一種治療肺纖維化的藥物組合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種治療肺纖維化的藥物組合物，它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑：紅景天30-40份，三七15-20份，丹參25-35份，麥冬35-35份。本發(fā)明還提供了該類藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明藥物組合物能有效治療肺纖維化，改善其相關指標，降低肺組織中TGF-β和TGF-β1含量，從而達到緩解其癥狀以提高其生存質量的治療效果，且避免了西醫(yī)化學藥物的嚴重毒副作用，為臨床用藥提供了一種新的選擇。
【專利說明】一種治療肺纖維化的藥物組合物及其制備方法和用途
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療肺纖維化的藥物組合物及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002]肺纖維化(Pulmonary fibrosis/PF)疾病是多種原因引起肺部炎癥和肺泡持續(xù)性損傷及細胞外基質的反復破壞、修復、重建和過度沉積從而導致正常的肺組織結構改變和功能喪失的一類疾病譜，是多種原因引起慢性肺疾病的共同結局，是呼吸衰竭的主要病理基礎，其病因和發(fā)病機制復雜，其確切的發(fā)病機制雖然目前尚未徹底闡明，但多種細胞因子及其網絡的調控是其發(fā)生發(fā)展病理機制的極重要因素。
[0003]肺纖維化屬于國際關注度極高的一類難治性重大病種，國內外研究認為:纖維化是慢性病久治不愈的根本原因，也是其致殘、致死的主因，有近50%的死亡與纖維化有關，而各種慢性肺病久治不愈的根本原因即在于其有纖維化病變。肺纖維化(PF)是器官纖維化中最具代表性、最典型最常發(fā)者，其病因復雜，除非典型肺炎可致PF外，很多肺系疾病均可導致PF，至少有150種以上病因與之相關。治療上，目前尚僅限于非特異性抗炎、免疫抑制劑及糖皮質激素等方法，其共同特點是缺少特異性治療，且大量使用抗生素和激素，這本身就是導致纖維化和加重纖維化的重要原因。隨著其發(fā)病率、死亡率的不斷上升，PF研究已成為世界關注熱點，故尋求中醫(yī)藥等其他療法已成當務之急。
[0004]過去認為器官的纖 維化一旦形成，就不能逆轉。然而，上世紀九十年代以來，大量實驗研究結果表明，包括肺纖維化在內的器官纖維化是可以逆轉的。各種器官纖維化之所以都可以經過正確的治療和調理發(fā)生過程相似的逆轉，是因為在細胞水平和分子水平上各種纖維化形成的過程就非常相似，具有殊途同歸的特點。這些相似的發(fā)生過程提示，一種器官纖維化發(fā)生機制的研究結果，也適用于其他各種器官纖維化；對一種器官纖維化的有效治療方法，對阻止、減輕其他各種組織器官纖維化也是有益的(Border WA.Evidencethat TGF-β should be a therapeutic target in diabetic nephropathy.KidneyInt, 1998，54:1390-1391.)。有鑒于此，國內外許多學者集中力量從一種器官纖維化的逆轉開始，逐漸擴展到多種器官纖維化逆轉的研究，獲得了器官纖維化可以逆轉的大量證據，其中包括肺纖維化。
[0005]雖然肺纖維化具有治療可逆性，但目前尚缺乏滿意的西醫(yī)藥防治手段，這可能與肺纖維化發(fā)病的多因素、病變的多靶點、病理進程的多樣性等相關。作為一種典型的復雜性疾病，以單靶點為主的西醫(yī)化學藥物經常顯得無能為力，中醫(yī)藥等傳統(tǒng)醫(yī)學在器官纖維化的治療方面擁有很大的潛力和優(yōu)勢，基于療效確切的中醫(yī)藥開發(fā)抗器官纖維化的藥物，特別是開發(fā)抗肺纖維化、肝纖維化、腎纖維化的藥物，前景日益廣闊。
[0006]中醫(yī)認為肺纖維化屬于典型的“本虛標實”病證，其病機為“病已久一本已虛”、“虛、阻相夾”，可歸屬中醫(yī)絡病范疇(李戎.論艾灸肺俞膏肓俞治療肺纖維化的中醫(yī)理論基礎與施治依據.遼寧中醫(yī)雜志，2004，31 (4):291-293.)。楊珂等報道了一種扶正化瘀方，主要成分為絞股藍、丹參、冬蟲夏草，用于抗大鼠肺纖維化，效果明顯；常繼亭報道了一種抗纖湯，主要成分為太子參、黃芪、沙參、麥冬、丹參、當歸、蛤蚧等10味中藥組成，臨床上用于治療特發(fā)性肺纖維化，療效顯著。

【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種治療肺纖維化的藥物組合物及其制備方法和用途。
[0008]本發(fā)明提供了一種治療肺纖維化的藥物組合物，它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑:
[0009]紅景天30-40份，三七15-20份，丹參25_35份，麥冬35_35份。
[0010]進一步地，它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑:
[0011]紅景天36份，三七18份，丹參30份，麥冬30份。
[0012]其中，所述藥物組合物是由所述重量配比的原料藥的水或有機溶劑提取物為活性成分，加上藥學上常用的輔料或者輔助性成分制備而成的制劑。
[0013]進一步地，所述制劑為經胃腸道吸收制劑。
[0014]所述制劑包括口服給藥途徑所用制劑，如膠囊劑、顆粒劑、散劑、片劑、口服液、丸劑等劑型。
[0015]本發(fā)明還提供了上述藥物組合物的制備方法，它包括如下步驟:
[0016](I)按所述重量配比稱取原料藥；
[0017](2)取紅景天、丹參和麥冬，加水提取，合并水提液，再加上三七粉和藥學上常用的輔料或者輔助性成分制備成制劑。
[0018]本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在制備治療肺纖維化的藥物中的用途。
[0019]進一步地，所述藥物是降低肺組織中TGF-β含量的藥物。
[0020]進一步地，所述藥物是降低肺組織中TGF- β I含量的藥物。
[0021]進一步地，所述藥物是治療血瘀絡滯、正氣已虛證型的肺纖維化的藥物。
[0022]目前已公認“整體觀念”、“辨證施治”、“復方使用”、“復方配伍用藥如用兵”是中醫(yī)最科學最有效的幾大優(yōu)勢，其中“復方配伍用藥如用兵”是非常科學的中醫(yī)藥原創(chuàng)理論。中醫(yī)組方中各藥如行兵布陣那樣環(huán)環(huán)相扣的嚴密配伍，是其優(yōu)于西醫(yī)化學藥配方的有效手段。中醫(yī)方劑理論認為，每一方劑，不僅需要根據病因病機選擇合適的藥物妥善配伍，同時也應符合組方的基本結構，即“君、臣、佐、使”的組方配伍理論，所謂“君、臣、佐、使”的組方配伍，就是其建立在對疾病病機的全方位判斷基礎上的科學配比。中醫(yī)用方通過多環(huán)節(jié)、多靶點整合調節(jié)的生物學機制，對肺纖維化這樣具有發(fā)病多因素、病變多靶點、病理進程多樣性(“三多”)等復雜特點、治療困難的疾病或其癥狀進行調控，可以取得比西醫(yī)化學藥更好、更持久的治療效果，且避免了西醫(yī)化學藥的毒副作用，而這種療效是建立在上述中醫(yī)傳統(tǒng)原創(chuàng)理論的正確指導之上的，本發(fā)明組方正遵循了這一原則。
[0023] 本發(fā)明藥物組合物中，以具有多種藥效作用，長于活血化瘀、抗氧化、消炎且提高免疫功能的紅景天為君藥。而三七富含人參皂苷成分，所以如人參同樣能補養(yǎng)正氣，但三七最大特長也是活血化瘀，故最適充任臣藥，以輔助君藥增強療效。中醫(yī)素有“一味丹參代四物”的醫(yī)謗，是說丹參一味藥就可以代替補血活血的著名古方“四物湯”，可見丹參可從“補血”的角度以補充和加強君藥、臣藥“補氣”，共同形成“扶正”的氣場；同時丹參的“活血”藥效，又可加強君藥、臣藥的“活血化瘀通絡”作用，因而遣為佐藥十分合宜。麥冬乃養(yǎng)陰要品，又能清熱，在君藥、臣藥補氣，佐藥養(yǎng)血的基礎上，再益以麥冬滋陰清熱，即形成了氣、血、陰均補的完整“扶正”態(tài)勢，因此，以之為使藥，既可養(yǎng)陰清熱助紅景天、三七、丹參發(fā)揮扶正藥效并防其燥弊，又可引導諸藥歸經，協(xié)調全方，堪為允當。
[0024]以上君臣佐使各組藥味職司分明，相輔相成，充分發(fā)揮了中醫(yī)學所獨有的復方配伍用藥如排軍布陣般的思辨性科學研究方法論精髓，各藥配伍產生了協(xié)同增效作用，能夠更好地治療肺纖維化，改善其相關指標，降低肺組織中TGF- β和TGF- β I含量，從而達到緩解其癥狀以提高其生存質量的治療效果，且避免了西醫(yī)化學藥物的嚴重毒副作用，為臨床用藥提供了一種新的選擇。
【具體實施方式】
[0025]實施例1本發(fā)明藥物組合物的制備[0026]取紅景天36克，三七粉18克，丹參30克，麥冬30克。各藥味按量稱取，三七研為極細末備用，其余三藥摻以足量的凈水，武火煎沸后改文火再煎煮10分鐘至15分鐘，煎煮3次，收集水煎液后，加入三七粉，即得湯劑。
[0027]實施例2本發(fā)明藥物組合物的制備
[0028]取紅景天40克，三七粉15克，丹參25克，麥冬35克。先以70%v/v乙醇提取2次后，合并醇提液，藥渣再以水煎煮2次，合并水煎液。分別將醇提液、水煎液濃縮后,混合,再加入適當糊精、可溶性淀粉，制粒，即得顆粒劑。
[0029]實施例3本發(fā)明藥物組合物的制備
[0030]取紅景天30克，三七粉20克，丹參35克，麥冬35克。先以70%v/v乙醇提取2次后，合并醇提液，藥渣再以水煎煮2次，合并水煎液。分別將醇提液、水煎液濃縮后,混合,再加入適量糊精、可溶性淀粉，制粒，壓片，即得片劑。
[0031]實施例4本發(fā)明藥物組合物的制備
[0032]取紅景天36克，三七粉18克，丹參30克，麥冬30克。各藥味按量稱取，摻以足量的凈水，武火煎沸后改文火再煎煮10分鐘至15分鐘，收集水煎液，再加水煎煮2次，合并濾液，濃縮，加入適量微晶纖維素，混勻后，裝膠囊，即得膠囊劑。
[0033]實施例5本發(fā)明藥物組合物的制備
[0034]取實施例1制備的湯劑，靜置，取上清液，濃縮后，干燥，粉碎，備用；取適量聚乙二醇4000，熔融后，將上述藥粉加入熔融基質中，75-85°C下保溫；采用各型滴丸機，滴口內/外徑及滴速適度，將其滴入二甲基硅油中，收集滴丸，即得滴丸劑。
[0035]以下通過試驗例具體說明本發(fā)明的有益效果。
[0036]試驗例I本發(fā)明藥物對大鼠實驗性肺纖維化的治療作用
[0037]1.實驗動物與材料
[0038]1.1實驗動物
[0039]3月齡健康SD大鼠42只，體重190±20g，雌雄各半。動物在實驗前適應性馴養(yǎng)I周，動物房溫度和濕度分別維持在20 0C和70%左右，動物飼料也由該中心提供。
[0040]1.2主要藥品與試劑
[0041]本發(fā)明組方藥物:實施例1制備的湯劑，臨用前配成1.5g生藥/ml的藥液；
[0042]博萊霉素A5: Smg/支，天津太河制藥有限公司，批號950902，用時以無菌生理鹽水稀釋成4mg/ml的溶液。
[0043]潑尼松:5mgX100片，南通制藥廠生產，批號951101，用時研成粉末，以蒸餾水溶
解配成50%的混懸液。
[0044]乙醚:天津市博迪化工有限公司，標準號:12951-2002
[0045]TGF-β單抗體、免疫組化、原位雜交試劑盒:博士德生物工程有限公司。1.3主要試驗儀器
[0046]ΒΧ50光學顯微鏡:日本OLYMPUS公司
[0047]Leica DM4000B圖像采集系統(tǒng):德國LEICA公司
[0048]2.實驗方法
[0049]2.1動物分組
[0050]將42只SD大鼠按照隨機排列表分為空白對照組(10只)、模型組(11只)、本發(fā)明組方藥物治療組(10只)、潑尼松組(11只)4個組。
[0051]2.2動物處理
[0052]2.2.1模型建立
[0053]采用國際上通用的博萊霉素A5(BLMA5)制作的大鼠肺纖維化模型，將模型組、本發(fā)明組方藥物治療組(以下簡稱“本方組”)、潑尼松(激素)對照組大鼠用乙醚麻醉后仰臥固定于大鼠實驗臺上，消毒后切開頸部皮膚，逐層分離，充分暴露氣管，其32只大鼠用Iml注射器抽取定量的博萊霉素A5(BLMA5)稀釋液(5mg/kg)，于氣管軟骨環(huán)之間穿刺，一次性緩慢注入氣管內，立即將動物直立旋轉，盡量使藥液在肺內分布均勻，消毒，縫合。其余10只空白對照組的大鼠手術過程相同，而氣管內滴注生理鹽水(0.2ml/只)，縫合皮膚，動物清醒后隨意進食。在手術造模過程中有3只大鼠死于麻醉意外，其中空白對照組I只，模型組I只，潑尼松組I只。
[0054]2.2.2治療方法
[0055]①本方組:造模后第7d開始每只每天以本發(fā)明藥物中劑量組按人劑量的10倍，即5g生藥/kg給大鼠灌胃，每日I次，連續(xù)治療4周。
[0056]②潑尼松組:造模后第7天開始每只每天胃內灌入潑尼松(5mg/kg)，連續(xù)治療4周。
[0057] ③模型組和空白對照組:模型組、空白對照組大鼠不給予任何藥物治療，僅每天在同一時間內以相同的方式進行抓取、固定，并按等容量生理鹽水灌胃作為對照。
[0058]3.檢測指標與方法
[0059]3.1 一般情況觀察
[0060]于造模后進行一般情況觀察，包括自主活動、動作、對外界刺激的反應和被毛的色澤，體重等。
[0061]3.2標本的采集與處理
[0062]3.2.1動物處死
[0063]稱取大鼠體重后，采用頸椎脫臼法處死。
[0064]3.2.2標本的選取和固定
[0065]處死大鼠后，開胸取肺，肉眼觀察組織大小、形狀、色澤、表面狀態(tài)、病灶特征。根據檢測指標不同，對左右肺分別取標本和固定。左肺的下部2/5(用于光鏡)，右下肺的2/3(免疫組化和原位雜交)，分別放入10%的甲醛溶液固定，常溫下保存。
[0066]3.3肺組織病理學改變
[0067]對肺組織進行HE染色，采用光鏡觀察肺泡炎及肺纖維化程度。HE染色主要步驟如下:(1)將取出的肺組織石蠟包埋、切片；(2)梯度酒精脫蠟至水；(3)蘇木素染色15min ；
(4)蒸餾水沖洗IOmin ；(5) 70 %鹽酸酒精分化5s ； (6)蒸餾水沖洗5min ；(7)伊紅復染Imin ；(8)梯度酒精脫水；(9) 二甲苯透明；(10)中性樹膠封片；(11)光鏡下觀察。
[0068]根據Szapiel等的方法確定肺泡炎和肺纖維化的程度。利用HE染色的病理切片將肺泡炎分為四級:無肺泡炎(_);輕度肺泡炎(+):肺泡隔因細胞浸潤增寬，病變范圍局限在全肺的20%以下沖度肺泡炎(++):病變范圍占全肺的20%~50%;重度肺泡炎(+++):呈彌漫性分布，病變范圍大于50%。將肺間質纖維化分為四級:無纖維化(_);輕度纖維化(+):受累范圍小于20% ;中度纖維化(++):受累范圍占全肺的20%~50%，肺泡結構紊亂；重度肺纖維化(+++):受累范圍大于50%，肺泡融合，肺實質結構紊亂。
[0069]3.4肺組織中TGF- β蛋白表達檢測
[0070]原理:利用抗原和抗體反應后，加入酶的相應底物，在酶的催化作用下，發(fā)生水解氧化，生成有色產物的顯色反應，以揭示組織切片存在的微量抗原，供顯微鏡結合圖像分析進行觀察。
[0071]采用鏈霉卵白素-生物素-酶復合物(SABC)法。主要步驟如下:(I)常規(guī)脫蠟、水化；(2)加3%過氧化氫去除內源性過氧化物酶；(3)蒸餾水洗滌，微波修復抗原；(4)滴加正常山羊血清封閉液，每張切片滴加20 μ 1，室溫20min，甩去多余液體，不洗；(5)加滴加適當比例稀釋的一抗，37°C孵育I~2小時或4°C過夜；(6)加入生物素化山羊抗小鼠IgG(二抗)，PBS洗3次；(7)滴加試劑SABC, 20-37 0C 20分鐘，PBS洗4次；(8) DAB顯色，鏡下控制顯色時間5~30分鐘；(9)蘇木素洗滌、復染、脫水、透明、封片。陰性對照除用PBS代替一抗外，其它步驟相同。
[0072]3.5肺組織中TGF- β mRNA表達檢測
[0073]原理:原位雜交是一種核酸雜交技術，以標記已知序列的DNA或RNA為探針與組織切片細胞中的DNA和RNA在原位雜交，檢測組織和細胞內特定基因的有無及表達情況，從而對組織細胞內特定的基因進行定性、定位和相對定量分析。
[0074]主要步驟如下:(1)常規(guī)脫蠟至水；(2)加3%過氧化氫滅活內源性過氧化物酶；
(3)暴露mRNA核酸片段，在切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶消化IOmin ； (4)加預雜交液37°C 3h ;(5)加雜交液40°C過夜；(6)次日，加封閉液37°C 30min ; (7)加入生物素化地高辛37°C Ih ；(8)滴加試劑SABC，20-37 °C 20分鐘，PBS洗滌；(9)滴加生物素化過氧化物酶37°C 20min ; (10) DAB顯色，鏡下控制顯色時間20-30分鐘；(11)蘇木素復染、脫水、透明、封片。陰性對照除不加含探針的雜交液外，其它步驟相同。
[0075]TGF-β蛋白表達和mRNA表達結果判定采用leica Qwin V3圖像分析軟件，各片在高倍視野(400X)下隨機取5個視野，測定各自陽性細胞中陽性顆粒的灰度值總和，然后計算各均值，作為該片的平均灰度值。灰度值與染色強度呈反比，即染色越淺，灰度值越大；染色越深，灰度值越小。平均灰度在圖像分析中用來表示圖像的透光率，分為256級，最黑為O級，最亮為256級。平均灰度值越小，說明其免疫組化染色越深，陽性表達越強，即細胞內被測物質的量越高。[0076]3.6統(tǒng)計學處理
[0077]所有數據均采用美國社會科學統(tǒng)計軟件SPSSll.0for Windows進行單因素方差分析、Q檢驗。等級資料米用非參數秩和檢驗。
[0078]4.結果
[0079]4.1 一般情況(見表1、2)
[0080]表1 一般情況觀察結果
[0081]
【權利要求】
1.一種治療肺纖維化的藥物組合物，其特征在于:它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑: 紅景天30-40份，三七15-20份，丹參25-35份，麥冬35-35份。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于:它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑: 紅景天36份，三七18份，丹參30份，麥冬30份。
3.根據權利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于:所述藥物組合物是由所述重量配比的原料藥的水或有機溶劑提取物為活性成分，加上藥學上常用的輔料或者輔助性成分制備而成的制劑。
4.根據權利要求3所述的藥物組合物，其特征在于:所述制劑為經胃腸道吸收制劑。
5.權利要求1~4任意一項所述藥物組合物的制備方法，其特征在于:它包括如下步驟: (1)按所述重量配比稱取原料藥； (2)取紅景天、丹參和麥冬，加水提取，合并水提液，再加上三七粉和藥學上常用的輔料或者輔助性成分制備成制劑。
6.權利要求1~5任意一項所述藥物組合物在制備治療肺纖維化的藥物中的用途。
7.根據權利要求6所述的用途，其特征在于:所述藥物是降低肺組織中TGF-β含量的藥物。
8.根據權利要求6所述的用途，其特征在于:所述藥物是降低肺組織中TGF-βI含量的藥物。
9.根據權利要求6所述的用途，其特征在于:所述藥物是治療血瘀絡滯、正氣已虛證型的肺纖維化的藥物。
【文檔編號】A61P11/00GK103933334SQ201410143051
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月10日 優(yōu)先權日:2014年4月10日
【發(fā)明者】李戎, 楊明, 余青, 李富紅 申請人:成都中醫(yī)藥大學