中和rsv、mpv和pvm的抗體和其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本公開涉及抗體和其抗原結(jié)合片段，其中和RSV、MPV和PVM的感染。本公開還涉及編碼這樣的抗體和抗體片段的核酸、產(chǎn)生這樣的抗體和抗體片段的無(wú)限增殖化B細(xì)胞和培養(yǎng)的漿細(xì)胞以及結(jié)合這樣的抗體和抗體片段的多肽。此外，本公開涉及抗體、抗體片段以及本發(fā)明的抗體識(shí)別的多肽在篩選方法以及在RSV或MPV感染和RSV和MPV共感染的診斷、治療和預(yù)防中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】中和RSV、MPV和PVM的抗體和其應(yīng)用
[0001] 該申請(qǐng)要求2012年3月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/613, 197和2012年6月4 日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/655, 310的權(quán)益，其公開內(nèi)容以其全部在此通過(guò)引用被并入， 如同記載在本文中。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 小鼠呼吸道合胞病毒（RSV)和變性肺病毒（MPV)和肺炎病毒是常見(jiàn)的屬于副粘病 毒（paramyxovirus)家族的感冒病毒，其共享目標(biāo)群體和代表新生兒和免疫受損的患者中 主要的健康問(wèn)題。
[0004] RSV是全球嬰兒和成人呼吸道疾病的主要原因。具有RSV感染的兒童的0.5% 和 3. 2 % 需要住院（Thompson, W.W.et al·，2003, JAMA:The Journal of the American Medical Association 289:179-186)，并且兒童的5%至10%具有延長(zhǎng)的嚴(yán)重感染，認(rèn)為是 以后童年里易感染哮鳴和哮喘樣癥狀的一個(gè)因素。對(duì)RSV的免疫似乎是短暫的，因此再感 染頻繁（〇gra, 2003, Paediatric Respiratory Reviews 5 Suppl A:S119_126)。
[0005] 人MPV在2001年被首次分離，并且現(xiàn)在被公認(rèn)為是嬰兒和成人中急性呼吸道疾病 的第二主要原因；據(jù)估計(jì)它感染超過(guò)50%的兩歲嬰兒和幾乎所有五歲的兒童。MPV占住院 的幼兒中呼吸性疾病的大致 5 至 15% (Alto, 2004, The Journal of the American Board of Family Practice/American Board of Family Practice 17:466-469 ;WiIliams et al.，2004, N Engl J Med 350:443-450)。具有MPV的感染是瀕臨危險(xiǎn)的早產(chǎn)兒中的疾病、 早產(chǎn)的慢性肺病、充血性心臟病和免疫缺陷的顯著負(fù)擔(dān)（Martino et al.，2005, Biology of Blood and Marrow Transplantation:Journal of the American Society for Blood and Marrow Transplantation 11:781-796)。
[0006] MPV和RSV的共感染可以是常見(jiàn)的，假定它們的流行和重疊的冬季疾病流行。雖 然不清楚是否協(xié)同的病理學(xué)可在這兩種病毒之間發(fā)生，但是導(dǎo)致特別嚴(yán)重的呼吸道疾病的 惡化在一些MPV和RSV共感染的兒童中觀察到（Greensill, 2003, Emerging Infectious Diseases 9:372)。
[0007] RSV-其屬于肺病毒屬（Pneumoviriniae)亞科肺炎病毒（Pneumovirus)屬，以 及MPV-其屬于肺病毒屬亞科變性肺病毒（Metapneumovirus)屬，在它們的基因結(jié)構(gòu)中 具有一些相似性，雖然MPV缺少在RSV中發(fā)現(xiàn)的非結(jié)構(gòu)基因 NSl和NS2。RSV和MPV包膜含 有三個(gè)病毒編碼的跨膜表面糖蛋白：主要附著蛋白G、融合蛋白F和小的疏水SH蛋白。雖 然RSV和MPV包膜含有功能上相似的蛋白，然而，重要的是注意RSV和MPV的F蛋白只共享 33 %的氨基酸序列同一性。另外，針對(duì)RSV或MPV產(chǎn)生的抗血清不交叉中和兩種病毒（Wyde et al·，2003, Antiviral Research 60:51-59)，并且到目前為止能交叉中和 RSV 和 MPV 的 單克隆抗體沒(méi)有被分離。
[0008] RSV和MPV F糖蛋白通過(guò)病毒粒子包膜和宿主細(xì)胞質(zhì)膜之間的融合來(lái)指導(dǎo)病毒穿 入。后來(lái)在感染中，細(xì)胞表面上表達(dá)的F蛋白可用鄰近細(xì)胞介導(dǎo)融合，形成合胞體（Collins et al.，1984PNAS 81:7683-7687)。在兩種情況中，溶蛋白性裂解和含有氨基酸的疏水伸展 的F亞基--稱作融合肽--的N-端直接插入靶細(xì)胞膜以啟動(dòng)融合。結(jié)合到靶細(xì)胞和隨后 的活化之后，相對(duì)穩(wěn)定的融合前F蛋白經(jīng)歷一系列結(jié)構(gòu)重排，其導(dǎo)致融合肽插入靶細(xì)胞膜， 之后是當(dāng)病毒和細(xì)胞膜放在附近時(shí)形成的穩(wěn)定的螺旋束的形成。這些結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致穩(wěn)定的 融合后F蛋白的形成。
[0009] RSV或MPV感染的疫苗目前得不到。發(fā)現(xiàn)20世紀(jì)60年代測(cè)試的福爾馬林滅活 的和鋁為佐劑的RSV疫苗（FI-RSV)使嬰兒易患導(dǎo)致高熱和嚴(yán)重肺炎的自然RSV感染之 后增強(qiáng)的疾病，導(dǎo)致高的住院率和甚至一些死亡率（Fulginiti et al.，1969，American Journal of Epidemiology 89:435-448 ;Kapikian et al., 1969,American Journal of Epidemiology 89:405-421 ;Kim et al. , 1969, American Journal of Epidemiology 89:422-434)。相似地，福爾馬林滅活的MPV疫苗顯示在年幼的短尾猴中免疫介導(dǎo)的增強(qiáng)的 疾?。╠e Swart et al.，2007, Vaccine 25:8518-8528)。另外，抗病毒治療如利巴韋林尚未 被證明在RSV或MPV感染中有效。
[0010] 血清抗體在抵御RSV病毒的保護(hù)中的作用的證據(jù)已出現(xiàn)自流行病學(xué)以及動(dòng)物 研究。在嬰兒中，母親傳遞的抗體效價(jià)與抵抗嚴(yán)重疾病相關(guān)（Glezen et al.，1981，The Journal of Pediatrics 98:708-715)，在成人中，下呼吸道受累的發(fā)生率和嚴(yán)重性在存 在高水平的血清RSV中和抗體的情況下減少了（McIntosh et al·，1978, The Journal of Infectious Diseases 138:24-32)。單克隆抗體，帕利珠單抗（Synagis)，被注冊(cè)用于早產(chǎn) 新生兒中RSV感染的預(yù)防。然而，帕利珠單抗在預(yù)防RSV感染中不總是有效并且在治療上 沒(méi)有效果。另外，在存在帕利珠單抗的情況下動(dòng)物中RSV延長(zhǎng)的肺的復(fù)制在抵抗的病毒株 出現(xiàn)之后繼起（Zhao 和 Sullender, 2005, Journal of Virology 79:3962-3968)。目前沒(méi)有 用于MPV感染的治療或預(yù)防的單克隆抗體。
[0011] 缺少針對(duì)最嚴(yán)重形式的RSV感染的好的操作動(dòng)物模型與RSV和MPV是宿主受限的 肺炎病毒病原體這一事實(shí)相關(guān)。用于RSV和MPV感染治療的新藥的發(fā)展已受到缺少能概括 人疾病的所有癥狀和嚴(yán)重性的動(dòng)物模型的阻礙。實(shí)際上，RSV和MPV不是天然的小鼠病原體 和響應(yīng)病毒的大量的、非生理學(xué)的接種物只引起有限的、最低限度的癥狀和迅速中止的首 次感染。小鼠肺炎病毒（PVM)是天然的嚙齒動(dòng)物肺炎病毒病原體，其屬于人和牛RSV的相 同家族、亞科和屬（肺炎病毒）。PVM F蛋白只共享與人RSV F蛋白的40%氨基酸同一性， 但是具有相同的遺傳組織，除了 M2-L重疊--其存在于RSV但不存在于PVM。當(dāng)它發(fā)生在 人嬰兒中時(shí)，天然的小鼠病原體PVM引起的感染復(fù)制最嚴(yán)重形式的RSV的體征和癥狀中的 許多。PVM感染被表征為迅速的病毒復(fù)制，伴有大量的炎癥應(yīng)答--其導(dǎo)致呼吸衰竭和死亡 (Rosemberg 和 Domachowske, 2008, Immunology Letter 118:6-12)。小鼠中 PVM 感染因此 被認(rèn)為是人RSV和MPV嚴(yán)重感染最相關(guān)的動(dòng)物模型。
[0012] 缺少針對(duì)MPV感染的預(yù)防性治療和針對(duì)RSV和MPV感染的疫苗以及帕利珠單抗 治療的無(wú)效，突出了對(duì)于這些顯著的人病原體的新的預(yù)防和治療劑的需要。假定大流行 和共感染的可能性，將高度期望具有單個(gè)藥劑--其能預(yù)防以及治療或減弱RSV和MPV感 染--和具有在其中測(cè)試藥劑的動(dòng)物模型。因此，存在對(duì)廣泛交叉反應(yīng)的中和抗體的需要， 所述中和抗體保護(hù)抵御寬范圍的副粘病毒，例如，至少RSV和MPV，和優(yōu)選RSV、MPV和PVM。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明部分基于中和RSV、MPV和PVM感染的廣泛中和抗體，以及本發(fā)明的抗體結(jié) 合的多肽的發(fā)現(xiàn)。因此，在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明包括分離的抗體，例如單克隆抗體、人 抗體、人單克隆抗體、抗體變體或抗原結(jié)合片段，其交叉中和RSV、MPV和PVM的感染。
[0014] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和 RSV和MPV的感染。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其 中和RSV、MPV和PVM的感染。
[0015] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特 異地結(jié)合RSV融合前F蛋白而不是RSV融合后F蛋白。在再一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括 分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異地結(jié)合RSV和MPV的融合前F蛋白而不是融合后F 蛋白。在再一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異地結(jié)合RSV、 MPV和PVM的融合前F蛋白而不是融合后F蛋白。
[0016] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其包括至少 一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)序列，所述序列與SEQ ID N0:l-6、19-23、35、39-42或53-54中任一 個(gè)具有至少95%的序列同一性，其中所述抗體中和RSV、MPV和PVM的感染。
[0017] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其包括具有 SEQ ID NO: 1 或SEQ ID NO: 19 的氨基酸序列的重鏈CDRl ;具有SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 20 或 SEQ ID N0:39 的氨基酸序列的重鏈 CDR2;和具有 SEQ ID N0:3，SEQ ID N0:21、SEQ ID N0:40或SEQ ID N0:53的氨基酸序列的重鏈CDR3,其中所述抗體中和RSV、MPV和PVM的感 染。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其包括具有SEQ ID N0:4的氨基酸序列的輕鏈CDRl ;具有SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:22或SEQ ID N0:41的氨基 酸序列的輕鏈 CDR2;和具有 SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:35、SEQ ID N0:42 或 SEQ ID NO: 54的氨基酸序列的輕鏈CDR3,其中所述抗體中和RSV、MPV和PVM的感染。
[0018] 在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗 體包括：（i)分別在 SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2 和 SEQ ID NO:3 中列出的重鏈 CDR1、CDR2 和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:35中列出的輕鏈CDR1、 CDR2 和 CDR3 序列；（ii)分別在 SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2 和 SEQ ID NO:3 中列出的重鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列，和分別在 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5 和 SEQ ID N0:6 中列出的 輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 序列；（iii)分別在 SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 39 和 SEQ ID NO:40 中列出的重鏈CDRUCDR2和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:41和SEQ ID N0:42 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；（iv)分別在 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:39 和 SEQ ID N0:40 中列出的重鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列，和分別在 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5 和 SEQ ID N0:6 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；（V)分別在 SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:2和SEQ ID N0:3中列出的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:41和SEQ ID N0:42中列出的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，并且其中所述抗體中和 RSV、MPV和PVM的感染。
[0019] 在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗 體包括：（i)分別在 SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20 和 SEQ ID NO:21 中列出的重鏈 CDR1、 CDR2和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:22和SEQ ID N0:23中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；（ii)分別在 SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:39 和 SEQ ID N0:53 中列 出的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 序列，和分別在 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:41 和 SEQ ID N0:54 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；（iii)分別在 SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:39 和 SEQ ID N0:53中列出的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:22和 SEQ ID N0:23 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；或（iv)分別在 SEQ ID NO: 19、SEQ ID N0:20和SEQ ID N0:21中列出的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、 SEQ ID N0:41和SEQ ID N0:54中列出的輕鏈⑶RU⑶R2和⑶R3序列，并且其中所述抗體 中和RSV、MPV和PVM的感染。
[0020] 在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗 體包括包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 37的氨基酸序列 的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 14的 氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:49的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包 含SEQ ID N0:50的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:49的氨基酸序列的重鏈 可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID NO: 17的氨基酸 序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:50的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，并且其中所述抗體中 和RSV、MPV和PVM的感染。
[0021] 在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗 體包括包含SEQ ID NO: 29的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 30的氨基酸序列 的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO:30的 氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:59的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:60的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:59的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包 含SEQ ID N0:30的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:33的氨基酸序列的重鏈 可變區(qū)和包含SEQ ID N0:60的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，并且其中所述抗體中和RSV、MPV 和PVM的感染。
[0022] 本發(fā)明進(jìn)一步包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其在本文中描述為HMB3210(或 3210);或HMB2430(或2430)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括抗體或其抗原結(jié)合片段， 其中和RSV、MPV和PVM的感染，其中所述抗體或其片段由產(chǎn)生HMB3210或HMB2430的無(wú)限 增殖化B細(xì)胞克隆表達(dá)。
[0023] 另一方面，本發(fā)明包括核酸分子，其包括編碼本發(fā)明的抗體或抗體片段的多核苷 酸。再一方面，本發(fā)明包括載體，其包括本發(fā)明的核酸分子。本發(fā)明還包括表達(dá)本發(fā)明的抗 體或其抗原結(jié)合片段的細(xì)胞。又一方面，本發(fā)明包括分離的或純化的免疫原性多肽，其包括 與本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合的表位。
[0024] 本發(fā)明進(jìn)一步包括藥物組合物，所述藥物組合物包括本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合 片段、本發(fā)明的核酸分子、包括本發(fā)明的核酸分子的載體、表達(dá)本發(fā)明的抗體或抗體片段的 細(xì)胞或本發(fā)明的免疫原性多肽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。本發(fā)明還包括藥物組合 物，其包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段以及第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其中第一抗體是 本發(fā)明的抗體，而第二抗體是抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和RSV或MPV、或RSV和MPV、或 RSV、MPV和PVM所有三種的感染。
[0025] 本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、本發(fā)明的核酸、包括本發(fā)明的核酸的載體、表達(dá) 本發(fā)明的載體的細(xì)胞、包括與本發(fā)明的抗體或抗體片段結(jié)合的表位的分離的或純化的免疫 原性多肽、或本發(fā)明的藥物組合物（i)在制備用于治療或減弱RSV或MPV、或RSV和MPV共 感染的藥物中，（ii)在疫苗中，或（iii)在RSV和/或MPV病毒感染的診斷中的應(yīng)用也被 考慮在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段用于通過(guò)檢查所述疫苗的 抗原含有處于正確構(gòu)象的特異表位而監(jiān)測(cè)針對(duì)RSV或MPV、或RSV和MPV的疫苗質(zhì)量的應(yīng)用 也被考慮在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0026] 另一方面，本發(fā)明包括治療或減弱RSV和MPV感染或降低RSV和MPV感染的危險(xiǎn) 的方法，包括給予需要其的對(duì)象治療有效量的本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合抗體片段。
[0027] 在另外的方面，本發(fā)明包括多肽，其特異地與本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié) 合，用⑴在治療中，（ii)在制備用于治療或減弱RSV或MPV、或RSV和MPV感染的藥物中， (iii)作疫苗，或（iv)在篩選能中和RSV或MPV、或RSV和MPV感染的配體中。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028] 圖1顯示篩選由來(lái)自7個(gè)供體（供體1至7)的EBV-無(wú)限增殖化記憶B細(xì)胞產(chǎn)生 的單克隆抗體體外中和RSV或MPV病毒感染的能力的結(jié)果。
[0029] 圖2顯示單克隆抗體HMB2430、HMB3210、234mAb和帕利珠單抗中和RSV和MPV的 結(jié)果。
[0030] 圖3顯示單克隆抗體莫托維珠單抗、234mAb、HMB2430和HMB3210與RSV F或破傷 風(fēng)毒素蛋白的結(jié)合，如通過(guò)ELISA所測(cè)量的。
[0031] 圖4顯示在存在大量過(guò)量的指示的未標(biāo)記抗體的情況下標(biāo)記的單克隆抗體與RSV 感染的H印-2細(xì)胞的結(jié)合。
[0032] 圖5顯示在還原或非還原條件下單克隆抗體HMB2430、HMB3210、234mAb和莫托維 珠單抗與來(lái)自RSV-Hep-2感染的細(xì)胞的溶胞產(chǎn)物的RSV F蛋白的結(jié)合，如蛋白印跡分析所 測(cè)量的。
[0033] 圖6顯示在還原或非還原條件下單克隆抗體HMB3210和234mAb與來(lái)自 MPV-LLC-MK2感染的細(xì)胞的溶胞產(chǎn)物的MPV F蛋白的結(jié)合，如蛋白印跡分析所測(cè)量的。
[0034] 圖7顯示單克隆抗體HMB2430、HMB3210、234mAb和帕利珠單抗中和RSV長(zhǎng)株和 PZ-MARM6隔離群的結(jié)果。
[0035] 圖8顯示在存在（+)或缺少（-)N-糖苷酶PNG-ase F的情況下溫育之后還原的 SDS-PAGE凝膠上HMB3210v2的分析結(jié)果。用黑框突出顯示的是被糖基化的HMB3210輕鏈的 小的部分。
[0036] 圖 9 顯示單克隆抗體 HMB3210v2 和 HMB3210v3 中和 MPV I-PV 03/01-6621 和 RSV A2的結(jié)果。
[0037] 圖10顯示單克隆抗體HMB3210v2和HMB3210v3中和一組MPV和RSV株的結(jié)果。
[0038] 圖11顯示HMB3210和HMB2430單克隆抗體種系化的變體中和MPV I-PV 03/01-6621 和 RSV A2 的結(jié)果。
[0039] 圖12顯示與HMB3210或帕利珠單抗共同溫育或不與其共同溫育的RSV F融合后 重組蛋白的尺寸排阻層析分析的結(jié)果。
[0040] 圖13顯示與HMB3210或帕利珠單抗共同溫育或不與其共同溫育的RSV F融合前 重組蛋白的尺寸排阻層析分析的結(jié)果。
[0041] 圖14顯示HMB3210V3或帕利珠單抗（PVZ)與融合前和融合后RSV F蛋白的結(jié)合， 如通過(guò)表面等離子體共振（SPR)所測(cè)量的。
[0042] 圖15顯示人單克隆抗體HMB3210v3和D25的病毒中和和病毒播散的抑制。
[0043] 圖16顯示RSV或MPV感染中HMB3210v3和帕利珠單抗的預(yù)防效力。
[0044] 圖17顯示用RSV感染的STATl缺陷小鼠中HMB3210的治療效力。
[0045] 圖18顯示用致死劑量的PVM感染的小鼠中HMB3210的預(yù)防和治療效力。
[0046] 圖19顯示在用PVM致死感染之后第3、4或5天用HMB3210v3處理的小鼠中肺病 毒滴度增加的阻斷。
[0047] 圖20顯示在用致死劑量的PVM感染的小鼠中帶有野生型Fc或LALA突變的 HMB3210v3變體的預(yù)防和治療效力。
[0048] 圖21顯示突出顯示與副流感病毒5(PIV5)相比RSV、BRSV、PVM和MPV序列中 HMB3210識(shí)別的YLSALR肽的高度保守的比對(duì)。
[0049] 圖22顯示融合前RSV F蛋白的模型，其顯示YLSALR肽和鄰近的帕利珠單抗（PVZ) 位點(diǎn)的位置和突出顯示RSV F蛋白的融合前和融合后構(gòu)象中PVZ和HMB3210v3位點(diǎn)重排的 帶圖。
[0050] 圖23顯示364RSV、162MPV、8BRSV和5PVM株中HMB3210核心表位的高度保守。
[0051] 圖24顯示多種HMB3210重鏈和輕鏈變體的序列。
[0052] 圖25顯示多種HMB2430重鏈和輕鏈變體的序列。

【具體實(shí)施方式】
[0053] 本發(fā)明部分基于交叉中和RSV和MPV、或RSV、MPV和PVM的抗體以及本發(fā)明的抗 體結(jié)合的表位的發(fā)現(xiàn)和分離。這樣的抗體是期望的，因?yàn)橹恍枰粋€(gè)或很少的抗體來(lái)中和 RSV和MPV、或RSV、MPV和PVM。另外，交叉中和抗體以高滴度產(chǎn)生，從而減少生產(chǎn)包括用于 治療RSV和/或MPV感染的抗體的藥物的成本。此外，這樣的抗體識(shí)別的表位可以是能引 起針對(duì)RSV和MPV的寬的保護(hù)的疫苗的部分。
[0054] 雖然本發(fā)明的抗體中和RSV、MPV和PVM，但是在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，例如與 疾病治療、疫苗開發(fā)等相關(guān)的那些，目前的公開內(nèi)容只涉及RSV和MPV，因?yàn)檫@些病毒是人 病原體，而PVM是小鼠病原體。如本文所用，術(shù)語(yǔ)"RSV和MPV"和"RSV、MPV和PVM"基于上 下文可互換地使用。
[0055] 因此，一方面，本發(fā)明提供分離的抗體、抗體變體和其抗原結(jié)合片段，其中和RSV 和MPV、或RSV、MPV和PVM。在一個(gè)實(shí)施方式中，RSV是人RSV。在另一個(gè)實(shí)施方式中，RSV 是牛RSV。本發(fā)明的抗體中和人RSV(hRSV)和牛RSV(bRSV)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，MPV是 人 MPV。
[0056] 在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明還提供分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和A群和B 群RSV的感染。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和A 群和B群MPV的感染。在再一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其 中和A群和B群RSV以及A群和B群MPV的感染。
[0057] 如更早所討論的，RSV、MPV和PVM的基因結(jié)構(gòu)具有一些相似性。RSV和MPV中的G 和F蛋白的氨基酸序列被分成A和B群；MPV進(jìn)一步分成4個(gè)亞群：A1、A2、Bl和B2。PVM 沒(méi)有再分成群或亞群。RSV、MPV或PVM F蛋白是I型跨膜表面蛋白，其具有N-端分裂的信 號(hào)肽和C-端附近的膜錨著點(diǎn)。RSV和MPV F蛋白被合成為無(wú)活性的R)前體，其裝配成同型 三聚體和通過(guò)分裂來(lái)活化。F蛋白由三個(gè)結(jié)構(gòu)域（DI至Dili)、融合肽（FP)和三個(gè)七價(jià)重 復(fù)區(qū)（HR-A、-B和-C)形成。RSV和MPVF糖蛋白通過(guò)病毒粒子包膜和宿主細(xì)胞質(zhì)膜之間的 融合來(lái)指導(dǎo)病毒穿入。在兩種情況中，F(xiàn)亞基的N-端--其通過(guò)溶蛋白性裂解而產(chǎn)生并含 有融合肽--直接插入靶膜以啟動(dòng)融合。與靶細(xì)胞結(jié)合和隨后的活化之后，相對(duì)穩(wěn)定的融 合前F蛋白經(jīng)歷一系列結(jié)構(gòu)重排，其導(dǎo)致融合肽插入靶細(xì)胞膜，之后形成穩(wěn)定的螺旋束-- 當(dāng)病毒和細(xì)胞膜放在附近時(shí)螺旋束形成。這些結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致穩(wěn)定的融合后F蛋白的形成。 后來(lái)在感染中，感染的細(xì)胞表面上表達(dá)的F蛋白可介導(dǎo)與鄰近非感染的細(xì)胞的融合，形成 大的合胞體。
[0058] 帕利珠單抗和莫托維珠單抗的表位已被繪制在殘基255-275形成的融合后RSV F 蛋白抗原位點(diǎn)II (也稱作A位點(diǎn)）上。MAB19和IOlF靶向殘基422-438形成的RSV的融 合后RSV F蛋白抗原位點(diǎn)IV (也稱作C位點(diǎn)）。MAB19在臨床試驗(yàn)中被測(cè)試，但是沒(méi)有顯示 顯著的效力（Johnson et al.，l"9, The Journal of Infectious Diseases 18〇:35_4〇; Meissner et al. , 1999, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 43:1183-1188)。
[0059] 為了有效，抗體應(yīng)識(shí)別融合前F蛋白--其是阻斷病毒進(jìn)入的有關(guān)構(gòu)造，并優(yōu)選避 免大量可充當(dāng)誘餌的融合后F蛋白的識(shí)別，因此消耗抗體和減少其效力。到目前為止識(shí)別 RSV融合前而不是RSV融合后F蛋白的抗體尚未被分離。
[0060] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異 地結(jié)合RSV融合前F蛋白而不是RSV融合后F蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括分 離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異地結(jié)合RSV和MPV的融合前F蛋白而不是融合后F蛋 白。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抗體，其特異地結(jié)合到RSV、MPV和PVM的融合前F蛋 白而不是融合后F蛋白。
[0061] 本發(fā)明提供抗體，其與RSV、MPV和PVM的F蛋白結(jié)合。盡管RSV和MPV、或RSV和 PVM F蛋白之間分別只有大約33%和40%的氨基酸序列同一性的事實(shí)，但是本發(fā)明的抗體 識(shí)別存在于RSV、MPV和PVM F蛋白上的共享表位。該表位不同于迄今已知的抗體如帕利珠 單抗、莫托維珠單抗、mAb 101F等識(shí)別的所有那些表位。本發(fā)明的抗體不，例如，結(jié)合抗原 位點(diǎn)II (莫托維珠單抗和帕利珠單抗所識(shí)別的）、抗原位點(diǎn)IV(mAb 101F所識(shí)別的），也不 結(jié)合抗原位點(diǎn)UmAb 131-2A所結(jié)合的）。本發(fā)明的抗體識(shí)別的RSV F蛋白上的表位也不 同于mAb D25--只對(duì)RSV特異的抗體--識(shí)別的表位。此外，本發(fā)明的抗體識(shí)別的MPV F 蛋白上的表位不同于mAb 234 (其識(shí)別MPV F蛋白上的表位，其對(duì)應(yīng)RSV F蛋白上的抗原位 點(diǎn)II)識(shí)別的表位。一般而言，本發(fā)明的抗體識(shí)別構(gòu)象表位。在一個(gè)實(shí)施方式中，構(gòu)象表位 只在非還原條件下存在。在另一個(gè)實(shí)施方式中，構(gòu)象表位依賴F蛋白上氨基酸殘基之間二 硫鍵的存在。
[0062] 如本文所示，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段特異地與RSV和MPV的幾個(gè)不同株結(jié) 合并中和RSV和MPV。另外，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段特異地結(jié)合并交叉中和A群和B 群RSV以及A群和B群MPV，包括所有相應(yīng)的MPV亞群（即Al、A2、Bl和B2)。
[0063] 本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段具有高的中和能力。RSV、MPV和PVM的50%中和 需要的本發(fā)明的抗體的濃度是，例如，約500ng/ml或更少。在一個(gè)實(shí)施方式中，RSV、MPV 和PVM的50%中和需要的本發(fā)明的抗體的濃度是約500、450、400、350、300、250、200、175、 150、125、100、90、80、70、60或約5〇1^/1111或更少。這意味著1?￥、]\0^和？￥]\1的50%中和 所需要的只是低的抗體濃度。特異性和能力可利用如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)來(lái)測(cè) 量。
[0064] 本發(fā)明的抗體可以是人抗體、單克隆抗體、人單克隆抗體、重組抗體或純化的抗 體。本發(fā)明還提供本發(fā)明的抗體的片段，特別是保留抗體的抗原結(jié)合活性的片段。這樣的 片段包括，但不限于，單鏈抗體、Fab、Fab'、F (ab'）2、Fv或scFv。雖然說(shuō)明書，包括權(quán)利要 求書，在一些地方可能明確地指抗原結(jié)合片段（或多個(gè)）、抗體片段（或多個(gè)）、抗體的變體 (或多個(gè)）和/或衍生物（或多個(gè)），但是應(yīng)當(dāng)理解術(shù)語(yǔ)"抗體"或"本發(fā)明的抗體"包括所 有類型的抗體，即，抗原結(jié)合片段（或多個(gè)）、抗體片段（或多個(gè)）、抗體的變體（或多個(gè)） 和衍生物（或多個(gè)）。
[0065] 已確定了本發(fā)明的幾種抗體的重鏈和輕鏈的序列，每個(gè)包括重鏈上的三個(gè)⑶R和 輕鏈上的三個(gè)⑶R。⑶R氨基酸的位置根據(jù)MGT編號(hào)系統(tǒng)確定。⑶R、重鏈、輕鏈的序列以及 編碼本發(fā)明的抗體的CDR、重鏈、輕鏈的核酸分子的序列公開在序列表中。抗體重鏈的CDR 分別稱作CDRHl (或HCDR1)、CDRH2 (或HCDR2)和CDRH3 (或HCDR3)。相似地，抗體輕鏈的 CDR分別稱作CDRLl (或LCDR1)、CDRL2 (或LCDR2)和CDRL3 (或LCDR3)。表1分別提供本 發(fā)明的示例性抗體的重鏈和輕鏈的六個(gè)CDR的氨基酸序列的SEQ ID編號(hào)。
[0066] 表L中和RSV、MPV和PVM的抗體的CDR多肽的SEQ ID編號(hào)。

【權(quán)利要求】
1. 分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和RSV、MPV和PVM的感染。
2. 分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異地結(jié)合RSV和MPV的融合前F蛋白而不是融 合后F蛋白。
3. 權(quán)利要求1或2所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段中和 A群和B群RSV以及A群和B群MPV的感染。
4. 權(quán)利要求1或2所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段中和 MPV亞群A1、A2、B1和B2的感染。
5. 權(quán)利要求2所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段中和RSV、 MPV和PVM的感染。
6. 權(quán)利要求1或2所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段不在 重疊抗原位點(diǎn)I、抗原位點(diǎn)II或抗原位點(diǎn)IV的位點(diǎn)結(jié)合RSV的所述F蛋白。
7. 權(quán)利要求1或2所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合 包括SEQ ID NO :64-69中任一個(gè)所示的氨基酸序列的RSV、MPV或PVM的F蛋白的氨基端部 分上的保守區(qū)。
8. 權(quán)利要求1或2所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中RSV、MPV或PVM的50%中和需 要的所述抗體或片段的濃度是500ng/ml或更少。
9. 權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，包括至少一個(gè)與SEQ ID NO: 1-6、19-23、 35、39-42或53-54中任一個(gè)具有至少95%的序列同一性的互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)序列。
10. 權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，包括具有SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 19 的氨基酸序列的重鏈CDR1 ;具有SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 39的氨基酸序 列的重鏈 CDR2;和具有 SEQ ID N0:3，SEQ ID N0:21、SEQ ID N0:40 或 SEQ ID N0:53 的氨 基酸序列的重鏈⑶R3。
11. 權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，包括具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的 輕鏈CDR1 ;具有SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:22或SEQ ID N0:41的氨基酸序列的輕鏈CDR2 ; 和具有 SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:42 或 SEQ ID NO:54 的氨 基酸序列的輕鏈⑶R3。
12. 權(quán)利要求10或11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，包括包含以下氨基酸序列的重 鏈：針對(duì)〇)冊(cè)1的3￡0 10勵(lì)：1、針對(duì)〇)冊(cè)2的5￡0 10勵(lì):2和針對(duì)〇)冊(cè)3的5￡0 10勵(lì):3;針對(duì) CDRH1 的 SEQ ID NO: 1、針對(duì) CDRH2 的 SEQ ID N0:39 和針對(duì) CDRH3 的 SEQ ID N0:40 ; 針對(duì) CDRH1 的 SEQ ID NO: 19、針對(duì) CDRH2 的 SEQ ID N020 ;和針對(duì) CDRH3 的 SEQ ID N0:21 ; 或針對(duì)〇)冊(cè)1的5￡0 10勵(lì)：1、針對(duì)〇)冊(cè)2的5￡0 10勵(lì):39和針對(duì)〇)冊(cè)3的5￡0 10勵(lì):53。
13. 權(quán)利要求10、11或12所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，包括包含以下氨基酸序列 的輕鏈：針對(duì)〇)虬1的5￡0 10勵(lì):4、針對(duì)〇)此2的5￡0 10勵(lì):5和針對(duì)〇)虬3的5￡0 10 勵(lì):35;針對(duì)〇)虬1的5￡0 10勵(lì):4、針對(duì)〇)虬2的5￡0 10勵(lì):5和針對(duì)〇)虬3的5￡0 10 勵(lì):6;針對(duì)〇)虬1的5￡0 10勵(lì):4、針對(duì)〇)虬2的5￡0 10勵(lì):41和針對(duì)〇)虬3的5￡0 10 勵(lì):42;針對(duì)〇)虬1的5￡0 10勵(lì):4、針對(duì)〇)虬2的5￡0 10勵(lì):22和針對(duì)〇)虬3的5￡0 10 勵(lì):23;或針對(duì)〇)虬1的5￡0 10勵(lì):4、針對(duì)〇)虬2的5￡0 10勵(lì):41和針對(duì)〇)虬3的5￡0 10 NO:54。
14. 分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和RSV、MPV和PVM的感染，包括⑴分別在SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2和SEQ ID勵(lì):3中列出的重鏈0?1、0)1?2和0)1?3序列，和分別在 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5 和 SEQ ID N0:35 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；（ii) 分別在 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2 和 SEQ ID N0:3 中列出的重鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列， 和分別在 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5 和 SEQ ID N0:6 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序 列；（iii)分別在 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:39 和 SEQ ID N0:40 中列出的重鏈 CDR1、CDR2 和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:41和SEQ ID N0:42中列出的輕鏈CDR1、 CDR2 和 CDR3 序列；（iv)分別在 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:39 和 SEQ ID N0:40 中列出的重 鏈001?1、〇)1?2和〇)1?3序列，和分別在5￡0 10冊(cè):4、5￡0 10勵(lì):5和5￡0 10勵(lì):6中列出的 輕鏈0?1、0)1?2和0)1?3序列；（￥)分別在5￡〇10勵(lì)：1、5￡〇10勵(lì):2和5￡〇10勵(lì):3中列 出的重鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列，和分別在 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:41 和 SEQ ID N0:42 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；（vi)分別在 SEQ ID NO: 19, SEQ ID N0:20 和 SEQ ID N0:21中列出的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:22和 5￡0 10勵(lì):23中列出的輕鏈001?1、〇)1?2和〇)1?3序列；卜11)分別在5￡0 10勵(lì)：1、5￡0 10 N0:39和SEQ ID N0:53中列出的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:41 和 SEQ ID N0:54 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；（viii)分別在 SEQ ID 勵(lì)：1、5￡〇10勵(lì):39和5￡〇10勵(lì):53中列出的重鏈0?1、0)1?2和0)1?3序列，和分別在5￡〇 ID N0:4、SEQ ID N0:22 和 SEQ ID N0:23 中列出的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列；或（ix) 分別在 SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:20 和 SEQ ID NO:21 中列出的重鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3 序列，和分別在SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:41和SEQ ID N0:54中列出的輕鏈CDR1、CDR2和 CDR3序列。
15. 權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)，所述重 鏈可變區(qū)與SEQ ID勵(lì)：13、17、29、33、49或51中任一個(gè)的氨基酸序列具有至少80%的序 列同一,I"生。
16. 權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，包括輕鏈可變區(qū)，所述輕 鏈可變區(qū)與SEQ ID勵(lì)：14、30、37、50或60的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性。
17. 抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包括包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的重 鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:37的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:13的氨基酸 序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID NO: 17 的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:49的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:50的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或 包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的輕鏈 可變區(qū)；或包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO:50的氨基酸 序列的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:30 的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:33的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:30的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:59的氨基酸序列的重鏈可變區(qū) 和包含SEQ ID N0:60的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:59的氨基酸序列的 重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:30的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或包含SEQ ID N0:33的氨 基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:60的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，其中所述抗體或 抗原結(jié)合片段中和RSV、MPV和PVM的感染。
18. 在前權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是HMB3210 變體 3、HMB3210 變體 1、HMB3210 變體 2、HMB3210 變體 4、HMB3210 變體 5、HMB3210 變體 6、 HMB2430 變體 1、HMB2430 變體 2、HMB2430 變體 3、HMB2430 變體 4 或 HMB2430 變體 5。
19. 在前權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是人抗體、單 克隆抗體、人單克隆抗體、純化的抗體、單鏈抗體、Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv。
20. 抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合與前權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的抗體相同的表位，其中 所述抗體或其抗原結(jié)合片段中和RSV和MPV的感染。
21. 在前權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其用于治療或減弱RSV或 MPV，或RSV和MPV的感染。
22. 核酸分子，其包括編碼前權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的多核苷 酸。
23. 權(quán)利要求22所述的核酸分子，其中所述多核苷酸序列與SEQ ID NO:7-12、15、16、 18、24-28、31-32、34、36、38、43-48、51-52、55-58或61-62中任一個(gè)的核酸序列至少75%相 同。
24. 載體，其包括權(quán)利要求22或23所述的核酸分子。
25. 細(xì)胞，其表達(dá)權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段；或包括權(quán)利要 求24所述的載體。
26. 分離的或純化的免疫原性多肽，其包括結(jié)合權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的抗體或 其抗原結(jié)合片段的表位。
27. 藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利 要求22或權(quán)利要求23所述的核酸分子、權(quán)利要求24所述的載體、權(quán)利要求25所述的細(xì)胞、 或權(quán)利要求26所述的免疫原性多肽，以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
28. 藥物組合物，其包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段以及第二抗體或其抗原結(jié)合片段， 其中所述第一抗體是權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的抗體，并且所述第二抗體中和RSV或 MPV，或RSV和MPV的感染。
29. 權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求22或權(quán)利要求 23所述的核酸、權(quán)利要求24所述的載體、權(quán)利要求25所述的細(xì)胞、權(quán)利要求26所述的免疫 原性多肽、或權(quán)利要求27或權(quán)利要求28所述的藥物組合物（i)在制備用于治療或減弱RSV 或MPV、或RSV和MPV的感染的藥物中，（ii)在疫苗中，或（iii)在RSV或MPV感染的診斷 中的應(yīng)用。
30. 權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段用于通過(guò)檢查所述疫苗的 抗原含有處于正確構(gòu)象的特異表位而監(jiān)測(cè)抗RSV或抗MPV疫苗的質(zhì)量的應(yīng)用。
31. 減少RSV或MPV感染、或降低RSV或MPV感染的危險(xiǎn)的方法，其包括：給需要其的 對(duì)象施用治療有效量的權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。
32. 分離的或純化的免疫原性多肽，其包括特異地結(jié)合權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的 抗體或其抗原結(jié)合片段的表位，用（i)在治療中，（ii)在用于治療或減弱RSV或MPV、或RSV 和MPV感染的藥物制備中，（iii)作疫苗，或（iv)在篩選能中和RSV或MPV、或RSV和MPV 感染的配體中。
【文檔編號(hào)】A61P31/14GK104350069SQ201380026218
【公開日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2013年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月20日
【發(fā)明者】D·柯蒂 申請(qǐng)人:胡默波斯生物醫(yī)學(xué)公司, D·柯蒂