一種黑莓花青素的提取方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種黑莓花青素的提取方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用，屬于植物提取技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 黑莓（Blackberry)，薔薇科（Rosaceae)懸鉤子屬（Rubus)灌木，主要原產(chǎn)于新舊 大陸北溫帶，北美東部和太平洋沿岸尤為豐富，在不列顛群島和西歐為常見萌生林和綠蘺 植物，品種較多栽培范圍廣泛，資源較為豐富。因新鮮黑莓不但有甘美的滋味，并且含有大 量的維生素、氨基酸、礦物元素、微量元素、無機(jī)鹽類、果膠、黃酮、有機(jī)酸、酚類、粗蛋白及糖 類等多種營養(yǎng)成分，又具有食用和醫(yī)療保健的作用，而被廣大人群所喜愛。黑莓具有鎮(zhèn)靜安 神、養(yǎng)顏益智、烏發(fā)明目、生津止渴、延年祛斑和降壓消渴的功效。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對黑莓進(jìn) 行藥理、藥效毒理測試的研究，發(fā)現(xiàn)黑莓具有促進(jìn)造血細(xì)胞的生長，提高動物體內(nèi)微波的活 性，抗誘變，抗菌，抗病毒，抗輻射，抑制腫瘤及有害物質(zhì)的生成，增強(qiáng)免疫力、抗寒功能及耐 勞能力，抗氧化，延緩細(xì)胞衰老，防止血管硬化，調(diào)節(jié)血糖和血脂，護(hù)肝等功效。
[0003] 花青素是自然界一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素，屬類黃酮化合物，具 有較為廣泛的生物活性，參與機(jī)體代謝，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，延緩細(xì)胞衰老，防止血管硬 化，防衰老，調(diào)節(jié)血糖，抗菌，抗病毒，抗輻射，抑制腫瘤，抗氧化，護(hù)肝等生物活性，其中抗 氧化活性是其最主要的生物活性。
[0004] 傳統(tǒng)的黑莓花青素提取方法主要有回流提取法、超聲波輔助提取法、熱乙醇提取 法、喊提取法和酸提取法，總體上呈現(xiàn)提取效率低、提取率低、工藝復(fù)雜或污染環(huán)境等諸多 缺陷，不適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
[0005] 因此，研發(fā)一種黑莓花青素的提取方法，以提高提取效率和提取率，簡化工藝，減 少污染，顯得尤為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種黑莓花青素的提取方法及其 產(chǎn)品和應(yīng)用，該方法工藝簡單，能夠提高黑莓花青素的提取效率，實(shí)現(xiàn)高的提取率，其提取 物可應(yīng)用于藥品、化妝品或保健品中。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0008] -種黑莓花青素的提取方法，包括以下步驟：
[0009] (1)將黑莓進(jìn)行勻漿，得黑莓漿備用；
[0010] (2)加入水或任意濃度的乙醇，采用微波輔助萃取，得提取液；
[0011] (3)提取液離心，收集上清液，即得黑莓花青素提取物。
[0012] 進(jìn)一步地，提取方法包括以下步驟：
[0013] (1)將黑莓進(jìn)行勻漿，得黑莓漿備用；
[0014] (2)按5~25mL/lg黑莓漿的比例加入水或任意濃度的乙醇，采用微波輔助萃取， 微波功率100~700w，微波處理時間1~9min，得提取液；
[0015] (3)提取液離心，收集上清液，即得黑莓花青素提取物。
[0016] 更進(jìn)一步地，提取方法包括以下步驟：
[0017] (1)將黑莓進(jìn)行勻漿，得黑莓漿備用；
[0018] (2)按25mL/Ig黑莓漿的比例加入濃度為52%的乙醇，采用微波輔助萃取，微波功 率469w，微波處理時間4min，得提取液；
[0019] (3)提取液離心，收集上清液，即得黑莓花青素提取物。
[0020] 前述提取方法中，提取液離心為提取液在3500r/min條件下離心3~8分鐘。
[0021] 優(yōu)選地，前述提取方法中，提取液離心為提取液在3500r/min條件下離心5分鐘。
[0022] 上述黑莓花青素的提取方法提取得到的黑莓花青素提取物。
[0023] 前述黑莓花青素提取物在制備抗氧化的藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0024] 前述黑莓花青素提取物在化妝品中的應(yīng)用。
[0025] 為了確保本發(fā)明黑莓花青素提取方法科學(xué)、合理，發(fā)明人進(jìn)行了相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究 和篩選，才得以確定本發(fā)明的技術(shù)方案。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下：
[0026] 1.儀器與試藥
[0027] I. 1 儀器
[0028] 錐形瓶、具塞試管、移液管、量筒、燒杯、試劑瓶、容量瓶、離心管、電子天平、臺秤、 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、攪拌機(jī)、離心機(jī)、水浴鍋、冰柜、酶標(biāo)儀、微波爐、紫外分光光度計(jì)等。
[0029] 1. 2 試藥
[0030] 黑莓、乙醇、7K、過硫酸鉀、1，I-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH)、2, 2-聯(lián)氮 基-雙- (3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨鹽（ABTS)。
[0031] 2.方法與結(jié)果
[0032] 2. 1黑莓花青素提取工藝
[0033] 2. I. 1工藝流程
[0034] 原料一勻漿一加適量乙醇一微波一離心一收集上清液一黑莓花青素提取物
[0035] 2. 1. 2操作過程
[0036] 黑莓預(yù)處理過程：將黑莓進(jìn)行勻漿，備用。
[0037] 微波過程：將黑莓漿置于容器中，按5~25mL/lg黑莓漿的比例加入水或任意濃度 的乙醇，采用微波輔助萃取，保持微波功率在100~700W，微波時間為1~9分鐘，得提取 液。
[0038] 收集過程：將提取液在3500r/min條件下離心3~8分鐘，收集上清液，得黑莓花 青素提取物。
[0039] 2. I. 3 ABTS溶液的配制
[0040] ABTS · +溶液：7mmol/L ABTS溶液和2. 5mmol/L過硫酸鉀溶液等體積混合置于室 溫避光處反應(yīng)16小時，即得ABTS自由基溶液。
[0041] 2. 2用鹽酸甲醇法測定黑莓花青素含量
[0042] 2. 2. 1操作流程
[0043] 取黑莓花青素提取物一配制成適當(dāng)濃度的溶液一取一定體積的黑莓花青素溶液 于具塞試管中一加5mL的1%的鹽酸甲醇溶液一沸乙醇浴5分鐘一冷卻至室溫一用紫外分 光光度計(jì)測530nm波長處的吸光度一計(jì)算黑莓花青素提取率。
[0044] 2. 2. 2黑莓花青素提取率的計(jì)算
[0045] 黑莓花青素提取率（mg/g)=提取物中花青素質(zhì)量/黑莓質(zhì)量
[0046] 2. 3用ABTS和DPPH自由基測定花青素抗氧化活性
[0047] 2. 3. 1操作流程
[0048] ABTS :取黑莓花青素提取物一配制成適當(dāng)濃度的溶液一取50 μ L的黑莓花青素溶 液于試管中一加 ImL的ABTS ·+溶液一室溫避光處反應(yīng)20min -用紫外分光光度計(jì)測734nm 波長處的吸光度一計(jì)算黑莓花青素清除自由基能力。
[0049] DPPH :取黑莓花青素提取物一配制成適當(dāng)濃度的溶液一取0. 5mL的黑莓花青素溶 液于具塞試管中一加〇. 5mL的0. 2mmol/L DPPH溶液一室溫避光處反應(yīng)40min -用紫外分 光光度計(jì)測517nm波長處的吸光度一計(jì)算黑莓花青素當(dāng)量抗氧化能力。
[0050] 2. 3. 2黑莓花青素當(dāng)量抗氧化能力的計(jì)算
[0052] 黑莓花青素當(dāng)量抗氧化能力=TEAC#/C# (TEAC#表示樣品在標(biāo)曲中等價的 Trolox濃度，單位為μ M ;C#表示樣品濃度，單位為mg ^mL 1C3 )
[0053] 2. 4提取工藝的單因素考察
[0054] 2. 4. 1微波功率的考察
[0055] 取預(yù)處理過的黑莓于容器中，按lOmL/lg黑莓漿的比例加入濃度為50%的乙醇， 放入微波爐分別保持功率在100、250、400、550、700?，微波5分鐘后在350(^/1^11條件下離 心5分鐘，取上清液得黑莓花青素提取物，再用鹽酸甲醇法顯色，用紫外分光光度計(jì)測定吸 光度，微波功率對黑莓花青素提取效果的影響見圖1。
[0056] 由圖1可知，微波功率在400w左右時，黑莓花青素提取效果較好。
[0057] 2. 4. 2乙醇濃度的考察
[0058] 取預(yù)處理過的黑莓于容器中，按lOmL/lg黑莓漿的比例加入乙醇，保持微波功率 在400w，其中加入乙醇的濃度分別為0 % (即水）、20 %、40 %、60 %、80 %、100 %，微波5分 鐘后在3500r/min條件下離心5分鐘，取上清液得黑莓花青素提取物，再用鹽酸甲醇法顯 色，用紫外分光光度計(jì)測定吸光度，乙醇濃度對黑莓花青素提取效果的影響見圖2。
[0059] 由圖2可知，乙醇的濃度為40%左右時，黑莓花青素提取效果較好。
[0060] 2. 4. 3乙醇用量的考察
[0061] 取預(yù)處理過的黑莓于容器中，分別按5mL/lg黑莓漿、lOmL/lg黑莓漿、15mL/lg黑 莓漿、20mL/lg黑莓漿、25mL/lg黑莓漿的比例加入濃度為40 %乙醇，保持微波功率在400w， 微波5分鐘后在3500r/min條件下離心5分鐘，取上清液得黑莓花青素提取物，再用鹽酸甲 醇法顯色，用紫外分光光度計(jì)測定吸光度，乙醇用量對黑莓花青素提取效果的影響見圖3。
[0062] 由圖3可知，乙醇用量為20mL/lg黑莓漿左右時，黑莓花青素提取效果較好。
[0063] 2. 4. 4微波時間的考察
[0064] 取預(yù)處理過的黑莓于容器中，按20mL/lg黑莓漿的比例加入濃度為40%乙醇，保 持微波功率在400w，微波1、3、5、7、9分鐘后在3500r/min條件下離心5分鐘，取上清液得黑 莓花青素提取物，再用鹽酸甲醇法顯色，用紫外分光光度計(jì)測定吸光度，微波時間對黑莓花 青素提取效果的影響見圖4。
[0065] 由圖4可知，微波時間在3分鐘左右時，黑莓花青素提取效果較好。
[0066] 2. 5黑莓花青素提取工藝的響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)
[0067] 2. 5. 1因素與水平
[0068] 影響黑莓花青素提取工藝的主要因素有微波功率（XI，w)、乙醇的濃度（X2, ％ )、 乙醇的用量（X3，mL/lg黑莓漿）、微波時間（X4，min)4個因素，本實(shí)驗(yàn)采用四因素三水平的 BBD響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)法（見表1)，以吸光度（A)為指標(biāo)，對其工藝的水平參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選，所選 因素水平及響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果見表2~表5。
[0069] 表1響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表
[0071] 2. 5. 2實(shí)驗(yàn)方法
[0072] 按響應(yīng)面設(shè)計(jì)1-29號條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用