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一種用于治療牛皮癬的抗體藥物的制作方法

文檔序號(hào):9386590閱讀:543來(lái)源:國(guó)知局
一種用于治療牛皮癬的抗體藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及牛皮癬治療藥物領(lǐng)域,尤其是一種用于治療牛皮癬的抗體藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀肩病是人們所患的常見(jiàn)慢性炎癥性皮膚病,病因尚無(wú)確切定論。銀肩病分為四 型,其中尋常型銀肩病最為常見(jiàn)。典型損害為境界清楚的紅斑、丘疹,表面覆蓋干燥的多層 鱗肩。該病病程長(zhǎng),病情反復(fù)發(fā)作,臨床治療較為棘手。目前銀肩病的治療藥物很多,但是由 于其病因錯(cuò)綜復(fù)雜,許多治療藥物的療效并不能確定,僅以改善患者癥狀為主。傳統(tǒng)的治療 藥物有較多不良反應(yīng),相比之下,抗銀肩病的生物制劑有針對(duì)性強(qiáng),療效確切,不良反應(yīng)少 的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)有不少針對(duì)銀肩病免疫發(fā)病機(jī)制研制了不少具有靶位特異性的生物制劑, 多數(shù)顯示出良好的應(yīng)用前景。但從患者的患處取標(biāo)本培養(yǎng)分離出治病真菌來(lái)做抗原再獲得 的抗體未見(jiàn)研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種用于治療牛皮癬的抗體藥物。
[0004] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0005] -種用于治療牛皮癬的抗體藥物,為銀肩病真菌(致病菌)作為抗原制備的多克 隆抗體,所述多克隆抗體是由下述方法獲得的:
[0006] (1)制備抗原,將致病菌分別按照以下方法進(jìn)行操作,其中,所述致病菌為煙曲霉、 熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和/或黑曲霉:
[0007]A致病菌接種馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中,28°C,160rpm震蕩培養(yǎng),菌液離心,收集沉 淀,向沉淀中加入3. 7%甲醛,4°C過(guò)夜滅活;
[0008] b離心收集滅活后的菌體,用生理鹽水重懸,細(xì)胞超聲粉碎儀粉碎,BCA法測(cè)定后 制備成總蛋白量0. 5mg/ml的溶液;
[0009] c取蛋白溶液與等體積的弗氏完全佐劑混合制備首次免疫抗原,與等體積弗氏不 完全佐劑制備成加強(qiáng)免疫抗原備用;
[0010] (2)抗體制備:首次免疫,1ml首次免疫抗原皮下注射新西蘭大白兔后15、30、45天 分別用加抗原進(jìn)一步免疫加強(qiáng),免疫加強(qiáng)最后一次注射后的一周內(nèi)采集抗血清,獲得各種 分離鑒定出真菌的抗體血清。
[0011] 優(yōu)選的,上述用于治療牛皮癬的抗體藥物,所述步驟(1)中致病菌為熱帶念珠菌 和/或近平滑念珠菌。
[0012] 優(yōu)選的,上述用于治療牛皮癬的抗體藥物,還包含藥學(xué)可接受的輔料、賦形劑。
[0013] 優(yōu)選的,上述用于治療牛皮癬的抗體藥物,為膏劑。
[0014] 上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法,具體制備步驟如下:
[0015] (1)制備抗原,將致病菌分別按照以下方法進(jìn)行操作,其中,所述致病菌為煙曲霉、 熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和/或黑曲霉:
[0016]A致病菌接種馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中,28°C,160rpm震蕩培養(yǎng),菌液離心,收集沉 淀,向沉淀中加入3. 7%甲醛,4°C過(guò)夜滅活;
[0017] b離心收集滅活后的菌體,用生理鹽水重懸,細(xì)胞超聲粉碎儀粉碎,BCA法測(cè)定后 制備成總蛋白量0. 5mg/ml的溶液;
[0018] c取蛋白溶液與等體積的弗氏完全佐劑混合制備首次免疫抗原,與等體積弗氏不 完全佐劑制備成加強(qiáng)免疫抗原備用;
[0019] (2)抗體制備:首次免疫,1ml首次免疫抗原皮下注射新西蘭大白兔后15、30、45天 分別用加抗原進(jìn)一步免疫加強(qiáng),免疫加強(qiáng)最后一次注射后的一周內(nèi)采集抗血清,獲得各種 分離鑒定出真菌的抗體血清。
[0020] 優(yōu)選的,上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法,所述步驟(1)中致病菌為 熱帶念珠菌和/或近平滑念珠菌。
[0021] 優(yōu)選的,上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法,所述步驟(1)中致病菌是 由下述方法得到的:
[0022] (1)取標(biāo)本:常規(guī)75%酒精消毒后,刮取銀肩病人的患處取表皮細(xì)胞(皮肩)及深 層表皮細(xì)胞,接種于含〇. 05%氯霉素的沙氏葡萄糖瓊脂斜面上,置于28°C培養(yǎng)10-15天;
[0023] (2)分離真菌:采用劃線分離法于沙氏葡萄糖瓊脂平板上接種,置于28°C溫度下 培養(yǎng),待培養(yǎng)出單菌落,鑒定真菌,用甘油冷凍法保存鑒定出菌種。
[0024] 優(yōu)選的,上述用于治療牛皮癬的抗體藥物的制備方法,將所述步驟(2)所得各種 抗體的血清,進(jìn)行效價(jià)測(cè)定,用無(wú)菌生理鹽水適當(dāng)稀釋后,按比例混合,加入3%水溶性氮 酮、以及乳膏基質(zhì)制成膏劑。
[0025] 本發(fā)明的有益效果是:
[0026] 上述用于治療牛皮癬的抗體藥物,采用致病菌直接作為抗原進(jìn)行免疫并獲得了顯 著的抗體效果,所使用的致病菌為現(xiàn)有菌株,也可以從銀肩病人患處取得皮肩標(biāo)本,將標(biāo)本 在含有氯霉素的沙堡弱葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)出真菌,劃線分離培養(yǎng)出單菌落,經(jīng)鑒定 出菌種,挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng),離心收集菌體獲得,再采用甲醛滅活制備 抗原,用此抗原直接免疫新西蘭大白兔獲得抗體,以此抗體為主制備藥物用于銀肩病人的 治療具有顯著的緩解效果;其制備方法簡(jiǎn)單,無(wú)毒副作用,可根據(jù)單個(gè)病人的致病菌制備出 針對(duì)性的藥物進(jìn)行有目的的靶向治療。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 致病菌分離
[0030] 1、銀肩病人病患處常規(guī)75%酒精消毒后,刮取患處取表皮細(xì)胞(皮肩)及深層表 皮細(xì)胞(病人標(biāo)本由世安門(mén)診和海馨門(mén)診部提供),共從11位病人病患處取得11種樣本。 將11種樣本分別接種于含〇. 05%氯霉素的沙氏葡萄糖瓊脂斜面上,置于28°C培養(yǎng)2周。沙 氏葡萄糖瓊脂按中國(guó)藥典配制。
[0031] 2、挑取培養(yǎng)出的真菌,采用劃線分離法于沙氏葡萄糖瓊脂平板上接種,置于28°C 溫度下培養(yǎng),待培養(yǎng)出單菌落。進(jìn)行肉眼觀察記錄每種菌落狀態(tài),確定酵母樣菌和霉菌,然 后將霉菌用棉蘭染色后制成涂片光鏡下觀察孢子形態(tài),結(jié)合菌落形態(tài),通過(guò)真菌庫(kù)對(duì)比確 定霉菌的類型;酵母樣菌采用念珠菌顯色培養(yǎng)基鑒定,挑酵母菌劃線接種在念珠菌顯色培 養(yǎng)基上,置于35°C培養(yǎng)48小時(shí),觀察記錄顏色變化,根據(jù)不同顏色鑒定菌種。用甘油冷凍法 保存鑒定出的菌種。共培養(yǎng)出4種致病菌分別是煙曲霉,熱帶念珠菌,近平滑念珠菌和黑曲 霉。其中熱帶念珠菌,近平滑念珠菌是11種樣
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