用于與抗體藥物偶聯(lián)物療法一起使用的免疫成像劑的制作方法
【專利說明】用于與抗體藥物偶聯(lián)物療法一起使用的免疫成像劑 發(fā)明領域
[0001] 本發(fā)明設及伴隨診斷性抗體樣結合蛋白和使用方法。
[000引發(fā)明背景
[0003] 患者人群中用于治療用途的藥物開發(fā)存在很多挑戰(zhàn)。多種初始作用劑由于多種原 因不能到達市場（例如臨床益處的缺乏或患者群體中經(jīng)過驗證的安全性的缺乏）。對于開 發(fā)有效和安全的藥物而言的一些關鍵問題是：（1)在患者群體中確立藥物與其目的分子祀 相互作用；（2)在相同患者群體中確立該特異性祀與治療特定疾病相關；和（3)在相同的患 者群體中基于藥物對所述祀的作用鑒定生物學最佳劑量。對于特定藥物的合適的伴隨診斷 劑的開發(fā)在對用于臨床患者群體中使用的藥物的開發(fā)中幫助顯著。
[0004] 與分子成像禪合（couple)的伴隨診斷劑提供了一種對分子祀及其在體內與藥 物分子的相互作用有力的、非侵入性的4維評估。一些成像平臺的實例包括：磁共振成像 (MRI);正電子發(fā)射斷層掃描（PET);單光子發(fā)射斷層掃描（SPECT);光學成像、計算機斷層 掃描（CT);超聲、X-射線或光聲成像。成像對比的選擇將特定分子探針和固有的組織特性 考慮在內。伴隨診斷劑與分子成像的禪合允許對患者中特定藥物與其分子祀的相互作用進 行更好的理解，運對鑒定特定藥物的潛在響應者具有幫助且有助于理解和判斷藥物敏感性 和抗性的機制（及其最佳劑量）。
[000引發(fā)明概述
[0006] 開發(fā)了基于人源化單克隆抗體DS6的伴隨診斷性抗體樣結合蛋白用作診斷工具， 用于通過成像技術如正電子發(fā)射斷層掃描（PET)生物成像來體內檢測和量化腫瘤相關 MUCl-唾酸糖表位CA6。所述抗體樣結合蛋白促進患者分級和人源化DS6抗體藥物免疫偶 聯(lián)物huDS6-DM4療效（由針對腫瘤相關MUCl-唾酸糖表位CA6的人源化單克隆抗體與細胞 毒性類美登素（maytansinoid)DM4偶聯(lián)組成）的早期評估。
[0007] 伴隨診斷性抗體樣結合蛋白可用于鑒別具有高度CA6表達的患者和患者亞群，其 可優(yōu)先響應于使用祀向具有高度CA6表達的組織（例如腫瘤組織）的藥物的治療，如使用 祀向CA6表位的抗體藥物偶聯(lián)物（ADC)。所述ADC可W是舉例來說與細胞毒性劑（如美登 素衍生物如DMl或DM4)或另一作用劑（如國際公開No.WO2005/009369中所描述）附接 的huDS6分子。伴隨診斷性抗體樣結合蛋白可在ADC施用前進行施用，例如W判斷受試者 是否可能對用ADC的治療有響應。
[0008] 伴隨診斷性抗體樣結合蛋白可通過生物成像技術如正電子發(fā)射斷層掃描（PET) 用于CA6體內檢測，并允許較短的暴露時間和快速的成像，如48-24小時內或更短，所述伴 隨診斷劑（companiondiagnostic)是具有合適的清除動力學的高度特異性結合劑。
[0009] 如本文公開，本發(fā)明提供特異性結合CA6的抗體樣結合蛋白，其中所述抗體樣結 合蛋白進一步包含馨合劑。抗體樣結合蛋白可通過生物成像技術如PET用作針對體內檢測 和量化人CA6腫瘤抗原的診斷工具，其中所述抗體樣結合蛋白與合適的馨合劑偶聯(lián)用于與 生物成像示蹤物禪合。
[0010] 如本文公開本發(fā)明進一步提供特異結合CA6的抗體樣結合蛋白，其中所述抗體樣 結合蛋白進一步包含馨合劑。所述抗體樣結合蛋白可用作表達CA6腫瘤抗原的組織的成像 或檢測劑，其中所述抗體樣結合蛋白與合適的馨合劑偶聯(lián)用于與作用劑禪合。
[0011] 如本文公開本發(fā)明進一步提供制備DS6抗體樣結合蛋白的方法，其包括將來自人 源化DS6抗體的各DNA序列W串聯(lián)排列并通過接頭序列隔開。根據(jù)下列式[I]和
[11] ，所述DS6\-接頭-056\和DS6VH-接頭-DS6Vh構建體在DNA水平融合至人恒定結構 域序列的3'末端：
[0012] Vu-Li-Vl2-Cl[I]
[001引Vh1-L2-Vh2_Ch1 山]
[0014] 其中
[0015]Vu是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0016]八2是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0017]Vhi是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0018]Vh2是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0019]Cl是免疫球蛋白輕鏈恒定結構域，如人IGKC免疫球蛋白輕鏈恒定結構域；
[0020] Chi是免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域，如人免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域；
[0021] L郝L2是氨基酸接頭；且
[0022] 其中所述Vu和V^多膚可W是相同或不同的基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構 域，且所述Vhi和VH2多膚可W是相同或不同的基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；且 其中式I的多膚和式II的多膚形成二價單特異性串聯(lián)免疫球蛋白抗體樣結合蛋白。旬和 Chi結構域可接合起來，如通過二硫鍵。此外，式I和式II的多膚可包含任選的標簽（例如 多聚組氨酸或Sx-His標簽）。
[0023] 如本文公開本發(fā)明可進一步提供在患者中治療病癥如癌癥的方法，其包括W下 步驟：獲得患者中CA6的表達水平，其中將特異性地結合CA6且進一步包含馨合劑的抗體 樣結合蛋白施用至所述患者，并作出組織是否表達CA6的判斷，且如果患者具有相比參照 組織中的CA6表達水平高至少10% (例如比參照組織中CA6的表達水平高10%、20%、 30%、40%或更高）的CA6表達水平，則施用huDS6-DM4至所述患者。在一些實施方案，本 發(fā)明中的特征抗體樣結合蛋白用于確定腫瘤組織中如漿液性卵巢癌瘤（serousovarian carcinoma)、子宮內膜樣卵巢癌瘤（endometriodovariancarcinoma)、子宮頸寶生物 (neoplasmoftheuterinecervix)、子宮內膜寶生物（neoplasmoftheendometrius)、 外陰寶生物（neoplasmofthevulva)、乳腺癌瘤化reastcarcinoma)、膜腺腫瘤 (pancreatictumor)和尿路上皮腫瘤（tumoroftheurothelium)中CA6 的表達水平。
[0024] 如本文公開本發(fā)明進一步提供判斷癌癥患者是否是用huDS6-DM4的治療的候選 者的方法，所述方法W下步驟：獲得患者中CA6的表達水平，其中將特異性地結合CA6且進 一步包含馨合劑的抗體樣結合蛋白施用至所述患者，并作出CA6的表達水平相比參照組織 中CA6的表達是否高至少10% (例如比參照組織中CA6的表達高10%、20%、30%、40%或 更高）的判斷；且當做出的判斷為肯定時提供癌癥患者是對于huDS6-DM4的治療的候選者 的指示。
[00巧]如本文公開本發(fā)明進一步提供監(jiān)測癌癥患者對用huDS6-DM4的治療的響應的方 法，所述方法包括W下步驟：獲得患者中的CA6的表達水平，將特異性地結合CA6且進一步 包含馨合劑的抗體樣結合蛋白施用至所述患者，用huDS6-DM4治療前和治療中，做出CA6的 表達水平是否作為用huDS6-DM4治療的結果而增加、保持相同或降低的判斷；且如果患者 中CA6的表達水平相比用huDS6-DM4治療前CA6表達的水平已降低，則提供治療應該繼續(xù) 的指示。
[0026] 本發(fā)明提供特異性地結合CA6的抗體樣結合蛋白，其中所述抗體樣結合蛋白包含 兩條多膚，所述多膚具有由下列式[I]和[II]代表的結構：
[0027] Vu-Li-Vl2-Cl[I]
[0028] Vhi-L2-Vh2~Chi[II]
[0029] 其中：
[0030] Vu是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0031] 八2是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0032] Vhi是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0033] Vh2是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0034] C鹿免疫球蛋白輕鏈恒定結構域，如人IGKC免疫球蛋白輕鏈恒定結構域；
[0035] Chi是免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域，如人免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域；
[003引 L郝L2是氨基酸接頭；
[0037] 其中所述式I的多膚和式II的多膚形成二價單特異性串聯(lián)免疫球蛋白抗體樣結 合蛋白；且
[0038] 其中所述抗體樣蛋白進一步包含馨合劑。
[0039] 本發(fā)明還提供制備特異性地結合CA6的抗體樣結合蛋白的方法，其中所述抗體樣 結合蛋白進一步包含馨合劑，所述方法包括：
[0040] (a)在細胞中表達一種或多種編碼多膚的核酸分子，所述多膚具有由下列式[I] 和[II]代表的結構：
[0041] Vli-Li-Vl2-Cl[I]
[004引Vhi-L2-Vh2-Chi[II]
[0043] 其中：
[0044] Vu是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0045] \2是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0046] Vhi是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0047] Vh2是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0048] 是免疫球蛋白輕鏈恒定結構域，如人IGKC免疫球蛋白輕鏈恒定結構域；
[0049] Chi是免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域，如人免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域；
[0050] L郝L2是氨基酸接頭；且
[0051] 其中式I的多膚和式II的多膚形成二價單特異性串聯(lián)免疫球蛋白抗體樣結合蛋 白；且
[0052] 化）將所述抗體樣結合蛋白與所述馨合劑附接。
[0053]本發(fā)明進一步提供在患者中用于治療表達CA6的疾病組織的方法，其包括：施用 特異性結合CA6且進一步包含馨合劑和成像劑的抗體樣結合蛋白至所述患者；在患者中通 過正電子發(fā)射斷層掃描（陽T)成像識別表達CA6的疾病組織；且如果CA6的表達在疾病組 織中大于或等于參照標準中CA6表達的10%，則確定所述患者是使用huDS6-DM4的治療的 候選者。
[0054] 本發(fā)明進一步提供在患者中治療CA6陽性癌癥的方法，其包括步驟：獲得關于患 者中CA6的表達水平的信息；且如果患者中CA6的表達水平大于或等于參照標準中CA6表 達的10%，則施用huDS6-DM4至所述患者。
[00巧]本發(fā)明進一步提供判斷癌癥患者是否為使用huDS6-DM4的治療的候選者的方法， 其包括步驟：獲得關于患者中CA6表達水平的信息；且如果患者中CA6的表達水平大于或 等于參照標準中CA6表達的10%，則確定所述患者是使用huDS6-DM4的治療的候選者。
[0056] 本發(fā)明進一步提供監(jiān)測癌癥患者對使用huDS6-DM4的治療的響應的方法，其包括 步驟：施用huDS6-DM4后獲得關于患者中CA6的表達水平的信息；且如果患者中CA6的表達 水平與使用huDS6-DM4治療前CA6的表達水平相比已降低，則提供所述治療應繼續(xù)的指示。
[0057] 本發(fā)明提供特異性地結合CA6的抗體樣結合蛋白，其中所述抗體樣結合蛋白包含 兩條多膚，所述多膚具有由下列式[I]和[II]代表的結構：
[0058] Vli-Li-Vlz-Cl山
[0059] Vhi-L2-Vh2-Chi[II]
[0060] 其中
[0061]Vu是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0062] \2是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0063] Vhi是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0064] Vh2是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0065] C鹿免疫球蛋白輕鏈恒定結構域，如人IGKC免疫球蛋白輕鏈恒定結構域；
[0066]Chi是免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域，如人免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域；
[0067] L郝L2是氨基酸接頭；且
[0068] 其中式I的多膚和式II的多膚形成二價單特異性串聯(lián)免疫球蛋白抗體樣結合蛋 白。
[0069] 本發(fā)明還提供用于制備特異性結合CA6的抗體樣結合蛋白的方法，其包括在細胞 中表達一種或多種編碼多膚的核酸分子，所述多膚具有由下列式[I]和[II]代表的結構：
[0070] Vli-Li-Vl2-Cl[I]
[0071]Vhi-Wh^-Chi[II]
[007引其中：
[0073] Vu是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[0074] \2是基于DS6的免疫球蛋白輕鏈可變結構域；
[00巧]Vhi是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0076] Vh2是基于DS6的免疫球蛋白重鏈可變結構域；
[0077] 是免疫球蛋白輕鏈恒定結構域，如人IGKC免疫球蛋白輕鏈恒定結構域；
[0078] Chi是免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域，如人免疫球蛋白CHi重鏈恒定結構域；
[007引 L郝L2是氨基酸接頭；且
[0080]其中式I的多膚和式II的多膚形成二價單特異性串