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水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)的制備方法及其在制備抗前列腺癌藥品中的應(yīng)用_2

文檔序號:8420652閱讀:來源:國知局
蛭蛆蟲粉體中的蛋白質(zhì)溶解,然后降壓 至常壓,生成水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)粗品與甲醇-NH 3 ? H2O的混合液; (3) 收集含有水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液,用孔徑0. 5~50Mm的微孔過濾器過濾去處固 體雜質(zhì); (4) 溶液用孔徑50~100nm的超濾機(jī)超濾處理,壓力0. 3~0. 8MPa,溫度為常溫,收集含有 相應(yīng)分子量的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液; (5) 超濾溶液用20%乙腈溶解,C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化預(yù)處理,加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡,用10%乙腈溶液溶解的超濾溶液上柱,常溫下用10~80%的 乙腈梯度脫洗,流速l~l〇mL/min,收集相關(guān)梯度的洗脫成分; (6) 將洗脫成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶劑體系中,用超聲駐 波液相制備色譜(200920274485. 8)分離純化,超聲波功率0. 2~3. 0KW,頻率500~1000KHz, 流速50~500mL/min,紫外檢測器波長260~280nm ; (7)純化后的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在溫度-30~501:、時(shí)間18~2611干燥制 備成凍干蛋白粉。
[0043] 實(shí)施例2: (1) 將1000 g水蛭蛆蟲干燥品裝入常溫膨化裝置(200520108339. X)中,對膨化裝置內(nèi) 充入二氧化碳?xì)怏w并加壓至〇. l~5MPa,時(shí)間10~60min,然后迅速釋放壓力至常壓,水蛭蛆 蟲被膨化成粉體; (2) 膨化粉碎后的水蛭蛆蟲粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置(201210179076. 6)中, 加入5Kg液態(tài)二氧化碳、300mL甲醇及200gNH3 ? H2O,加壓至5MPa,形成膨脹溶劑體系,保持 溫度15°C,時(shí)間20min,水蛭蛆蟲粉體中的蛋白質(zhì)溶解,然后降壓至常壓,生成水蛭蛆蟲蛋 白質(zhì)粗品與甲醇-NH 3 ? H2O的混合液; (3) 收集含有水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液,用孔徑30Mm的微孔過濾器過濾去處固體雜 質(zhì); (4) 溶液用孔徑IOOnm的超濾機(jī)超濾處理,壓力0. 5MPa,溫度為常溫,收集含有相應(yīng)分 子量的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液; (5) 超濾溶液用20%乙腈溶解,C18固相萃取柱用80%乙腈活化預(yù)處理,加0. 05%三氟乙 酸-水平衡,用10%乙腈溶液溶解的超濾溶液上柱,常溫下用1〇~80%的乙腈梯度脫洗,流速 5mL/min,收集相關(guān)梯度的洗脫成分; (6) 將洗脫成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶劑體系中,用超聲駐 波液相制備色譜(200920274485. 8)分離純化,超聲波功率I. 0KW,頻率500KHz,流速200mL/ min,紫外檢測器波長260nm ; (7) 純化后的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在溫度-30~40°C、時(shí)間20h干燥制備 成凍干蛋白粉。
[0044] 實(shí)施例3: (1) 將1000 g水蛭蛆蟲干燥品裝入常溫膨化裝置(200520108339. X)中,對膨化裝置內(nèi) 充入二氧化碳?xì)怏w并加壓至〇. l~5MPa,時(shí)間10~60min,然后迅速釋放壓力至常壓,水蛭蛆 蟲被膨化成粉體; (2) 膨化粉碎后的水蛭蛆蟲粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置(201210179076. 6)中, 加入l~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨,加壓至2~10MPa,形成膨脹 溶劑體系,保持溫度l〇~20°C,時(shí)間10~30min,水蛭蛆蟲粉體中的蛋白質(zhì)溶解,然后降壓至 常壓,生成水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)粗品與乙醇-氯化銨的混合液; (3) 收集含有水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液,用孔徑0. 5~50Mm的微孔過濾器過濾去處固 體雜質(zhì); (4) 溶液用孔徑50~100nm的超濾機(jī)超濾處理,壓力0. 3~0. 8MPa,溫度為常溫,收集含有 相應(yīng)分子量的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液; (5) 超濾溶液用20%乙腈溶解,C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化預(yù)處理,加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡,用10%乙腈溶液溶解的超濾溶液上柱,常溫下用10~80%的 乙腈梯度脫洗,流速l~l〇mL/min,收集相關(guān)梯度的洗脫成分; (6) 將洗脫成分溶解在正丁醇-乙酸乙酯-水(體積比1. 25:3. 75:5)溶劑體系中, 用超聲駐波液相制備色譜(200920274485. 8 )分離純化,超聲波功率0. 2~3. 0KW,頻率 500~1000KHz,流速 50~500mL/min,紫外檢測器波長 260~280nm ; (7)純化后的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在溫度-30~501:、時(shí)間18~2611干燥制 備成凍干蛋白粉。
[0045] 實(shí)施例4: (1) 將1000 g水蛭蛆蟲干燥品裝入常溫膨化裝置(200520108339. X)中,對膨化裝置內(nèi) 充入二氧化碳?xì)怏w并加壓至2MPa,時(shí)間40min,然后迅速釋放壓力至常壓,水蛭蛆蟲被膨化 成粉體; (2) 膨化粉碎后的水蛭蛆蟲粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置(201210179076. 6)中, 加入6Kg液態(tài)二氧化碳、200mL乙醇及150g氯化銨,加壓至6MPa,形成膨脹溶劑體系,保持 溫度20°C,時(shí)間lOmin,水蛭蛆蟲粉體中的蛋白質(zhì)溶解,然后降壓至常壓,生成水蛭蛆蟲蛋 白質(zhì)粗品與乙醇-氯化銨的混合液; (3) 收集含有水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液,用孔徑50Mm的微孔過濾器過濾去處固體雜 質(zhì); (4) 溶液用孔徑IOOnm的超濾機(jī)超濾處理,壓力0. 5MPa,溫度為常溫,收集含有相應(yīng)分 子量的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液; (5) 超濾溶液用20%乙腈溶解,C18固相萃取柱用60%乙腈活化預(yù)處理,加0. 08%三氟乙 酸-水平衡,用10%乙腈溶液溶解的超濾溶液上柱,常溫下用1〇~80%的乙腈梯度脫洗,流速 8mL/min,收集相關(guān)梯度的洗脫成分; (6) 將洗脫成分溶解在正丁醇-乙酸乙酯-水(體積比1. 25:3. 75:5)溶劑體系中,用超 聲駐波液相制備色譜(200920274485. 8)分離純化,超聲波功率2. 0KW,頻率lOOOKHz,流速 300mL/min,紫外檢測器波長280nm ; (7) 純化后的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在溫度-30~50°C、時(shí)間18h干燥制備 成凍干蛋白粉。
[0046] 實(shí)施例5: 取水蛭蛆蟲凍干蛋白粉100~150g、卵磷脂l~15g、液體石蠟200~350g,將三者攪拌均 勻,用研磨機(jī)以30~60r/min研勻成糊狀,另取烏桕脂100~200g在水浴上加熱40~60°C熔化 后,冷卻至25~38°C,倒入研勻的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)-卵磷脂-液體石蠟混合物中迅速攪拌均 勻,趁熱澆注于栓劑模具中,冷凝到10~20°C,從栓劑模具中取出即為成型的水蛭蛆蟲蛋白 質(zhì)栓劑,整理光滑后包裝成品。
[0047] 實(shí)施例6: 取水蛭蛆蟲凍干蛋白粉120g、卵磷脂10g、液體石蠟250g,將三者攪拌均勻,用研磨機(jī) 以60r/min研勻成糊狀,另取烏桕脂150g在水浴上加熱60°C熔化后,冷卻至30°C,倒入研 勻的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)-卵磷脂-液體石蠟混合物中迅速攪拌均勻,趁熱澆注于栓劑模具中, 冷凝到15°C,從栓劑模具中取出即為成型的水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)栓劑,整理光滑后包裝成品。
[0048] 實(shí)施例7: 脂質(zhì)體注射劑制備: (I)Imol磷脂酰絲氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后,加入1000~3000L生理鹽水水合 處理,再用超聲波在頻率500~2000KHz、功率0. 01~5KW處理l~5min。
[0049] (2)取上述溶液 l~100mL 加入到含量 0? 001~0. 01mol/L 的 0? l~1000mLCaCl2溶液 中,在轉(zhuǎn)速30~75r/min條件下攪拌10~30min,然后在25~50°C條件下靜置30~120min。
[0050] (3)將生成物放置離心機(jī)中,在轉(zhuǎn)速1500~3000r/min離心分離5~30min,將離 心物從離心機(jī)中取出后加入2~50g水蛭蛆蟲蛋白質(zhì)混合均勻,在10~25 °C條件下靜置 10~120min。
[0051] (4)上述物體加入含有0. 01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理鹽水溶液0. 1~10L 中,混合均勻靜置30~180min,得到單層脂質(zhì)體。
[0052] (5)取]-IOmg單層脂質(zhì)體與10~200mL生理鹽水溶液混合,制備成為注射劑。
[0053] 實(shí)施例8: 脂質(zhì)體注射劑制備: (I)Imol磷脂酰絲氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后,加入2000L生理鹽水水合處理, 再用超聲波在頻率1000 KHz、功率2KW處理5min。
[0054] (2)取上述溶液50mL加入到含量0? 005mol/L的1000 mLCaCl2溶液中,在轉(zhuǎn)速45r/ min條件下攪拌30min,然后在30°C條件下靜置60min。
[0055] (3)將生成物放置離心機(jī)中,在轉(zhuǎn)速2000r/min離心分離20min,將離心物從離心 機(jī)中
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