一種用于治療牛皮癬的抗體藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及牛皮癬治療藥物領(lǐng)域，尤其是一種用于治療牛皮癬的抗體藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀肩病是人們所患的常見(jiàn)慢性炎癥性皮膚病，病因尚無(wú)確切定論。銀肩病分為四 型，其中尋常型銀肩病最為常見(jiàn)。典型損害為境界清楚的紅斑、丘疹，表面覆蓋干燥的多層 鱗肩。該病病程長(zhǎng)，病情反復(fù)發(fā)作，臨床治療較為棘手。目前銀肩病的治療藥物很多，但是由 于其病因錯(cuò)綜復(fù)雜，許多治療藥物的療效并不能確定，僅以改善患者癥狀為主。傳統(tǒng)的治療 藥物有較多不良反應(yīng)，相比之下，抗銀肩病的生物制劑有針對(duì)性強(qiáng)，療效確切，不良反應(yīng)少 的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)有不少針對(duì)銀肩病免疫發(fā)病機(jī)制研制了不少具有靶位特異性的生物制劑， 多數(shù)顯示出良好的應(yīng)用前景。但從患者的患處取標(biāo)本培養(yǎng)分離出治病真菌來(lái)做抗原再獲得 的抗體未見(jiàn)研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種用于治療牛皮癬的抗體藥物。
[0004] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0005] -種用于治療牛皮癬的抗體藥物，為銀肩病真菌（致病菌）作為抗原制備的多克 隆抗體，所述多克隆抗體是由下述方法獲得的：
[0006] (1)制備抗原，將致病菌分別按照以下方法進(jìn)行操作，其中，所述致病菌為煙曲霉、 熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和/或黑曲霉：
[0007]A致病菌接種馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中，28°C，160rpm震蕩培養(yǎng)，菌液離心，收集沉 淀，向沉淀中加入3. 7%甲醛，4°C過(guò)夜滅活；
[0008] b離心收集滅活后的菌體，用生理鹽水重懸，細(xì)胞超聲粉碎儀粉碎，BCA法測(cè)定后 制備成總蛋白量0. 5mg/ml的溶液；
[0009] c取蛋白溶液與等體積的弗氏完全佐劑混合制備首次免疫抗原，與等體積弗氏不 完全佐劑制備成加強(qiáng)免疫抗原備用；
[0010] (2)抗體制備：首次免疫，1ml首次免疫抗原皮下注射新西蘭大白兔后15、30、45天 分別用加抗原進(jìn)一步免疫加強(qiáng)，免疫加強(qiáng)最后一次注射后的一周內(nèi)采集抗血清，獲得各種 分離鑒定出真菌的抗體血清。
[0011] 優(yōu)選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，所述步驟（1)中致病菌為熱帶念珠菌 和/或近平滑念珠菌。
[0012] 優(yōu)選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，還包含藥學(xué)可接受的輔料、賦形劑。
[0013] 優(yōu)選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，為膏劑。
[0014] 上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，具體制備步驟如下：
[0015] (1)制備抗原，將致病菌分別按照以下方法進(jìn)行操作，其中，所述致病菌為煙曲霉、 熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和/或黑曲霉：
[0016]A致病菌接種馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中，28°C，160rpm震蕩培養(yǎng)，菌液離心，收集沉 淀，向沉淀中加入3. 7%甲醛，4°C過(guò)夜滅活；
[0017] b離心收集滅活后的菌體，用生理鹽水重懸，細(xì)胞超聲粉碎儀粉碎，BCA法測(cè)定后 制備成總蛋白量0. 5mg/ml的溶液；
[0018] c取蛋白溶液與等體積的弗氏完全佐劑混合制備首次免疫抗原，與等體積弗氏不 完全佐劑制備成加強(qiáng)免疫抗原備用；
[0019] (2)抗體制備：首次免疫，1ml首次免疫抗原皮下注射新西蘭大白兔后15、30、45天 分別用加抗原進(jìn)一步免疫加強(qiáng)，免疫加強(qiáng)最后一次注射后的一周內(nèi)采集抗血清，獲得各種 分離鑒定出真菌的抗體血清。
[0020] 優(yōu)選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，所述步驟（1)中致病菌為 熱帶念珠菌和/或近平滑念珠菌。
[0021] 優(yōu)選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，所述步驟（1)中致病菌是 由下述方法得到的：
[0022] (1)取標(biāo)本：常規(guī)75%酒精消毒后，刮取銀肩病人的患處取表皮細(xì)胞（皮肩）及深 層表皮細(xì)胞，接種于含〇. 05%氯霉素的沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，置于28°C培養(yǎng)10-15天；
[0023] (2)分離真菌：采用劃線分離法于沙氏葡萄糖瓊脂平板上接種，置于28°C溫度下 培養(yǎng)，待培養(yǎng)出單菌落，鑒定真菌，用甘油冷凍法保存鑒定出菌種。
[0024] 優(yōu)選的，上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法，將所述步驟（2)所得各種 抗體的血清，進(jìn)行效價(jià)測(cè)定，用無(wú)菌生理鹽水適當(dāng)稀釋后，按比例混合，加入3%水溶性氮 酮、以及乳膏基質(zhì)制成膏劑。
[0025] 本發(fā)明的有益效果是：
[0026] 上述用于治療牛皮癬的抗體藥物，采用致病菌直接作為抗原進(jìn)行免疫并獲得了顯 著的抗體效果，所使用的致病菌為現(xiàn)有菌株，也可以從銀肩病人患處取得皮肩標(biāo)本，將標(biāo)本 在含有氯霉素的沙堡弱葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)出真菌，劃線分離培養(yǎng)出單菌落，經(jīng)鑒定 出菌種，挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，離心收集菌體獲得，再采用甲醛滅活制備 抗原，用此抗原直接免疫新西蘭大白兔獲得抗體，以此抗體為主制備藥物用于銀肩病人的 治療具有顯著的緩解效果；其制備方法簡(jiǎn)單，無(wú)毒副作用，可根據(jù)單個(gè)病人的致病菌制備出 針對(duì)性的藥物進(jìn)行有目的的靶向治療。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 致病菌分離
[0030] 1、銀肩病人病患處常規(guī)75%酒精消毒后，刮取患處取表皮細(xì)胞（皮肩）及深層表 皮細(xì)胞（病人標(biāo)本由世安門(mén)診和海馨門(mén)診部提供），共從11位病人病患處取得11種樣本。 將11種樣本分別接種于含〇. 05%氯霉素的沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，置于28°C培養(yǎng)2周。沙 氏葡萄糖瓊脂按中國(guó)藥典配制。
[0031] 2、挑取培養(yǎng)出的真菌，采用劃線分離法于沙氏葡萄糖瓊脂平板上接種，置于28°C 溫度下培養(yǎng)，待培養(yǎng)出單菌落。進(jìn)行肉眼觀察記錄每種菌落狀態(tài)，確定酵母樣菌和霉菌，然 后將霉菌用棉蘭染色后制成涂片光鏡下觀察孢子形態(tài)，結(jié)合菌落形態(tài)，通過(guò)真菌庫(kù)對(duì)比確 定霉菌的類型；酵母樣菌采用念珠菌顯色培養(yǎng)基鑒定，挑酵母菌劃線接種在念珠菌顯色培 養(yǎng)基上，置于35°C培養(yǎng)48小時(shí)，觀察記錄顏色變化，根據(jù)不同顏色鑒定菌種。用甘油冷凍法 保存鑒定出的菌種。共培養(yǎng)出4種致病菌分別是煙曲霉，熱帶念珠菌，近平滑念珠菌和黑曲 霉。其中熱帶念珠菌，近平滑念珠菌是11種樣