛋白相當于90個活性單位)，在50℃下水解。用Biotech Analyzer(旭化成工業(yè))測定隨時間變化游離的賴氨酸量，當游離賴氨酸的量達到14％時，在80℃下加熱6分鐘使酶失活。冷卻后用檸檬酸調整pH為6.0。用截留分子量10,000的超濾膜(日東電工)進行超濾，得到含有5.9％的乳清蛋白水解物溶液約16kg。比較例5按照特開平8-228692號公報(以下稱為現有技術5)的實施例1所述的方法制備蛋白水解物。
市售的酪蛋白(New Zealand Dairy Board)1kg加水9kg，充分分散，用10％的氫氧化鈉水溶液，調整溶液的pH值為7.0，使酪蛋白完全溶解，制備濃度約為10％的酪蛋白水溶液。該酪蛋白水溶液在85℃加熱10分鐘殺菌后，調整溫度至50℃，用氫氧化鈉調整pH為9.5后。添加Bioplase SP-20(長瀨生化學工業(yè))1,008,000個活性單位(每1g蛋白質相當于1,200個活性單位)、蛋白酶N(天野制藥)1,680,000個活性單位(每1g蛋白質相當于2,000個活性單位)和PTN6.0S(Novo Nordisk)5,880,000個活性單位(每1g蛋白質相當于7,000個活性單位)，啟動水解反應。分別測定隨時間變化的酪蛋白的水解率及用L-氨基酸測定儀(sensor)[Biotech Analyzer(旭化成工業(yè))]測定16種氨基酸摩爾數的總測定值。當酪蛋白的水解率為24.1％和用L-氨基酸測定儀測定的數值為6.0mM時，80℃下加熱6分鐘使酶失活，停止酶反應，冷卻到10℃。在水解液中加入輔助過濾劑Standard Super Cell(東京硅藻土公司)吸濾。然后，所得到的濾液按常規(guī)的方法濃縮，噴霧干燥，得到噴霧干燥物0.96kg。比較例6按照特開平7-203844號公報(以下稱為現有技術6)的實施例2所述的方法制備蛋白水解物。
市售的WPC(蛋白質含量為85％，Denmark Protein公司)3kg在17kg的純化水中溶解，用板型殺菌裝置(plate sterilizer)在75℃下經過15秒殺菌。在其中添加氫氧化鉀溶液調整其pH為8.0。對于每1g蛋白質加入Bioplase(長瀨產業(yè))1,000PUN單位、胰蛋白胨(Novo)10,000USP單位，papain(天野制藥)2,000PUN單位和蛋白酶A天野(天野制藥)200PUN單位，在50℃下經過12小時水解。水解后的水解液pH值為6.4，用氫氧化鈉調整pH為7.3，用板型殺菌裝置85℃5分鐘，130℃2秒鐘加熱使酶失活。再按常規(guī)的方法濃縮水解液，干燥，得到粉末狀的乳清蛋白水解物約3kg。試驗例1該試驗是為了證明本發(fā)明的蛋白水解物及制備方法優(yōu)于現有技術。(1)樣品使用下述7種樣品?！げ捎帽景l(fā)明實施例1制備得到的蛋白水解物·采用比較例1(與現有技術1中的實施例1相同的方法)制備得到的蛋白水解物·采用比較例2(與現有技術2中的實施例2相同的方法)制備得到的蛋白水解物·采用比較例3(與現有技術3中的實施例1相同的方法)制備得到的蛋白水解物·采用比較例4(與現有技術4中的實施例1相同的方法)制備得到的蛋白水解物·采用比較例5(與現有技術5中的實施例1相同的方法)制備得到的蛋白水解物·采用比較例6(與現有技術6中的實施例2相同的方法)制備得到的蛋白水解物(2)試驗方法分別依上述各試驗的方法針對樣品的蛋白質的水解率，數均分子量，重均分子量與數均分子量與的比值(Mw/Mn)，殘余抗原活性及乳化性進行測定。(3)試驗結果從表1可知這些試驗結果。將本發(fā)明實施例1的蛋白水解物與現有技術的比較例1-6相比，其蛋白水解物的殘余抗原活性極低，而且乳化性優(yōu)良。
另外，關于本發(fā)明的樣品，適當改變起始原料蛋白的種類，蛋白質水解率在30-45％的范圍內改變，數均分子量在不超過300以及Mw/Mn的比值大于1，不超過2時改變，幾乎可得到同樣的試驗結果。
表1
試驗例2本試驗是為了以殘余抗原活性及乳化性作為試驗的指標確定合適的蛋白水解物的水解率。(1)樣品的制備除了通過改變酶反應的停止時間，如表2所示，逐級地改變起始蛋白材料的水解率外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備了4種樣品(實施例3和4，以及比較例7和8)。(2)試驗方法分別依上述試驗方法針對各樣品的蛋白質的水解率，數均分子量，重均分子量與數均分子量的比值(Mw/Mn)，殘余抗原活性及乳化性進行測定。(3)試驗結果該試驗結果如表2所示。為了制備抗原性極低，乳化性優(yōu)良的蛋白水解物，必須將起始原料蛋白的水解率在30-45％的范圍之內改變。
另外，表2還表明了當數均分子量不超過300時，殘余抗原活性極低，從乳化性考慮優(yōu)選數均分子量不小于200。
又，若在大于1，不超過2的范圍內適當改變Mw/Mn，以及起始蛋白質的種類，所得試驗結果幾乎相同。
表2
試驗例3本試驗是以殘余抗原活性、乳化性及回收率作為試驗的指標研究多孔型疏水性合成吸附劑的平均孔徑的大小及其組合。(1)樣品的制備使用平均孔徑大小不同的市售多孔型合成吸附劑，改變其平均孔徑的大小和它們的組合，除此之外，其它均采用與實施例1相同的方法按照以下的描述制備了28種樣品(實施例7-10和比較例9-32)。實施例7除了使用的2種類型的多孔型合成吸附劑是平均孔徑為2nm的多孔型合成吸附劑(商品名SEPABEADS-SP-825，三菱化學)和平均孔徑為20nm的多孔型合成吸附劑(商品名SEPABEADS HP-2MG，三菱化學)外，采用與實施例1同樣的方法制備得到本發(fā)明蛋白水解物。實施例8除了使用的2種類型的多孔型合成吸附劑是平均孔徑為2nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為30nm的多孔型合成吸附劑(商品名SEPABEADS-SP-206，三菱化學)外，采用與實施例1同樣的方法制備得到本發(fā)明蛋白水解物。實施例9除了使用的2種類型的多孔型合成吸附劑是平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為20nm的多孔型合成吸附劑外，采用與實施例1同樣的方法制備得到本發(fā)明蛋白水解物。實施例10除了使用的2種類型的多孔型合成吸附劑是平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為30nm的多孔型合成吸附劑外，采用與實施例1同樣的方法制備得到本發(fā)明蛋白水解物。比較例9除了單獨使用平均孔徑為1nm的多孔型合成吸附劑(商品名SEPABEADS-SP-205，三菱化學)作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例10除了單獨使用平均孔徑為2nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例11除了單獨使用平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例12除了單獨使用平均孔徑為10nm的多孔型合成吸附劑(商品名SEPABEADS-SP-207，三菱化學)作為多孔型合成吸附劑外，采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例13除了單獨使用平均孔徑為20nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例14除了單獨使用平均孔徑為30nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例15除了單獨使用平均孔徑為40nm的多孔型合成吸附劑(商品名Amberlite X4D-9，Rohm & Haas)作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例16除了使用2種類型的平均孔徑為1nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為2nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例17除了使用2種類型的平均孔徑為1nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例18除了使用2種類型的平均孔徑為1nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為10nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例19除了使用2種類型的平均孔徑為1nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為20nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例20除了使用2種類型的平均孔徑為1nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為30nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例21除了使用2種類型的平均孔徑為1nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為40nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例22除了使用2種類型的平均孔徑為2nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例23除了使用2種類型的平均孔徑為2nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為10nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例24除了使用2種類型的平均孔徑為2nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為40nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例25除了使用2種類型的平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為10nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例26除了使用2種類型的平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為40nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例27除了使用2種類型的平均孔徑為10nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為20nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例28除了使用2種類型的平均孔徑為10nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為30nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例29除了使用2種類型的平均孔徑為10nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為40nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例30除了使用2種類型的平均孔徑為20nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為30nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例31除了使用2種類型的平均孔徑為20nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為40nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。比較例32除了使用2種類型的平均孔徑為30nm的多孔型合成吸附劑和平均孔徑為40nm的多孔型合成吸附劑作為多孔型合成吸附劑外，其他均采用與實施例1同樣的方法制備得到的本發(fā)明蛋白水解物。(2)試驗方法各樣品的殘余抗原活性、乳化性及蛋白回收率均采用上述的試驗方法進行測定。(3)試驗結果試驗結果如表3所示。從表3可知，為了制備殘余抗原活性極低、乳化性優(yōu)良且回收率高達60％以上的蛋白水解物，必須使用平均孔徑分別為2-8nm和平均孔徑為20-30nm的2種類型的多孔型合成吸附劑。
另外，適當改變起始蛋白質原料的種類，蛋白質水解率在30-45％的范圍內改變，或者對水解率在30-45％的范圍內水解起始蛋白質原料得到的每1g蛋白水解物(蛋白質當量)只要所述2種類型的多孔型合成吸附劑的使用總表面積在300-3000m2的范圍內適當改變，幾乎可得到同樣的試驗結果。
表3
試驗例4本試驗以殘余抗原活性及回收率作為指標研究了多孔型合成吸附劑的使用表面積及合適的蛋白水解物的重均分子量與數均分子量之比。(1)樣品的制備如表4所示，除了改變對每1g蛋白水解物(當量蛋白質)多孔型合成吸附劑的使用面積(m2)之外，其他均與實施例1同樣的方法制備了4種的樣品(實施例9和10及比較例33和34)。(2)試驗方法各樣品的重均分子量與數均分子量的比值(Mw/Mn)、殘余抗原活性及回收率均采用上述的試驗方法進行了試驗。(3)試驗結果本試驗結果如表4所示。從表4可知，在制備抗原性極低、回收率高的蛋白水解物方法中，首先在水解率為30-45％的范圍內水解原料蛋白質，針對所得的每1g蛋白水解物(當量蛋白質)必需使用2種類型的多孔型合成吸附劑其總表面積在300-3000m2的范圍內，其平均孔徑分別為2-8nm和20-30nm。另外，試驗結果還表明蛋白水解物的重均分子量與數均分子量的比在不超過2時，抗原性極低。
又，適當的改變原料蛋白質的種類，蛋白質水解率的改變在30-45％的范圍內，數均分子量不超過300，以及適當改變2種類型的平均孔徑分別為2-8nm和20-30nm的多孔型疏水性合成吸附劑的組合所用的多孔型合成吸附劑的平均孔徑的大小及其組合，所得試驗結果幾乎相同。
表4
試驗例5本試驗以殘余抗原活性和回收率為指標研究了平均孔徑為2-8nm的多孔型合成吸附劑與平均孔徑為20-30nm的多孔型合成吸附劑表面積的比優(yōu)選范圍。(1)樣品的制備如表5所示，除了改變平均孔徑為8nm的多孔型合成吸附劑與平均孔徑為26nm的多孔型合成吸附劑的表面積之比外，其它均與實施例1相同的方法制備了4種樣品(實施例11和12及比較例35和36)。(2)試驗方法各樣品的殘余抗原活性及回收率均采用上述的試驗方法進行測定。(3)試驗結果本試驗結果如表5所示。從表5可明確得知，為了以更高的回收率來制備抗原性極低的蛋白水解物，優(yōu)選平均孔徑為2-8nm的多孔型合成吸附劑與平均孔徑為20-30nm的多孔型合成吸附劑的表面積之比為4∶6-6∶4。
又，適當改變起始蛋白質原料，在30-45％內改變蛋白質水解率，以及適當改變2種類型的平均孔徑分別為2-8nm和20-30nm的多孔型疏水性合成吸附劑的組合所用的多孔型合成吸附劑的平均孔徑的大小及其組合，以及針對水解原料蛋白質水解率在30-45％的范圍內所得的每1g蛋白質水解物(當量蛋白質)在300-3000m2的范圍內改變上述2種類型的多孔型合成吸附劑的使用總表面積，所得試驗結果幾乎相同。
表5
實施例13采用與實施例1同樣的方法制備得到的蛋白水解物25kg、乳糖(Meggle公司)68kg、棉子糖(日本甜菜制糖)1120g、麥芽糖糊精(松谷化學工業(yè))14.6kg、無機鹽(mineral)混合物(富田制藥)920g以及維生素混合物(田邊制藥)35g用純化水300kg溶解，然后再加入瑚珀酸甘油單脂(花王)450g和改性脂肪(modified fat)(太陽油脂)40kg，攪勻，在120℃經過2秒鐘殺菌之后，濃縮，噴霧干燥，得到用于預防過敏的乳粉約145kg。
所得的用于預防過敏的乳粉將其濃度調整為14％并調成乳液時，其乳化性和品味良好，蛋白質成分的殘余抗原活性極低，因此是適合用作預防過敏的理想飲料。
所得的過敏患者飲用的調制乳，其乳化性及品味良好，蛋白質成分的殘余抗原活性極低，是非常適用于為過敏患者提供的飲料。
在上述液狀物中添加琥珀酸甘油單酯(花王)140g、改性脂肪(太陽油脂)2.2kg、無機鹽混合物(富田制藥)400g和維生素混合物(田邊制藥)20g，用TK高速攪拌機(特殊機化工業(yè))預先乳化，加水至總量為100kg。
接著，使用高壓勻化器(Manton Gaulin)按照第一段壓力為5MPa、第二段壓力為50MPa的2個階段反復處理5次預乳化物并攪勻，調制成液狀食品約92kg。
分別將液狀食品約11kg，每200ml一袋裝入殺菌袋里(東洋制罐)。然后用殺菌機(日阪制作所)在125℃經過10分鐘殺菌，調制成過敏患者飲用的液狀食品50個單位。
所得的用于治療過敏的液狀食品，其乳化性及品味良好，蛋白質成分的殘余抗原活性極低。因此非常適用于為過敏患者提供的飲料。
工業(yè)利用本發(fā)明蛋白水解物的制造方法可很好地針對起始原料蛋白保持極佳的蛋白水解物的回收率的同時，對患有過敏癥者來說還可制造低抗原性且乳化性優(yōu)良的蛋白水解物。
本發(fā)明蛋白水解物具有良好的乳化性，基本上不具有抗原性，從這一點上來說，其蛋白水解物可應用于預防過敏癥以及為過敏患者提供的食品或飲料。
包含本發(fā)明蛋白水解物的飲食品乳化性良好，蛋白成分的殘余抗原活性極低。從這一點上來說，本飲食品可用作預防過敏癥的食品以及用于為過敏患者提供蛋白質如低抗原性調制乳以及調制乳粉等。具體地說，可包括各種飲食品如調制乳粉、調制乳、營養(yǎng)補品、病人營養(yǎng)食品、液狀食品等。
權利要求
1.一種包含至少2種肽的蛋白水解物，其特征在于，蛋白的水解率為30％-45％，其中所包含肽的數均分子量不超過300，并且重均分子量與該數均分子量之比大于1，但不超過2。
2.一種制備蛋白水解物的方法，其特征在于該方法包括以下步驟水解起始原料蛋白到水解率為30％-45％的范圍內；同時或分別使所得的水解物與2種類型的多孔型合成吸附劑接觸，回收未被吸附的成分，所述吸附劑的平均孔徑分別為2-8nm和20-30nm，對每1g所得蛋白水解物兩種吸附劑的總表面積為300-3000m2。
3.權利要求2所述蛋白水解物的制備方法，使用其中所述的具有平均孔徑分別為2-8nm和20-30nm的多孔型合成吸附劑，且平均孔徑2-8nm的多孔型合成吸附劑表面積與平均孔徑為20-30nm的表面積比在4∶6至6∶4的范圍內。
4.一種飲食品，其特征在于包含權利要求1所述的蛋白水解物。
5.權利要求4所述的飲食品，它是以來源于乳蛋白為起始原料蛋白制得的調制乳或調制乳粉。
6.權利要求4所述的飲食品，它是用于預防過敏的飲食品或為過敏患者提供的飲食品。
7.權利要求1所述蛋白水解物的應用，包括用于預防過敏的飲食品或用于過敏患者的飲食品，或者用于所述飲食品的制造。
全文摘要
一種蛋白水解物，其中含有至少2種類型的肽，該蛋白水解物的特征是，其蛋白的水解率為30％－45％，數均分子量不超過300，重均分子量與數均分子量之比為大于1，但不超過2，其具有良好的乳化性質，而且由于所述蛋白水解物抗原性低對有過敏癥易發(fā)因素者也可使用。獲得該蛋白水解物的方法是，在水解率為30％－45％的范圍內對起始原料蛋白進行水解，再將其同時或分別接觸2種多孔型合成吸附劑，所述吸附劑的平均孔徑分別為2－8nm和20－30nm，每1g(當量蛋白質)所得蛋白水解物對應的兩種多孔合成吸附劑總表面積為300－3000m
文檔編號C07K1/12GK1392877SQ01802995
公開日2003年1月22日 申請日期2001年3月12日 優(yōu)先權日2000年3月13日
發(fā)明者早澤宏紀, 田村吉隆, 宮川博, 七野俊和, 川口靖, 金原彥克 申請人:森永乳業(yè)株式會社