一種腦蛋白水解物的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生化制藥技術領域，具體的是一種腦蛋白水解物的制備方法。
【背景技術】
[0002]現(xiàn)階段提取方式是取豬腦組織，去除筋膜，制成腦勻漿物。然后脫脂、酶解、超濾和納濾等過程進行提取。
[0003]具體酶解過程是，取胃蛋白酶，置已加入純化水的水解(提取)罐內(nèi)，攪拌。取豬腦勻漿，加入上述胃蛋白酶水溶液中，用10% HC1溶液調(diào)測溶液pHl.8?2.0，保持物料溫度41°C 土1°C，不斷調(diào)測pHl.8?2.0，水解4-6小時。用10% ΝΑ0Η溶液調(diào)測胃蛋白酶水解物pH值至7.0?8.0，加入胰蛋白酶，保持溫度41°C ± 1°C，不斷調(diào)測溶液7.0?8.0，水解4-6小時。水浴加熱胰蛋白酶水解物，保溫15min，水浴冷卻至20-25 °C，板框過濾。
[0004]超濾過程是，將離心液用截留分子量為10000道爾頓、5000道爾頓的超濾器進行超濾；
[0005]納濾過程是，納濾濃縮截留分子量為90-150道爾頓，腦蛋白水解物稀溶液含氮量大于6mg/ml，得腦蛋白水解物。
[0006]上述過程得到的腦蛋白水解物溶液，僅適合制劑注射用腦蛋白水解物生產(chǎn)。生產(chǎn)效率低，提取液中含大量脂肪，納濾生產(chǎn)繁瑣，腦蛋白提取物粉粘性大，吸濕性大不利于制劑腦蛋白水解物片等生產(chǎn)。同時所制得的干燥粉粘度大，收率低。也有勻漿后直接用丙酮脫脂，但有機溶媒用量大且效果沒有本發(fā)明方法好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種腦蛋白水解物的制備方法。
[0008]為實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用的技術方案為:
[0009]一種腦蛋白水解物的制備方法，將預處理并干燥后豬腦經(jīng)丙酮浸泡2-3次脫脂，脫脂后干燥；而后用胰酶水解，水解后酶水解混合液分離收集上清，上清液純化濃縮、干燥即得到腦蛋白水解物粉。
[0010]所述豬腦預處理為將融化的豬大腦去除筋膜絞碎后，在真空干燥箱中50-60°C、真空度在-0.085MPa以下干燥，干燥后立即搶盤(嚴格控制干燥溫度不得過60°C )得豬腦干粉，待用。
[0011]所述豬腦干粉經(jīng)丙酮浸泡是將豬腦干粉用其2-3倍質(zhì)量的丙酮浸泡18-20小時，浸泡過程中每2小時攪拌一次，浸泡后過濾，壓榨濾渣，濾渣在50°C下，真空干燥12小時。
[0012]所述胰酶水解是將干燥后豬腦(即為經(jīng)丙酮浸泡壓榨后濾渣)中加入其質(zhì)量的10-12倍(W/W)的水攪拌均勻，用氨水調(diào)節(jié)PH為8.0-8.5，水浴加熱至48_52°C ;而后再加入干燥后豬腦質(zhì)量4%-5% (W/W)的胰酶原粉，保溫攪拌水解，水解3.5-4.5小時后再加入干燥后豬腦質(zhì)量2.3% -2.6% (W/W)的胰酶，保溫攪拌水解5.5-6.5小時得酶水解混合液。
[0013]所述胰酶水解后，將上述酶水解混合液加熱煮沸，保持微沸15_20min后，冷卻至25-30°C，而后用濃度為10% (質(zhì)量)的HC1溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0-7.0，靜置10-12小時，
靜置后取上清液待用。
[0014]所述收集的上清液用截留分子量為10000道爾頓的超濾器進行超濾，濾過液(腦蛋白水解物溶液)濃縮至上清液原體積的1/3-1/4，即為得腦蛋白水解物濃縮溶液，濃縮液減壓干燥，真空干燥溫度不得過60°C，粉碎即得腦蛋白水解物粉。
[0015]本發(fā)明所具有的優(yōu)點:
[0016]本發(fā)明在生化提取前，對原材料進行預處理，真空干燥先脫水，再使用有機溶劑脫月旨，使細胞結(jié)構(gòu)松散，增加了物質(zhì)的穩(wěn)定性，有利于生化提取，又減少了體積，便于存儲和運輸；減少了有機溶劑用量，經(jīng)有機溶劑處理后，減少了提取液的乳化程度及粘度，便于后續(xù)工序的超濾，利于純化。粉碎采用機械方法；提取使用胰酶水解，分次加胰酶，控制時間和PH值，使之水解完全，選擇適合的PH值，采用氨水堿化，避免提取液中大量使用強堿，蛋白變性及生成無機鹽；分離純化超濾，減壓干燥，提高了中間體和成品的收率，降低成本，工藝操作簡便、適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0017]本發(fā)明的提取物具有營養(yǎng)大腦細胞，疏通大腦微細血管的特性，達到恢復大腦活力、改善腦細胞功能、增加記憶力的效果，能全面改善記憶力減退等腦萎縮癥狀。
[0018]同時本發(fā)明制備的腦蛋白水解物，經(jīng)檢驗符合國家藥品質(zhì)量標準。即性狀棕黃色粉末、鑒別呈正反應、酸度5.0-7.0、蛋白質(zhì)合格、干燥失重小于4%、微生物限度合格、含量測定含總氮大于120mg符合規(guī)定。本發(fā)明制備的復方腦蛋白水解物制劑高于國家藥品質(zhì)量標準。
【附圖說明】
，
[0019]圖1為本發(fā)明實施例提供的腦蛋白水解物粉生產(chǎn)工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0020]實施例1
[0021]1.原材料預處理脫水脫脂:
[0022]取豬大腦，室溫下融化去除筋膜絞碎后，于真空干燥箱中50°C、真空度在-0.085MPa以下干燥，干燥后立即搶盤(嚴格控制干燥溫度不得過60°C )得腦干粉。
[0023]取腦干粉用干粉3倍質(zhì)量的丙酮浸泡18小時后，換丙酮浸泡，反復處理3次，而后過濾，壓榨濾渣，濾渣在50°C下，真空干燥12小時；其中，每次浸泡時每2小時攪拌一次。
[0024]2.胰酶水解:
[0025]將干燥后的濾渣加入至濾渣的10倍(w/w)量的水中，攪拌均勻，用氨氣調(diào)體系PH為8.0，水浴加熱至52°C，在加入上述干燥后的濾渣的4% (W/W)的胰酶原粉，52°C下保溫攪拌水解4小時，再加入上述干燥后濾渣重量的2.6% (W/W)的胰酶原粉，再于52°C下保溫攪拌水解6小時得酶水解混合液。
[0026]3.將上述酶水解液加熱煮沸，保持微沸15min后，冷卻至25°C，用HC1溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0，靜置10小時。取上清液。
[0027]4.上清液再用截留分子量為10000道爾頓的超濾器進行超濾，濾過液(腦蛋白水解物溶液)濃縮至上清液原體積的1/3，即為得腦蛋白水解物濃縮溶液，濃縮液減壓干燥真空干燥溫度不得過60°C，粉碎即得腦蛋白水解物粉。
[0028]上述獲得的腦蛋白水解物粉可用于制備復方腦蛋白水解物片。
[0029]上述獲得的腦蛋白水解物，收率達7%。經(jīng)檢驗符合國家質(zhì)量標準。即性狀棕黃色粉末、鑒別呈正反應、酸度5.0-7.0、蛋白質(zhì)合格、干燥失重小于4%、微生物限度合格、含量測定含總氮高于國家質(zhì)量標準規(guī)定。
[0030]實施例2
[0031]1.原材料預處理脫水脫脂:
[0032]取豬大腦，室溫下融化去除筋膜絞碎后，于真空干燥箱中60°C，真空度在-0.085MPa以下干燥，干燥后立即搶盤(嚴格控制干燥溫度不得過60°C )得腦干粉。
[0033]取腦干粉用干粉2倍質(zhì)量的丙酮浸泡20小時后，換丙酮浸泡，反復處理2次，而后過濾，壓榨濾渣，濾渣在50°C下，真空干燥12小時；其中，每次浸泡時每2小時攪拌一次。
[0034]2.胰酶水解:
[0035]將干燥后的濾渣加入至濾渣的12倍(w/w)量水中，攪拌均勻，用氨氣調(diào)體系PH為
8.5，水浴加熱至48°C，在加入上述干燥后的濾渣的5% (W/W)的胰酶原粉，48°C下保溫攪拌水解4小時，再加入上述干燥后濾渣重量的2.3% (W/W)的胰酶原粉，再于48°C下保溫攪拌水解6小時得酶水解混合液。
[0036]3.將上述酶水解液加熱煮沸，保持微沸20min后，冷卻至30°C，用HC1溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0，靜置12小時。取上清液。
[0037]4.上清液再用截留分子量為10000道爾頓的超濾器進行超濾，濾過液(腦蛋白水解物溶液)濃縮至上清液原體積的1/4，即為得腦蛋白水解物濃縮溶液，濃縮液減壓干燥真空干燥溫度不得過60°C，粉碎即得腦蛋白水解物粉。
[0038]上述獲得的腦蛋白水解物粉可用于制備復方腦蛋白水解物片。
[0039]上述獲得的腦蛋白水解物，收率達7%。經(jīng)檢驗符合國家藥品質(zhì)量標準。即性狀棕黃色粉末、鑒別呈正反應、酸度5.0-7.0、蛋白質(zhì)合格、干燥失重小于4%、微生物限度合格、含量測定含總氮高于國家標準規(guī)定。
【主權(quán)項】
1.一種腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于:將預處理并干燥后豬腦經(jīng)丙酮浸泡2-3次脫脂，脫脂后干燥；而后用胰酶水解，水解后酶水解混合液分離收集上清，上清液純化濃縮、干燥即得到腦蛋白水解物粉。2.按權(quán)利要求1所述的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于:所述豬腦預處理為將融化的豬大腦去除筋膜絞碎后，在真空干燥，待用。3.按權(quán)利要求1所述的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于:所述豬腦干粉經(jīng)丙酮浸泡是將豬腦干粉用其2-3倍質(zhì)量的丙酮浸泡18-20小時，浸泡過程中每2小時攪拌一次，浸泡后過濾，壓榨濾渣，濾渣在50°C下，真空干燥12小時。4.按權(quán)利要求1所述的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于:所述胰酶水解是將干燥后豬腦中加入其質(zhì)量的10-12倍(W/W)的水攪拌均勻，用氨水調(diào)節(jié)PH為8.0-8.5，水浴加熱至48-521:;而后再加入干燥后豬腦質(zhì)量4%-5% (W/W)的胰酶原粉，保溫攪拌水解，水解3.5-4.5小時后再加入干燥后豬腦質(zhì)量2.3% -2.6% (W/W)的胰酶，保溫攪拌水解5.5-6.5小時得酶水解混合液。5.按權(quán)利要求2所述的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于:所述胰酶水解后，將上述酶水解混合液加熱煮沸，保持微沸15-20min后，冷卻至25_30°C，而后調(diào)節(jié)pH值為6.0-7.0，靜置10-12小時，靜置后取上清液，待用。6.按權(quán)利要求5所述的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于:所述靜置后收集的上清液用截留分子量為10000道爾頓的超濾器進行超濾，濾過液(腦蛋白水解物溶液)濃縮至上清液原體積的1/3-1/4，濃縮液減壓干燥、粉碎即得腦蛋白水解物粉。7.按權(quán)利要求5所述的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于:所述pH值用濃度為10% (質(zhì)量)的HC1溶液調(diào)節(jié)。
【專利摘要】本發(fā)明屬于生化制藥技術領域，具體的是一種腦蛋白水解物的制備方法。將預處理并干燥后豬腦經(jīng)丙酮浸泡2-3次脫脂，脫脂后干燥；而后用胰酶水解，水解后酶水解混合液分離收集上清，上清液純化濃縮、干燥即得到腦蛋白水解物粉。本發(fā)明的提取物具有營養(yǎng)大腦細胞，疏通大腦微細血管的特性，達到恢復大腦活力、改善腦細胞功能、增加記憶力的效果，能全面改善記憶力減退等腦萎縮癥狀。本發(fā)明所提供的方法脫脂過程減少有機溶劑的用量，制得的腦蛋白水解物為粉狀，粘度低，適于制備腦蛋白水解物片后續(xù)生產(chǎn)，含量高于現(xiàn)有技術標準。
【IPC分類】A61P25/28, A61K38/01
【公開號】CN105396119
【申請?zhí)枴緾N201410471010
【發(fā)明人】賈天亮, 鄭桂榮, 劉紹杰
【申請人】遼寧天醫(yī)生物制藥股份有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2014年9月15日