專利名稱：新穎的綴合物、其制備方法及其治療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及念珠藻素(cryptophycin)綴合物(conjugate)、包含它們的組合物和它們的治療用途尤其是作為抗癌劑的用途。本發(fā)明還涉及制備這些化合物的方法和念珠藻素衍生物本身。
背景技術(shù)：
[技術(shù)領(lǐng)域]念珠藻素類化合物作為次級(jí)代謝物屬于由念珠藻屬的藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)生的縮酚酸肽大環(huán)類。它們的名稱表明它們對(duì)隱球菌屬的酵母具有高度的細(xì)胞毒性。該類分子的第一種代表性化合物即念珠藻素-I(C-I)在1990年從藍(lán)細(xì)菌念珠藻屬種(ATCC 53789)中分離(參見 Ei β Ier S.，et al. ,Synthesis 2006，22，3747-3789)。這些化合物的結(jié)構(gòu)、通式和碳原子編號(hào)(參見WO 98/08505)如下所述
權(quán)利要求
1.式(II)念珠藻素衍生物
2.權(quán)利要求1的念珠藻素衍生物，其中Rltl表示苯基母核上的至少一個(gè)取代基且選自 H, -OH, (C1-C4)烷氧基和鹵素原子。
3.權(quán)利要求1或2的念珠藻素衍生物，其中RCGl表示-S、或_C(= 0)-ZbRb。
4.權(quán)利要求1至3的念珠藻素衍生物，其中+sO(CH2)n+表示以下7種基團(tuán)中的一種
5.權(quán)利要求1至4的念珠藻素衍生物，其中η為1。
6.權(quán)利要求1的念珠藻素衍生物，其中L選自
7.權(quán)利要求1的念珠藻素衍生物，其中L選自
8.權(quán)利要求7的念珠藻素衍生物，其中R12表示H。
9.權(quán)利要求7的念珠藻素衍生物，其中R12表示(C1-C6)烷基，更具體為甲基。
10.權(quán)利要求1至9的念珠藻素衍生物，其中、表示H、-S(C1-C6)烷基尤其是甲基S-或-S-雜芳基尤其是一s、sO 或 4Rb 表示-O (C1-C6)烷基、-OH、-OCH3、-OCH2CH = CH2、
11.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的念珠藻素衍生物，其具有以下結(jié)構(gòu)式中的一種，其中L 優(yōu)選位于對(duì)位
12.權(quán)利要求1的念珠藻素衍生物，其選自
13.式(III)念珠藻素衍生物
14.權(quán)利要求13的念珠藻素衍生物，其中Y表示-N3；-NR12-CH2-C ε CH，其中R12表示H 或(C1-C6)烷基；甲磺?；鵒-；或-OC ( = 0) -0- (4-硝基苯基)。
15.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的念珠藻素衍生物或權(quán)利要求13的式(III)念珠藻素衍生物，其中G = -(CH2)nY,其中Y = -Cl、-N3、-OH、-NH2、馬來酰亞氨基或鹵代乙酰氨基且旨在與結(jié)合劑綴合。
16.權(quán)利要求15的念珠藻素衍生物，其中所述結(jié)合劑為配體、蛋白質(zhì)、抗體更具體為單克隆抗體、蛋白質(zhì)片段或抗體片段、肽、寡核苷酸或寡糖。
17.制備與至少一個(gè)念珠藻素衍生物連接的稱為綴合物的結(jié)合劑的方法，所述方法包括(i)使任選經(jīng)緩沖的結(jié)合劑的水溶液與權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的念珠藻素衍生物的溶液接觸且使它們發(fā)生反應(yīng)；( )然后任選使步驟(i)中形成的綴合物與念珠藻素衍生物和/或未反應(yīng)的結(jié)合劑和 /或所形成的任何聚集物分離。
18.權(quán)利要求17的方法，其中 在包含-S、型反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)RCGl的念珠藻素衍生物存在下，所述結(jié)合劑包含 ■在RCGl表示-SH的情況下，所述結(jié)合劑包含二硫化物化學(xué)基團(tuán)； ■在RCGl表示-S、且、興H的情況下，所述結(jié)合劑包含巰基化學(xué)基團(tuán)； ■在RCGl表示-SH的情況下，所述結(jié)合劑包含馬來酰亞氨基或碘乙酰氨基化學(xué)基團(tuán)； 在包含_C( = 0)-ZbRb型反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)RCGl的念珠藻素衍生物存在下，使所述念珠藻素衍生物與所述結(jié)合劑中的氨基官能團(tuán)尤其是抗體中由賴氨酸殘基(Lys)的側(cè)鏈所帶有的ε-氨基反應(yīng)； 在其中G = -(CH2)nY的式(III)念珠藻素衍生物存在下，所述結(jié)合劑當(dāng)Y = -Cl或馬來酰亞氨基時(shí)包含-SH，當(dāng)Y = -N3時(shí)包含-C ^ CH,或當(dāng)Y = -OH或-NH2時(shí)包含羧基； 在包含馬來酰亞氨基或鹵代乙酰氨基型反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)RCGl的念珠藻素衍生物存在下，所述結(jié)合劑包含巰基化學(xué)基團(tuán)。
19.權(quán)利要求17或18的方法，其中 在包含-S、型反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)RCGl的念珠藻素衍生物存在下，所述結(jié)合劑用改性劑改性，所述改性劑選自下式化合物
20.綴合物，其可通過權(quán)利要求17至19中任一項(xiàng)的方法來得到。
21.權(quán)利要求20的綴合物，其特征在于通過對(duì)HRMS譜進(jìn)行解卷積而確定的DAR大于 1，優(yōu)選為2至10，且更具體為2至7。
22.權(quán)利要求20的綴合物，其特征在于使用UV分光光度計(jì)而確定的DAR大于0.5，優(yōu)選大于1，更具體為1至10，且甚至更具體為2至7，其中所述DAR通過以下方程來計(jì)算DAR = cD/cA 其中Cd= [( ε Αλ ΧΑλ2)-( ε Αλ2ΧΑλ1)]/[( ε Βλ2Χ ε Αλ1)-( ε Αλ2Χ ε Βλ1)] cA = [AA1-(cDX ε Βλ1)]/ ε Αλ1Αλ1和Αλ2分別表示綴合物溶液分別在波長λ 1和λ 2的吸光度； ε dm和ε Βλ2分別表示念珠藻素衍生物在綴合前在波長λ 1和λ 2的摩爾吸光系數(shù)， 這些系數(shù)通過其中\(zhòng) =甲基S-的-S、型式(II)化合物或其中4Rb =甲基0-或-OCH2-CH =CH2的_C( = 0)-ZbRb型式(II)化合物來測(cè)量；ε Αλ1和ε Αλ2分別表示裸抗體在綴合前在兩種波長λ 1和λ 2的摩爾吸光系數(shù)。
23.權(quán)利要求22的綴合物，其中λ1 = 280nm，且λ 2在具體波長范圍M6nm-252nm內(nèi)選擇。
24.綴合物溶液，其可通過權(quán)利要求17至19中任一項(xiàng)的方法來得到或包含權(quán)利要求 20至23中任一項(xiàng)的綴合物。
25.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的念珠藻素衍生物在制備與至少一個(gè)所述念珠藻素衍生物連接的結(jié)合劑中的用途。
26.念珠藻素衍生物在制備與至少一個(gè)所述念珠藻素衍生物連接的結(jié)合劑中的用途， 所述念珠藻素衍生物具有式(III)vv
27.念珠藻素衍生物在制備與至少一個(gè)念珠藻素衍生物連接的結(jié)合劑中的用途，所述念珠藻素衍生物選自以下物質(zhì)中的一種
28.下式念珠藻素衍生物
29.權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)的念珠藻素衍生物，其用作抗癌劑。
30.權(quán)利要求20至23的綴合物，其用作抗癌劑。
31.權(quán)利要求M的綴合物溶液，其用作抗癌劑。
32.權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)的念珠藻素衍生物在制備抗癌藥物中的用途。
33.權(quán)利要求20至23的綴合物在制備抗癌藥物中的用途。
34.權(quán)利要求對(duì)的綴合物溶液在制備抗癌藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及與至少一個(gè)念珠藻素連接的式(I)靶向劑，其中R1為鹵素原子且R2為-OH、由氨基酸AA衍生的酰基或(C1-C4)烷?；趸换騌1和R2一起形成環(huán)氧單元；AA表示天然或非天然氨基酸；R3為C1-C6)烷基；R4和R5都為H或一起形成在C13和C14之間的雙鍵CH＝CH；R6和R7彼此獨(dú)立為H或(C1-C6)烷基；R8和R9彼此獨(dú)立為H或(C1-C6)烷基；R10為苯基母核上的至少一個(gè)取代基且選自H、-OH、(C1-C4)烷氧基、鹵素原子、-NH2、-NH(C1-C6)烷基或-N((C1-C6)烷基)2；R11為苯基母核上的至少一個(gè)取代基且選自H和(C1-C4)烷基；靶向劑和念珠藻素衍生物共價(jià)連接且連接位置在帶有CR1單元的苯基母核的鄰位(o)、間位(m)或?qū)ξ?p)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102482238SQ201080038575
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月29日
發(fā)明者A.康默康, H.博查德, J.張, M-P.布龍 申請(qǐng)人:賽諾菲