Virosaine A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在抗紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗紅細(xì)胞低下性貧血藥物上的用途。本發(fā)明公開(kāi)了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有抗紅細(xì)胞低下性貧血的作用，具有開(kāi)發(fā)抗紅細(xì)胞低下性貧血藥物的價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
Vi rosa i ne A的四氫吡咯基和嗎啉基衍生物的組合物在抗紅 細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 基于不同的臨床特點(diǎn)，貧血有不同的分類(lèi)。如:按貧血進(jìn)展速度分急、慢性貧血;按 骨髓紅系增生情況分增生性貧血(如溶血性貧血、缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞貧血等）和增生低 下性貧血(如再生障礙性貧血）。
[0003] 臨床上常從貧血發(fā)病機(jī)制和病因的分類(lèi)：
[0004] 1.紅細(xì)胞生成減少性貧血
[0005] 造血細(xì)胞、骨髓造血微環(huán)境和造血原料的異常影響紅細(xì)胞生成，可形成紅細(xì)胞生 成減少性貧血。
[0006] (1)造血干祖細(xì)胞異常所致貧血
[0007] 1)再生障礙性貧血(AA)AA是一種骨髓造血功能衰竭癥，與原發(fā)和繼發(fā)的造血干祖 細(xì)胞損害有關(guān)。部分全血細(xì)胞減少癥的發(fā)病機(jī)制與B細(xì)胞產(chǎn)生抗骨髓細(xì)胞自身抗體，進(jìn)而破 壞或抑制骨髓造血細(xì)胞有關(guān)。
[0008] 2)純紅細(xì)胞再生障礙貧血(PRCA)PRCA是指骨髓紅系造血干祖細(xì)胞受到損害，進(jìn)而 引起貧血。依據(jù)病因，該病可分為先天性和后天性?xún)深?lèi)。先天性PRCA即Diamond-Blackfan綜 合征，系遺傳所致;后天性PRCA包括原發(fā)、繼發(fā)兩類(lèi)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)部分原發(fā)性PRCA患者血清 中有自身ΕΡ0或幼紅細(xì)胞抗體。繼發(fā)性PRCA主要有藥物相關(guān)型、感染相關(guān)型(細(xì)菌和病毒，如 微小病毒出 9、肝炎病毒等）、自身免疫病相關(guān)型、淋巴細(xì)胞增殖性疾病相關(guān)型（如胸腺瘤、淋 巴瘤、漿細(xì)胞病和淋巴細(xì)胞白血病等）以及急性再生障礙危象等。
[0009] 3)先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血(CDA)CDA是一類(lèi)遺傳性紅系干祖細(xì)胞良性克隆 異常所致的、以紅系無(wú)效造血和形態(tài)異常為特征的難治性貧血。根據(jù)遺傳方式，該病可分為 常染色體隱陛遺傳型和顯性遺傳型。
[0010] 4)造血系統(tǒng)惡性克隆性疾病這些疾病造血干祖細(xì)胞發(fā)生了質(zhì)的異常，包括骨髓增 生異常綜合征及各類(lèi)造血系統(tǒng)腫瘤性疾病如白血病等。前者因?yàn)椴B(tài)造血，高增生，高凋 亡，出現(xiàn)原位溶血;后者腫瘤性增生、低凋亡和低分化，造血調(diào)節(jié)也受到影響，從而使正常成 熟紅細(xì)胞減少而發(fā)生貧血。
[0011] (2)造血微環(huán)境異常所致貧血
[0012] 造血微環(huán)境包括骨髓基質(zhì)，基質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞因子。
[0013] 1)骨髓基質(zhì)和基質(zhì)細(xì)胞受損所致貧血骨髓壞死、骨髓纖維化、骨髓硬化癥、大理石 病、各種髓外腫瘤性疾病的骨髓轉(zhuǎn)移以及各種感染或非感染性骨髓炎，均可因損傷骨髓基 質(zhì)和基質(zhì)細(xì)胞，造血微環(huán)境發(fā)生異常而影響血細(xì)胞生成。
[0014] 2)造血調(diào)節(jié)因子水平異常所致貧血干細(xì)胞因子(SCF)、白細(xì)胞介素（IL)、粒-單系 集落刺激因子(GM-CSF)、粒系集落刺激因子(G-CSF)、紅細(xì)胞生成素(ΕΡ0)、血小板生成素 (TPO)、血小板生長(zhǎng)因子(TGF)、腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素（IFN)等均具有正負(fù)調(diào)控造血 作用。腎功能不全、肝病和垂體或甲狀腺功能低下等時(shí)產(chǎn)生EP0不足;腫瘤性疾病或某些病 毒感染會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較多的造血負(fù)調(diào)控因子如TNF、IFN、炎癥因子等，均可導(dǎo)致慢性病性 貧血(ACD)。
[0015] (3)造血原料不足或利用障礙所致貧血
[0016] 造血原料是指造血細(xì)胞增殖、分化、代謝所必需的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、維生素 (葉酸、維生素 B12等）、微量元素(鐵、銅、鋅等)等。任一種造血原料不足或利用障礙都可能 導(dǎo)致紅細(xì)胞生成減少。
[0017] 1)葉酸或維生素 B12缺乏或利用障礙所致貧血由于各種生理或病理因素導(dǎo)致機(jī)體 葉酸或維生素 B12絕對(duì)或相對(duì)缺乏或利用障礙可引起的巨幼細(xì)胞貧血。
[0018] 2)缺鐵和鐵利用障礙性貧血這是臨床上最常見(jiàn)的貧血。缺鐵和鐵利用障礙影響血 紅素合成，有稱(chēng)該類(lèi)貧血為血紅素合成異常性貧血。該類(lèi)貧血的紅細(xì)胞形態(tài)變小，中央淡染 區(qū)擴(kuò)大，屬于小細(xì)胞低色素性貧血。
[0019] 2.溶血性貧血(HA)
[0020] 即紅細(xì)胞破壞過(guò)多性貧血。
[0021] 3.失血性貧血
[0022] 根據(jù)失血速度分急性和慢性，慢性失血性貧血往往合并缺鐵性貧血。可分為出凝 血性疾?。ㄈ缣匕l(fā)性血小板減少性紫癜、血友病和嚴(yán)重肝病等)所致和非出凝血性疾病(如 外傷、腫瘤、結(jié)核、支氣管擴(kuò)張、消化性潰瘍、痔和婦科疾病等)所致兩類(lèi)。
[0023] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價(jià)值。
[0024] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2012年發(fā)表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化 合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗紅細(xì)胞低下性貧血活性 進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗紅細(xì)胞低下性貧血活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0025] 本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為30%和70%。
[0026]
[0027]
[0028] 本發(fā)明公開(kāi)的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0029] 本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明組合物在制藥領(lǐng)域中的新的應(yīng)用。
[0030] 本發(fā)明涉及組合物作為制備治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用。
[0031]以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 實(shí)施例1化合物Virosaine A的制備
[0033] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B, Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法。
[0034]
[0035] 實(shí)施例2 Virosaine A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0036] 將化合物I (235mg，1. OOmmo 1)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攪拌Shdh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后 對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0037] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s,2H),3.33(s,lH),2.26(s,lH),1.58(d,J=9.8Hz,3H),1.41(s,2H).
[0038] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s),79.95(s),74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0039] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0040]
[0041 ] 實(shí)施例3 Virosaine A的0_(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的合成
[0042] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(345mg， 2.5mmo 1)，碘化鉀(84mg，0.5mmo 1)和吡略燒（1420mg，20mmo 1)，混合物加熱回流lh。反應(yīng)結(jié) 束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水 洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品 用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮=100:1.5，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的淡黃色膠狀固體(111.6mg，67% )。
[0043] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.92(s，lH)，4.11(s，lH)，3.66(s，lH)，3.53(s，2H)， 3.45(d,J=66.9Hz,lH),2.64(s,2H),2.52(s,4H),2.29(s,lH),1.71(s,4H),1.64(s,2H), 1.61(s,lH),1.50(s,2H).
[0044] 13C NMR( 125MHz，DMS0-d6)Sl71.83(s), 106.73(s),79.97(s),74.35(s),66.72((1, J = 9.2Hz),54.42(d ,J = 17.1Hz),44.23(s),35.58(s),25.86(s),25.23(s),21.90(s).
[0045] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci8H25N2〇4:333.1814;found:333.1811。
[0046]
[0047] 實(shí)施例4 Virosaine A的0_(嗎啉基）乙基衍生物的合成
[0048] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmo 1)，碘化鉀(84mg，0 · 5mmo 1)和嗎啉（1742mg，20mmo 1)，混合物加熱回流lh。反應(yīng)結(jié)束 后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶即得 到Virosaine A的0-(嗎啉基）乙基衍生物的黃色固體(IV) (125.3mg，72% )。
[0049] 4^^(5001^,01^0-(16)35.95(8,111),4.12(8,111),3.68(8,111),3.63((1,1 = 8·4Ηζ，1H)，3.61(s，4H)，3.57-3.26(m，3H)，2.61(s，2H)，2.56(s，2H)，2.51-2.03(m，5H)， 1.70(d ,J = 3.1Hz,lH),1.65(d ,J = 25.6Hz,lH),1.52(s,2H).
[0050] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.85(s)，106.73(s)，79.95(s)，74.34(s)，66.75(t, J=4.6Hz),54.46(s),52.93(s),44.22(s),35.55(s),25.88(s),21.89(s).
[0051] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci8H25N2〇5:349.1763;found:349.1761。
[0052]
[0053] 實(shí)施例5組合物抗紅細(xì)胞低下性貧血實(shí)驗(yàn)
[0054] -、組合物對(duì)失血小鼠的治療作用
[0055] ICR小鼠30只，早d各半，均分成5組(η = 10)。除生理鹽水組外，其它組每只小鼠從 眼眶靜脈放血0.5ml，24h后再取血測(cè)全部各組指標(biāo)，然后連續(xù)灌胃給藥1周且給藥之后每天 放血0.5ml，末次給藥lh后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù) (10 12/L)。
[0056] 組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的30mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò)200 目網(wǎng)的70mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物， 使用時(shí)用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0057] 表1組合物對(duì)因失血所致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0058]
[0060] 與模型組比較:*ρ〈0·05
[0061] 結(jié)果表明，放血小鼠經(jīng)服用組合物治療7天后，與模型組比較，其紅細(xì)胞顯著高于 模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV無(wú)此作用。
[0062] 二、組合物對(duì)環(huán)磷酰胺致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0063] 對(duì)小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，??用，均分成5組(η=10)， 即生理鹽水組、造模組、組合物1.2mg/kg組、化合物III 1.2mg/kg組和化合物IV 1.2mg/kg 組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環(huán)磷酸胺 80mg/kg，然后繼續(xù)給藥3天。于末次給藥后lh，從眼眶靜脈叢取血，測(cè)紅細(xì)胞數(shù)(10 12/L)。
[0064] 表2組合物對(duì)環(huán)磷酰胺所致紅細(xì)胞的影響
[0065]
[0066]與模型組比較:**ρ〈0·01
[0067] 結(jié)果表明，與生理鹽水組比較，環(huán)磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細(xì)胞下 降，組合物組與模型組比較，可明顯對(duì)抗環(huán)磷酸胺所致小鼠紅細(xì)胞下降。而化合物III和化 合物IV無(wú)此作用。
[0068] 三、組合物對(duì)苯所致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0069] 對(duì)再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，罕痛用，均分成5組(η = 10)，除 生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續(xù)12天，造模的當(dāng)日，同時(shí)口服給藥，每 天1次，共18天，末次給藥后lh，眼眶靜脈叢取血，測(cè)紅細(xì)胞。
[0070] 表3組合物對(duì)苯所致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0071]
[0072] 與模型組比較:**ρ〈0·01
[0073] 結(jié)果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對(duì)抗苯所致再生障礙性貧血小鼠紅細(xì) 胞的下降。而化合物III和化合物IV無(wú)此作用。
[0074] 結(jié)論:組合物能夠顯著升高紅細(xì)胞，可以用來(lái)制備治療貧血的藥物。而化合物III 和化合物IV不能夠顯著升高紅細(xì)胞，不能用來(lái)制備治療貧血的藥物。
[0075] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0076] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0077] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0078] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為30%和70%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為30%和70%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 紅細(xì)胞低下性貧血是由失血所引起的。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 紅細(xì)胞低下性貧血是由化學(xué)物質(zhì)所引起的紅細(xì)胞低下。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 化學(xué)物質(zhì)為苯，所述紅細(xì)胞低下性貧血是由苯所致的再生障礙性貧血。7. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 化學(xué)物質(zhì)為環(huán)憐酸胺，所述紅細(xì)胞低下性貧血是由環(huán)憐酸胺所致紅細(xì)胞下降。
【文檔編號(hào)】A61P7/06GK105935361SQ201610278640
【公開(kāi)日】2016年9月14日
【申請(qǐng)日】2016年4月28日
【發(fā)明人】蔣登旭
【申請(qǐng)人】鎮(zhèn)江瑪珂蕘生物醫(yī)藥科技有限公司