含有蛋白酶的藥物組合物和治療溶酶體貯積病的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種治療患有溶酶體貯積病例如戈謝病的受試者的方法和組合物，所述方法是通過給予患有溶酶體貯積病的受試者治療有效量的組合物，所述組合物以足以改良、減少或改善所述疾病的至少一種癥狀的量包含至少一種蛋白酶或肽酶。本發(fā)明還提供了用于患有溶酶體貯積病的受試者的膳食補充劑。
【專利說明】含有蛋白酶的藥物組合物和治療溶酶體貯積病的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及溶酶體貯積病領域。本發(fā)明還涉及用于溶酶體貯積病的酶替代療法的組合物和方法。具體地，本發(fā)明提供了用于預防和/或治療戈謝病(Gaucher’s disease)的方法和組合物。
【背景技術】
[0002]溶酶體是一種細胞質細胞器，其功能為降解大分子例如蛋白質、多核苷酸、多糖和脂質。溶酶體圍起一個酸性環(huán)境并含有催化生物大分子水解的水解酶。還發(fā)現(xiàn)溶酶體在經胞吞作用攝取分子中起重要作用。
[0003]當溶酶體蛋白缺乏或突變時，會發(fā)生溶酶體貯積病。在許多情況中，這種蛋白為酶，并且所述缺乏的酶的底物的異常沉著物在細胞中累積。在其他情況中，所述缺乏的蛋白涉及溶酶體酶的運輸、翻譯后加工或保護或激活。在其他情況中，所述缺乏的蛋白不是酶，而是存在于溶酶體內空間中或跨越溶酶體膜。這些蛋白中的某些的功能目前未知。在所述溶酶體貯積病中有廣泛的臨床異質性和生化異質性，所述溶酶體貯積病包括大多數(shù)脂質貯積病、黏多糖貯積癥、黏脂貯積病和糖蛋白貯積病。目前大約有50種已知的溶酶體貯積病，包括尼曼一皮克(Niemann-Pick)病、法布里病(Fabry’s disease)、戈謝病等。所述病癥一般是進行性的，在兒童期或青少年期經常是致命的。遺傳咨詢在這些疾病的治療中是重要的，具體的治療例如酶替代療法是有希望但昂貴的。通常對這些患者的護理主要是針對癥狀的。
[0004]溶酶體貯積病( LSD)是大約50種的一組遺傳代謝疾病，其起因在于細胞缺乏特定溶酶體酶、受體靶、激活蛋白、膜蛋白或轉運蛋白，這導致溶酶體中物質的致病性累積，造成底物的聚集，使得細胞和組織功能衰退。LSD的標志性特征是溶酶體中代謝物的異常累積，其導致在核周體中形成大量的膨脹溶酶體。治療LSD的主要挑戰(zhàn)(與治療器官特異性酶病如肝特異性酶病相反)是需要反轉多個單獨組織中的溶酶體貯積病狀。
[0005]溶酶體貯積病發(fā)生在大約1/5000至1/10000的活產兒中，顯示出大量的臨床異質性和生化異質性。大多數(shù)的溶酶體貯積病作為常染色體隱性病癥遺傳，但是兩個伴X染色體的實例為黏多糖貯積癥II型(MPS II)和法布里病。溶酶體貯積病的范圍和嚴重度取決于累積的底物的類型和量，但是幾乎所有病癥是進行性的。大多數(shù)病癥具有中樞神經系統(tǒng)表現(xiàn)和全身表現(xiàn)，然而某些僅影響中樞神經系統(tǒng)或神經系統(tǒng)之外的組織。許多溶酶體貯積病患者在幼兒期或兒童期死亡，存活到成人期的患者經常壽命縮短且病態(tài)明顯。溶酶體病癥的實例包括粘多糖(MPS) 1-1X的代謝缺陷(黏多糖貯積癥IH型、黏多糖貯積癥IS型、黏多糖貯積癥II型、黏多糖貯積癥III型、黏多糖貯積癥IV型、葡糖胺聚糖黏多糖病VI型、黏多糖累積病VII型(Sly diseases)、透明質酸酶缺乏癥)、聚糖降解缺陷的天冬氨?；咸烟前纺?、巖藻糖苷貯積癥、甘露糖苷貯積癥、葡萄糖鞘脂辛德勒(Schindler)病、黏脂病I型、糖原降解缺陷(糖原貯積癥II型)、球形三脂?；拾按冀到馊毕?法布里病)、脂質降解缺陷(法伯(Farber)病)、戈謝病(鞘脂質組分1_3型)GM-1神經節(jié)苷脂貯積癥、GM2-神經節(jié)苷脂貯積癥(泰-薩克斯病、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥變異型O、GM2激活病)、克拉伯病、異染性腦白質營養(yǎng)不良、尼曼一皮克病(A型或B型)、致密性成骨不全癥、脂褐素降解或轉運缺陷導致的蠟樣脂褐質沉積癥(具有不同膽固醇、膽固醇酯或缺陷的多種類型，一些還未知)、膽固醇酯貯積疾病以及其他復脂貯積疾病、尼曼一皮克病C型、酸性脂酶缺乏癥、多種溶酶體硫酸酯酶缺乏、半乳糖唾液酸苷貯積癥、黏脂貯積病I型、III型和IV型、胱氨酸忙積癥、唾液酸忙積癥、馬里內斯科-舍格倫(Marinesco-Sjogren)綜合征、海-普二氏(Hermansky-Pudlak)綜合征(幾種形式)、白細胞異常色素減退綜合征(Chediak-Higashisyndrome)和糖原忙積病 II B 型(Danon disease)。
[0006]戈謝病是最普遍的溶酶體貯積病，其是由于所有組織中的葡糖腦苷脂酶(GC;EC3.2.1.45)缺乏。這種酶缺乏導致包括肝、脾、肺和骨髓的網狀內皮系統(tǒng)中載脂巨噬細胞(稱為戈謝細胞)中葡糖苷酯酰鞘氨醇的累積。戈謝病已被分類為三種主要的表型:1型，非神經型；2型，急性嬰兒神經型；和3型，慢性神經型。I型戈謝病的疾病嚴重度譜寬。兒童和成人可以無癥狀或可以具有嚴重衰弱的癥狀，包括骨骼退化、貧血、血小板減少和肝脾大。
[0007]癥狀可存在于任何年齡。雖然I型戈謝病在阿什肯納茲猶太人(AshkenaziJewish)人群中更常見，但是其發(fā)生在所有人種群中。2型戈謝病是快速進行性的。到6月齡時，大多數(shù)2型嬰兒具有腦干功能障礙并在18-24個月齡時死于并發(fā)癥例如呼吸停止或吸入性肺炎。3型戈謝病患者在晚于2型患者的年齡發(fā)生神經系統(tǒng)異常；大多數(shù)僅發(fā)生微弱的水平掃視眼動缺陷。
[0008]戈謝病是最常見的溶酶體貯積病，影響世界上大約8000-10000人。在戈謝病中，稱為酸性(6-葡糖苷酶或葡糖腦苷脂酶(GlcCerase)的溶酶體酶的活性由于編碼所述酶的GBA基因中大約200個突變之一而顯著下降。這種病癥以常染色體隱性模式遺傳，這意味著在所述GBA基因的兩 個拷貝上都有突變的人會發(fā)生戈謝病。降低的GlcCerase活性會導致組織(包括脾、肝、肺、骨髓，有時是腦)中葡糖腦苷脂(還稱為葡糖苷酯酰鞘氨醇)的累積。這種葡糖腦苷脂的累積被認為會導致戈謝病的多種癥狀和征象，包括增大的肝和脾(脾大)、骨骼病癥以及一些情況中的肺、腎和中樞神經系統(tǒng)病損。戈謝病與影響運動和平衡的帕金森氏病或帕金森樣病癥(帕金森癥)之間也有關聯(lián)。帕金森癥已經在患有戈謝病的患者以及疾病基因攜帶者中觀察到(Lesage et al.，2011)。在這些人中帕金森癥的征象和癥狀可包括:意向性震顫、強直和運動徐緩、面無表情、講話急促不清或單調、肌陣攣性反射、嗅覺喪失以及無血管性骨壞死(Neudorfer et al., 1996;Bultron et al.，2010)。在一些受試者中還報告了路易體癡呆。針對一種或多種這些征象和癥狀的有效飲食和/或藥物干預會顯著改善這些人的生活質量。
[0009]目前，酶替代療法(ERT)和減少底物療法是針對患有戈謝病的患者僅有的被批準的治療選擇(綜述見Harmanci, 2008)。使用重組伊米苷酶的ERT改善了所述疾病的內臟表現(xiàn)和血液學表現(xiàn)，但是其對神經型形式的戈謝病無效。并且，ERT的費用是每患者每年大約200000美元，這對許多患者來說是負擔不起的，并且沒有充足的重組酶供應來滿足市場的醫(yī)學需要。此外，重組伊米苷酶必須經靜脈給藥，這是不利的。針對戈謝病的首個口服治療劑是麥格司他(miglustat，N-丁基脫氧野艽霉素)，其是葡糖苷酯酰鞘氨醇合成酶的亞胺糖抑制劑，其用于減少底物療法。麥格司他在患有輕度或中度疾病的選擇患者中產生臨床改善，但是反應比使用ERT所觀察到的反應更慢且更弱。針對戈謝病的其他可能療法仍然在開發(fā)中(Futerman, 2004)。
[0010]長期需要可為患者提供更高生活質量并達到更好臨床結果的預防和/或治療溶酶體貯積病的方法。具體地，需要可為患者提供更高生活質量并達到更好臨床結果的預防和/或治療戈謝病的方法。
[0011]因此，尚未滿足對用于治療戈謝病的改進方法和組合物的長期需要。具體地，尚未滿足對可口服且經濟的方法和組合物的長期需要。仍然需要治療那些經常致命的疾病的其他療法。本發(fā)明的系統(tǒng)、組合物和方法會提供這些長期未滿足的需要以及現(xiàn)有療法沒有提供的其他優(yōu)點。
[0012]本發(fā)明的目的
[0013]因此，本發(fā)明的一個目的是提供用于治療溶酶體貯積病的新治療方法。
[0014]本發(fā)明的另一個目的是提供用于治療溶酶體貯積病的蛋白酶/肽酶組合物。
[0015]本發(fā)明的另一個目的是提供用于治療戈謝病的蛋白酶/肽酶。
[0016]本發(fā)明的另一個目的是提供用于減少戈謝病的癥狀的方法。
[0017]本發(fā)明的 另一個目的是蛋白酶/肽酶結合物治療戈謝病的用途。
[0018]從下文的描述和實施例將會更容易明白本發(fā)明的這些目的以及其他目的。

【發(fā)明內容】

[0019]本發(fā)明提供了新組合物以及使用所述組合物預防和/或治療具有患上溶酶體貯積病的風險或被診斷患有所述疾病的患者中的溶酶體貯積病的方法，包括給予所述有此需要的患者有效量的本文描述的組合物。
[0020]本發(fā)明還提供了用于治療溶酶體貯積病的方法和組合物，所述溶酶體貯積病包括但不限于，糖原貯積癥II型、GMl神經節(jié)苷脂貯積癥、泰-薩克斯病、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥變異型O、法布里病、戈謝病、異染性腦白質營養(yǎng)不良、克拉伯病、尼曼一皮克病A型、尼曼一皮克病B型、尼曼一皮克病C型、尼曼一皮克病D型、法伯病、酸性脂酶缺乏癥、黏多糖貯積癥IH型、黏多糖貯積癥IS型、胡-射二氏綜合征、黏多糖貯積癥II型、黏多糖貯積癥III型A型、黏多糖貯積癥III型B型、黏多糖貯積癥III型C型、黏多糖忙積癥III型D型、莫爾丘病A型、莫爾丘病B、黏多糖病VI型(Maroteaux-Lamy disease)、黏多糖累積病VII型、α -甘露糖苷貯積癥、β -甘露糖苷貯積癥、巖藻糖苷貯積癥、天冬氨?；咸烟前纺颉⑾阉豳A積癥、黏脂貯積病II型、黏脂貯積病III型、黏脂貯積病IV型、Goldberg綜合征、辛德勒病、胱氨酸貯積癥、Salla病、嬰兒唾液酸貯積病、Batten病、嬰兒神經元臘樣質脂褐質沉積癥或前列腺血清酸性磷酸酶(prosaposin)。
[0021]本發(fā)明還涉及治療溶酶體貯積病的治療方法，所述溶酶體貯積病例如糖原貯積癥II型、黏多糖累積病、黏脂貯積病II型、黏脂貯積病III型、多硫酸酯酶缺乏癥、GM2激活蛋白缺陷變異型AB、糖原貯積病II b型、Salla病、泰-薩克斯病、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥變異型O、辛德勒病、Kanzaki病、α -甘露糖苷貯積癥、β -甘露糖苷貯積癥、巖藻糖苷貯積癥、涎酸貯積癥、天冬氨酰基葡萄糖胺尿、碳水化合物-缺乏糖蛋白綜合征、酸性脂酶缺乏癥、法伯病、尼曼一皮克病Α、B和C型、戈謝病、克拉伯病、法布里病、多種硫酸脂酶缺乏癥、GMl神經節(jié)苷脂貯積癥、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥、GM3神經節(jié)苷脂貯積癥、半乳糖唾液酸苷貯積癥、胱氨酸貯積癥、唾液酸貯積病、骨發(fā)育障礙矮小癥、異染性腦白質營養(yǎng)不良、半乳糖唾液酸苷貯積癥、神經元臘樣脂褐質癥(1-9型)、乳糖基?；拾贝歼^多癥、糖原貯積癥II型以及鈷胺素缺乏癥(cobalamin definiciency)F型,所述方法是通過以足夠改良、減少或改善所述溶酶體貯積病的至少一種癥狀或標記物的量使用至少一種蛋白酶或肽酶進行治療。
[0022]在一個方面，本文的組合物、方法、系統(tǒng)目的在于提供能夠在有此需要的個體中減少戈謝病的一種或多種癥狀的生理上可接受的組合物，以及制造和使用或給予這類組合物的方法。
[0023]在另一方面，本文的組合物、膠囊、方法包含用于在有此需要的個體中減少戈謝病的所述至少一種癥狀的組合物。在一個實施方案中，被本發(fā)明的組合物、方法等減少的戈謝病的所述至少一種癥狀是所述疾病的以下征象或癥狀之一:骨骼異常，包括骨變薄(骨質減少)、骨痛和骨折；增大的肝(肝大)或脾(脾大)，或兩者都有；健康紅細胞減少(貧血);過度疲勞；對受傷更敏感，其可指示血小板數(shù)量低(血小板減少)；眼睛中的黃斑(瞼裂斑(Pingueculae));青春期延遲；-和/或鼻出血；以及認知衰退。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述被減少的癥狀是脾大。
[0024]在本發(fā)明的另一方面，戈謝病的替代標記物被用于評估所述組合物治療戈謝病的效用。適合的疾病標記物包括細胞標記物、生理標記物或生化標記物。
[0025]在另一個實施方案中 ，所述生理上可接受的組合物、制劑、方法等可被用作膳食補充劑或用作食物添加劑或用作藥劑或以需要的其他方式使用來減少戈謝病的癥狀?？诜o藥是有利的，因為治療劑的口服途徑給藥相對于任何其他途徑是優(yōu)選的。
[0026]這些生理上可接受的組合物和方法可以與戈謝病的其他療法聯(lián)合使用。例如，所述組合物可以與酶替代療法(ERT)或減少底物療法(SRT)聯(lián)合使用。
[0027]在另一方面，本發(fā)明提供了用于治療溶酶體貯積病的試劑盒。本發(fā)明試劑盒包括用于治療溶酶體貯積病的至少一種蛋白酶或其藥物組合物。所述試劑盒還可包括用于治療本文所述的基礎溶酶體貯積病或其癥狀的其他試劑。所述試劑盒一般包括多個劑量的一種或多種蛋白酶和任選的第二治療劑。所述試劑盒可以包括足夠劑量的用于治療受試者的每種試劑，持續(xù)一周、兩周、三周、一個月、兩個月、三個月、六個月或更長時間。所述試劑盒還可以包括用于給予所述試劑的裝置例如匙、注射器等。所述試劑盒一般還包括所述試劑盒中所包括試劑的處方信息。
[0028]本文的方法包括目的在于標記、銷售以及另外將所述組合物提供給健康護理專業(yè)人員和/或給消費者用于減少戈謝病的癥狀的方法、試劑盒、標簽和系統(tǒng)。
[0029]在本發(fā)明的另一方面，一種或多種所述生理上可接受的蛋白水解酶可存在于適于人消費的食物或飲料中。在一方面，所述生理上可接受的一種或多種蛋白酶/ 一種或多種肽酶存在于發(fā)酵食物中。
[0030]在本發(fā)明的另一方面，所述生理上可接受的蛋白酶或肽酶可以存在于食品級的微生物、酵母、藻類或海草、植物、脊椎動物、無脊椎動物、環(huán)節(jié)動物、昆蟲或節(jié)肢動物中。
[0031]在另一個實施方案中，所述生理上可接受的酶是具有脯氨酰寡肽酶活性、二肽基肽酶活性或三肽基肽酶活性的肽酶或蛋白酶-肽酶復合物。
[0032]根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，所述生理上可接受的酶具有DPP-1V氨基肽酶活性。[0033]根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，所述酶為具有DPP-1V氨基肽酶活性的曲霉菌蛋白酶。
[0034]在本發(fā)明的優(yōu)選方面,所述組合物包含SerenAid?，具有蛋白酶和DPP-1V活性的膳食補充劑以及其他成分。
[0035]在本發(fā)明的另一方面，將蛋白酶或肽酶與以下的一種或多種結合給予:維生素、礦物質、抗氧化劑、生物類黃酮、其他酶、草藥、草藥提取物、植物和動物濃縮物、益生菌或其他成分。
[0036]在本發(fā)明的另一方面，所述方法、組合物等在協(xié)同組合物中包含兩種或多種蛋白酶或肽酶。
[0037]在一個實施方案中，所述產品可以是試劑盒或系統(tǒng)，其中本文的組合物、膠囊包含在可藥用容器中，以及解釋所述產品可以減少戈謝病的一種或多種癥狀的書面說明書、小冊子、信息頁、目錄或標簽。另外，所述產品可以與所述解釋所述產品可以減少戈謝病的一種或多種癥狀的書面說明書、小冊子、信息頁、目錄或標簽一起銷售。
[0038]這些以及其他方面、特征和實施方案在本申請，包括如下的詳細描述中闡明。除非特別地另有說明，所有實施方案、方面、特征等可以以任何需要的方式被混合和匹配、結合以及改變次序。`
【具體實施方式】
[0039]在其最寬泛方面，本發(fā)明教導了有效量或更多量的口服給藥生理上可接受的蛋白水解酶減少、改善或治療哺乳動物中溶酶體貯積病的一種或多種癥狀的用途。
[0040]本發(fā)明教導了有效量的口服給藥生理上可接受的蛋白水解酶減少、改善或治療哺乳動物中戈謝病的一種或多種癥狀的用途。
[0041]本發(fā)明還教導了口服給藥生理上可接受的蛋白水解酶可被用于減少、改善或治療人中戈謝病的一種或多種癥狀。
[0042]本發(fā)明涉及治療溶酶體貯積病的治療方法，所述溶酶體貯積病例如糖原貯積癥II型、黏多糖累積病、黏脂貯積病II型、黏脂貯積病III型、多硫酸酯酶缺乏癥、GM2激活蛋白缺陷變異型AB、糖原貯積病II b型、Salla病、泰-薩克斯病、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥變異型
O、辛德勒病、Kanzaki病、a -甘露糖苷貯積癥、3 -甘露糖苷貯積癥、巖藻糖苷貯積癥、涎酸貯積癥、天冬氨酰基葡萄糖胺尿、碳水化合物-缺乏糖蛋白綜合征、酸性脂酶缺乏癥、法伯病、尼曼一皮克病A、B和C型、戈謝病、克拉伯病、法布里病、多種硫酸脂酶缺乏癥、GMl神經節(jié)苷脂貯積癥、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥、GM3神經節(jié)苷脂貯積癥、半乳糖唾液酸苷貯積癥、胱氨酸貯積癥、唾液酸貯積病、骨發(fā)育障礙矮小癥、異染性腦白質營養(yǎng)不良、半乳糖唾液酸苷貯積癥、神經元臘樣脂褐質癥(1-9型)、乳糖基?；拾贝歼^多癥、糖原貯積癥II型以及鈷胺素缺乏癥F型，所述方法是通過用法尼基轉移酶抑制劑來治療。
[0043]在一個方面，本發(fā)明提供了通過給予治療有效量的至少一種蛋白酶、肽酶或蛋白酶/肽酶復合物用于治療患溶酶體貯積病的受試者的方法。
[0044]在另一方面，本發(fā)明提供了用于在患戈謝病的受試者中或在是其攜帶者的受試者中治療帕金森氏病的一種或多種癥狀或征象的方法。
[0045]對于本發(fā)明，包括至少一種蛋白酶、肽酶或蛋白酶/肽酶復合物是必要的。[0046]蛋白酶是存在于多種來源(包括植物、動物和微生物)中的普遍存在的酶。它們催化蛋白質和肽中肽鍵的水解斷裂。在本發(fā)明中，術語“肽酶”和“蛋白酶”可互換使用?？晒┻x擇的蛋白酶可以是產生本文所述需要的效果的任何可藥用蛋白酶，單獨給予或與維生素、礦物質、抗氧化劑、生物類黃酮、其他酶、草藥、草藥提取物、植物和動物濃縮物、益生菌或其他藥物活性成分結合給予。
[0047]鑒定和選擇適合用于本發(fā)明的蛋白酶可以通過經驗方式來完成。例如，作為本發(fā)明主題的適合生理上可接受組合物可被給予至患戈謝病的個體，并且可以在監(jiān)控戈謝病的一種或多種癥狀或征象以在減少所述癥狀方面評價所述組合物的效力。
[0048]可被監(jiān)控改善的戈謝病癥狀或征象包括以下的一種或多種:骨骼異常，包括骨密度損失(骨質減少)、骨痛和骨折；增大的肝(肝大)或脾(脾大)，或兩者都有；健康紅細胞減少(貧血)；過度疲勞；對受傷更敏感,其可指示血小板數(shù)量低(血小板減少)；眼睛中的黃斑(瞼裂斑);青春期延遲；鼻出血；和/或認知衰退。在另一方面，在具有與帕金森氏病有關的至少一種戈謝病基因突變的個體中，可監(jiān)測以下一種或多種疾病癥狀或征象的改善:意向性震顫、強直和運動徐緩、面無表情、講話急促不清或單調、肌陣攣性反射、嗅覺喪失、無血管性骨壞死和癡呆。
[0049]本文的組合物、膠囊、方法等包含用于減少戈謝病的至少一種癥狀或征象，從而通常引起所述至少一種癥狀或征象改善的組合物。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述被減少的征象是脾大。
[0050]戈謝病的細胞標記物、生理標記物和生化標記物還可用于選擇用于本發(fā)明的最佳蛋白酶。潛在的疾病標記物可見于例如美國專利申請2010/0196279、美國專利申請2010/0120056 ;和 Lieberman, 1976 中。
[0051]通常認為，許多蛋白酶和肽酶對人服用是安全的，即它們是生理上可接受的。許多來源可在科學文獻和專利文獻中找到。例如，已經顯示，補充性的消化酶制劑可改善營養(yǎng)吸收(US7，235，390)，可減少胃灼熱和消化不良(US7，067，124);可促進手術快速恢復(US6, 900，173);可改善氣道粘液分泌過多疾病(Rogers，2007);并可改善肝功能、囊性纖維化病、膽固醇吸收和膽石(US5，324，514)。菠蘿蛋白酶(一種植物蛋白酶)已被用于炎性的、血液凝固相關的和惡性的疾病的口服全身治療(Maurer, 2001)?？煽诜牡鞍酌负碗拿敢驯挥糜诰S持哺乳動物血漿中膽囊收縮素的基礎水平以及用于治療患有胰腺炎的哺乳動物的腹痛(US7，459，155)。許多這樣的酶不僅在腸中保持其活性，而且通過胃腸道被完整吸收并在血流中保持活性(見例如Castell et al., 1997;Fujita et al.，1995)。對于本發(fā)明的目的，沒必要知道所述蛋白酶或肽酶的確切作用機制，只要能實現(xiàn)所需要的效果。
[0052]生理上可接受的蛋白水解酶可見于某些細菌、真菌、酵母和霉菌(Rao etal., 1998; Sumatha et al., 2006;Peng et al.，2005)。例如，蛋白酶和妝酶可在已被用于發(fā)酵許多傳統(tǒng)食物和飲料的真菌中發(fā)現(xiàn)。適合的種包括鐮刀菌屬(Fusarium)、根霉菌屬(Rhizopus)、放射毛霉屬(Actinomucor)、曲霉菌屬(Aspergillus)和鏈孢霉屬(Neurospora)的種(見例如US6，413，512; US3，932，618;美國專利申請2009/0155239;Sriranganadane., et al,2010;O'Toole, 1999;Kudryavtseva et al.,2008;Frish, 1974;Machida, 2010;Luisetti et al., 1991;Meyer et al., 2010 ；以及Kolodny, 1963)。[0053]蛋白酶和肽酶還可在已被用于產生酸乳和其他發(fā)酵的乳制品的乳酸菌中找到(Liu et al.，2010)。納ii囷酵素、蜂蜜曲霉蛋白酶、沙雷囷妝酶、鏈霉蛋白酶、鍵刀囷蛋白酶、司非立酶是生理上可接受的蛋白水解酶的實例(例如US5, 296，223;Majima Y.，etal.,1988;Pant KK, et al., 2008;Yoshida K，1983;Sumi H，et al.，1990)。
[0054]脯氨酰寡肽酶屬于不同類的絲氨酸肽酶(EC3.4.21.26)。這些酶在脯氨酸殘基的羧基末端一側切割肽鍵。這些肽酶已經牽涉于這些疾病和病癥例如焦慮、精神疾病和抑郁性疾病、認知障礙、痛覺和神經變性疾病例如路易體癡呆、帕金森氏病和亨廷頓氏病中(Goossens et al., 1996; Sedo et al., 1991 ;Mantle et al., 1996)。降低水平的腦氛酸內肽酶活性還可在重性抑郁癥的病理生理學中起作用(Maes et al.，1995)。脯氨酰寡肽酶的分布和其用于治療性發(fā)現(xiàn)的潛力最近被綜述(Rosenblum et al.，2003)。從肽中除去N-末端脯氨酸和輕脯氨酸殘基的脯氨酰氨基肽酶已在黑曲霉(Aspergillus niger)中被鑒定(Basten et al., 2005)。
[0055]二肽基氨基肽酶從多肽的N-末端切割二肽基部分(Kreil，1990)。二肽基氨基肽酶IV型(DPP IV)屬于一組特化的蛋白酶,其能夠切割鄰近脯氨酸的鍵(Cunningham and
0Connorl997;Lambeir et al.，2003)。該結構域定義了屬于 EC3.4.14.5 的絲氨酸妝酶。EC3.4.14.5酶分類廣泛用于飼料、食物加工和膳食補充劑工業(yè)。在人中，DPP-1V (也稱為CD26)被認為涉及心理神經內分泌功能、營養(yǎng)和免疫防御(Hildebrandt et al.，2000)。DPP-1V蛋白酶可在多種生物例如酵母、真菌、昆蟲和蛙中發(fā)現(xiàn)。細胞外DPP-1V已經在幾種曲霉菌屬種包括米曲霉(Aspergillus oryzae)、黑曲霉和蜂蜜曲霉(Aspergillusme Ileus)中被表征(Doumas et al.1998, Tachi et al, 1992; Jalving et al.，2005)。
[0056]含有脯氨酰內肽酶的口服補充劑已被提議用于治療不利的食物反應包括乳糜瀉或口炎性腹瀉的腸病表現(xiàn)。能夠分解膳食麩質的食品級蛋白酶已被建議用于緩和該問題(US7，741，094)。Ehren`等(2009)已經提出了兩種食品級酶的結合物，來自黑曲霉的曲霉酸性蛋白酶(aspergiIlopepsin, ASP ；EC3.4.23.18)和來自米曲霉(Aspergillusoryzae)的二肽基肽酶IV(DPP-1V;EC3.4.21.63)。Mitea et al.(2008)建議與含麩質的膳食共服用脯氨酰內肽酶可消除麩質毒性。Byun et al.(2001)報告了 X-脯氨酰二肽基氨基肽酶和非特異性氨基肽酶在蛋白水解中的協(xié)同作用。本發(fā)明中也考慮協(xié)同組合物。
[0057]在酪蛋白和麩質的消化中釋放的脯氨酰肽被認為作為阿片受體激動劑或外啡肽(exorphin)起作用，其可介導或加劇患有孤獨癖譜群疾病(ASD)的個體中的神經行為癥狀。這些阿片樣妝已經被稱為酪嗎啡(casomorphin)和谷嗎啡(gluteomorphin)。DPP-1V還因為其針對酪嗎啡的蛋白水解活性而被稱為酪嗎啡酶(casomorphinase)。補充性的DPP-1V已被提議用于減少 ASD 的癥狀(US6, 251，391;US6, 413，512;US6, 447，772;US6, 808，708;US6，821，514;US6, 899，876)。
[0058]三肽基肽酶或sedolisin廣泛存在于絲狀子囊菌包括曲霉菌屬種中(Reichard etal.，2006;Gotou et al.，2009)。在人中，編碼三肽基肽酶I的基因的突變會導致晚期嬰兒
神經元蠟樣質脂褐質沉積癥-一種致命的神經變性疾病(Pal et al.，2009)，但是還沒
有報告三肽基肽酶I在戈謝病中的活性。
[0059]雖然已表明許多蛋白水解酶用于人是生理上可接受的，如本文所述，上述參考文獻都沒有預料到蛋白酶或肽酶在治療戈謝病的組合物中的用途。[0060]本發(fā)明的藥物組合物中活性成分的實際劑量水平可以變化，以使得對于具體的患者、組合物和給藥方式可獲得有效實現(xiàn)所需治療反應的活性成分的量，而對所述患者無毒性。
[0061]所選擇的劑量水平將取決于多種因素，包括本發(fā)明使用的具體蛋白酶或肽酶或其衍生物的活性、口服給藥、給藥時間、所用具體蛋白酶排泄或代謝速率、治療的持續(xù)時間、與所用具體蛋白酶結合使用的其他藥物、化合物和/或材料、被治療患者的年齡、性別、體重、病癥、一般健康狀況和之前的醫(yī)療史等醫(yī)學領域熟知的因素。
[0062]本領域的普通醫(yī)師可以容易地確定并開出有效量的所需藥物組合物。例如，醫(yī)師可以以比實現(xiàn)所需治療效果需要的劑量低的水平開始所述藥物組合物中使用的本發(fā)明的蛋白酶或肽酶的劑量，然后逐漸增加所述劑量直到實現(xiàn)所需效果。
[0063]以下實施例進一步描述并證明本發(fā)明范圍內的實施方案。這些實施例目的僅是解釋，不應被認為是對本發(fā)明的限制，因為在不背離本發(fā)明精神或范圍的前提下可以作出許
多變化。
[0064]實施例1
[0065]稱為SerenAid?的產品是六種植物衍生的酶的混合物，包括具有二肽基肽酶IV (DPP-1V)活性的蛋白酶(見例如US6，251，391)。配制SerenAid?以幫助分解植物和動物蛋白質，包括酪蛋白(乳和乳產品)、麩質(小麥、黑麥、燕麥、大麥和其他谷物)和大豆蛋白。發(fā)明人已經觀察到，在開始口服給予SerenAid?,后，患有戈謝病的患者脾大癥狀減少并且能量增加。本發(fā)明 考慮SerenAid?在有此需要的個體中改善戈謝病的一種或多種癥
狀、征象或標記物的用途。
[0066]實施例2
[0067]適合的蛋白酶可以分離自其天然來源，或者它們可以經重組DNA技術在培養(yǎng)物中通過適合的宿主細胞產生，所述宿主細胞選自細菌、酵母、真菌、植物、昆蟲或哺乳動物宿主細胞中的任一種。例如，見US6，309，868和Doumas et al.，1998。重組酶包括來自天然存在的酶序列的核酸，或由其編碼。另外，重組酶包括與天然存在的序列同源或基本相同的氨基酸序列，以及那些由與編碼蛋白酶的天然存在核酸同源或基本相同的核酸編碼的酶?；蛘?，用于本發(fā)明的組合物和方法的酶可以通過常規(guī)的肽合成技術合成。本領域技術人員已知產生和純化酶(包括蛋白酶和肽酶)的方法。
[0068]許多商業(yè)供應商銷售可用于本發(fā)明的純化的蛋白酶和肽酶。綜述見于Sumantha等，2006。商業(yè)供應商的幾個實例為:Amano Enzyme Inc ;Novozymes ;和 National EnzymeCompany。
[0069]實施例3
[0070]為了將本發(fā)明的組合物作為藥物的給藥，多種可能的蛋白質穩(wěn)定、修飾和配制方法是本領域技術人員已知的。見于US6，613，332 ;美國專利申請20080311214 ;美國專利申請 20080317726 ；Singh et al., 2008 ；McNally and Hastedt, 2008 ；Mahato, et al., 2003 ；Rao，2008。這些方法以及其他方法可以用于本發(fā)明。
[0071]應強調，配制和給予所述組合物和協(xié)同組合物的方法不限于本文提供的實施例；本領域技術人員可以想出另外的方法和新制劑。[0072]以下專利、公開的申請(包括它們所有的外文等同物)和期刊出版物的全部內容(包括其引用的參考文獻)，為了所有目的將其全文以引用的方式納入本文，如同每個單獨的專利、專利申請或出版物被單獨指出一樣。
[0073]
【權利要求】
1.一種用于改良、減少或改善戈謝病的至少一種癥狀或征象或替代標記物的方法，所述方法包括給予有此需要的個體有效量的可藥用組合物，所述組合物以足以改良、減少或改善所述疾病的至少一種癥狀、征象或標記物的量包含至少一種蛋白酶或肽酶。
2.權利要求1的方法，其中被改良、減少或改善的癥狀或征象選自:骨密度損失(骨質減少)、骨痛和骨折；增大的肝(肝大)；增大的脾(脾大)；貧血；肺動脈高壓；過度疲勞；血小板數(shù)量低(血小板減少)；眼睛中的黃斑(瞼裂斑)；青春期延遲；共濟失調；痙攣狀態(tài)；發(fā)作；聽覺受損；鼻出血；認知損害；意向性震顫；強直；運動徐緩；面無表情；講話急促不清或單調；肌陣攣性反射；嗅覺喪失；無血管性骨壞死；和癡呆。
3.權利要求1的方法，其中被改良、減少或改善的疾病標記物選自:溶酶體酸性(6-葡糖苷酶活性；存在載脂巨噬細胞(“戈謝巨噬細胞”)；殼丙糖酶水平；肝酶水平；肺的趨化因子PARC/CCL18的水平；血管緊張素轉換酶(ACE)、總酸性磷酸酶和骨特異性酸性磷酸酶的水平；免疫缺陷例如貧血、血小板減少、白細胞減少、高Y球蛋白血、脾中T淋巴細胞的量減少、全身性B細胞過度增殖、漿細胞增多、血漿a突觸核蛋白；炎性細胞因子的水平、包含巨噬細胞、淋巴細胞和中性白細胞的組織或器官中存在炎性病灶以及受損的中性粒細胞趨化性；骨骼缺陷例如骨髓中戈謝細胞的浸潤、甘油三酯水平降低；骨密度和其他異常的放射照相結果；神經癥狀例如神經元損失、神經退行性變、水平凝視異常、肌陣攣運動、角膜渾濁、戈謝巨噬細胞的肺浸潤；在戈謝病患者的細胞中酸性(6-葡糖苷酶從ER到溶酶體的異常運輸；細胞脂質通過胞內體途徑的異常運輸；在ER或胞質溶膠中存在增加數(shù)量的錯折疊的酸性P -葡糖苷酶；存在由GCase的毒性累積產生的ER和/或應激(通過應激相關標記物的基因和/或蛋白表達確定);異常的胞內體PH水平；在單核細胞上存在增加的MHCII和/或CDld的質膜表達；異常的細胞形態(tài)；泛素/蛋白酶體途徑抑制；泛素化蛋白的量增加；以及血清或尿中生化標記物的改變。
4.權利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶被口服給予。
5.權利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶衍生自發(fā)酵食物或飲料。
6.權利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶為脯氨酰肽酶、二肽基肽酶或三肽基肽酶。
7.權利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶衍生自食品級的微生物、酵母、藻類、海草、植物、脊椎動物、無脊椎動物、環(huán)節(jié)動物、昆蟲或節(jié)肢動物。
8.權利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶衍生自曲霉菌屬(Aspergillus)的種。
9.權利要求1的方法，其中所述蛋白酶衍生自包含具有二肽基肽酶IV活性的蛋白酶的曲霉菌屬發(fā)酵產物。
10.權利要求1的方法，其中所述可藥用組合物被標記為膳食補充劑。
11.權利要求10的方法，其中所述可藥用組合物被配制為干粉劑、片劑、硬明膠膠囊或軟明膠膠囊。
12.權利要求10的方法，其中所述可藥用組合物在適于人服用的可消化載體材料中提供。
13.權利要求12的方法，其中所述載體材料選自基于谷類作物的產品、米糕、大豆糕、食物棒產品、冷成型的食物棒產品、軟凍、布丁、明膠、米漿、豆?jié){、果漿產品、糖果、糖果棒、蘋果沙司、酸乳、飲料和發(fā)酵飲料。
14.權利要求11、12或13的方法，其中所述可藥用組合物還含有一種或多種選自以下的成分:維生素、礦物質、草藥或草藥提取物、益生菌或益生元、抗氧化劑、生物類黃酮、木瓜蛋白酶、乳糖酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶以及植物和動物濃縮物。
15.權利要求1的方法，其中所述可藥用組合物含有一種或多種蛋白酶。
16.權利要求1的方法,其中所述可藥用組合物與單獨的、FDA批準的藥物組合物結合或共同給予。
17.權利要求1的方法，其中所述可藥用組合物還包含有治療活性的小分子。
18.權利要求16的方法，其中所述FDA批準的藥物組合物為有治療活性的小分子。
19.權利要求2的方法，其中在患有戈謝病的個體中被改良、減少或改善的所述征象為增大的脾(脾大)。
20.一種篩選適用于治療戈謝病的蛋白酶和肽酶的方法，所述方法包括:(a)在患有戈謝病的個體中定量戈謝病的癥狀或標記物；(b)以已知的量給予所述個體在可藥用載體中的生理上可接受的蛋白酶或肽酶，持續(xù)已知的時間；和(C)定量前述癥狀或替代標記物以評估是否由于給予所述蛋白酶或肽酶組合物而導致所述癥狀或標記物的定量改變。
21.權利要求20的方法，其中所述癥狀或疾病標記物選自權利要求2或3所述的癥狀和疾病標記物。
22.—種治療患有溶酶體貯積病的受試者的方法，所述方法包括給予患有溶酶體貯積病的受試者治療有效量的組合物，所述組合物以足以改良、減少或改善所述疾病的至少一種癥狀的量包含至少一種蛋白酶或肽酶。
23.權利要求22的方法，其中所述患有溶酶體貯積病的受試者患有選自以下的疾病:糖原貯積癥II型、黏多糖累積病、黏脂貯積病II型、黏脂貯積病III型、多硫酸酯酶缺乏癥、GM2激活蛋白缺陷變異型AB、糖原貯積病II b型、Salla病、泰-薩克斯病、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥變異型O、辛德勒病、Kanzaki病、α -甘露糖苷貯積癥、β -甘露糖苷貯積癥、巖藻糖苷貯積癥、涎酸貯積癥、天冬氨?；咸烟前纺颉⑻妓衔?缺乏糖蛋白綜合征、酸性脂酶缺乏癥、法伯病、尼曼一皮克病Α、B和C型、克拉伯病、法布里病、多種硫酸脂酶缺乏癥、GM1神經節(jié)苷脂貯積癥、GM2神經節(jié)苷脂貯積癥、GM3神經節(jié)苷脂貯積癥、半乳糖唾液酸苷貯積癥、胱氨酸貯積癥、唾液酸貯積病、骨發(fā)育障礙矮小癥、異染性腦白質營養(yǎng)不良、半乳糖唾液酸苷貯積癥、神經元臘樣脂褐質癥(1-9型)、乳糖基?；拾贝歼^多癥、糖原貯積癥II型以及鈷胺素缺乏癥F型。
24.權利要求22的方法其中所述受試者為人。
25.一種用于將膳食補充劑提供給患有溶酶體貯積病的受試者的方法，所述方法包括給予患有溶酶體貯積病的受試者有效量的包含至少一種蛋白酶或肽酶的膳食補充劑。
26.一種用于在具有一個或多個戈謝病基因突變的個體中改良、減少或改善帕金森氏病的至少一種征象或癥狀或替代標記物的方法，所述方法包括給予有此需要的個體有效量的可藥用組合物，所述組合物以足以改良、減少或改善帕金森氏病的至少一種征象、癥狀或標記物的量包含至少一種蛋白酶或肽酶。
27.權利要求26的方法，其中被改良、減少或改善的癥狀或征象選自:意向性震顫、強直和運動徐緩、面無表情、講話急促不清或單調、肌陣攣性反射、嗅覺喪失、無血管性骨壞死和癡呆。
【文檔編號】A61K38/48GK103796672SQ201280028579
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年6月8日 優(yōu)先權日:2011年6月10日
【發(fā)明者】S·F·奧姆斯特德 申請人:普洛特拉有限公司