一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法，一種胸腺法新緩釋微球制劑，它是由微球重量0.1%?30%的胸腺法新和微球重量50%?99.9%的分子量為5000?200000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0%?20%的藥學(xué)上可接受的其他輔料制備而成的制劑。本發(fā)明還提供了一種制備胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法，即高壓靜電微膠囊成型法。本發(fā)明制備的胸腺法新緩釋微球達(dá)到了胸腺法新的有效包埋并緩慢釋放，緩釋效果可以達(dá)到40天，可有效降低胸腺法新的毒副作用，提高生物利用度，延長代謝半衰期，同時減少給藥次數(shù)，為患者減輕經(jīng)濟與精神負(fù)擔(dān)。
【專利說明】
一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于緩釋微球制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種免疫調(diào)節(jié)劑的長效緩釋微球制劑及其制備方法，具體涉及一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]胸腺法新，即胸腺肽α?，是1984年發(fā)現(xiàn)并由胸腺分泌的一種重要的T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。胸腺法新是一個N端乙?；乃嵝远嚯?，由28個氨基酸殘基組成，主要用于慢性乙肝及作為免疫損害病者的免疫應(yīng)答增強劑。
[0003]胸腺法新作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，它的良好療效已得到確證，臨床應(yīng)用前景可觀。乙型肝炎病毒(HBV)感染是人類最常見的病毒性感染之一，全世界慢性HBV感染者約有3億，其中大部分在亞洲地區(qū)。我國人群中慢性HBV攜帶者約占1 % -15 %，慢性乙型肝炎(CHB)患者中每年發(fā)生肝硬化和肝細(xì)胞癌者分別占2 %和I %。顯然，積極治療HBV感染，阻止其向肝硬化和肝癌發(fā)展，具有重要意義。此外，胸腺法新對愛滋病、惡性腫瘤等疾病具有良好療效。
[0004]目前已有注射用胸腺法新上市銷售，該制劑為凍干粉針劑，其在治療慢性乙型肝炎的推薦量是每針1.6mg皮下注射每周二次，兩劑量大約相隔3-4日，治療應(yīng)連續(xù)6個月(52針)期間不可中斷。這樣的給藥方式病人的順應(yīng)性很差，因此開發(fā)出能夠每月給藥一次的緩釋微球制劑可以極大的提尚病人的順應(yīng)性，提尚該疾病的治愈率。
[0005]當(dāng)前胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法的文獻(xiàn)與專利越來越多，主要有復(fù)乳法(W/0/W)、乳化溶劑擴散法、熔融擠出法等，其中復(fù)乳法是一種制備聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)緩釋微球的典型方法。中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)的鐘延強等發(fā)表的文章和專利(CN200610118413.5)中采用了復(fù)乳法(W/0/W)制備了胸腺法新緩釋微球。專利申請?zhí)枮?00310119386.X公開了一種利用PLGA提取、合成胸腺肽微囊緩釋針的方法。何熠等，胸腺肽聚乳酸微球的制備和釋藥性能研究，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006，37(3)，公開了用乳化溶劑揮發(fā)制備胸腺肽聚乳酸微球，其中以PLGA為載體，以乳化揮發(fā)法制備微球。鄒良等，胸腺肽明膠微球的制備和體外釋藥的特征，中國醫(yī)院藥學(xué)雜志2004，24(9)，公開了胸腺肽的明膠微球。用乳化交聯(lián)法制備的胸腺肽微球的研究，以藥物A型明膠為囊材。張海松、陳陽述，胡軍高，等，口服胸腺微球的研究，中國藥房，1999，10(2): 58，等。以上傳統(tǒng)的方法容易存在聚集、融合，分離及純化產(chǎn)品困難，大部分時間和成本用于除去殘留溶劑和多余藥物，不適宜工業(yè)化生產(chǎn)，而噴霧干燥法、熔融法、鹽析法等操作簡單、重現(xiàn)性好，但制備過程比較激烈，所使用的溫度較高或PH值變化較大，對藥物的穩(wěn)定性有較高的要求，不適合多肽、蛋白類藥物或其他熱敏性物質(zhì)，此外，以上方法制備的胸腺法新緩釋微球表面無孔，內(nèi)部中空或互相不管通的空洞，使得微球載藥量低，對給藥不利。因此，當(dāng)前亟需一款可以解決上述缺點的胸腺法新實心多孔緩釋微球及其制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種胸腺法新緩釋微球及其制備方法，所述方法是不需要分離純化、避免了第二次乳液及高溫操作的高壓靜電微膠囊成型法，該法制備的胸腺法新緩釋微球為大小均勻、藥物含量高的實心多孔微球，能有效延長藥物在體內(nèi)作用時間，降低了胸腺法新的給藥頻率。
[0007]目前國內(nèi)還沒有采用高壓靜電微膠囊成型法制備出胸腺法新-聚乳酸長效緩釋微球制劑的單位或個人，且本發(fā)明制備的胸腺法新緩釋微球是國內(nèi)首次制備的表面開孔，內(nèi)外孔洞相互貫通的胸腺法新-聚乳酸多孔緩釋微球。L-聚乳酸是具有優(yōu)良的生物相容性和生物降解性的聚合物，是經(jīng)CFDA批準(zhǔn)可用作藥物載體，在體內(nèi)代謝的最終產(chǎn)物為0)2和出0，中間產(chǎn)物乳酸也是體內(nèi)正常糖代謝的產(chǎn)物，不會在重要器官聚集，因此聚乳酸微球作為藥物載體得到了廣泛的研究和應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0009]—種采用高壓靜電微膠囊成型法制備胸腺法新緩釋微球技術(shù)，具體如下:
[0010]I) —定量的L-聚乳酸(PLLA)溶解在有機溶劑中，得到聚乳酸共聚物濃度為(I %-40% )(W/V，g/ml)的油相，其中有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或其任意組合物；穩(wěn)定劑為包含但不僅限于普朗羅尼F_127(Pluronic F127)，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%_1.2%。[0011 ] 2)將胸腺法新、保護劑溶、致孔劑溶于水，得胸腺法新為I %-60% (W/V)的內(nèi)水相。
[0012]3)將上述油相與內(nèi)水相混合，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時間，乳化時間一般為(0.5-2 )min (功率200W、超聲I s，間隔I s)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。
[0013]4)將新鮮配備的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%_30%的海藻酸鈉或殼聚糖水溶液作為水相(W)加入上述乳液中，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時間，乳化時間一般為(0.5-2)min(功率200W、超聲I s，間隔I s)形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液。
[0014]5)將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過高壓微膠囊成型裝置和注射栗，注射到新配制的5%-10%的氯化鈣水溶液中，因海藻酸鈉與氯化鈣相遇反應(yīng)生成海藻酸鈣而形成胸腺法新緩釋微球。
[0015]進一步，步驟2)中所述的保護劑主要為:人血清白蛋白、明膠、海藻糖、甘露糖或甘露醇等中的一種或幾種混合物，其中保護劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般在0.0l%-5.0%,致孔劑包含但不僅限于碳酸氫銨，質(zhì)量百分含量為:0.01 % -1.0 %。
[0016]進一步，步驟5)中高壓微膠囊成型裝置的工藝參數(shù)為:電壓25KV;推進速度:(81-100)111111/11、236針頭，接收距離(41-60)1111]1。磁力攪拌接收后的溶液60-80111；[11，用漏斗過濾掉溶液中的白色絮狀物，7000rpm離心5min，即可收集胸腺法新-聚乳酸實心微球，冷凍干燥以除去H20、二氯甲烷、NH3及C02，可得到干燥的胸腺法新實心多孔緩釋微球。
[0017]本發(fā)明所制備的胸腺法新多孔緩釋微球制劑可以緩釋30-40天。
【附圖說明】
[0018]圖1是本發(fā)明實施例1制備的胸腺法新緩釋微球的掃描電鏡圖；
[0019]圖2是本發(fā)明實施例2制備的胸腺法新緩釋微球的掃描電鏡圖；
[0020]圖3是本發(fā)明實施例3制備的胸腺法新緩釋微球的掃描電鏡圖；
[0021]圖4是本發(fā)明實施例1制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線；
[0022]圖5是本發(fā)明實施例2制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線；
[0023]圖6是本發(fā)明實施例3制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線；
[0024]圖7是本發(fā)明實施例1、2、3制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線對比圖。
【具體實施方式】
[0025]實施例1
[0026]200mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在5ml的二氯甲烷中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入3mg的穩(wěn)定劑普朗羅尼F-127。將80mg胸腺法新、15mg的明膠、0.5ml的碳酸氫錢溶于600ml的注射用水中，將油相加入到水相中，采用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min(功率200W、超聲ls，間隔Is)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。將上述溶液加入到新配制的100ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的海藻酸鈉水溶液，并用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min，超聲乳化條件同上，形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液，將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過高壓微囊成型裝置，注射到500ml配置好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的氯化鈣溶液中，磁力攪拌乳液1.5小時，用漏斗過濾掉白色絮狀物，7000rpm離心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷凍干燥即得到胸腺法新多孔緩釋微球，微球粒徑小于ΙΟΟμπι，載藥量為5.2%,胸腺法新多孔緩釋微球掃描電鏡如圖1。
[0027]實施例2
[0028]300mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在1ml的乙酸乙酯中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入3.5mg的穩(wěn)定劑普朗羅尼F-127。將150mg胸腺法新、20mg的海藻糖、4.0ml的碳酸氫銨溶于100ml的注射用水中，將油相加入到水相中，采用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min(功率200W、超聲I s，間隔Is)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。將上述溶液加入到1500ml新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的海藻酸鈉水溶液，并用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min，超聲乳化條件同上，形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液，將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過高壓微囊成型裝置，注射到100ml配置好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的氯化鈣溶液中，磁力攪拌乳液1.5小時，用漏斗過濾掉白色絮狀物，7000rpm離心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷凍干燥即得到胸腺法新多孔緩釋微球，微球粒徑小于ΙΟΟμπι，載藥量為6.0%，胸腺法新多孔緩釋微球掃描電鏡如圖2。
[0029]實施例3
[0030]400mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在1ml的二氯甲烷中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入4.8mg的穩(wěn)定劑普朗羅尼F-127。將10mg胸腺法新、1mg的海藻糖、1.0ml的碳酸氫銨溶于800ml的注射用水中，將油相加入到水相中，采用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min(功率200W、超聲ls，間隔Is)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。將上述溶液加入到1200ml新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的海藻酸鈉水溶液，并用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min，乳化條件同上，形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液，將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過高壓微囊成型裝置，注射到1200ml配置好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的氯化鈣溶液中，磁力攪拌乳液1.5小時，用漏斗過濾掉白色絮狀物，7000rpm離心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷凍干燥即得到胸腺法新多孔緩釋微球，微球粒徑小于ΙΟΟμπι，載藥量為5.8%,胸腺法新多孔緩釋微球掃描電鏡如圖3。
[0031 ] 實施例4
[0032]胸腺法新緩釋微球體外釋放測定
[0033]將上述實施例制備的胸腺法新緩釋微球制劑進行體外釋放測定，測定方法為:
[0034]精密稱取干燥的含藥微球0.1OOg置于1ml具塞試管中，以pH為7.4的磷酸鹽緩沖液(含0.02%疊氮化鈉作為抑菌劑，0.05%的吐溫80為潤濕劑HOml為釋放介質(zhì)，置于恒溫水域搖床中，在震蕩速度10rpm、溫度37 °C ± 0.5 °(:條件下進行微球的體外釋放度測定。分別在O小時、3小時、I天、3天、5天、7天、9天、14天、18天、21天、24天、28天、30天、40天各取
0.5ml釋放介質(zhì)用于高效液相色譜法測定胸腺法新的含量，并補充新鮮的釋放介質(zhì)。圖4、5、
6、7分別為實施例4、5、6所制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累計釋放曲線及對比曲線。由圖4、5、6、7可以看出，本發(fā)明所制備的胸腺法新緩釋微球制劑具有良好的釋放效果，7天內(nèi)均小于20%，其釋放周期為30-40天。
[0035]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，所作出了任何修改、等同替換、改進等，都應(yīng)視為屬于本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于:它是由微球重量的0.1%-30%的胸腺法新和微球重量的50%-99.9%的分子量為5000-200000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0%_20%的藥學(xué)上可接受的其他輔料制備而成的制劑，所述的緩釋微球平均粒徑為50-1 ΟΟμπι。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，包含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.1%-5.0%的保護劑，該保護劑為人血清白蛋白、明膠、海藻酸糖或甘露醇中的一種或其中任意組合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，選自聚乙交酯-丙交酯、明膠、L-聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物中的一種或兩種及以上任意混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，優(yōu)選L-聚乳酸、聚乙交酯-丙交酯、聚乳酸-聚乙二醇中的一種，以L-聚乳酸為最佳。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，分子量范圍均在5000-200000道爾頓。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的胸腺法新的緩釋周期為30-40天。7.—種如權(quán)利要求1至6任意一項所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: I)將L-聚乳酸溶解于有機溶劑，并加入一定量的穩(wěn)定劑，得到聚乳酸濃度為(1%-40%)(W/V，g/ml)的油相，其中有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或其任意組合物;穩(wěn)定劑為包含但不僅限于普朗羅尼F-127(Pluronic F127)，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%_1.2%; 2 )將胸腺法新、保護劑溶、致孔劑溶于水，得胸腺法新為1%_60%( W/V)的內(nèi)水相，其中保護劑為人血清白蛋白、明膠、海藻酸糖或甘露醇中的一種或其中任意組合物，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.01%-5.0%;致孔劑包含但不僅限于碳酸氫銨，質(zhì)量百分含量為:0.01%-1.0%； 3)將上述油相與內(nèi)水相混合，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時間，超聲乳化時間一般為(0.5-2 )min (功率200W、超聲I s，間隔I s )形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液； 4)將新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%-30%的海藻酸鈉或殼聚糖水溶液作為水相(W)加入上述乳液中，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時間，乳化時間為(0.5-2)min(功率200W、超聲Is，間隔I s )形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液； 5)將上述步驟4)中制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過高壓微膠囊成型裝置，注射到新配制的5%-10%的氯化鈣水溶液中，因海藻酸鈉與氯化鈣相遇反應(yīng)生成海藻酸鈣而形成微球； 6)高壓微膠囊成型裝置注射液與接收液接觸混合發(fā)生反應(yīng)，磁力攪拌50-80min，用漏斗過濾掉溶液中的白色絮狀物，7000rpm離心5min，即可收集胸腺法新-聚乳酸微球，冷凍干燥以除去H20、二氯甲烷、NH3及C02，可得到干燥的胸腺法新多孔緩釋微球。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法，高壓微膠囊成型裝置的工藝參數(shù)為:電壓25KV;推進速度:(81-100)111111/11、236針頭，接收距離(41-60)111111。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法的步驟6)中，磁力攪拌時間優(yōu)選為(61_70)min，以65min為最佳。10.權(quán)利要求1-9任意一項所述制備方法制備的胸腺法新緩釋微球制劑。
【文檔編號】A61K38/22GK105935353SQ201610387160
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年6月2日
【發(fā)明人】王蕾
【申請人】煙臺海安藥物研發(fā)有限公司