本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及2-甲基-5-亞胺基-苯并[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑和冰片組合物在腦血管病，特別是缺血性腦血管病中的應用。
背景技術(shù)：
：腦血管疾病（cerebrovasculardisease,CVD）是指由于各種腦血管病變所引起的腦部病變，按其發(fā)病進程可分為急性腦血管病（中風）和慢性腦血管病兩種。急性腦血管病包括短暫性腦缺血發(fā)作、腦血栓形成、腦栓塞、高血壓腦病、腦出血和蛛網(wǎng)膜下腔出血等；慢性腦血管病包括腦動脈硬化、腦血管病性癡呆、腦動脈盜血綜合癥、帕金森氏病等。缺血性腦卒中（Stroke）是指由于腦的供血動脈（頸動脈和椎動脈）狹窄或閉塞、腦供血不足導致的腦組織壞死的總稱。腦缺血包括四種類型，分比為短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）、可逆性神經(jīng)功能障礙（RIND）、進展性卒中（SIE）完全性卒中（CS）。TIA無腦梗死存在，而RIND、SIE和CS有不同程度的腦梗死存在。2-甲基-5-亞胺基-苯并[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑（又名泰瑞拉奉）是以已上市腦神經(jīng)保護劑依達拉奉（3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）作為先導化合物，引入丁基苯酞（3-丁基-1(3H)-異苯并呋喃酮）的活性中心內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)，設(shè)計并合成了全新化合物。臨床前研究表明，泰瑞拉奉具有抗氧化活性，能夠劑量依賴性地改善腦缺血再灌動物的神經(jīng)缺陷癥狀，縮小梗死面積，降低腦損傷程度，減輕腦水腫，抑制受損腦組織的脂質(zhì)過氧化（專利CN10108696A）。泰瑞拉奉（分子式C11H8N2O2，分子量200.20）。冰片分為合成冰片和天然冰片。合成冰片含有異龍腦，對人體有毒副作用；而天然冰片不含異龍腦。天然冰片屬于雙環(huán)單萜類的化合物，可以由龍腦香科植物撓腦香樹脂的加工結(jié)晶品（傳統(tǒng)醫(yī)藥,2006,15(9):57），還存在于多種藥用植物的揮發(fā)油中，包括纈草、甘菊、薰衣草等（BiochemPharmacol.2005,69(7):1101-11）。冰片能夠改善胃腸道（AAPSPharmSciTech.2011,12(4):1044-9;IntJPharm2007,337,74-79）、血腦屏障（JAsianNatProdRes.2014,16(6):648-57；JEthnopharmacol.2013,pii:S0378-8741(13)00735-6；JEthnopharmacol.2015,162:270-7）和眼角膜的通透性（Pharmazie2006,61,783-788;JIntMedRes2009,37,791-802），能夠發(fā)揮神經(jīng)保護作用（AfrJTraditComplementAlternMed.2013,11(1):161-4;Neuroscience.2011,176:408-19;EurJPharmacol.2014,740:522-31)，具有抗炎（Inflammation2014,37,1148-1157）、抗氧化和DNA保護作用（JAgricFoodChem.2014,62(28):6632-9）。此外，天然冰片還能改善大鼠凝血功能，抗血栓活性（AmJChinMed.2008,36(4):719-27）。另外，天然冰片還能增強抑制性氨基酸GABA受體活性（BiochemPharmacol.2005,69(7):1101-11）。天然冰片（分子式C10H18O；分子量154.25）。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是提供一種藥物組合物，包括2-甲基-5-亞胺基-苯并[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑或其在藥學可接受的鹽和冰片。上述藥物組合物，其特征在于重量比2-甲基-5-亞氨基-苯并[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑：冰片9：1~1：9，優(yōu)選重量比9：1~1：3，優(yōu)選重量比為3：1~1：3。本發(fā)明所述的冰片包括天然冰片或合成冰片，優(yōu)選天然冰片。本發(fā)明的藥物組合可以應用于制備腦血管的藥物。其中，腦血管病優(yōu)選缺血性腦血管病，進一步優(yōu)效缺血性腦卒中。本發(fā)明的有益效果是：2-甲基-5-亞胺基-苯并[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑和冰片兩者配伍，根據(jù)動物藥效試驗結(jié)果，針對腦血管病，兩者具有協(xié)同性地增加藥效的作用。具體實施方式下述實施例舉例說明本發(fā)明，不應被認為是對本發(fā)明的限制。實施例中提及的泰瑞拉奉是2-甲基-5-亞胺基-苯并[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑，提及的冰片是天然冰片。實施例1：泰瑞拉奉與冰片組合物對局灶性腦缺血再灌損傷的保護作用研究1材料和方法1.1實驗動物Sprague-Dawley（SD）大鼠，雄性，清潔級，體重270-290g1.2受試藥品泰瑞拉奉原料藥冰片原料藥市售依達拉奉注射液，南京先聲東元制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格10mg/5ml1.3實驗方法1.3.1局灶性腦缺血再灌模型的制備采用頸內(nèi)動脈線栓法制備大腦中動脈阻塞（Middlecerebralarteryocclusion,MCAO）腦缺血再灌注模型。動物用7％水合三氯乙醛（6ml/kg）麻醉后，俯臥位固定于手術(shù)臺上，消毒皮膚，頸部正中切開，分離右側(cè)頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈，輕輕剝離迷走神經(jīng)，結(jié)扎并剪斷頸外動脈，循頸內(nèi)動脈向前，結(jié)扎翼腭動脈。夾閉頸總動脈近心端，從頸外動脈的結(jié)扎線的遠端作一切口，插入外徑為0.285mm的尼龍線，進過頸總動脈分叉進入頸內(nèi)動脈，然后徐徐插入至有輕微阻力為止（自分叉處約20mm），阻斷大腦中動脈的所有血供，右側(cè)腦缺血2h后，輕輕拔出尼龍線，恢復血供進行再灌注，縫合皮膚，消毒。1.3.2動物分組與給藥實驗動物分為泰瑞拉奉組（3mg/kg）、冰片組（1mg/kg）、泰瑞拉奉與冰片組合物組、陽性藥依達拉奉組（6mg/kg）及模型組，共5組。制備腦缺血模型后，將動物機率均等單盲分配至各組。動物于再灌注后立即靜脈給藥1次，模型組動物給于等體積的生理鹽水。腦缺血后24小時評價神經(jīng)缺陷癥狀，而后處死動物，取腦，染色，拍照測定腦梗死面積。1.3.3神經(jīng)缺陷癥狀評分及腦梗死面積的測定采用改良Bederson5分制法進行神經(jīng)缺陷癥狀評價。采用單盲法評價腦缺血后大鼠的神經(jīng)缺陷癥狀，即由試驗設(shè)計者將動物按組標記，對神經(jīng)缺陷癥狀進行評分的試驗者不知道動物的分組情況，評分結(jié)束后，評分者將各種標記的評分結(jié)果呈交設(shè)計者，由設(shè)計者揭盲，獲得各試驗組每只動物的評分。腦梗死程度的測定，動物處死后，斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干，用生理鹽水沖洗大腦表面血跡，吸去表面殘留水跡，于-20℃放置20min，取出后立即于視線交叉平面垂直向下作冠狀切面，并向后每隔2mm切一片，將腦片置于2％TTC染液中孵育(37℃,90min)，正常腦組織染成深紅色，缺血腦組織則呈蒼白色，用生理鹽水沖洗后，迅速將腦片從前向后按順序排成一排，吸干表面殘留水跡，拍照。照片用圖像分析軟件處理，根據(jù)公式計算左腦相應的體積以及梗死灶體積，求出梗死灶百分比。梗死體積計算法：V=t(A1+A2+A3+………+An)t為切片厚度，A為梗死面積。%I=100%×(VC-VL)/VC%I為梗死體積百分比，VC為對照側(cè)（左腦半球）腦體積，VL為梗死側(cè)（右腦半球）非梗死區(qū)域體積。2實驗結(jié)果2.1對神經(jīng)缺陷癥狀的影響各組動物神經(jīng)缺陷癥狀的程度見表1，與模型組相比，泰瑞拉奉、冰片、泰瑞拉奉與冰片組合物、陽性藥依達拉奉均能顯著改善大鼠神經(jīng)缺陷癥狀（p=0.010，0.039，0.000，0.018），組合物藥效顯著優(yōu)于泰瑞拉奉及冰片單用（p=0.027,0.024）。根據(jù)金正均公式q=E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)評價組合物中泰瑞拉奉與冰片是否有協(xié)同作用。式中E(a+b)為合用藥物的有效率，Ea、Eb分別為A藥、B藥單獨用藥的有效率。若q值在0.85～1.15范圍內(nèi)，為兩藥合用單純相加，q值>1.15為增強，q值<0.85則表示兩藥合用有拮抗作用。按照上述公式計算，q=1.25，說明組合物組分間具有協(xié)同效應，復方優(yōu)于單方。表1.泰瑞拉奉與冰片復方用藥對神經(jīng)缺陷癥狀的影響組別動物數(shù)神經(jīng)缺陷癥狀評分模型組152.67±0.72依達拉奉組141.78±1.12*泰瑞拉奉組131.69±1.10*#冰片組111.82±1.25*#泰瑞拉奉與冰片組140.78±0.89***X±SD。與模型組相比，*p<0.05，***p<0.001；與組合物組相比，#p<0.052.2對腦梗面積的影響對腦梗塞面積的影響見表2，與模型組相比，泰瑞拉奉、泰瑞拉奉與冰片組合物、陽性藥依達拉奉均能顯著減小大鼠腦梗面積（p=0.03，0.000，0.03），組合物藥效顯著優(yōu)于泰瑞拉奉及冰片單用（p=0.019,0.02）。冰片組與模型組比較，雖有減小腦梗面積的趨勢，但未達到顯著水平。按照上述金正均公式計算，q=1.21，說明組合物組分間具有協(xié)同效應，復方優(yōu)于單方。表2.泰瑞拉奉與冰片復方用藥對腦梗面積的影響組別動物數(shù)腦梗面積（%）模型組1541.2±11.8依達拉奉組1429.6±15.6*泰瑞拉奉組1331.5±10.3*#冰片組1133.3±13.1#泰瑞拉奉與冰片組1422.2±9.1***X±SD。與模型組相比，*p<0.05，***p<0.001；與組合物組相比，#p<0.05實施例2：泰瑞拉奉/冰片（9:1,3:1,1:1）對局灶性腦缺血再灌損傷的作用1材料和方法1.1實驗動物Sprague-Dawley（SD）大鼠，雄性，清潔級，體重270-290g1.2受試藥品泰瑞拉奉原料藥冰片原料藥市售依達拉奉注射液，南京先聲東元制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格10mg/5ml1.3實驗方法局灶性腦缺血再灌模型的制備、神經(jīng)缺陷癥狀評分及腦梗死面積的測定方法同實施例11.3。實驗動物分為三個組方比例組（泰瑞拉奉/冰片比例分別為9:1、3:1、1:1，各組的給藥劑量均為4mg/kg）、陽性藥依達拉奉組（6mg/kg）及模型組，共5組。制備腦缺血模型后，將動物機率均等單盲分配至各組。動物于再灌注后立即靜脈給藥1次，模型組動物給于等體積的生理鹽水。腦缺血后24小時評價神經(jīng)缺陷癥狀，而后處死動物，取腦，染色，拍照測定腦梗死面積。2實驗結(jié)果2.1對神經(jīng)缺陷癥狀的影響各組動物神經(jīng)缺陷癥狀的程度見表3，與模型組相比，泰瑞拉奉/冰片比例9:1、3:1及陽性藥依達拉奉均能顯著改善神經(jīng)缺陷癥狀（p=0.041，0.004，0.013）。組合物1:1比例與模型組比較，雖有改善神經(jīng)缺陷癥狀的趨勢，但未達到顯著水平。表3.泰瑞拉奉與冰片復方用藥對神經(jīng)缺陷癥狀的影響組別動物數(shù)神經(jīng)缺陷癥狀評分模型組152.67±0.82依達拉奉組111.91±0.54*組方9:1組131.77±1.36*組方3:1組141.50±1.16**組方1:1組122.08±1.16X±SD。與模型組相比，*p<0.05，**p<0.012.2對腦梗塞面積的影響對腦梗塞面積的影響見表4，與模型組相比，泰瑞拉奉/冰片比例9:1、3:1、1:1及陽性藥依達拉奉均能顯著減小動物缺血再灌后腦梗塞面積（p=0.005，0.000，0.025，0.022）。表4.泰瑞拉奉與冰片復方用藥對腦梗面積的影響組別動物數(shù)腦梗面積（%）模型組1539.8±12.4依達拉奉組1129.2±8.4*組方9:1組1325.0±13.5**組方3:1組1421.9±11.2***組方1:1組1228.4±12.5*X±SD。與模型組相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001實施例3泰瑞拉奉/冰片（1:1,1:3,1:9）對局灶性腦缺血再灌損傷的作用1材料和方法1.1實驗動物Sprague-Dawley（SD）大鼠，雄性，清潔級，體重270-290g1.2受試藥品泰瑞拉奉原料藥冰片原料藥市售依達拉奉注射液，南京先聲東元制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格10mg/5ml1.3實驗方法局灶性腦缺血再灌模型的制備、神經(jīng)缺陷癥狀評分及腦梗死面積的測定方法同實施例11.3。實驗動物分為三個組方比例組（泰瑞拉奉/冰片比例分別為1:1、1:3、1:9，各組的給藥劑量均為4mg/kg）、陽性藥依達拉奉組（6mg/kg）及模型組，共5組。制備腦缺血模型后，將動物機率均等單盲分配至各組。動物于再灌注后立即靜脈給藥1次，模型組動物給于等體積的生理鹽水。腦缺血后24小時評價神經(jīng)缺陷癥狀，而后處死動物，取腦，染色，拍照測定腦梗死面積。2實驗結(jié)果2.1對神經(jīng)缺陷癥狀的影響各組動物神經(jīng)缺陷癥狀的程度見表5，與模型組相比，泰瑞拉奉/冰片比例1:1、1:3及陽性藥依達拉奉均能顯著改善神經(jīng)缺陷癥狀（p=0.042，0.017，0.005）。組合物1:9比例與模型組比較，雖有改善神經(jīng)缺陷癥狀的趨勢，但未達到顯著水平。表5.泰瑞拉奉與冰片復方用藥對神經(jīng)缺陷癥狀的影響組別動物數(shù)神經(jīng)缺陷癥狀評分模型組102.10±0.74依達拉奉組111.18±0.60**組方1:1組111.36±0.81*組方1:3組121.33±0.65*組方1:9組121.50±0.79X±SD。與模型組相比，*p<0.05，**p<0.012.2對腦梗塞面積的影響對腦梗塞面積的影響見表6，與模型組相比，泰瑞拉奉/冰片比例1:1、1:3、1:9及陽性藥依達拉奉均能顯著減小動物缺血再灌后腦梗塞面積（p=0.027，0.035，0.045，0.009）。表6.泰瑞拉奉與冰片復方用藥對腦梗面積的影響組別動物數(shù)梗死面積（%）模型組1032.6±11.0依達拉奉組1119.9±9.0**組方1:1組1122.0±9.3*組方1:3組1220.5±13.5*組方1:9組1220.1±15.4*X±SD。與模型組相比，*p<0.05，**p<0.01。當前第1頁1 2 3