一種雷公藤免疫納米粒及用圖
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術領域，具體地說，是一種雷公藤免疫納米粒及用途。
【背景技術】
[0002]肥大細胞和嗜堿性粒細胞是過敏反應的主要效應細胞，細胞表面表達特異性受體IgE高親和力受體(Fe ε RI)，該受體可與IgE高親和力結合，當多價抗原與細胞表面的IgE結合后，多個Fe ε RI受體分子發(fā)生交聯(lián)，導致細胞的活化和生物活性物質的釋放，發(fā)生I型超敏反應。近年來越來越多的研宄證實，肥大細胞還參與其他多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，如肥大細胞增多癥、腫瘤、自身免疫性疾病和心血管疾病。肥大細胞和嗜堿性粒細胞凋亡可能是治療過敏及肥大細胞相關疾病的有效手段。
[0003]雷公藤來源于植物雷公藤的根部，是臨床上治療自身免疫性疾病的有效藥物。
[0004]雷公藤含有多種活性成分，如三萜類、二萜類和生物堿類。研宄表明雷公藤具有抗炎、抗神經(jīng)退行性變和抗腫瘤的作用。近年來研宄發(fā)現(xiàn)，雷公藤及其單體成分具有肥大細胞凋亡作用，其主要作用機制是使促凋亡基因(baX、c-myc)表達增加，使抗凋亡基因(bcl_2)的表達減少。在體內(nèi)，肥大細胞凋亡形成的凋亡小體可被巨噬細胞吞噬，而不引起顆粒內(nèi)容物釋放。因此，雷公藤及單體成分可能成為過敏性疾病或者肥大細胞相關疾病治療的理想藥物。
[0005]然而，雷公藤難溶于水，制成藥物制劑有一定困難。此外，雷公藤對細胞的凋亡作用是非組織、器官和細胞特異的，這些特性導致了雷公藤體內(nèi)應用時的毒副反應，特別是對生殖的抑制，使其臨床應用范圍受到極大限制。因此，如何克服雷公藤的水不溶性和毒性、增加生物利用度是目前亟待解決的問題。而制備靶向給藥系統(tǒng)成了雷公藤臨床應用的關鍵。
[0006]納米材料在生物領域的應用為藥物的研發(fā)提供了廣闊的平臺。納米載體具有增溶、生物相容性好、緩釋、循環(huán)時間長、靶向性等優(yōu)點，在生物制藥領域應用廣泛，目前常用的納米載體有脂質體、樹枝狀聚合物、納米碳管和磁性納米粒、聚合物納米粒子。
[0007]Fe ε RI是IgE高親和力受體，是由α、β和兩個γ亞單位組成的四聚體，α鏈是IgE的結合部位，主要表達于肥大細胞和嗜堿性粒細胞表面，并且在疾病狀態(tài)時肥大細胞膜表面的受體的表達量顯著增加。Fe ε RI表達的局限性、疾病狀態(tài)表達量增加的特性、Fe ε RI α為IgE結合部位的生物優(yōu)越性使其成為肥大細胞有效的靶分子。
[0008]關于本發(fā)明的一種雷公藤免疫納米粒及用途目前還未見報道，本發(fā)明以納米材料為載體，包裹雷公藤，偶聯(lián)抗Fe ε RI α抗體，構建雷公藤-納米-抗人Fe ε RI α單抗三聚物，所形成的雷公藤免疫納米粒既可以增加雷公藤的溶解度，提高藥物的生物利用度；又能將雷公藤定向攜帶至表達Fe ε RI的肥大細胞或嗜堿性粒細胞使其凋亡，從而可以有效地緩解過敏性炎癥和過敏癥狀，降低毒副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術中的不足，提供一種雷公藤免疫納米粒。
[0010]本發(fā)明的再一的目的是，提供一種雷公藤免疫納米粒的制備方法。
[0011]本發(fā)明的另一的目的是，提供一種雷公藤免疫納米粒的用途。
[0012]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是:一種雷公藤免疫納米粒，所述的雷公藤免疫納米粒為包封了細胞凋亡誘導劑的納米粒，所述的細胞凋亡誘導劑為雷公藤或雷公藤單體成分，所述的納米粒表面有抗體修飾。
[0013]所述的雷公藤單體成分為雷公藤紅素、雷公藤酮、雷酚酮內(nèi)酯、雷公藤對醌A、雷公藤三萜酸B、雷公藤內(nèi)酯甲、雷公藤內(nèi)酯乙、雷公藤內(nèi)酯醇、雷公藤內(nèi)酯二醇、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤喊戊、雷公藤內(nèi)醋、雷公藤吉喊、雷公藤特喊、雷公藤次喊、雷公藤春喊、雷公藤晉喊、雷公藤靈堿、雷公藤增堿或雷公藤異春堿。
[0014]所述的雷公藤免疫納米粒的載體材料為聚合物納米粒子、脂質體、樹枝狀聚合物、磁性納米?；蚣{米碳管。
[0015]所述的抗體為識別并結合肥大細胞和嗜堿性粒細胞表面IgE高親和力受體α鏈的抗體或者抗體Fab片段或者人源化抗體或者單鏈抗體。
[0016]所述的抗體為抗人Fe ε RI α抗體、抗人Fee RIa抗體Fab片段、人源化抗人Fe ε RI α抗體、抗鼠Fe ε RI α抗體、抗鼠Fe ε RI α抗體Fab片段、單鏈抗人Fe ε RI α抗體或單鏈抗鼠Fe ε RI α抗體。
[0017]所述的雷公藤免疫納米粒通過如下方法制得:由雷公藤和羧基修飾的納米材料反應制得羧基修飾的雷公藤納米粒，然后與抗Fe ε RI α單抗反應制得抗Fe ε RI α單抗-納米粒-雷公藤三聚物，即雷公藤免疫納米粒。
[0018]為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術方案是:一種雷公藤免疫納米粒的制備方法，所述的制備方法包括以下步驟:
[0019]a)將納米材料包裹細胞凋亡誘導劑得到雷公藤納米粒；
[0020]b)將抗體和雷公藤納米粒連接得到內(nèi)包裹雷公藤外連接抗體的雷公藤免疫納米粒。
[0021]為實現(xiàn)上述第三個目的，本發(fā)明采取的技術方案是:所述的雷公藤免疫納米粒在制備治療肥大細胞或嗜堿性粒細胞相關的疾病的藥物中的應用。
[0022]所述的肥大細胞相關疾病為過敏性疾病、肥大細胞增多癥、器官纖維化、自身免疫病、心血管疾病或腫瘤。
[0023]本發(fā)明優(yōu)點在于:
[0024]本發(fā)明中雷公藤免疫納米粒的用途為特異地誘導表達Fe ε RI α陽性細胞凋亡，包括肥大細胞和嗜堿性粒細胞，治療肥大細胞相關疾病包括過敏性疾病、肥大細胞增多癥、腫瘤、自身免疫性疾病和心血管疾病。
【具體實施方式】
[0025]下面結合實施例對本發(fā)明提供的【具體實施方式】作詳細說明。
[0026]實施例1羧基修飾的雷公藤紅素膠束的制備
[0027]稱取雷公藤紅素和羧基修飾的Pluronic Ρ123嵌段共聚物，加入二氯甲烷攪拌至完全溶解，蒸發(fā)至有機溶劑完全蒸干，真空干燥過夜去除殘留溶劑，獲得干燥藥膜。加入PBS重懸，去除未包封的雷公藤紅素，獲得羧基修飾的雷公藤紅素膠束。
[0028]實施例2雷公藤紅素免疫膠束的制備
[0029]取羧基修飾的雷公藤紅素膠束，加入適量EDC，室溫條件下活化15min ;取已活化的雷公藤紅素膠束，加入抗Fe ε RI α單抗Fab，室溫反應2小時，獲得抗Fe ε RI α單抗Fab-膠束-雷公藤紅素三聚物，即雷公藤紅素免疫膠束。