一種純化藍(lán)靛果忍冬中多酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用超聲波輔助提取-大孔樹脂聯(lián)用技術(shù)純化藍(lán)靛果忍冬中多酚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藍(lán)靛果忍冬(Lonicera Caerulea L)簡稱為藍(lán)靛果，民間也俗稱山前子、羊奶子等，其形狀為長橢圓形，呈深藍(lán)紫色，果實(shí)味道類似于越蔓橘、藍(lán)莓等，呈酸甜味。藍(lán)靛果是一種新興的野生漿果資源，具有較強(qiáng)的生命力、抗寒能力，適應(yīng)性也很好。藍(lán)靛果中含有維生素、礦物質(zhì)等多種營養(yǎng)成分，可鮮食也可進(jìn)行生產(chǎn)加工。此外，藍(lán)靛果也是一種生物活性成分富集的漿果，尤其是花色苷類物質(zhì)、酚酸類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)的種類多樣、含量較高，同時(shí)還具有多種生物活性，如預(yù)防心血管疾病、抑菌抗炎、預(yù)防癌癥和抗氧化等生理功效。本發(fā)明采用超聲波輔助提取-大孔樹脂聯(lián)用技術(shù)所得藍(lán)靛果忍冬多酚的含量和純度均較高，旨在為藍(lán)靛果多酚分離及應(yīng)用提供新的途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的是提供一種利用超聲波輔助提取-大孔樹脂聯(lián)用技術(shù)純化藍(lán)靛果忍冬中多酚的方法，在保證以高效率獲取高含量、高純度的藍(lán)靛果忍冬多酚精制品的同時(shí)盡可能的降低工藝成本、減少能源消耗和對環(huán)境造成的污染。
[0004]本發(fā)明所提供技術(shù)方案的工藝流程如下:
藍(lán)靛果忍冬鮮果—挑選、清洗、瀝干—打漿—高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)—超聲波輔助乙醇提取法浸提—真空抽慮并收集濾液—旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液—篩選后的大孔樹脂純化—蒸餾水除雜—乙酸酸化的乙醇溶液洗脫—薄層色譜法跟蹤檢測—收集多酸富集物—0.45 μπι有機(jī)微孔濾膜過濾多酸富集物—Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析法再次純化多酚富集物—用乙醇-乙酸-水(70: 0.01: 29.99，v/v/v)溶液洗脫—減壓濃縮洗脫液—真空冷凍干燥—紫紅色藍(lán)靛果多酚精制品方法步驟如下:
(I)原料挑選:挑選出采摘后的藍(lán)靛果忍冬中無病蟲害和機(jī)械損傷且成熟度一致的果實(shí)，清洗、瀝干。
[0005](2)藍(lán)靛果多酚提取:采用勻漿機(jī)對預(yù)處理后的藍(lán)靛果忍冬進(jìn)行打漿，并通過高壓均質(zhì)機(jī)對藍(lán)靛果果漿均質(zhì)5 min，然后加入比例為40?55: 0.1: 59.9?44.9(ν/ν/ν)的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比為1:15?25(g/mL)的比例進(jìn)行混合，待混合均勻后置于35?50 °C超聲波清洗機(jī)(功率為500 W)中浸提75?100 min。
[0006](3)真空抽濾:對浸提后的多酚粗提液進(jìn)行真空抽慮并收集濾液。
[0007](4)濃縮:將藍(lán)靛果多酚濾液置于圓底燒瓶中并在35?40 °C條件下的真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中處理30?35 min，回收乙醇并收集多酚濃縮液。
[0008](5)大孔樹脂的篩選:對收集的多酚濃縮液再次真空抽慮，并通過比較分析型號分別為XAD-7、X-5、S-8、D11、AB-8、D1400的大孔樹脂對多酚濾液的吸附量、吸附率和解吸率，從中篩選出純化藍(lán)靛果忍冬多酚的最適大孔樹脂。
[0009](6)大孔樹脂純化:用恒流栗將濃度為2.03 11^/1^的濃縮濾液以0.5?2 BV/h的流速進(jìn)行上樣，上樣量為樹脂體積的1.5?2.5倍，至大孔樹脂呈吸附飽和狀態(tài)。先用洗脫體積為2.5?4 BV的蒸餾水沖洗柱子，清除藍(lán)靛果多酚中多糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，接著用4倍柱體積的65?95% (v/v)的乙醇洗脫液控制洗脫流速為I?2 BV/h進(jìn)行梯度洗脫，并用薄層色譜法跟蹤和檢測，收集藍(lán)靛果多酚富集物。
[0010](7)有機(jī)濾膜過濾:用0.45 μπι有機(jī)微孔濾膜過濾藍(lán)靛果多酚富集物并收集濾液。
[0011](8)葡聚糖凝膠柱層析:將過濾后的多酚富集物經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱吸附飽和后進(jìn)行二次純化，用4?5 BV的乙醇-乙酸-水(70: 0.01: 29.99，v/v/v)溶液進(jìn)行洗脫，收集二次純化的多酚洗脫液。
[0012](9)濃縮和真空冷凍干燥:對收集到的多酚洗脫液在35?45 °C條件下進(jìn)行減壓濃縮并回收乙醇，接著將多酚濃縮液置于30?40 °C條件下的真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行干燥處理，制成藍(lán)館果多酸精制品粉末，呈紫紅色。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:1.大孔樹脂具有理化性質(zhì)穩(wěn)定、吸附容量大效果好、再生簡單等優(yōu)點(diǎn)，適合藍(lán)靛果多酚的規(guī)?；a(chǎn);2.整個(gè)操作工藝安全可靠，操作技術(shù)成本低廉;3.通過此工藝獲取的藍(lán)靛果多酚含量和純度均較高;4.此技術(shù)提高了藍(lán)靛果資源的商用價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例1
挑選出采摘后的藍(lán)靛果忍冬中無病蟲害和機(jī)械損傷且成熟度一致的果實(shí)，清洗、瀝干后，用勻漿機(jī)進(jìn)行打漿，并通過高壓均質(zhì)機(jī)對藍(lán)靛果果漿均質(zhì)5 min，然后加入比例為40:0.1: 59.9(v/v/v)的乙醇-乙酸-水溶液，按照料液比為1:15(g/mL)的比例進(jìn)行混合，待混合均勻后置于35 °C超聲波清洗機(jī)(功率為500 W)中浸提75 min;接著對多酚浸提液進(jìn)行真空抽慮，收集藍(lán)靛果多酚濾液并置于圓底燒瓶中在35 °(:條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30 min，回收乙醇并收集多酚濃縮液，再次真空抽慮多酚濃縮液;通過比較分析型號分別為XAD-7、X-5、S-8、0101^8-8、01400的大孔樹脂對多酚濾液的吸附量、吸附率和解吸率，篩選結(jié)果為乂40-7型大孔樹脂純化藍(lán)靛果忍冬多酚的效果最佳。用恒流栗將濃度為2.03 mg/mL的濃縮濾液以
0.5 BV/h的流速進(jìn)行上樣，上樣量為樹脂體積的1.5倍，至大孔樹脂呈吸附飽和狀態(tài)，先用洗脫體積為3 BV的蒸餾水沖洗柱子，清除藍(lán)靛果多酚中多糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，接著用4倍柱體積的65?95% (v/v)的乙醇洗脫液控制洗脫流速為I BV/h進(jìn)行梯度洗脫，并用薄層色譜法跟蹤和檢測，收集藍(lán)靛果多酚富集物，接著用0.45 pm有機(jī)微孔濾膜過濾藍(lán)靛果多酚富集物并收集濾液，將多酚濾液經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱吸附飽和后進(jìn)行二次純化，用4BV的乙醇-乙酸-水(70: 0.01: 29.99,ν/ν/ν)溶液進(jìn)行洗脫，收集二次純化的多酚洗脫液。在35 °C條件下對多酚洗脫液進(jìn)行減壓濃縮并回收乙醇，接著將多酚濃縮液置于30 °C條件下的真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行干燥處理，制成藍(lán)靛果多酚精制品粉末，呈紫紅色。
[0015]實(shí)施例2
挑選出采摘后的藍(lán)靛果忍冬中無病蟲害和機(jī)械損傷且成熟度一致的果實(shí)，清洗、瀝干后，用勻漿機(jī)進(jìn)行打漿，并通過高壓均質(zhì)機(jī)對藍(lán)靛果果漿均質(zhì)5 min，然后加入比例為50: