一種不可萃取多酚的制備方法【專利摘要】本發(fā)明涉及一種不可萃取多酚的制備方法，屬于食品深加工【
技術(shù)領(lǐng)域：
】。包括下述步驟：將果蔬打漿后與質(zhì)量濃度為50%-60%乙醇按照1g:2-6ml比例混勻，然后超聲萃取，離心分離后收集果蔬殘?jiān)?；向果蔬殘?jiān)屑?.3-2.9mol/L的NaOH溶液，加熱至40-45℃浸泡30-40min后進(jìn)行超聲萃取，然后離心分離、收集上清液，得不可萃取多酚粗提液；不可萃取多酚粗提液用丁醇萃取，得不可萃取多酚萃取液；將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂純化、干燥，得不可萃取多酚凍干粉。本發(fā)明具備具有操作步驟簡(jiǎn)單、工藝條件要求低、安全性較高、生產(chǎn)成本低、收率高的優(yōu)點(diǎn)；所獲得的不可萃取多酚純度高?！緦＠f明】一種不可萃取多酚的制備方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及一種不可萃取多酚的制備方法，屬于食品深加工【
技術(shù)領(lǐng)域：
】。技術(shù)背景[0002]多酚的萃取分離方法很多，由于其組成復(fù)雜，聚合度不同，以及原料結(jié)構(gòu)性質(zhì)的差異等諸多因素影響，到目前沒有一種方法完全適于所有多酚的萃取。常用的萃取溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸、丁醇、丁醇、水等。目前對(duì)果蔬中多酚的研究主要集中在可萃取多酌.(extractable/solublepolyphenols),而很少關(guān)注不可萃取多酌.(non-extractable/insolublepolyphenols),在大多文獻(xiàn)包括外文文獻(xiàn)中有關(guān)總多酹含量的概念也僅僅是指可萃取部分，而忽略了不可萃取部分，實(shí)際上總多酚含量是指可萃取多酚與不可萃取多酚的總和，這正是目前從事活性成分提取的科研工作者所忽視的。Arranz等指出不可萃取多酹主要指一些水合丹寧酸(hydrolyzabletannins)以及與纖維或蛋白結(jié)合的原花青素(proanthocyanindins),這需要通過化學(xué)或酶處理方法將多酹從細(xì)胞壁上分離出來。[0003]實(shí)際上有關(guān)不可萃取多酚早在1973年就有研究，但由于缺乏合適的分析研究方法，一直沒有引起人們的注意。從2007年,西班牙Saura-Calixto領(lǐng)導(dǎo)的研究小組開始關(guān)注并研究不可萃取多酚，以谷類、蔬菜、豆類、水果、堅(jiān)果為實(shí)驗(yàn)材料，研究表明這些材料中含有大量的不可萃取多酚，其含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過可萃取多酚，其中蘋果、桃子及油桃中不可萃取的多酚含量是可萃取多酚的5倍以上。Madhujith等采用堿水解的方式研究了大麥中可萃取和不可萃取多酚的含量及其抗氧化性，結(jié)果表明不可萃取多酚的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于可萃取多酚，相應(yīng)的不可萃取多酚的抗氧化性也明顯高于可萃取多酚。Kristl等研究指出，李子中的不可萃取多酚含量也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于可萃取多酚，在抗氧化作用中的貢獻(xiàn)也遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于可萃取部分。[0004]目前從果蔬中提取不可萃取多酚是采用硫酸進(jìn)行加熱水解的方法。雖然有文獻(xiàn)提出可以用NaOH進(jìn)行堿水解的方法來提取不可萃取多酚；但是不可萃取多酚的收率和純度仍有待提聞?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種不可萃取多酚的制備方法；采用該方法提取的不可萃取多酚純度和收率都明顯提高。[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案:一種不可萃取多酚的制備方法，包括下述步驟:(1)將果蔬打漿后與質(zhì)量濃度為50%-60%乙醇按照lg:2-6ml比例混勻，然后超聲萃取，離心分離后收集果蔬殘?jiān)?2)向果蔬殘?jiān)屑?.3-2.9mol/L的NaOH溶液，加熱至40_45°C浸泡30_40min后進(jìn)行超聲萃取，然后離心分離、收集上清液，得不可萃取多酚粗提液；果蔬殘?jiān)cNaOH水溶液的比例為Ig:5-30ml；(3)不可萃取多酚粗提液用丁醇萃取，得不可萃取多酚萃取液；(4)將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂純化、干燥，得不可萃取多酚凍干粉。[0007]步驟(I)和(2)中，超聲萃取條件功率為200-500W，時(shí)間0.5_2h;離心條件:轉(zhuǎn)速3000-5000r/min，時(shí)間10_20min。[0008]所用果蔬為含有多酚的水果和蔬菜。[0009]上述不可萃取多酚的制備方法，優(yōu)選的，步驟(3)采用下述方式完成:將不可萃取多酚粗提液與等體積的丁醇混合，加熱至40°C-50°C，靜置，待分層后收集下層液，濃縮至原體積的1/3-1/5，過濾，收集濾液，得不可萃取多酚萃取液。[0010]上述不可萃取多酚的制備方法，優(yōu)選的，步驟(4)采用下述方法完成:首先，將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂吸附；上樣濃度為2-5.0mg/ml，上樣流速為1.5-3m/min，上樣體積為4_6倍柱體積；然后，用蒸餾水洗去樹脂表面的雜物；再用質(zhì)量濃度60%-90%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫并收集洗脫液；洗脫速率為1.5-3ml/min，洗脫體積為3_5倍柱體積；最后，將洗脫液濃縮到原體積的1/3-1/5、過濾、將濾液冷凍干燥，得不可萃取多酚凍干粉。[0011]上述不可萃取多酚的制備方法，優(yōu)選的，在進(jìn)行步驟(2)之前，將果蔬殘?jiān)?0-60°C條件下烘干，粉碎。[0012]上述不可萃取多酚的制備方法，優(yōu)選的，所述大孔樹脂為HPD-100C。[0013]有益效果:1.與硫酸加熱水解提取不可萃取多酚的方法相比較，本發(fā)明具備具有操作步驟簡(jiǎn)單、工藝條件要求低、安全性較高、生產(chǎn)成本低、收率高的優(yōu)點(diǎn)；2.所獲得的不可萃取多酚純度高。具體實(shí)施方案[0014]實(shí)施例1選擇新鮮、成熟的藍(lán)莓為原料，剔除霉?fàn)€果、病蟲果及雜質(zhì)并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍(lán)莓粉碎打漿，然后按照1:2.5(g/ml)的比例加入質(zhì)量濃度50%乙醇水溶液，200W超聲萃取2h，3000r/min離心20min。重復(fù)提取兩次。[0015]過濾后將獲得的果渣45°C烘干，然后粉碎至60目。向果渣中按照1:10(g/mL)的料液比例加入2.5mol/L的NaOH溶液，將混合漿液在45°C條件下、200W超聲萃取2h。然后3000r/min離心20min，過濾取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。[0016]按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入丁醇，40°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復(fù)萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/5，過濾，收集濾液。[0017]選用HPD-1OOC大孔樹脂在常溫常壓下對(duì)濾液進(jìn)行吸附提純，調(diào)整上樣液的濃度為2.5mg/ml,上樣速度和流出速度均為3ml/min,體積為4倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對(duì)吸附柱進(jìn)行沖，洗直到流出液無色；然后使用60%的乙醇溶液進(jìn)行解吸洗脫，洗脫流速為3ml/min，洗脫體積為3倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的30%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。用Folin-C1calteu法在765nm處測(cè)定多酚含量，測(cè)得其收率為41mg/g，純度為47%。[0018]實(shí)施例2選擇新鮮、成熟的藍(lán)莓為原料，剔除霉?fàn)€果、病蟲果及雜質(zhì)并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍(lán)莓粉碎打漿，然后按照1:6(g/ml)的比例加入質(zhì)量濃度60%乙醇水溶液；500W超聲萃取lh,5000r/min離心lOmin。重復(fù)提取兩次。[0019]過濾后將獲得的果渣放烘箱中40°C烘干，然后粉碎至80目。向果渣中按照1:30(g/mL)的料液比例加入2.9mol/L的NaOH水溶液，將混合漿液在40°C條件下、500W超聲萃取0.5h。然后5000r/min離心lOmin，過濾、取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。[0020]按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入丁醇，40°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復(fù)萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/3，過濾，收集濾液。[0021]選用HPD-1OOC大孔樹脂在常溫常壓下對(duì)濾液進(jìn)行吸附提純，調(diào)整上樣液的濃度為5.0mg/ml,上樣速度和流出速度均為5ml/3min,體積為6倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對(duì)吸附柱進(jìn)行沖，洗直到流出液無色；然后使用質(zhì)量濃度80%的乙醇溶液進(jìn)行解吸洗脫，洗脫流速為5ml/3min，洗脫體積為5倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的20%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。使用Folin-C1calteu法在765nm條件下測(cè)定多酚含量，測(cè)得其收率為48mg/g，純度為46%。[0022]實(shí)施例3選擇新鮮、成熟的藍(lán)莓為原料，剔除霉?fàn)€果、病蟲果及雜質(zhì)并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍(lán)莓粉碎打漿，然后按照1:4(g/ml)的比例加入質(zhì)量濃度50%乙醇水溶液，400W超聲萃取lh,4000r/min離心15min。重復(fù)提取兩次。[0023]過濾后將獲得的果渣40°C烘干，然后粉碎至100目。向果渣中按照1:20(g/mL)的料液比例加入2.3mol/L的NaOH溶液，將混合漿液在45°C條件下、500W超聲萃取2h。然后4000r/min離心15min，過濾取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。[0024]按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入丁醇，40°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復(fù)萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/5，過濾，收集濾液。[0025]選用HPD-1OOC大孔樹脂在常溫常壓下對(duì)濾液進(jìn)行吸附提純，調(diào)整上樣液的濃度為4.0mg/ml,上樣速度和流出速度均為5ml/3min,體積為5倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對(duì)吸附柱進(jìn)行沖，洗直到流出液無色；然后使用70%的乙醇溶液進(jìn)行解吸洗脫，洗脫流速為5ml/3min，洗脫體積為5倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的30%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。使用Folin-C1calteu法在765nm條件下測(cè)定多酚含量，測(cè)得其收率為53mg/g，純度為49%。[0026]實(shí)施例4選擇新鮮、成熟的藍(lán)莓為原料，剔除霉?fàn)€果、病蟲果及雜質(zhì)并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍(lán)莓粉碎打漿，然后按照1:6(g/ml)的比例加入質(zhì)量濃度60%乙醇水溶液；500W超聲萃取lh,5000r/min離心lOmin。重復(fù)提取兩次。[0027]過濾后將獲得的果渣放烘箱中45°C烘干，然后粉碎至80目。向果渣中按照1:5(g/mL)的料液比例加入2.8mol/L的NaOH水溶液，將混合漿液在45°C條件下、500W超聲萃取0.5h。然后5000r/min離心lOmin,過濾、取上清液，即為不可萃按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入丁醇，40°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復(fù)萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/3，過濾，收集濾液。[0028]選用HPD-1OOC大孔樹脂在常溫常壓下對(duì)濾液進(jìn)行吸附提純，調(diào)整上樣液的濃度為5.0mg/ml,上樣速度和流出速度均為5ml/3min,體積為6倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對(duì)吸附柱進(jìn)行沖，洗直到流出液無色；然后使用80%的乙醇溶液進(jìn)行解吸洗脫，洗脫流速為5ml/3min，洗脫體積為5倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的20%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。使用Folin-C1calteu法在765nm條件下測(cè)定多酚含量，測(cè)得其收率為47mg/g，純度為49%?！緳?quán)利要求】1.一種不可萃取多酚的制備方法，其特征在于，包括下述步驟:(1)將果蔬打漿后與質(zhì)量濃度為50%-60%乙醇按照lg:2-6ml比例混勻，然后超聲萃取，離心分離后收集果蔬殘?jiān)?2)向果蔬殘?jiān)屑?.3-2.9mol/L的NaOH溶液，加熱至40_45°C浸泡30_40min后進(jìn)行超聲萃取，然后離心分離、收集上清液，得不可萃取多酚粗提液；果蔬殘?jiān)cNaOH水溶液的比例為Ig:5-30ml；(3)不可萃取多酚粗提液用丁醇萃取，得不可萃取多酚萃取液；(4)將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂純化、干燥，得不可萃取多酚凍干粉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(I)和(2)中，超聲萃取條件功率為200-500W，時(shí)間0.5-2h;離心條件:轉(zhuǎn)速3000_5000r/min，時(shí)間10_20min。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)采用下述方式完成:將不可萃取多酚粗提液與等體積的丁醇混合，加熱至40°C-50°C，靜置，待分層后收集下層液，濃縮至原體積的1/3-1/5，過濾，收集濾液，得不可萃取多酚萃取液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)采用下述方法完成:首先，將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂吸附；上樣濃度為2-5.0mg/ml，上樣流速為1.5-3m/min，上樣體積為4_6倍柱體積；然后，用蒸餾水洗去樹脂表面的雜物；再用質(zhì)量濃度60%-90%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫并收集洗脫液；洗脫速率為1.5-3ml/min，洗脫體積為3_5倍柱體積；最后，將洗脫液濃縮到原體積的1/3-1/5、過濾、將濾液冷凍干燥，得不可萃取多酚凍干粉。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在進(jìn)行步驟(2)之前，將果蔬殘?jiān)?0-60°C條件下烘干，粉碎。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述大孔樹脂為HPD-100C。【文檔編號(hào)】C07G99/00GK104513282SQ201310458972【公開日】2015年4月15日申請(qǐng)日期:2013年10月7日優(yōu)先權(quán)日:2013年10月7日【發(fā)明者】賈傳龍申請(qǐng)人:賈傳龍