迷迭香酸在制備治療或預防肺纖維化的藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了迷迭香酸的藥物新用途，具體涉及迷迭香酸通過抑制高遷移率族蛋白B1(highmobility?group?box1，HMGB1)的表達從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，達到預防或治療特發(fā)性肺纖維化。在上述應用中，迷迭香酸使用劑量范圍是50mg～2000mg；優(yōu)選100～1000mg。
【專利說明】迷迭香酸在制備治療或預防肺纖維化的藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及迷迭香酸抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展從而預防或治療特發(fā)性肺纖維化； 具體涉及迷迭香酸通過抑制高遷移率族蛋白Bl(highmobility group boxl，HMGBl)的表達 從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，達到預防或治療特發(fā)性肺纖維化。
【背景技術】：
[0002] 特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)又稱為隱源性致纖維化 性肺泡炎（cryptogenicfibrosing alveolitis, CFA)，是一種慢性炎癥性間質性疾病，以普 通型間質性肺炎（usual interstitialpneumonia，UIP)為特征性病理改變且病因不明。主 要表現(xiàn)為成纖維細胞灶（fibroblastic foci)的出現(xiàn)致大量細胞外基質（extracellular matrix, ECM)沉，膠原積聚，肺泡結構破壞，最終導致正常肺組織結構的破壞，是一種 慢性、進行性、不可逆轉也是最常見的一種致命性肺疾病[King TJ，Pardo A, Selman M. Idiopathic pulmonary fibrosis [J]· Lancet. 2011，378 (9807) :1949-1961.]。臨床表 現(xiàn)為進行性呼吸困難并伴有刺激性干咳，肺功能限制性通氣障礙，病情持續(xù)惡化，最終因呼 吸衰竭而死亡。流行病學研究顯示IPF發(fā)病率呈不斷上升趨勢，目前約為16. 3/100, 000， 且 3 年內(nèi)急性惡化發(fā)生率為 20.7% [Navaratnam V，F(xiàn)leming KM，West J et al.The rising incidence of idiopathic pulmonary fibrosis in the UK J. Thorax,2011, 66(6) :462-467. ;Song JW, Hong SB, Lim CM et al. Acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis ：incidence, risk factors and outcome[J]. Eur Respir J,2011, 37(2) :356-363.]。肺纖維化主要是肺組織受損后修復調(diào)節(jié)失控、重建異常所引起的病變， 期間一系列細胞因子和生長因子等表達異常、炎癥反應參與肺纖維化的發(fā)病過程。由此造 成上皮細胞缺損、成纖維細胞增生和ECM積聚等主要病變，最終結果是成纖維細胞替代了 行使正常功能的肺泡上皮細胞，導致了纖維化的發(fā)生。
[0003] HMGB1是一種重要的晚期炎癥因子，它作為晚期炎癥介質在的內(nèi)毒素血癥敗血 癥，失血性休克中發(fā)揮作用[Wang H.et al.HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science. 1999,9;285(5425) :248-251·]。HMGB1 的拮抗劑特異性 地抑制內(nèi)源性的HMGB1能降低敗血癥的病死率[Yang H.et al. Reversing established sepsis with antagonists of endogenous high-mobility group box 1. Proc. Natl Acad. Sci. USA,2004,101 :296-301. ；ffang H, Czura CJ, Tracey KJ. Lipid unites disparate syndromes of sepsis. Nature Med. 2004,10 :124-125. ]〇
[0004] 最近研究表明HMGB1在IPF的發(fā)生發(fā)展中起重要作用【Hamada N, Maeyama T, Kawaguchi T, Yoshimi M, Fukumoto J, Yamada M, Yamada S, Kuwano K, Nakanishi Y. The role of high mobility group boxl in pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 2008 ;39 (4) :440-447.】。
[0005] 迷迭香酸（Rosmarinic acid)的化學名為R(+)2-〔〔3-(3,4_二輕基苯基-(-氧 化-2-丙烯基）氧基〕3,4-二羥基苯丙酸〕。迷迭香酸是水溶性的多酚類化合物。具 有抗炎、抗氧化活性、免疫抑制、抗血栓和抗血小板聚集作用等多種活性[劉鷹翔，計志 忠.迷迭香酸藥理作用的研究進展，國外醫(yī)藥?植物分冊，1993,8(6) :248?251 ;陳淑 珍，付陽平，等.迷迭香酸對大鼠中性粒細胞自由基生成和溶酶體釋放的影響，藥學學報， 1999,34(12) :881 ?885. ;Peake PW, Pussell BA, Martyn P.The inhibition effect of Rosmarinic acid on complement in volves the C5 convertase. Int J Tmmuno pharmacol. 1997,13 :853?85.;鄒正午，徐理納，田金英.迷迭香酸抗血栓和血小板聚集 作用，藥學學報，1993, 28 (4) :241?245.]，但迷迭香酸在制備預防或治療肺纖維化的藥理 作用未見報道。本發(fā)明人通過大量的研究發(fā)現(xiàn)迷迭香酸可以通過HMGB1的表達從而在預防 或治療肺纖維化和腎纖維化方面有明顯的作用?；诖?，本發(fā)明人發(fā)明了迷迭香酸通過抑 制HMGB1的表達從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，以達到預防或治療IPF。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明提供了迷迭香酸在制備預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
[0007] 本發(fā)明提供了迷迭香酸在抑制HMGB1表達達到預防或治療肺纖維化的藥物中的 應用。
[0008] 發(fā)明提供的藥物在用于肺纖維化時，其使用劑量范圍是50mg?2000mg;優(yōu)選 100 ?lOOOrng。
[0009] 本發(fā)明還提供了由迷迭香酸和藥學上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可 以以藥學常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、注射液、凍干粉針，優(yōu)選以片劑或凍干粉針形式存 在。
【專利附圖】
【附圖說明】 圖1是迷迭香酸對TGF- β 1刺激的A549細胞的HMGB1和E-cad表達影響圖
【具體實施方式】
[0010] 實施例1迷迭香酸凍干粉針制備
[0011] 取迷迭香酸50. 0g，加注射用水2000ml使其溶解，以NaOH調(diào)pH = 5. 5?7. 5,加 甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按凍干粉針 工藝凍干，制成每支含迷迭香酸50. Omg的凍干粉針。
[0012] 實施例2迷迭香酸片劑制備
[0013] 稱取100. 〇g迷迭香酸、35. 0g糖粉、40. 0g乳糖和23. 0g羧甲基淀粉鈉充分混合均 勻后過100目篩，加入適量的3% PVPK3(I水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60°C干燥3小時， 18目篩整粒，加入2. 0g硬脂酸鎂，混合均勻后淺凹沖壓，調(diào)節(jié)片重約200mg，即得。
【具體實施方式】
[0014] 試驗例1迷迭香酸對A549細胞株HMGB1表達的影響
[0015] 1實驗材料
[0016] DMEM培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品，新生牛血清為杭州四季青公司產(chǎn)品，TGF-β 1購自 PeproTech公司，A549細胞購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心，用含10%胎牛血清（Hyclone公 司）的低糖DMEM培養(yǎng)基（GIBCO公司），常規(guī)培養(yǎng)于5%的C02 , 37°C人工培養(yǎng)箱中，細胞呈 貼壁生長。HMGB1、E-cad -抗購買于sigma公司。
[0017] 迷迭香酸（純度98. 9%，濱州醫(yī)學院藥物化學研究室制備）
[0018] 2試驗方法
[0019] 當細胞生長融合至70% -80 %，用無血清培養(yǎng)基饑餓24h，換新鮮培養(yǎng)液，將傳 代的A549細胞分為：（1)陰性對照組；（2) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作用時間48h) ; (3) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作用時間48h) +迷迭香酸10 μ Μ ; (4) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作 用時間48h) +迷迭香酸30μΜ。48h后收獲并裂解細胞提取細胞總蛋白。BCA蛋白測定試 劑盒（Pierce公司）測定蛋白濃度后，取50 μ g樣品蛋白進行10%的十二燒基磺酸鈉2聚 丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉至聚偏二氟乙烯（PVDF)膜，加入HMGBl、E-cad 一抗，β-actin作內(nèi)參，Western blot檢測細胞HMGB1和E-cad(上皮細胞標記物）蛋白的 表達。以TGF- β 1未刺激組作為對照，分析HMGB1和E-cad蛋白的表達差異。
[0020]
[0021]
[0022] 表1迷迭香酸對TGF- β 1刺激A549細胞的HMGB1和E-cad表達影響
[0023]
【權利要求】
1. 本發(fā)明提供了迷迭香酸在制備預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
2. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征為迷迭香酸是通過抑制高遷移率族蛋白 Bl(highmobility group boxl，HMGBl)表達達到預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
3. 根據(jù)權利要求2所述的應用，其特征為迷迭香酸在用于預防或治療肺纖維化時，其 使用劑量范圍是50mg?2000mg ;優(yōu)選100?lOOOmg。
4. 根據(jù)權利要求3所述的應用，迷迭香酸是由藥學上可接受的載體或輔料組成的藥 物，以藥學常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、注射液、凍干粉針，優(yōu)選以片劑或凍干粉針形式存 在。
【文檔編號】A61K31/216GK104095839SQ201310127648
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2013年4月5日 優(yōu)先權日:2013年4月5日
【發(fā)明者】蔣王林, 呂長俊, 欒海云, 張樹平, 亢澤春 申請人:濱州醫(yī)學院