專(zhuān)利名稱(chēng)：環(huán)狀前塞波素衍生肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和鎮(zhèn)痛肽。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及來(lái)源于具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和鎮(zhèn)痛作用的塞波素(saposin)C的活性區(qū)的環(huán)狀肽。
背景技術(shù)：
神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是能夠影響神經(jīng)元細(xì)胞群的存活、目標(biāo)神經(jīng)分布和/或功能的蛋白質(zhì)或肽(Barde，神經(jīng)(Neuron)2:1525-1534,1989)。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在體外和體內(nèi)的功效已有很多文獻(xiàn)論述過(guò)。例如，神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)是一種前腦膽堿能、外周和感覺(jué)神經(jīng)元的營(yíng)養(yǎng)因子(Hefti等，Neurobiol Aging,10:515-533,1989)，能夠逆轉(zhuǎn)自然發(fā)生的、以及機(jī)械外傷對(duì)外周神經(jīng)引起的損傷(Rich等，神經(jīng)細(xì)胞學(xué)雜志(J.Neurocytol.)16:261-268,1987)。來(lái)源于腦的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)是外周感覺(jué)神經(jīng)元、黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元、中樞膽堿能神經(jīng)元和視網(wǎng)膜神經(jīng)中樞的營(yíng)養(yǎng)因子(Henderson等，Restor.Neurol.Neurosci.5:15-28,1993)。BDNF顯示能夠防止體內(nèi)或體外自然發(fā)生的細(xì)胞死亡(Hofer等，自然，331:262-262,1988)。睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)促進(jìn)體外雞胚睫狀神經(jīng)中樞的生存，支持培養(yǎng)的交感神經(jīng)感覺(jué)神經(jīng)元和脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活(Ip等，J.Physiol.Paris 85:122-130,1991)。脫髓鞘是很多中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病的常見(jiàn)缺陷，在多發(fā)性硬化(MS)中最為普遍存在。MS，一種可能導(dǎo)致完全無(wú)行為能力的慢性疾病，特征在于髓磷脂鞘的損傷，而保持軸突大部分完整。目前對(duì)于MS沒(méi)有有效的治療方法。其它涉及脫髓鞘的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括急性擴(kuò)散性腦脊髓炎、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化、急性出血性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、進(jìn)行性多病灶腦白質(zhì)炎、異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、和腎上腺性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良。外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)也會(huì)遭受脫髓鞘化，例如Guillain-Barre綜合癥中發(fā)生的脫髓鞘(疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)(Pathologic Basis of Disease),Robbins等編，W.B.Saunders,Philadelphia,1979,pp.1578-1582)。
外周神經(jīng)損傷和外周神經(jīng)病，例如由于糖尿病或化療引起的那些，包括最常見(jiàn)的外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病。目前對(duì)外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療僅限于治療癥狀，卻不能治療病因。
神經(jīng)痛由神經(jīng)損傷引起，例如神經(jīng)緊縮或壓迫以及脊髓的外傷性損傷，并通常持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間或?yàn)槁?。大多?shù)神經(jīng)損傷還導(dǎo)致神經(jīng)瘤的形成，其中異常神經(jīng)再生導(dǎo)致產(chǎn)生疼痛。另外，當(dāng)腫瘤的生長(zhǎng)壓迫鄰近神經(jīng)、腦或脊髓，產(chǎn)生癌癥-相關(guān)神經(jīng)痛。神經(jīng)痛也與包括糖尿病和酒精中毒在內(nèi)的疾病有關(guān)。在大多數(shù)情況下，神經(jīng)痛對(duì)目前的藥物有抗藥性。這些藥物還存在嚴(yán)重的副作用。US專(zhuān)利申請(qǐng)序列號(hào)08/611307提供了緩解或防止神經(jīng)痛的方法，即給個(gè)體施用有效量的前塞波素(prosaposin)的活性片段。
前塞波素(prosaposin)是四種需要糖鞘脂被溶酶體水解酶水解的小熱穩(wěn)定糖蛋白的前體(Kishimoto等，脂類(lèi)研究雜志(J.Lipid Res.)33:1255-1267,1992)。前塞波素(prosaposin)在溶酶體中被蛋白水解加工成塞波素(saposin)A、B、C和D(O’Brien等，F(xiàn)ASEB J.,5:301-308,1991)。US5571787和已公開(kāi)的PCT申請(qǐng)WO95/03821公開(kāi)前塞波素(prosaposin)、塞波素(saposin)C刺激神經(jīng)突生長(zhǎng)，促進(jìn)增強(qiáng)的成髓鞘作用。另外，US5571787、US5696080、US5714459和公開(kāi)的PCT申請(qǐng)WO95/03821公開(kāi)了由人塞波素(saposin)C的8-29位氨基酸構(gòu)成的22-肽(CEFLVKEVTKLIDNNKTEKEIL；SEQ ID NO:1)刺激神經(jīng)突生長(zhǎng)。這些參考文獻(xiàn)還公開(kāi)了一種包含在塞波素(saposin)C活性22-肽(由Y取代V)中的18-肽(YKEVTKLIDNNKTEKEIL；SEQ ID NO:2)也能促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)，并能夠穿過(guò)血腦屏障。O’Brien等(FASEB J.9:681-685,1995)表明該22-肽刺激膽堿乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性，防止神經(jīng)細(xì)胞死亡。該活性、促神經(jīng)突生長(zhǎng)的片段位于塞波素(saposin)C氨基末端區(qū)的線形12-聚體序列(LIDNNKTEKEIL；SEQ IDNO:3)(O’Brien等，F(xiàn)ASEB J.9:681-685,1994)。Liepinsh等(天然結(jié)構(gòu)生物學(xué)(Nature Struct.Biol.)4:793-795)闡述可以由一種環(huán)狀肽模擬NK-細(xì)胞溶解酶的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)活性肽片段(殘基17-30)的環(huán)形構(gòu)象。
肽體內(nèi)治療應(yīng)用的主要障礙是它們易于受蛋白水解而降解。本發(fā)明提供了對(duì)蛋白水解導(dǎo)致的降解有很好抗性并能夠穿過(guò)血腦屏障的環(huán)狀前塞波素(prosaposin)肽模擬物。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是一種環(huán)狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和鎮(zhèn)痛肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。該肽優(yōu)選具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。
本發(fā)明還提供了一種裝于隔片密封小瓶中的含有上述肽的組合物，其與控釋材料一起配制成凍干形式、脂質(zhì)體形式、為適于局部給藥的劑型或單元?jiǎng)┬汀?br> 本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物成髓鞘或抑制脫髓鞘的方法，包括給存在脫髓鞘的哺乳動(dòng)物施用一種藥物有效脫髓鞘抑制量的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。在該優(yōu)選實(shí)施方式的一個(gè)方面，脫髓鞘是由多發(fā)性硬化、缺血性損傷或外傷引起的。優(yōu)選給藥部位為靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、顱內(nèi)、腦脊液內(nèi)或局部施用。該肽有利地在藥物可接受載體中施用。在該優(yōu)選實(shí)施方式的另一方面，該肽包封于薄層狀結(jié)構(gòu)中。該肽優(yōu)選具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。在該優(yōu)選實(shí)施方式的另一方面，哺乳動(dòng)物是人。
本發(fā)明還提供了抑制神經(jīng)退化或促進(jìn)神經(jīng)組織中神經(jīng)突生長(zhǎng)的方法，包括使神經(jīng)退化抑制有效量的環(huán)狀肽接觸對(duì)該退化易感的神經(jīng)組織，所述環(huán)狀肽具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。該肽優(yōu)選具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。優(yōu)選給藥部位為靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、顱內(nèi)、腦脊液內(nèi)或局部。該肽有利地在藥物可接受載體中施用。在該優(yōu)選實(shí)施方式的另一方面，該肽包封于薄層狀結(jié)構(gòu)中。哺乳動(dòng)物優(yōu)選是人。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方式是治療有必要接受治療的哺乳動(dòng)物神經(jīng)痛的方法，包括給患神經(jīng)痛的哺乳動(dòng)物施用抑制神經(jīng)退化有效量的環(huán)狀肽，其中所述肽具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。優(yōu)選給藥部位為靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、顱內(nèi)、腦脊液內(nèi)或局部。該肽優(yōu)選具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。該肽有利地在藥物可接受載體中施用。在該優(yōu)選實(shí)施方式的另一方面，該肽包封于薄層狀結(jié)構(gòu)中。哺乳動(dòng)物優(yōu)選是人。
本發(fā)明還提供了一種用于誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物成髓鞘或抑制脫髓鞘的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。該肽優(yōu)選具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是一種用于抑制神經(jīng)退化或促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。該肽優(yōu)選具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。
本發(fā)明還提供了一種用于治療神經(jīng)痛的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。該肽優(yōu)選具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。
優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了來(lái)源于塞波素(saposin)C的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括共同序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8(SEQ ID NO:4)，其中X1是一種疏水氨基酸(丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，該肽具有如下序列環(huán)-[LLDNNKTEKLY](SEQ ID NO:5)或環(huán)-[LIDNNATEEIL](SEQ ID NO:6)。由于它們的被約束的結(jié)構(gòu)，這些環(huán)狀前塞波素(prosaposin)肽模擬物對(duì)酶降解明顯具有更強(qiáng)的抗性，并能夠比相應(yīng)的線形肽更大程度地穿過(guò)血腦屏障。本發(fā)明的環(huán)狀肽與序列為T(mén)XLIDNNATEEILY(其中X是D-丙氨酸)的已知高活性線形前塞波素(prosaposin)肽模擬物(“prosaptide”)(SEQ ID NO:7)相比對(duì)刺激神經(jīng)突生長(zhǎng)同樣有效或比其更有效(實(shí)施例1)。而且，本發(fā)明的環(huán)狀肽對(duì)于防止體外神經(jīng)細(xì)胞死亡比prosaptide更有效(實(shí)施例2)。這些環(huán)狀肽無(wú)游離氨基和羧基末端。因此，它們?cè)隗w內(nèi)對(duì)從氨基-和羧基-末端降解肽的氨基肽酶和羧基肽酶的降解具有更好的抗性。
來(lái)源于塞波素(saposin)C、包括活性11-聚體區(qū)的環(huán)狀肽(SEQ INNO:4)和其神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)類(lèi)似物具有促進(jìn)外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)在中毒、外傷、缺血、退化和遺傳損傷后功能恢復(fù)的用途。另外，這些肽刺激成髓鞘，對(duì)抗脫髓鞘疾病的作用。這些肽刺激哺乳動(dòng)物優(yōu)選人的神經(jīng)組織中神經(jīng)元的生長(zhǎng)，促進(jìn)成髓鞘，促進(jìn)神經(jīng)保護(hù)和防止程序性細(xì)胞死亡。本發(fā)明的肽還能夠用于治療各種神經(jīng)疾病，包括但不限于，運(yùn)動(dòng)的、感覺(jué)的、外周的、紫杉醇誘導(dǎo)的和糖尿病性神經(jīng)疾病。本文提到的神經(jīng)疾病是外周神經(jīng)系統(tǒng)中的功能紊亂或病理性改變，其臨床特征在于感覺(jué)或運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元異常。該肽還用作鎮(zhèn)痛劑，尤其用于治療哺乳動(dòng)物優(yōu)選人的神經(jīng)痛，該神經(jīng)痛能在外傷后持續(xù)數(shù)天或數(shù)月，通常持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間或?yàn)槁浴?br> 天然前塞波素(prosaposin)序列中的第二個(gè)天冬酰胺殘基(相應(yīng)于SEQ ID NO:4中的第二個(gè)“N”)已知為N-乙酰氨基葡萄糖糖苷化的，其可以為蛋白水解提供某種程度的抗性。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法(即，Merrifield合成)，用各種碳水化合物，優(yōu)選葡萄糖，對(duì)即時(shí)非-天然塞波素(saposin)C-來(lái)源肽中該天冬酰胺殘基的合成修飾也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是一種促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)或增強(qiáng)分化的或未分化神經(jīng)細(xì)胞成髓鞘作用的方法，即給細(xì)胞施用有效促神經(jīng)突生長(zhǎng)或促髓鞘形成量的來(lái)源于塞波素(saposin)C的包括SEQ ID NO:4所示活性環(huán)狀11-聚體區(qū)的肽。
本發(fā)明的來(lái)源于塞波素(saposin)C的環(huán)狀肽類(lèi)似物可以通過(guò)如下修飾區(qū)別于塞波素(saposin)C序列或SEQ IN NO:4-6，例如，取代一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸和/或精氨酸殘基；取代一個(gè)或多個(gè)酪氨酸和/或苯丙氨酸殘基；刪除一個(gè)或多個(gè)苯丙氨酸殘基和/或保守取代該肽中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸。賴(lài)氨酸/精氨酸和酪氨酸/苯丙氨酸殘基的取代或刪除將分別降低肽對(duì)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解的易感性。本發(fā)明的環(huán)狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和髓鞘營(yíng)養(yǎng)肽序列優(yōu)選具有高至約50個(gè)氨基酸；更優(yōu)選高至約30個(gè)氨基酸；最優(yōu)選約11到25個(gè)氨基酸，并且其中包括SEQ INNO:4所示的序列。
本發(fā)明考慮應(yīng)用的對(duì)這些肽序列的其它改變包括小的插入、缺失和取代。例如，考慮進(jìn)行保守氨基酸取代。該取代是，例如，在其側(cè)鏈的化學(xué)性質(zhì)相互關(guān)聯(lián)的一組氨基酸中進(jìn)行的取代。氨基酸分組包括堿性電荷氨基酸(賴(lài)氨酸、精氨酸、組氨酸)；酸性電荷氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)；非-極性氨基酸(丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)；無(wú)電荷的極性氨基酸(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸)；和芳香氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)。具體地說(shuō)，通常認(rèn)為一種由異亮氨酸或纈氨酸對(duì)亮氨酸、或谷氨酸對(duì)天冬氨酸、或絲氨酸對(duì)蘇氨酸的單獨(dú)取代構(gòu)成的保守氨基酸取代、或由結(jié)構(gòu)相關(guān)氨基酸對(duì)一種氨基酸的類(lèi)似保守取代將不會(huì)明顯影響肽的性質(zhì)。能夠?qū)Π⊿EQ ID NO:4的來(lái)源于塞波素(saposin)C-的環(huán)狀序列進(jìn)行修飾，以獲得各種目的，例如增強(qiáng)活性和穩(wěn)定性。也可以存在所述通用序列之外的其它氨基酸，包括天然塞波素(saposin)C序列、這些天然序列的保守取代、或非相關(guān)肽序列，以實(shí)現(xiàn)多種目的，例如增強(qiáng)的結(jié)合力、疏水性、親水性等。除活性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)區(qū)之外的序列對(duì)于活性通常不是必須的。因此，在大多數(shù)情況下，除去這些序列的相同性，目標(biāo)肽將具有活性。另外，任意所述肽可以用本文所述的方案篩選該活性。
所述環(huán)狀肽刺激神經(jīng)突生長(zhǎng)、防止神經(jīng)細(xì)胞死亡、促進(jìn)成髓鞘、緩解神經(jīng)痛、和治療感覺(jué)神經(jīng)疾病的任何一種能力可以容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)用實(shí)施例1-9描述的方案確定。分析這些肽促進(jìn)成髓鞘和抑制脫髓鞘能力的方法在下面的實(shí)施例3和4中闡述。
本發(fā)明的肽在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)活性的常用最小量通常至少約5ng/ml?？梢钥紤]用該量或高于該量的本發(fā)明的環(huán)狀合成肽進(jìn)行體外應(yīng)用。這些肽的用量通常在0.1μg/ml至約10μg/ml濃度范圍內(nèi)?？梢园凑諏?shí)施例1確定任意特定組織的有效量。
可以直接將本發(fā)明的肽施用給細(xì)胞在體外或離體處理神經(jīng)細(xì)胞。這可以如下進(jìn)行，例如，在適合特定細(xì)胞類(lèi)型的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，然后將肽加入培養(yǎng)基。當(dāng)在體內(nèi)，通常在脊椎動(dòng)物體內(nèi)，優(yōu)選哺乳動(dòng)物體內(nèi)處理細(xì)胞時(shí)，可以通過(guò)一種方法施用組合物。更優(yōu)選，直接將賦予肽所需局部濃度的足夠量組合物注射到血液或組織中。在缺乏賴(lài)氨酸和精氨酸殘基的肽中，蛋白水解導(dǎo)致的降解減少了。較小的肽(即20-聚體或更小)將最容易穿過(guò)血腦屏障，進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，治療CNS疾病(參見(jiàn)，Banks等，肽(Peptides),13:1289-1294,1992)。
本發(fā)明的肽還可以應(yīng)用常規(guī)酸-催化酯化作用用脂肪酸酯化，以形成肽脂肪酸酯?；蛘?，合成程序中添加的最后一個(gè)的氨基酸自身就是一種商業(yè)提供的酯化氨基酸，這即可免去酯化反應(yīng)的必要。考慮用于形成肽酯的脂肪酸包括月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸。
本發(fā)明的肽還可以通過(guò)在合成程序中加入商業(yè)提供的乙?；?lài)氨酸、精氨酸或天冬氨酸殘基進(jìn)行乙?；?。這些修飾肽保留了母體化合物的活性。該修飾由于增強(qiáng)了疏水性而有利于促進(jìn)肽穿過(guò)血腦屏障的能力。
對(duì)于治療神經(jīng)疾病，還可以將足夠賦予所需局部濃度量的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素直接顱內(nèi)注射或注射到腦脊液中。在這兩種情況下，使用藥物可接受的可注射載體。該載體包括，例如，磷酸鹽緩沖的鹽水和Ringer’s溶液?；蛘撸梢酝ㄟ^(guò)直接局部注射或通過(guò)系統(tǒng)給藥將組合物施用到外周神經(jīng)組織。各種常規(guī)給藥方式都可以考慮，包括靜脈內(nèi)、腦脊液內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、顱內(nèi)、鼻內(nèi)、硬膜外、局部和口服。對(duì)于鎮(zhèn)痛劑的應(yīng)用，優(yōu)選通過(guò)直接肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射給藥。
本發(fā)明的肽組合物可以以單劑量形式包裝和給藥，例如一種劑量等于施用給患者的日劑量的可注射組合物或局部制劑或作為一種控釋組合物。一種裝有在PBS中的或凍干形式的日劑量活性成分的隔片密封小瓶是單位劑型的一個(gè)例子。用于治療神經(jīng)疾病、脫髓鞘或作為一般性鎮(zhèn)痛劑或用于治療神經(jīng)痛的本發(fā)明肽的近似日系統(tǒng)劑量基于脊椎動(dòng)物體重在約0.01至約10000μg/kg范圍內(nèi)。更優(yōu)選，日系統(tǒng)劑量在約0.1至1000μg/kg之間。最優(yōu)選，日系統(tǒng)劑量在約10至100μg/kg之間。因此，對(duì)于典型體重70kg的人，劑量可以在每日約0.7至700000μg之間；更優(yōu)選在每日約7至70000μg之間；最優(yōu)選在每日約700至7000μg之間。局部給藥材料的日劑量將大約少一個(gè)數(shù)量級(jí)。口服給藥也可以考慮。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，通過(guò)將神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)肽移植到體內(nèi)，將其局部施用給神經(jīng)細(xì)胞。例如，本發(fā)明特別考慮應(yīng)用聚乳酸、聚半乳酸、再生膠原、多層脂質(zhì)體和其它一些常規(guī)儲(chǔ)存制劑。灌注泵、骨架捕獲系統(tǒng)和透皮傳送裝置的組合也可以考慮。還可以在肽移植前，將其包封于US5529914所述的聚乙二醇仿形涂層中。
本發(fā)明的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)肽還可以包封于膠束或脂質(zhì)體。脂質(zhì)體包封技術(shù)是公知的。通過(guò)應(yīng)用能夠結(jié)合目標(biāo)組織的受體、配體或抗體，脂質(zhì)體可以靶向特定組織，例如神經(jīng)組織。這些制劑的制備是本領(lǐng)域眾所周知的(Radin等，Meth.Enzymol.,98:613-618,1983)。
目前還沒(méi)有能夠促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)功能完全再生和結(jié)構(gòu)完整性修復(fù)的商業(yè)提供藥品。尤其對(duì)CNS更是如此。通過(guò)應(yīng)用神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子使外周神經(jīng)再生在本發(fā)明的范圍內(nèi)。而且，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在治療與神經(jīng)群或腦特定區(qū)域退化有關(guān)的神經(jīng)退化疾病中具有治療作用。帕金森氏癥的主要病因是黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的退化。因?yàn)榭骨叭ㄋ?prosaposin)的抗體免疫組織化學(xué)染色人腦切片中黑質(zhì)的多巴胺能神經(jīng)元，本發(fā)明的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)肽可能在治療帕金森氏癥中具有治療作用。視網(wǎng)膜神經(jīng)疾病，一種導(dǎo)致老年人視力喪失的眼神經(jīng)退化疾病，也可以應(yīng)用本發(fā)明的肽治療。
長(zhǎng)期以來(lái)一直認(rèn)為，為了到達(dá)腦神經(jīng)群，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子必需施用到腦內(nèi)，因?yàn)檫@些蛋白質(zhì)不能穿過(guò)血腦屏障。US5571787公開(kāi)了一種來(lái)源于塞波素(saposin)C的碘化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)18-聚體片段能夠穿過(guò)血腦屏障。本發(fā)明的高到約22個(gè)氨基酸的肽也將以比較短肽更大的運(yùn)輸量穿過(guò)該屏障，因此能夠靜脈內(nèi)施用。其它的神經(jīng)群，例如運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，也可以通過(guò)靜脈注射治療，當(dāng)然直接注射到腦脊液內(nèi)也可以預(yù)見(jiàn)作為一種可選擇途徑。
可以按照前面描述的方式在體內(nèi)、離體或在體外治療細(xì)胞，以促進(jìn)髓鞘形成或防止脫髓鞘。導(dǎo)致神經(jīng)纖維脫髓鞘的疾病，包括MS、急性擴(kuò)散性腦白質(zhì)炎、進(jìn)行性多病灶腦白質(zhì)炎、異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良和腎上腺性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良，可以通過(guò)將本發(fā)明的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)肽施用給感染疾病的細(xì)胞緩解或中止。也可以考慮逆轉(zhuǎn)脫髓鞘病或其它神經(jīng)損傷。
本發(fā)明的組合物可以用作體外研究工具，用于研究神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和鞘磷脂促進(jìn)材料的效果。然而，更具體地說(shuō)，它們可以直接用作實(shí)驗(yàn)室試劑和細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基的成分，用于在體外促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)和維持。
本發(fā)明的肽應(yīng)用成熟方法在固體支持物上和應(yīng)用本領(lǐng)域公知的自動(dòng)固相方案的Fmoc化學(xué)法(Traeciak等，Tetrahedron Lett.33:4557-4561,1992)在Protein Technologies Symphony肽合成儀上合成。環(huán)狀肽應(yīng)用TFA/水/三異丙基硅烷(95∶2.5∶2.5)從固體支持物上切下來(lái)。應(yīng)用反相HPLC在C-18柱上用0.3％三氟乙酸(TFA)的乙腈液洗脫，來(lái)純化肽。SEQ ID NO:5(肽A)和6(肽B)所示的肽的質(zhì)譜分析證實(shí)已經(jīng)合成了環(huán)狀肽[SEQ ID NO:5:MH+1333(預(yù)期)，1333(觀察)；SEQ ID NO:6:MH+1127(預(yù)期)，1127(觀察)]。
下列實(shí)施例作為舉例說(shuō)明，不是意圖限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
體外刺激神經(jīng)突生長(zhǎng)NS20Y成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞在含有10％胎牛血清(FCS)的DMEM中生長(zhǎng)。用胰蛋白酶轉(zhuǎn)移細(xì)胞，在30mm有蓋培養(yǎng)皿的蓋玻片上鋪板。20-24小時(shí)后，用含0.5％FCS加各種濃度肽A、肽B或TX14(A)的2ml DMEM替換培養(yǎng)基。再次培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)，然后用PBS清洗，用Bouin’s溶液(苦味酸/福爾馬林/7酸15∶5∶1的飽和水溶液)固定30分鐘。用PBS除去固定劑，在相差顯微鏡下記錄神經(jīng)突生長(zhǎng)。表現(xiàn)等于或長(zhǎng)于一個(gè)細(xì)胞直徑的一個(gè)或多個(gè)明顯定義的神經(jīng)突的細(xì)胞記錄為陽(yáng)性。在各平皿的不同部分至少記錄200個(gè)細(xì)胞，以確定神經(jīng)突生長(zhǎng)細(xì)胞的百分率，分析進(jìn)行兩次。
所有三種肽在NS20Y細(xì)胞中均誘導(dǎo)神經(jīng)突生長(zhǎng)。T1/2(ED50)，導(dǎo)致神經(jīng)突生長(zhǎng)增加50％的肽濃度，對(duì)于TX14(A)和肽B為1.0ng/ml。對(duì)于肽A,T1/2為0.6ng/ml。因此，肽B與TX14(A)同樣有效，而肽A比TX14(A)更有效。這表明本發(fā)明的環(huán)狀肽與已成型的標(biāo)準(zhǔn)“prosaptide”相比具有優(yōu)良活性。
實(shí)施例2體外防止細(xì)胞死亡如實(shí)施例1所述將NS20Y細(xì)胞鋪板，在存在或缺乏TX14(A)、肽A或肽B的情況下，在0.5％胎牛血清中在玻璃蓋玻片上生長(zhǎng)2天。除去培養(yǎng)基，向各皿中加入0.2％錐蟲(chóng)藍(lán)的PBS液。在倒置顯微鏡上記錄蘭色-染色的死亡細(xì)胞，作為總百分?jǐn)?shù)，在每個(gè)平皿的四個(gè)視野記錄400個(gè)細(xì)胞。兩次的平均偏差為5％。TX14(A)、均降低了錐蟲(chóng)藍(lán)-陽(yáng)性(死亡)細(xì)胞的數(shù)目。TX14(A)防止神經(jīng)細(xì)胞死亡的T1/2(ED50)為1.0ng/ml。肽A和肽B更為強(qiáng)效，T1/2值分別為0.6ng/ml和0.8ng/ml。這表明本發(fā)明的環(huán)狀肽在援救程序細(xì)胞死亡方面，與標(biāo)準(zhǔn)線形“prosaptide”相比具有優(yōu)越活性。
實(shí)施例3離體成髓鞘分析按照Satomi(Zool.Sci.,9:127-137,1992)制備新生鼠的小腦移植體。當(dāng)新生小鼠小腦進(jìn)行正常神經(jīng)分化和開(kāi)始形成髓鞘的過(guò)程中，觀察培養(yǎng)中的神經(jīng)突生長(zhǎng)和成髓鞘共22天。在移植體(三個(gè)對(duì)照和三個(gè)處理移植體)制備好后的第二天加入具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽(10μg/ml)，在亮視野顯微鏡下用攝影機(jī)評(píng)價(jià)神經(jīng)突的生長(zhǎng)和成髓鞘。在第八天，含有肽的培養(yǎng)物比對(duì)照培養(yǎng)物更細(xì)瘦，擴(kuò)散更廣泛。在第15天，肽處理培養(yǎng)物在移植體的外圍含有一些具有長(zhǎng)突出物的細(xì)胞，而這在未處理培養(yǎng)物中很難發(fā)現(xiàn)。在第22天，肽處理培養(yǎng)物與對(duì)照移植體相比在顱下腦白質(zhì)中含有明顯較多的成髓鞘軸突。因此，本發(fā)明的肽離體誘導(dǎo)分化中的小腦增強(qiáng)的成髓鞘作用。
實(shí)施例4脫髓鞘的防止防止Schwann細(xì)胞死亡與防止脫髓鞘有關(guān)。Schwann細(xì)胞含有廣泛的髓磷脂鞘。向培養(yǎng)中的Schwann細(xì)胞加入具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽能夠以劑量依賴(lài)模式減少Schwann細(xì)胞死亡，并刺激硫酸腦苷脂，髓磷脂-特異性脂類(lèi)，整合到Schwann細(xì)胞中。這表明本發(fā)明的環(huán)狀肽能夠防止由于Schwann細(xì)胞死亡導(dǎo)致的脫髓鞘。
實(shí)施例5應(yīng)用肽治療外傷缺血性CNS損傷受到外傷損傷脊柱的人接受約100μg/ml具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽在無(wú)菌鹽水溶液中或以?xún)?chǔ)庫(kù)形式在腦脊髓內(nèi)或直接注射，以使肽能夠在損傷部位緩慢、連續(xù)地釋放。由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能的獲得(即，增加的四肢運(yùn)動(dòng))評(píng)價(jià)狀況改善。連續(xù)治療直到不再發(fā)生進(jìn)一步改善。
實(shí)施例6
應(yīng)用肽治療脫髓鞘疾病給診斷為早期MS的患者直接靜脈內(nèi)注射到腦脊液中劑量與實(shí)施例3相同劑量范圍的具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽。每2-5天或每周重復(fù)該劑量，觀察肌肉強(qiáng)度、肌與骨骼的協(xié)調(diào)和成髓鞘作用(通過(guò)MRI確定)的改善。
實(shí)施例7對(duì)Chung模型大鼠神經(jīng)痛的緩解該實(shí)施例描述了對(duì)外周神經(jīng)痛Chung實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ颓蕛?nèi)快速濃注具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽。各肽均為化學(xué)合成、純化、并溶解在無(wú)菌PBS并緩沖到神經(jīng)pH。按照以前Kim等(Pain,50:355,1992)描述的外科程序?qū)π坌源笫筮M(jìn)行操作，以誘導(dǎo)一種allodynic狀態(tài)。手術(shù)后兩周導(dǎo)入脊柱插管，5天后，以0.007、0.07、和0.7μg/只鼠施用肽。然后用校準(zhǔn)的von Frey發(fā)絲(hairs)測(cè)定壓力極限。動(dòng)物對(duì)施用壓力反應(yīng)而縮回爪子耗費(fèi)的時(shí)間越長(zhǎng)，神經(jīng)痛約不嚴(yán)重。該肽明顯增加了極限壓力，表明顯著地緩解神經(jīng)痛。
實(shí)施例8感覺(jué)神經(jīng)疾病的治療給小鼠施用紫杉醇，以誘導(dǎo)感覺(jué)神經(jīng)疾病。給紫杉醇-處理小鼠施用50μg/ml、100μg/ml、或250μg/ml的具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽。用Hargreaves感覺(jué)測(cè)試裝置測(cè)量熱感的喪失，作為感覺(jué)神經(jīng)疾病的指標(biāo)。三個(gè)劑量的肽都有效地防止或減緩紫杉醇-處理小鼠熱感的喪失。因此，本發(fā)明的合成的塞波素(saposin)C-衍生肽誘導(dǎo)地移植感覺(jué)神經(jīng)疾病。
實(shí)施例9緩解糖尿病大鼠的神經(jīng)痛該實(shí)施例描述了在糖尿病性神經(jīng)疾病的大鼠模型腹膜內(nèi)施用具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽的效果。
如Calcutt等(Pain,68:293-299,1996)所述，對(duì)大鼠單次腹膜內(nèi)注射鏈脲霉素(50mg/kg體重，臨用前溶解于0.9％無(wú)菌鹽水中)以融化胰腺β細(xì)胞并誘導(dǎo)胰島素缺陷，使大鼠成為糖尿病。兩天后，通過(guò)測(cè)量學(xué)糖水平確定鏈脲霉素-注射大鼠的糖尿病。按照大鼠糖尿病研究中普遍接受的非-飲食性高糖血癥的定義，將血糖濃度低于15mmol/l的鏈脲霉素-注射動(dòng)物排除于后續(xù)研究。
在第8周，分析對(duì)作為allodynia指標(biāo)的有毒化學(xué)福爾馬林的行為應(yīng)答，研究糖尿病大鼠和對(duì)照大鼠(Calcutt等，同上，1996)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，在大鼠右前爪背表面皮下注射新鮮配制的福爾馬林(50μl,0.5％的無(wú)菌鹽水溶液)。該濃度的福爾馬林在對(duì)照小鼠中誘導(dǎo)最大程度之下的行為應(yīng)答，在Q和2期糖尿病大鼠中可以檢測(cè)到痛覺(jué)過(guò)敏(Calcutt等，歐洲藥理學(xué)雜志(Eur.J.Pharmacol.)285:189-197,1995)。將動(dòng)物轉(zhuǎn)移到構(gòu)建成能夠連續(xù)觀察爪子的觀察倉(cāng)內(nèi)。在接下來(lái)的60分鐘里，由一位不知道各動(dòng)物治療組的觀察者以5分鐘的間隔記錄1分鐘內(nèi)因痛畏縮的動(dòng)物數(shù)。如以前對(duì)糖尿病大鼠研究時(shí)的定義，1期被定義為測(cè)定畏縮的開(kāi)始(注射后的1-2和5-6分鐘)；Q(靜止，quiescent)期是在10-11、15-16和20-21分鐘進(jìn)行的測(cè)定；2期是注射后接著的全部測(cè)定(參見(jiàn)，例如，Malmberg等，Neurosci.Lett.,161:45-48,1993)。由各期測(cè)定點(diǎn)畏縮數(shù)的總和，比較各期的活性。
將糖尿病大鼠分成兩組，每組四只動(dòng)物，分別施用鹽水或具有約11至25個(gè)氨基酸并含有SEQ ID NO:4所示序列的環(huán)狀塞波素(saposin)C-衍生肽。用0.5％福爾馬林處理前兩小時(shí)，用鹽水或200μg/kg肽腹膜內(nèi)給藥處理糖尿病大鼠。肽的施用完全防止了1期的異常畏縮應(yīng)答，在2期改善應(yīng)答達(dá)70％。因此，在疼痛的糖尿病性神經(jīng)病大鼠模型中，非腸道施用肽緩解福爾馬林注射導(dǎo)致的疼痛，并改善運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元功能。
序列表(1)總信息(ⅰ)申請(qǐng)人Myelos Corporation(ⅱ)發(fā)明名稱(chēng)環(huán)狀前塞波素衍生肽及其應(yīng)用(ⅲ)序列數(shù)目6(ⅳ)通信地址(A)收信人Knobbe,Martens,Olson&Bear(B)街道620 Newport Center Drive,16th Floor(C)城市Newport Beach(D)州CA(E)國(guó)家USA(F)郵編92660(ⅴ)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)介質(zhì)類(lèi)型軟盤(pán)(B)計(jì)算機(jī)IBM兼容(C)操作系統(tǒng)Windows(D)軟件FastSEQ for Windows Version 2.0b(ⅵ)在先申請(qǐng)資料(A)申請(qǐng)?zhí)?0/098,359(B)申請(qǐng)日1998年8月28日(ⅷ)律師/代理人信息(A)姓名Bartfeld,Neil S(B)登記號(hào)39901(C)案號(hào)MYELOS.014PR(ⅸ)通訊號(hào)碼(A)電話619-235-8550(B)傳真619-235-0176(2)SEQ ID NO:1的信息(ⅰ)序列特征
(A)長(zhǎng)度21氨基酸(B)類(lèi)型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類(lèi)型肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:1:Cys Glu Phe Leu Val Lys Glu Val Thr Lys Leu Ile Asp Asn Asn Lys1 5 10 15Thr Glu Lys Glu Lys20(2)SEQ ID NO:2的信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度18氨基酸(B)類(lèi)型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類(lèi)型肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:2:Tyr Lys Glu Val Thr Lys Leu Ile Asp Asn Asn Lys Thr Glu Lys Glu1 5 10 15Ile Leu(2)SEQ ID NO:3的信息
(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度12氨基酸(B)類(lèi)型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類(lèi)型肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:3:Leu Ile Asp Asn Asn Lys Thr Glu Lys Glu Ile Leu1 5 10(2)SEQ ID NO:4的信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度11氨基酸(B)類(lèi)型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類(lèi)型肽(ⅸ)特性(A)名稱(chēng)/關(guān)鍵詞其它(B)位置1...2(D)其它信息A,L,I,V,Y,W,F或者M(jìn)(A)名稱(chēng)/關(guān)鍵詞其它(B)位置3...3(D)其它信息D,E,K或者R
(A)名稱(chēng)/關(guān)鍵詞其它(B)位置6...6(D)其它信息任意氨基酸(A)名稱(chēng)/關(guān)鍵詞其它(B)位置8...8(D)其它信息D或者E(A)名稱(chēng)/關(guān)鍵詞其它(B)位置9...9(D)其它信息任意氨基酸(A)名稱(chēng)/關(guān)鍵詞其它(B)位置10...11(D)其它信息A,L,I,V,Y,W,F或者M(jìn)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:4:Xaa Xaa Xaa Asn Asn Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa1 5 10(2)SEQ ID NO:5的信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度11氨基酸(B)類(lèi)型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)環(huán)狀(ⅱ)分子類(lèi)型肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:5:Leu Leu Asp Asn Asn Lys Thr Glu Lys Leu Tyr1 5 10(2)SEQ ID NO:6的信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度11氨基酸(B)類(lèi)型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)環(huán)狀(ⅱ)分子類(lèi)型肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:6:Leu Ile Asp Asn Asn Ala Thr Glu Glu Ile Leu1 5 10
權(quán)利要求
1．一種環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。
2．權(quán)利要求1的肽，其中所述肽具有SEQ ID NO:5或6所示的氨基酸序列。
3．一種含有權(quán)利要求1的肽的組合物，其裝于隔片密封的小瓶中。
4．一種含有權(quán)利要求1的肽的組合物，其用一種控釋材料配制。
5．一種含有權(quán)利要求1的肽的組合物，其為凍干形式。
6．一種含有權(quán)利要求1的肽的組合物，其為脂質(zhì)體形式。
7．一種含有權(quán)利要求1的肽的組合物，其為適合局部施用的劑型。
8．一種含有權(quán)利要求1的肽的組合物，其為單位劑量形式。
9．一種誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物成髓鞘或抑制脫髓鞘作用的方法，包括給遭受脫髓鞘的哺乳動(dòng)物施用脫髓鞘抑制有效量的環(huán)狀肽，該肽具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。
10．權(quán)利要求9的方法，其中所述脫髓鞘是由于多發(fā)性硬化、缺血性損傷或外傷所致。
11．權(quán)利要求9的方法，其中所述施用選自靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、顱內(nèi)、腦脊液內(nèi)、和局部施用。
12．權(quán)利要求9的方法，其中所述肽在藥物可接受的載體中施用。
13．權(quán)利要求9的方法，其中所述肽被包封于薄層結(jié)構(gòu)中。
14．權(quán)利要求9的方法，其中所述肽具有SEQ IN NO:5或6所示的序列。
15．權(quán)利要求9的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
16．一種抑制神經(jīng)組織中神經(jīng)退化或促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)的方法，包括使神經(jīng)退化抑制有效量的環(huán)狀肽接觸對(duì)該退化易感的神經(jīng)組織，所述環(huán)狀肽具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。
17．權(quán)利要求16的方法，其中所述施用步驟選自靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、顱內(nèi)、腦脊液內(nèi)、和局部施用。
18．權(quán)利要求16的方法，其中所述肽在藥物可接受的載體中施用。
19．權(quán)利要求16的方法，其中所述肽被包封于薄層結(jié)構(gòu)中。
20．權(quán)利要求16的方法，其中所述肽具有SEQ IN NO:5或6所示的序列。
21．權(quán)利要求16的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
22．一種治療需要接受該治療的哺乳動(dòng)物神經(jīng)痛的方法，包括給患神經(jīng)退化疾病的哺乳動(dòng)物施用治療神經(jīng)痛有效量的環(huán)狀肽，其中所述肽具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。
23．權(quán)利要求22的方法，其中所述施用步驟選自靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、顱內(nèi)、腦脊液內(nèi)、和局部施用。
24．權(quán)利要求22的方法，其中所述肽在藥物可接受的載體中施用。
25．權(quán)利要求22的方法，其中所述肽被包封于薄層結(jié)構(gòu)中。
26．權(quán)利要求22的方法，其中所述肽具有SEQ IN NO:5或6所示的序列。
27．權(quán)利要求22的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
28．一種用于在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)成髓鞘或抑制脫髓鞘作用的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。
29．權(quán)利要求28的肽，其中所述肽具有SEQ ID NO:5或6所示的序列。
30．一種用于抑制神經(jīng)退化或促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。
31．權(quán)利要求30的肽，其中所述肽具有SEQ ID NO:5或6所示的序列。
32．一種用于治療神經(jīng)痛的環(huán)狀肽，其具有約11到25個(gè)氨基酸，并包括序列X1X2X3NNX4TX5X6X7X8，其中X1是一種疏水氨基酸(丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)；X2是一種疏水氨基酸；X3是天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸或精氨酸；N是天冬酰胺；X4是任意氨基酸；T是蘇氨酸；X5是谷氨酸或天冬氨酸；X6是任意氨基酸；X7是一種疏水氨基酸；X8是一種疏水氨基酸。
33．權(quán)利要求32的肽，其中所述肽具有SEQ ID NO:5或6所示的序列。
全文摘要
來(lái)源于前塞波素(prosaposin)的活性區(qū)的環(huán)狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和鎮(zhèn)痛肽,其具有如下共有序列:X
文檔編號(hào)A61P25/00GK1324367SQ99812627
公開(kāi)日2001年11月28日 申請(qǐng)日期1999年8月20日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月28日
發(fā)明者戴維·E·賴(lài)特, 約翰·S·奧布賴(lài)恩 申請(qǐng)人:邁洛斯公司