一種蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法，它是將磁性納米粒子載體與樣品溶液反應(yīng)，使樣品溶液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白與磁性納米粒子載體上的三價(jià)鐵離子結(jié)合；然后用磁鐵將吸附了轉(zhuǎn)鐵蛋白的磁性納米粒子載體與溶液分離，并通過(guò)調(diào)節(jié)pH使結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白再次從磁性納米粒子載體中釋放出來(lái)并與FeCl3反應(yīng)，經(jīng)干燥后得到鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白；將鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白與富馬酸亞鐵、L?抗壞血酸、補(bǔ)血中藥提取物和藥學(xué)上可接受的載體混合，制成蛋白鐵補(bǔ)鐵劑。本發(fā)明具有補(bǔ)鐵效果好，副作用和不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】
-種蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于補(bǔ)血?jiǎng)╊I(lǐng)域，具體設(shè)及一種蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鐵離子是人體所必須的微量元素，它參與血紅蛋白的合成，是機(jī)體運(yùn)輸和供應(yīng)氧 氣的保障。鐵缺乏是造成貧血的重要因素，約50% W上的貧血（即缺鐵性貧血，IDA)是由于 鐵元素缺乏所引起的，而通過(guò)補(bǔ)鐵劑對(duì)鐵缺乏人群進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化，是預(yù)防和治療作用鐵缺 乏及缺鐵性貧血的有效措施。
[0003] 目前，常用補(bǔ)鐵劑的種類已達(dá)數(shù)十種，但現(xiàn)有補(bǔ)鐵劑具有一些缺點(diǎn):具有較重的鐵 腥味，不易為消費(fèi)者所接受;很容易引起胃腸道不適，使用者很難長(zhǎng)期堅(jiān)持服用，耐受性差； 部分補(bǔ)鐵劑會(huì)干擾藥物的代謝。
[0004] 轉(zhuǎn)鐵蛋白具有結(jié)合鐵離子的活性位點(diǎn)，可W非常牢固地結(jié)合鐵離子，將其作為鐵 離子載體具有顯著的優(yōu)勢(shì):可W有效地屏蔽鐵腥味，易于被消費(fèi)者接受;經(jīng)胃腸道消化后逐 步釋放鐵離子，起到緩釋的作用，減輕鐵離子對(duì)胃腸道的刺激，降低副作用;減少鐵離子與 其他藥物在消化道內(nèi)的接觸，避免干擾其它藥物的代謝。因此，W轉(zhuǎn)鐵蛋白作為載體的補(bǔ)鐵 劑具有可W克服目前常用補(bǔ)鐵劑的缺點(diǎn)，具有顯著的優(yōu)勢(shì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是為了克服傳統(tǒng)補(bǔ)鐵劑的缺陷，提供一種沒(méi)有鐵腥味，胃腸道刺激 小，副作用和不良反應(yīng)少的蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法。
[0006] 本發(fā)明所提供的制備方法包括W下步驟：
[0007] (1) W戊二醒為交聯(lián)劑，將磁性氧化鐵納米粒與Ξ價(jià)鐵離子反應(yīng)，制成磁性納米粒 子載體；
[000引（2)將含有轉(zhuǎn)鐵蛋白的樣品稀釋后，調(diào)節(jié)溶液pH至6.8-9.5,然后按溶液重量的 0.02-1 %加入磁性納米粒子載體，攬拌5-60分鐘，使溶液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白與磁性納米粒子載 體上的Ξ價(jià)鐵離子結(jié)合；
[0009] (3)用磁鐵將吸附了轉(zhuǎn)鐵蛋白的磁性納米粒子載體吸附至溶液底部，棄去上層溶 液，用抑為6.8-9.5的緩沖液洗涂下層固體，然后轉(zhuǎn)移至抑為3.2-4.8的緩沖液中，攬拌5-60 分鐘，使結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白從磁性納米粒子載體中釋放出來(lái);再次用磁鐵將磁性納米粒子載 體和溶液分離，向溶液中加入化Cl3反應(yīng)，經(jīng)干燥后得到鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白；
[0010] (4)將鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白與富馬酸亞鐵、心抗壞血酸、補(bǔ)血中藥提取物和藥學(xué)上可接 受的載體混合，制成蛋白鐵補(bǔ)鐵劑，
[0011] 所述鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白、富馬酸亞鐵、心抗壞血酸、補(bǔ)血中藥提取物的重量比為100: (0.1-0.5):(1-5):(5-20)。
[0012] 所述補(bǔ)血中藥提取物是指具有補(bǔ)血功能的中藥如當(dāng)歸、白巧、阿膠、大要、構(gòu)杞等 的水提取或乙醇提取物，優(yōu)選地，所述補(bǔ)血中藥為阿膠、大要、構(gòu)杞中的一種或多種。
[0013] 優(yōu)選地，所述含有轉(zhuǎn)鐵蛋白的樣品是雞蛋清或牛乳。
[0014] 本發(fā)明的有益效果：
[0015] (1)本發(fā)明制備的蛋白鐵補(bǔ)鐵劑由多種成分組成，各成分之間相互協(xié)調(diào)，不可或 缺，補(bǔ)鐵效果明顯優(yōu)于常用補(bǔ)鐵劑，而且副作用和不良反應(yīng)更少，使用更加安全。
[0016] (2)本發(fā)明通過(guò)改進(jìn)鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的制備方法，使鐵離子與轉(zhuǎn)鐵蛋白緊密結(jié)合， 在胃腸道中不易釋放出來(lái)，從而有效地屏蔽了鐵腥味，減輕了鐵離子對(duì)胃腸道的刺激，降低 了副作用和不良反應(yīng)。
[0017] (3)本發(fā)明提高了鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的純度，減少了雜質(zhì)和其它結(jié)合狀態(tài)的鐵離子， 從而進(jìn)一步降低了副作用和不良反應(yīng)。
[0018] (3)本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)物收率高，同時(shí)利用了物理吸附的原理進(jìn)行 純化分離，盡可能減少了有機(jī)試劑的使用，不僅降低了成本，而且更加安全、環(huán)保。
【具體實(shí)施方式】
[0019] W下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說(shuō)明。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] (1)將市售的W四氧化Ξ鐵為基質(zhì)的磁性氧化鐵納米粒(平均粒徑小于lOOnm)按 0.3g/mL的比例分散于抑為8的憐酸鹽緩沖液中，然后按緩沖液的體積添加2.5%的戊二醒， 避光攬拌化，使戊二醒與磁性氧化鐵納米粒交聯(lián)，用蒸饋水洗去未交聯(lián)的戊二醒分子，超聲 波處理10s使納米粒分散，然后向溶液中加入Ξ價(jià)鐵離子(FeCl3,20mmol/L)，攬拌反應(yīng)化， 蒸饋水洗去多余的鐵離子，制備成磁性納米粒子載體；
[0022] (2)將雞蛋清稀釋8倍，調(diào)節(jié)pH至8.5,然后按溶液重量的0.5%加入磁性納米粒子 載體，攬拌10分鐘，使溶液中的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白與磁性納米粒子載體上的Ξ價(jià)鐵離子結(jié)合；
[0023] (3)用磁鐵將吸附了轉(zhuǎn)鐵蛋白的磁性納米粒子載體吸附至容器底部，棄去上層溶 液，用抑為8.5的緩沖液洗涂下層固體，除去未吸附的雜蛋白，然后將固體轉(zhuǎn)移至抑為4的緩 沖液中，攬拌45分鐘，使結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白從磁性納米粒子載體中釋放出來(lái);再次使用磁鐵將 磁性納米粒子載體和溶液分離，向溶液中加入FeCl3(25mmol/L)反應(yīng)，經(jīng)干燥后得到鐵結(jié)合 轉(zhuǎn)鐵蛋白；
[0024] (4)取鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白lOOg、富馬酸亞鐵0.2肖、1^-抗壞血酸2g、阿膠lOg、混均，再加 入微晶纖維素 lOg，制粒，壓片，即得補(bǔ)鐵片劑。
[0025] 實(shí)施例2
[0026] (1)與實(shí)施例1的步驟(1)相同；
[0027] (2)將牛乳稀釋5倍，調(diào)節(jié)溶液抑至6.8,然后按溶液重量的0.02%加入磁性納米粒 子載體，攬拌5分鐘，使溶液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白與磁性納米粒子載體上的Ξ價(jià)鐵離子結(jié)合；
[0028] (3)用磁鐵將吸附了轉(zhuǎn)鐵蛋白的磁性納米粒子載體吸附至溶液底部，棄去上層溶 液，用抑為6.8的緩沖液洗涂下層固體，然后轉(zhuǎn)移至抑為3.2的緩沖液中，攬拌60分鐘，使結(jié) 合的轉(zhuǎn)鐵蛋白從磁性納米粒子載體中釋放出來(lái);再次用磁鐵將磁性納米粒子載體和溶液分 離，向溶液中加入化Cl3(20mmol/L)反應(yīng)，經(jīng)干燥后得到鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白；
[0029] (4)取鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白lOOg，富馬酸亞鐵0.1肖，1^-抗壞血酸Ig，大要提取物(大要的 水提取物，通過(guò)市售途徑購(gòu)買)20g，混勻后加入糖粉制粒，干燥，即得補(bǔ)鐵顆粒劑。
[0030] 實(shí)施例3
[0031] (1)與實(shí)施例1的步驟(1)相同；
[0032] (2)將雞蛋清稀釋10倍，調(diào)節(jié)溶液抑至9.5,然后按溶液重量的1%加入磁性納米粒 子載體，攬拌60分鐘，使溶液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白與磁性納米粒子載體上的Ξ價(jià)鐵離子結(jié)合；
[0033] (3)用磁鐵將吸附了轉(zhuǎn)鐵蛋白的磁性納米粒子載體吸附至溶液底部，棄去上層溶 液，用抑為9.5的緩沖液洗涂下層固體，然后轉(zhuǎn)移至抑為4.8的緩沖液中，攬拌5分鐘，使結(jié)合 的轉(zhuǎn)鐵蛋白從磁性納米粒子載體中釋放出來(lái);再次用磁鐵將磁性納米粒子載體和溶液分 離，向溶液中加入化Cl3(5mmol/L)反應(yīng)，經(jīng)干燥后得到鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白；
[0034] (4)取鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白lOOg，富馬酸亞鐵0.5肖，1^-抗壞血酸5g，構(gòu)杞子提取物(構(gòu)杞 子的乙醇和水提取物，通過(guò)市售途徑購(gòu)買）5g;混勻，加入淀粉制粒，用膠囊填充，即得復(fù)合 補(bǔ)鐵膠囊劑。
[0035] 經(jīng)SDS-PAGE電泳分析，實(shí)施例1~3鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的產(chǎn)物純度和收率見下表1。
[0036] 表1鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的純度和收率
[0037]
[003引實(shí)施例4
[0039] 為驗(yàn)證本發(fā)明的補(bǔ)血效果，我們進(jìn)行W下實(shí)驗(yàn)：
[0040] 雌性初斷乳大鼠42只，4周齡，健康狀況良好，血象正常，平均體重76.57 ±9.49邑。 隨機(jī)選取6只大鼠作為正常對(duì)照組，全程飼喂普通飼料，飲自來(lái)水;其余大鼠飼喂低鐵飼料4 周，飲去離子水，建立IDA模型。缺鐵性貧血為典型的低色素小細(xì)胞型貧血，其表現(xiàn)為血清血 紅蛋白化b)的顯著降低，當(dāng)化<100g/L時(shí)即為建模成功。因此，在4周后對(duì)所有大鼠進(jìn)行尾靜 脈取血，測(cè)定化，結(jié)果顯示，正常組含量為148.75±6.90g/L，而IDA模型組的大鼠化值均降 低至lOOg/LW下，平均值為85.79 ±4.85g/L，由此可W判定IDA模型構(gòu)建成功。
[0041] 從IDA大鼠中選取6只作為陰性對(duì)照組，不添加補(bǔ)鐵劑，使其持續(xù)缺鐵;剩余大鼠分 為4組，繼續(xù)飼喂低鐵飼料，飲去離子水，但補(bǔ)充相同劑量的補(bǔ)鐵劑鐵離子計(jì)），進(jìn)行補(bǔ)鐵 劑效果實(shí)驗(yàn)。繼續(xù)飼喂至第7周，然后頸靜脈取血，測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。各組飼喂情況見表2。
[0042] 表2實(shí)驗(yàn)各組飼喂情況
[0043]
[0044] 補(bǔ)鐵期間，各組大鼠化測(cè)定結(jié)果如表3所示。
[0045] 表3補(bǔ)鐵期大鼠化測(cè)定結(jié)果
[0046]
[0047] 結(jié)果顯示，在補(bǔ)鐵第0天，除正常對(duì)照組外，其他各組大鼠的血清化均小于lOOg/L， 表明IDA模型建立成功;在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，陰性對(duì)照組由于持續(xù)缺鐵，血清化持續(xù)下降；傳統(tǒng)補(bǔ) 鐵劑組的大鼠血清化含量有所升高，但在第21天時(shí)仍低于正常對(duì)照組;本發(fā)明中的巧中補(bǔ)鐵 劑效果最明顯，在補(bǔ)鐵第10天時(shí)血清化含量已經(jīng)大大恢復(fù)，在第21天時(shí)，化水平已超過(guò)或接 近正常對(duì)照組，表明大鼠的缺鐵性貧血已完全治愈。運(yùn)些結(jié)果證明，本發(fā)明的轉(zhuǎn)鐵蛋白蛋白 鐵補(bǔ)鐵劑使用效果顯著優(yōu)于傳統(tǒng)補(bǔ)鐵劑。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 以戊二醛為交聯(lián)劑，將磁性氧化鐵納米粒與三價(jià)鐵離子反應(yīng)，制成磁性納米粒子載 體； (2) 將含有轉(zhuǎn)鐵蛋白的樣品稀釋后，調(diào)節(jié)溶液pH至6.8-9.5,然后按溶液重量的0.02-1 %加入磁性納米粒子載體，攪拌5-60分鐘，使溶液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白與磁性納米粒子載體上的 三價(jià)鐵離子結(jié)合； (3) 用磁鐵將吸附了轉(zhuǎn)鐵蛋白的磁性納米粒子載體吸附至溶液底部，棄去上層溶液，用 pH為6.8-9.5的緩沖液洗滌下層固體，然后轉(zhuǎn)移至pH為3.2-4.8的緩沖液中，攪拌5-60分鐘， 使結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白從磁性納米粒子載體中釋放出來(lái);再次用磁鐵將磁性納米粒子載體和溶 液分離，向溶液中加入FeCl 3反應(yīng)，經(jīng)干燥后得到鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白； (4) 將鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白與富馬酸亞鐵、L-抗壞血酸、補(bǔ)血中藥提取物和藥學(xué)上可接受的 載體混合，制成蛋白鐵補(bǔ)鐵劑， 所述鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白、富馬酸亞鐵、L-抗壞血酸、補(bǔ)血中藥提取物的重量比為100: (0·卜0.5):(卜5):(5-20)〇2. 如權(quán)利要求1所述的蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法，其特征在于:所述補(bǔ)血中藥為阿膠、 大棗、枸杞中的一種或多種。3. 如權(quán)利要求1所述的蛋白鐵補(bǔ)鐵劑的制備方法，其特征在于:所述含有轉(zhuǎn)鐵蛋白的樣 品是雞蛋清或牛乳。
【文檔編號(hào)】A61K47/48GK105998059SQ201610457867
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月22日
【發(fā)明人】馬美湖, 耿放, 袁小軍, 任國(guó)棟, 何恩祺, 付星, 王博, 王一博
【申請(qǐng)人】華中農(nóng)業(yè)大學(xué)