一種順鉑脂質體制劑及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制劑技術領域，具體涉及一種順鉬脂質體制劑及其制備方法和應 用。
【背景技術】
[0002] 順鉬（順氯氨鉬，DDP)最早于1844年制得，直到1967年，美國密執(zhí)安州大學教授 Rosenberg等人才發(fā)現(xiàn)其順式異構有抗癌作用，并于1969年應用于臨床，1978年在美國上 市。
[0003] 順鉬是第1個鉬類藥物，順鉬為重金屬鉬的絡合物，在中心原子鉬的四周有2個氯 原子和2個氨分子，具有雙官能團烷化劑的性質。在人體內，氯可被水解下來，形成活潑的 帶正電的水化分子，然后與核酸和蛋白質反應，引起DNA鏈間或鏈內交聯(lián)，或形成DNA與蛋 白質的交聯(lián)，從而抑制DNA復制和轉錄，導致DNA斷裂和誤碼，抑制細胞有絲分裂，且作用較 強而持久。
[0004] 順鉬的抗癌譜較廣，為細胞周期非特異性藥物，靜注后迅速廣泛分布于肝、腎、前 列腺、膀胱、卵巢、亦可到達胸腹腔，極少通過血腦屏障，在人體內主要通過腎臟排泄。DDP是 目前腫瘤化療的主要藥物，對睪丸癌、骨肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、小細胞肺癌和非小細 胞肺癌、頭頸部癌、胃癌、膀胱癌、惡性淋巴瘤和軟組織肉瘤有較好療效。
[0005] 順鉬具有以下特點：（1)抗癌譜廣，抗癌作用強，抗癌活性高；（2)毒副作用，主要 是腎毒性和惡心、嘔吐，毒性譜與其他抗癌藥物有不同之處，因此易與其他抗癌藥物配伍， 包括與其他鉬類抗癌藥物配伍；（3)與其他抗癌藥物缺乏交叉耐藥性，有利于臨床的聯(lián)合 用藥。
[0006] 順鉬的抗腫瘤藥效確定，效果較好，臨床應用較為廣泛。但是，在殺傷腫瘤細胞同 時，對人體正常細胞也造成很大傷害，毒性反應較為嚴重。其主要的毒性反應包括腎毒性、 消化道毒性、骨髓抑制神經毒性和耳毒性等，在很多情況下，毒性反應嚴重時可導致治療中 斷。
[0007] 為了在保證療效的基礎上，最大限度地降低順鉬的毒副作用，科學家們試圖通過 改變藥物靶向輸送的方式，提高藥物治療效果，緩解順鉬的毒副作用。
[0008] 研究顯示，脂質體包裹抗癌藥物能顯著減輕藥物的毒副作用，提高藥物的治療指 數(shù)。目前已上市的抗癌脂質體制劑有：阿霉素脂質體、順鉬脂質體、柔紅霉素脂質體、紫杉醇 脂質體等。將順鉬制成靶向制劑，提高藥物在腫瘤部位的濃度，降低血液及其他組織中藥物 的濃度，不僅可提高療效，還可降低其全身毒副作用。脂質體具有類細胞結構，毒性低，無免 疫原性，并具有被動靶向性，特別適合于作為抗癌化療藥物的靶向給藥。將順鉬開發(fā)為脂質 體制劑，具有廣闊的應用前景，近幾十年來一直是醫(yī)藥工作者關注的焦點。自20世紀80年 代初，國外已進行了其脂質體研究，動物實驗證實，順鉬脂質體制劑能夠提高抗腫瘤作用， 并顯著降低其毒副作用，并且有1期臨床試驗表明，順鉬脂質體可提高療效，降低毒性作用 (Boulikas, Clinical overview on lipoplatinTM:a successful liposomal formulation of cisplatin.Expert Opinion on Investigational Drugs, 18(8)，1197-1218,2009)〇 雖然目前對鉬類藥物脂質體的研究較多，但其效果均不是很理想，主要存在包封率低、藥 物易泄露以及部分順鉬包裹在脂質體內失活或無法釋放等問題（Meric, Rixe, Khayat. Metastatic malignant melanoma. Drugs Today(Barc), 2003, 39(S_C) :17.)。因此，提高順 鉬脂質體的穩(wěn)定性及包封率成為實現(xiàn)順鉬脂質體應用于臨床的關鍵。
[0009] 本發(fā)明采用特殊配方，及特殊制備工藝制備全新順鉬脂質體。結果表明，該脂質體 載藥量高，體外穩(wěn)定性好。動物實驗表明，該脂質體藥效較游離順鉬強，動物給藥后顯著延 長了存活時間，在腫瘤部位的藥物濃度顯著高于其他身體器官，安全性好。

【發(fā)明內容】

[0010] 針對現(xiàn)有技術中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種具有較高載藥量的順鉬脂 質體制劑及其較為簡單易行的制備方法，進一步，提供了該制劑的應用。
[0011] -種順鉬脂質體制劑，由以下原料制備而成：順鉬、蛋黃卵磷脂、膽固醇、油酸、吐 溫-80、氫氧化鈉和水；
[0012] 其中，順鉬、蛋黃卵磷脂、膽固醇、油酸、吐溫-80的重量份配比如下：
[0013] 順鉬：蛋黃卵磷脂：膽固醇：油酸：吐溫-80 = (20-40) : (40-70) : (8-15): (10-35) ：(4-8)；
[0014] 優(yōu)選重量份配比為，順鉬：蛋黃卵磷脂：膽固醇：油酸：吐溫-80 = (30-40): (50-68) :(10-12) :(16-31) ：(6-7)；
[0015] 最優(yōu)重量份配比為，
[0016] 順鉬：蛋黃卵磷脂：膽固醇：油酸：吐溫-80 = 37. 5 :50 :12 :31 :7或者
[0017] 順鉬：蛋黃卵磷脂：膽固醇：油酸：吐溫-80 = 37. 5 :68 :10 :16 :6 ;
[0018] 其中，氫氧化鈉用量為油酸摩爾量的60-85% ;
[0019] 其中，水的體積與蛋黃卵磷脂、膽固醇、油酸和吐溫-80四者總質量的比例為：
[0020] ImL ： (10一40) mg,優(yōu)選 ImL : (15 -25)mg，最優(yōu) ImL :20mg ;
[0021] 本發(fā)明的另一個目的在于提供了一種將上述配比的原料制備成所述順鉬脂質體 制劑的方法，其步驟如下：
[0022] (1)、通過乙醇注入-擠壓法制備空白脂質體混懸液；
[0023] 將蛋黃卵磷脂、油酸、膽固醇和吐溫-80置于燒杯中，加入無水乙醇在30_45°C水 浴中磁力攪拌溶解，將所得乙醇溶液注入已預熱到30°C的氫氧化鈉水溶液中，在30°C條件 下繼續(xù)攪拌30min后，用脂質體擠出器過孔徑為IOOnm的聚碳酸酯膜1-4次，得到空白脂質 體混懸液。
[0024] (2)、將順鉬加入至空白脂質體混懸液中，避光、加熱攪拌至充分反應，棄去沉淀， 用脂質體擠出器過孔徑為IOOnm聚碳酸酯膜1-4次；
[0025] (3)、除去游離的順鉬，即得順鉬脂質體制劑；
[0026] 所述步驟⑵中加熱溫度為30~60°C，優(yōu)選為50°C ;反應時間為1~5小時，優(yōu) 選為1-2小時。
[0027] 所述步驟⑶中除去游離順鉬的方法為將步驟⑵所得液體進行如下四種處理之
[0028] 置于截留分子量10000-14000的透析袋中透析、過瓊脂糖凝膠柱（如CL-4B凝膠 柱）、于0~4°C下15000~35000轉/分鐘離心5~10分鐘，或通過50KD-100KD中空纖 維過濾器。
[0029] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明產品及方法的優(yōu)點和有益效果在于：
[0030] 本發(fā)明制得的脂質體粒徑可控，可根據需求制備出不同粒徑大小并且粒徑均一的 脂質體，粒徑范圍在80~120nm之間，Zeta電位在-30至-60mv之間，順鉬脂質體的載藥 量在8. 45~10. 71%之間。該方法與現(xiàn)有文獻及專利已報道的脂質體不同，該順鉬脂質體 具有載藥量高、穩(wěn)定性好及抗癌活性強等特點。
[0031] 本發(fā)明獲得的順鉬脂質體制劑可用于治療多種實體瘤，如肺癌、肝癌、結直腸癌、 卵巢癌、骨肉瘤、神經母細胞瘤、頭頸部、宮頸、食管及泌尿系腫瘤等，本發(fā)明制備的順鉬脂 質體制劑可經注射途徑給藥，如靜脈、肌肉或皮下注射給藥。經實驗驗證該順鉬脂質體能提 高順鉬生物利用度，延長藥物在體內的滯留時間，并可使順鉬濃集于癌變器官，不僅可以減 少用藥劑量，增強療效，而且可以降低藥物的毒副作用，適用于多種腫瘤疾病的治療。
【附圖說明】
[0032] 圖1為實施例3所制備的順鉬脂質體制劑粒徑分布圖，其分布范圍為80~120nm。
[0033] 圖2為順鉬對A549細胞生長的抑制作用。
[0034] 圖3為實施例3所制備的順鉬脂質體對A549細胞生長的抑制作用。
[0035] 圖4為順鉬及實施例3所制備的順鉬脂質體對A549細胞誘導的裸鼠腫瘤抑制作 用。
[0036] ?順鉬脂質體15mg/kg, □順鉬脂質體5mg/kg，Λ游離順鉬5mg/kg, X生理鹽水 組。
[0037] 圖5為順鉬及實施例3所制備的順鉬脂質體對A549細胞誘導的腫瘤裸鼠存活時 間的影響。
[0038] _順鉬脂質體15mg/kg,順鉬脂質體5mg/kg, _?游離順鉬5mg/kg,
[0039] _生理鹽水組。
[0040] 圖6為順鉬及實施例3所制備的順鉬脂質體對A549細胞誘導的腫瘤裸鼠體重的 影響。
[0041] □順鉬脂質體15mg/kg，Λ順鉬脂質體5mg/kg，?游離順鉬5mg/kg，?生理鹽水 組。
【具體實施方式】
[0042] 以下實施例中原料藥順鉬購自昆明貴研藥業(yè)有限公司，蛋黃卵磷脂為上海東尚生 物科技有限公司型號為LIPOID E PC S的產品，其他原料均為常規(guī)試劑。