專利名稱：治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有坎地沙坦和羅蘇伐他汀的聯(lián)合物。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有上述聯(lián)合物的藥物組合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述聯(lián)合物在預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化中的用途。
動(dòng)脈粥樣硬化是一種通過(guò)導(dǎo)致不規(guī)則分布的脂質(zhì)沉積于動(dòng)脈中的復(fù)雜病理途徑介導(dǎo)的病癥，它是引發(fā)冠心病的重要因素。因此，為了減少心血管事件例如心肌梗塞、心絞痛惡化、心臟停博、中風(fēng)、充血性心力衰竭和心血管死亡發(fā)生的次數(shù)，主要的目標(biāo)在于降低動(dòng)脈粥樣硬化。
血脂障礙特別是低密度脂蛋白(LDL)的血漿水平升高是動(dòng)脈粥樣硬化的主要危險(xiǎn)因素之一。臨床研究證實(shí)，使用3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG CoA)還原酶抑制劑(通常稱作他汀類藥物)降低血漿LDL水平可以降低出現(xiàn)心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。
腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的活化被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化的另一重要危險(xiǎn)因素。伴有血管緊張素(II)(A(II))形成以及A(II)受體活化的RAS活化涉及動(dòng)脈粥樣硬化形成、斑塊破裂、心肌缺血性功能障礙以及充血性心力衰竭(Singh和Mehta，Arch Intern Med，2003，vol163，1296-1304)。
國(guó)際專利申請(qǐng)WO 95/26188公開(kāi)了使用A(II)受體阻斷劑、任選同時(shí)聯(lián)合HMG CoA還原酶抑制劑治療動(dòng)脈粥樣硬化。國(guó)際專利申請(qǐng)WO 01/76573公開(kāi)了含有A(II)拮抗劑、ACE(血管緊張素轉(zhuǎn)化酶)抑制劑和HMG CoA還原酶抑制劑中的至少兩種的聯(lián)合物用于預(yù)防或延遲一系列病癥的惡化，其中之一是動(dòng)脈粥樣硬化。
我們出人意料地發(fā)現(xiàn)，含有A(II)拮抗劑坎地沙坦和HMG CoA還原酶抑制劑羅蘇伐他汀的聯(lián)合物在降低動(dòng)脈粥樣硬化中具有協(xié)同效應(yīng)。這種協(xié)同效應(yīng)似乎是因?yàn)閰f(xié)同抑制了涉及RAS的多種炎癥介質(zhì)(例如CD40、金屬蛋白酶(MMPs))表達(dá)和/或抑制受體LOX-1(它是內(nèi)皮細(xì)胞上氧化LDL的受體)的表達(dá)而帶來(lái)的。這種協(xié)同效應(yīng)為RAS和動(dòng)脈粥樣硬化形成中的血脂障礙之間的串?dāng)_提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。
應(yīng)該理解的是，MMPs活性在體內(nèi)可以通過(guò)其組織抑制劑(TIMPs)調(diào)節(jié)。我們還發(fā)現(xiàn)，TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)受高膽固醇飲食正向調(diào)節(jié)，同時(shí)使用含有坎地沙坦和羅蘇伐他汀的聯(lián)合物可以顯著削弱其表達(dá)。據(jù)信這些資料意味著，MMPs和TIMPs之間的平衡受高膽固醇飲食影響，同時(shí)這種平衡可以通過(guò)A(II)拮抗劑和脂質(zhì)減少劑的聯(lián)合物“正?；?。
在本發(fā)明一方面，提供了一種含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。
在本發(fā)明一方面，提供了一種含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，用于預(yù)防心血管事件。
這種聯(lián)合物還可以用于治療或預(yù)防與上述介質(zhì)相關(guān)的其它疾病，例如炎性疾病或病癥如缺血-再灌注損傷(心臟、腦、腎臟、肺和肝臟)、輻射誘導(dǎo)的損傷、燒傷和外周血管疾病。
坎地沙坦可以適當(dāng)?shù)貫榭驳厣程剐问交蛘邽榭驳厣程刮黪サ那八幮问?。上述形式可以與其它藥劑例如利尿劑如氫氯噻嗪(如市場(chǎng)上銷售的Atacand PlusTM)一起配制。
在涉及坎地沙坦的場(chǎng)合，其包括坎地沙坦和坎地沙坦西酯。
優(yōu)選在本發(fā)明的各個(gè)方面使用羅蘇伐他汀的鈣鹽，其被稱作羅蘇伐他汀鈣。
一般來(lái)說(shuō)，可藥用鹽包括酸加成鹽例如甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、α-甘油磷酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、檸檬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、酒石酸鹽以及(較少優(yōu)選)氫溴酸鹽?？伤幱名}通常還包括與磷酸和硫酸形成的鹽?？伤幱名}通常包括堿式鹽(base salts)例如堿金屬鹽如鈉鹽、堿土金屬鹽如鈣鹽或鎂鹽，有機(jī)胺鹽例如三乙胺、嗎啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普魯卡因、二芐胺、N，N-二芐基乙基胺、三-(2-羥乙基)胺、三(羥甲基)甲基銨、N-甲基d-葡萄糖胺和氨基酸例如賴氨酸?？赡艽嬖诓恢挂粋€(gè)陽(yáng)離子或陰離子，這取決于指定官能團(tuán)的數(shù)目和陽(yáng)離子或陰離子的化合價(jià)。
應(yīng)該理解的是，本文中使用的術(shù)語(yǔ)“聯(lián)合物/聯(lián)合”是指同時(shí)、分開(kāi)或連續(xù)給藥。在本發(fā)明一方面，“聯(lián)合”是指同時(shí)給藥。在本發(fā)明另一方面，“聯(lián)合”是指分開(kāi)給藥。在本發(fā)明再一方面，“聯(lián)合”是指先后給藥。在先后或分開(kāi)給藥的情形中，第二種成分的延遲給藥應(yīng)當(dāng)使得兩種藥劑同時(shí)存在于體內(nèi)從而發(fā)揮出該聯(lián)合用藥的協(xié)同效應(yīng)。
在本發(fā)明另一方面，提供了一種藥物組合物，用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化，所述藥物組合物含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽以及可藥用稀釋劑或載體。
在本發(fā)明另一方面，提供了一種藥物組合物，用于預(yù)防心血管事件或減少心血管事件風(fēng)險(xiǎn)，所述藥物組合物含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽以及可藥用稀釋劑或載體。
本文所描述的組合物可以是適合口服給藥的形式例如片劑或膠囊劑形式，適合非腸道注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)或輸注)的形式例如無(wú)菌溶液劑、混懸劑或乳劑形式，適合局部給藥的形式例如軟膏劑或乳劑形式，適合直腸給藥的形式例如栓劑形式，或者給藥途徑可以采取直接注入腫瘤或通過(guò)區(qū)域遞送或局部遞送。在本發(fā)明其它實(shí)施方案中，聯(lián)合治療中的化合物可以通過(guò)內(nèi)窺鏡、器官內(nèi)、病灶內(nèi)(intralesionally)、經(jīng)皮、靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或腫瘤內(nèi)遞送。通常，本文所述的組合物可以按照常規(guī)方法使用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)賦形劑或載體制備。
用于片劑的適宜可藥用賦形劑或栽體包括例如惰性賦形劑如乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣，制?；虮澜鈩├缬衩椎矸刍蛟逅幔徽澈蟿├缑髂z或淀粉；潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石；防腐劑例如4-羥基苯甲酸乙酯或丙酯，以及抗氧化劑例如抗壞血酸。為了調(diào)節(jié)片劑的崩解以及接下來(lái)活性成分在胃腸道中的吸收，或者為了改善片劑的穩(wěn)定性和/或外觀，片劑可以不包衣，也可以包衣，在上述兩種情形中均可以使用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)包衣劑和方法。
用于口服的組合物可以是硬膠囊劑形式，其中將活性成分與惰性固體賦形劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或者是軟膠囊劑形式，其中將活性成分與水或油例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。
坎地沙坦可以‘AtacandTM’和‘Atacand PlusTM’商購(gòu)得到。羅蘇伐他汀鈣可以‘CrestorTM’商購(gòu)得到。用于本發(fā)明的適宜制劑包括那些可商購(gòu)得到的制劑。
聯(lián)合物中各組分的適宜劑型是那些市售產(chǎn)品形式?；蛘撸@些組分所具有的協(xié)同作用可以允許所使用的一種或兩種組分的劑量更低。例如，可以聯(lián)合使用劑量為4mg、8mg、16mg、32mg、或者多達(dá)160mg的坎地沙坦和劑量為80mg、40mg、20mg、10mg、5mg或2.5mg的羅蘇伐他汀。應(yīng)該理解的是，任何一種上述劑量的坎地沙坦都可以與任何適宜劑量的羅蘇伐他汀聯(lián)合使用。
在一方面，使用了80mg羅蘇伐他汀。在另一方面，使用了40mg羅蘇伐他汀。在又一方面，使用了20mg羅蘇伐他汀。在再一方面，使用了10mg羅蘇伐他汀。在另一方面，使用了5mg羅蘇伐他汀。在又一方面，使用了2.5mg羅蘇伐他汀。
在一方面，使用了介于32-160mg之間例如大約64-128mg、例如64-112mg、例如大約64-96mg的坎地沙坦。方便地，使用大約72mg坎地沙坦。在另一方面，使用了32mg坎地沙坦。在又一方面，使用了16mg坎地沙坦。在再一方面，使用了8mg坎地沙坦。在再一方面，使用了4mg坎地沙坦。
應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的藥物組合物包括含有坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的組合物以及可藥用賦形劑或載體。這種組合物(例如為單口服制劑形式)在動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防或治療中通?？梢蕴峁┍景l(fā)明所述的用于同時(shí)給藥的治療聯(lián)合產(chǎn)品。
優(yōu)選聯(lián)合物中的兩種組分都通過(guò)口服給藥。
優(yōu)選聯(lián)合物中的兩種組分以單口服制劑形式給藥。
優(yōu)選將聯(lián)合物配制成一天給藥一次。
方便地，將聯(lián)合物配制成單片劑或膠囊劑形式。
上文所述的劑量和給藥方案可以視患者具體的病理狀態(tài)和整體情況變化而變化。例如，為了降低毒性反應(yīng)，可能必須或希望降低上述聯(lián)合治療中各組分的劑量。如果除了本發(fā)明的聯(lián)合治療之外，還使用了一種或多種其它化學(xué)治療劑的話，劑量和給藥方案也會(huì)有所變化。給藥方案可以由治療具體患者的執(zhí)業(yè)醫(yī)生根據(jù)其專業(yè)技能和知識(shí)加以確定。
本發(fā)明的藥物組合物還包括獨(dú)立的組合物，它含有含坎地沙坦或其可藥用鹽和可藥用賦形劑或載體的第一組合物、和含有羅蘇伐他汀或其可藥用鹽和可藥用賦形劑或載體的第二組合物。這種組合物在動(dòng)脈粥樣硬化的協(xié)同預(yù)防或治療中方便地提供本發(fā)明所述的先后或分開(kāi)給藥的治療聯(lián)合物，但是這些獨(dú)立的組合物也可以同時(shí)給藥。
在本發(fā)明另一方面，提供了一種含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，用作用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
在本發(fā)明另一方面，提供了一種含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，用作用于預(yù)防心血管事件的藥物。
在本發(fā)明另一方面，提供了一種含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，用于制造藥物。
在本發(fā)明另一方面，提供了一種含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，用于制造用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
在本發(fā)明另一方面，提供了一種含有坎地沙坦或其可藥用鹽、和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，用于制造用于預(yù)防心血管事件的藥物。
在本發(fā)明又一方面，提供了一種預(yù)防或治療溫血?jiǎng)游锢缛藙?dòng)脈粥樣硬化的方法，所述方法包括施用坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物。
在本發(fā)明又一方面，提供了一種預(yù)防溫血?jiǎng)游锢缛诵难苁录姆椒?，所述方法包括施用坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物。
根據(jù)本發(fā)明又一方面，提供了一種試劑盒，所述試劑盒含有坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，同時(shí)任選含有用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的說(shuō)明。
根據(jù)本發(fā)明又一方面，提供了一種試劑盒，所述試劑盒含有a)在第一單位劑型中的坎地沙坦；b)在第二單位劑型中的羅蘇伐他??；以及c)用于容納所述第一和第二劑型的容器裝置；以及任選的d)用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的說(shuō)明。
根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供了一種抑制CD40和/或金屬蛋白酶(MMPs)的表達(dá)的方法，所述方法包括施用坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物。
具體的金屬蛋白酶是MMP-1、MMP-2和MMP-9。
根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供了一種通過(guò)抑制CD40和/或金屬蛋白酶(MMPs)的表達(dá)來(lái)治療動(dòng)脈粥樣硬化患者的方法，所述方法包括施用適于抑制CD40和/或金屬蛋白酶(MMPs)表達(dá)的一定量的坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物，該用量對(duì)是適宜的。
根據(jù)本發(fā)明又一方面，提供了一種使MMPs和TIMPS之間的平衡正?；?normalize)的方法，所述方法包括施用一定量的坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物。
根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供了一種抑制LOX-1表達(dá)的方法，所述方法包括施用坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物。
根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供了一種通過(guò)抑制LOX-1表達(dá)來(lái)治療動(dòng)脈粥樣硬化患者的方法，所述方法包括施用適于抑制LOX-1表達(dá)的一定量的坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽的聯(lián)合物。
材料和方法動(dòng)物模型由Jackson Laboratories(Bar Harbor，ME)獲得五對(duì)C57BL/6J小鼠和三對(duì)純合的apo-E剔除小鼠(在C57BL/6J背景上)。它們通過(guò)兄妹交配進(jìn)行繁殖，同時(shí)圈養(yǎng)在6:00AM至6:00PM有光照的房間中，保持在21℃。在整個(gè)研究期間，給C57BL/6J小鼠(n＝10)連續(xù)供應(yīng)普通食物。將apo-E剔除小鼠分成四組。第1組(n＝10)動(dòng)物從6周大后單獨(dú)給予高膽固醇食物(1％膽固醇)，持續(xù)12周；第2組(n＝10)動(dòng)物從6周大后給予高膽固醇食物和坎地沙坦(1mg/kg/天)，持續(xù)12周；第3組(n＝10)動(dòng)物從6周大后給予高膽固醇食物和羅蘇伐他汀(1mg/kg/天)，持續(xù)12周；第4組(n＝10)動(dòng)物從6周大后給予高膽固醇食物和坎地沙坦(1mg/kg/天)與羅蘇伐他汀(1mg/kg/天)，持續(xù)12周。
在12周治療結(jié)束時(shí)，將小鼠處死進(jìn)行下述研究。所有的試驗(yàn)步驟按照由Institutional Animal Care and Usage Committee ofUniversity of Arkansas for Medical Sciences許可的規(guī)程完成。
動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的定量分析在12周治療結(jié)束時(shí)，對(duì)各組中的5只小鼠實(shí)施安樂(lè)死，將主動(dòng)脈與周圍組織分離。除去外膜脂肪組織后，沿縱向?qū)⒅鲃?dòng)脈從主動(dòng)脈弓至髂骨分岔切開(kāi)，然后固定在10％福爾馬林中持續(xù)24小時(shí)。主動(dòng)脈隨后在70％乙醇中簡(jiǎn)單清洗，用蘇丹IV溶液著色15分鐘，在80％乙醇中分化20分鐘后在流動(dòng)水中洗滌1小時(shí)(Russell L.Techniques forstudying atherosclerotic lesion，Lab invest.1958；742-47)。主動(dòng)脈架好后，使用與解剖顯微鏡相連的照相機(jī)拍攝得到其圖片。圖像通過(guò)軟件分析(Image Pro Plus，Media Cybernetics)。
RNA制備和RT-PCR分析在12周治療結(jié)束時(shí)，對(duì)各組中的5只小鼠實(shí)施安樂(lè)死，將主動(dòng)脈(從主動(dòng)脈弓至髂骨分岔)與周圍組織分離并貯存于干冰上。將每段主動(dòng)脈切成四節(jié)，按照在先(27)描述的單步酸-硫氰酸胍鹽-苯酚-氯仿方法使用其中的兩節(jié)提取得到總RNA。使用寡脫氧胸苷酸(Promega，Madison，Wi，U.S.A.)和Maloney鼠白血病病毒(M-MLV)反轉(zhuǎn)錄(Promega)在42℃下將1微克總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，持續(xù)1小時(shí)。2微升反轉(zhuǎn)錄(RT)材料用Taq DNA聚合酶(Promega)和對(duì)小鼠LOX-1、CD40或MMPs(MMP-1、-2、-9)特異的引物對(duì)擴(kuò)增。對(duì)于小鼠LOX-1而言，使用正向引物5′-TTACTCTCCATGGTGGTGCC-3′，反向引物5′-AGCTTCTTCTGCTTGTTGCC-3′。30個(gè)周期的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)在94℃下進(jìn)行40秒鐘(變性)，在55℃下進(jìn)行1分鐘(退火)，在72℃下進(jìn)行1分鐘(延伸)。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)產(chǎn)物的大小為193個(gè)堿基對(duì)。對(duì)于小鼠CD40而言，使用正向引物5′-GTTTAAAGTCCCGGATGCGA-3′和反向引物5′-CTCAAGGCTATGCTGTCTGT-3′。35個(gè)周期的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)在94℃下進(jìn)行1分鐘(變性)，在55℃下持續(xù)1分鐘(退火)，在72℃下進(jìn)行1分鐘(延伸)。PCR產(chǎn)物的大小為408個(gè)堿基對(duì)。對(duì)于小鼠MMP-1而言，使用正向引物5′-GGACTCTCCCATTCTTAATGA T-3′和反向引物5′-CCTCTTTCTGGATAACATCATCA AC-3′。對(duì)于小鼠MMP-2而言，使用正向引物5′-ATCAAGGGGATCCAGGAGC-3′和反向引物5′-GCAGCGATGAAGATGATAG-3′。對(duì)于小鼠MMP-9而言，使用正向引物5′-AGTTTGGTGTCGCGGAGCAC-3′和反向引物5′-TACATGAGCGCTTCCGGCAC-3′。對(duì)于所有MMPs，35個(gè)周期的PCR在94℃下進(jìn)行1分鐘(變性)，在58℃下進(jìn)行1分鐘(退火)，在75℃下進(jìn)行1分鐘(延伸)。PCR產(chǎn)物的大小分別為627、718和753個(gè)堿基對(duì)。使用對(duì)小鼠β-肌動(dòng)蛋白特異的引物對(duì)作為持家基因(正向引物5′-TTCTACAATGAGCTGCGTTG-3′，反向引物5′-CACTGTGTTGGCATAGAGGTC-3′)。30個(gè)周期在94℃下進(jìn)行30秒鐘(變性)，在55℃下進(jìn)行1分鐘(退火)，在72℃下進(jìn)行1秒鐘(延伸)。PCR產(chǎn)物為560個(gè)堿基對(duì)。反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)-擴(kuò)增樣本在1.5％瓊脂糖凝膠上用溴化乙錠肉眼觀察。
蛋白制備和蛋白質(zhì)印跡分析將每只小鼠的主動(dòng)脈切成四節(jié)。其中的兩節(jié)用于提取RNA，其余兩節(jié)用于按照在先(14)描述的方法提取蛋白。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將主動(dòng)脈組織勻化并在裂解緩沖液中裂解后，在4℃下以4000rpm離心10分鐘。來(lái)自主動(dòng)脈的裂解物蛋白(20μg/泳道)通過(guò)10％SDS-PAGE分離，然后轉(zhuǎn)移至硝化纖維膜上。在封閉溶液(5％脫脂乳，Sigma)中培養(yǎng)后，將膜用1∶750稀釋的抗小鼠LOX-1單克隆抗體、1∶500稀釋的抗小鼠CD40多克隆抗體(Santa Cruz)、1μg/ml稀釋的抗小鼠MMP-1單克隆抗體(Oncogene)、1μg/ml稀釋的抗小鼠MMP-2單克隆抗體(Oncogene)、1μg/ml稀釋的抗小鼠MMP-9單克隆抗體(Oncogene)、1∶500稀釋的抗小鼠TIMP-1多克隆抗體(Santa Cruz)、1∶500稀釋的抗小鼠TIMP-2多克隆抗體(Santa Cruz)、或者1∶5000稀釋的抗小鼠β-肌動(dòng)蛋白單克隆抗體(Sigma)在4℃下培養(yǎng)過(guò)夜。膜洗滌后，用1∶5000稀釋的特異性二級(jí)抗體(Amersham Life Science)在室溫下培養(yǎng)2小時(shí)，膜洗滌后，用ECL系統(tǒng)(Amersham Life Science)檢測(cè)。通過(guò)Scan-gel-it軟件(Li D Y，Zhang YC，Sawamura T，Mehta JL.Circ Res.1999；841043-1049)分析蛋白質(zhì)帶(protein band)的相對(duì)強(qiáng)度。
數(shù)據(jù)分析所有數(shù)據(jù)表示重復(fù)雙份的樣本的平均值。數(shù)據(jù)以平均值±SD表示。在各獨(dú)立組數(shù)據(jù)之間進(jìn)行多重比較確定統(tǒng)計(jì)顯著性，其中ANOVA和F檢驗(yàn)顯示存在顯著性差異。P值＜0.05被認(rèn)為具有顯著性。
結(jié)果坎地沙坦和羅蘇伐他汀的協(xié)同抗動(dòng)脈粥樣硬化效果與對(duì)照小鼠(進(jìn)食普通食物的C57BL/6J小鼠)相比，進(jìn)食高膽固醇食物的apo-E剔除小鼠形成了深度的動(dòng)脈粥樣硬化(P＜0.01 vs對(duì)照小鼠)。盡管單獨(dú)的坎地沙坦和羅蘇伐他汀都降低了動(dòng)脈粥樣硬化程度(p＜0.05vs單獨(dú)的高膽固醇食物)，但是聯(lián)合物更大程度地降低了動(dòng)脈粥樣硬化程度(P＜0.05vs單獨(dú)的坎地沙坦或羅蘇伐他汀加高膽固醇食物)。

圖1示出了代表性試驗(yàn)的結(jié)果以及不同組動(dòng)物中動(dòng)脈粥樣硬化的程度(平均值±SD)。
單獨(dú)的坎地沙坦和羅蘇伐他汀分別使動(dòng)脈粥樣硬化降低了大約35％和25％。聯(lián)合物使動(dòng)脈粥樣硬化降低了70％，這表明它們具有協(xié)同效應(yīng)。圖2對(duì)這種效應(yīng)進(jìn)行了圖表說(shuō)明。
坎地沙坦和羅蘇伐他汀對(duì)于LOX-1表達(dá)的協(xié)同效應(yīng)在對(duì)照C57BL/6J小鼠中，LOX-1表達(dá)(mRNA和蛋白質(zhì))較低。相反，在apo-E剔除小鼠中通過(guò)高膽固醇食物顯著提高了LOX-1表達(dá)(mRNA和蛋白質(zhì))(P＜0.01vs對(duì)照小鼠)。單獨(dú)的坎地沙坦和羅蘇伐他汀都降低了LOX-1表達(dá)(mRNA和蛋白質(zhì))，盡管比較溫和(P＜0.05vs單獨(dú)的高膽固醇食物)?？驳厣程购土_蘇伐他汀的聯(lián)合物對(duì)于apo-E剔除小鼠中的LOX-1的正向調(diào)節(jié)(mRNA和蛋白質(zhì))具有顯著的抑制效果(P＜0.01vs單獨(dú)的高膽固醇食物)。
坎地沙坦和羅蘇伐他汀對(duì)于CD40表達(dá)的協(xié)同效應(yīng)與對(duì)照C57BL/6J小鼠中的表達(dá)相比，在進(jìn)食高膽固醇食物的apo-E剔除小鼠中，CD40表達(dá)(mRNA和蛋白質(zhì))被顯著提高(P＜0.01vs對(duì)照小鼠)。盡管單獨(dú)的坎地沙坦和羅蘇伐他汀都輕微降低了CD40表達(dá)(P＜0.05vs單獨(dú)的高膽固醇食物)，但是坎地沙坦和羅蘇伐他汀的聯(lián)合物對(duì)于apo-E剔除小鼠中的CD40的正向調(diào)節(jié)(mRNA和蛋白質(zhì))具有顯著的抑制效果(P＜0.01vs單獨(dú)的高膽固醇食物)。
坎地沙坦和羅蘇伐他汀對(duì)于MMPs表達(dá)的協(xié)同效應(yīng)與對(duì)照C57BL/6J小鼠中的表達(dá)相比，在進(jìn)食高膽固醇食物的apo-E剔除小鼠中，MMP-1、-2和-9表達(dá)(mRNA和蛋白質(zhì))被顯著提高(P＜0.01vs對(duì)照小鼠)。單獨(dú)的坎地沙坦和羅蘇伐他汀都降低了MMP-1、-2和-9表達(dá)(mRNA和蛋白質(zhì))，盡管比較溫和(P＜0.05vs單獨(dú)的高膽固醇食物)?？驳厣程购土_蘇伐他汀的聯(lián)合物對(duì)于它們的表達(dá)具有顯著的抑制效果(P＜0.01vs單獨(dú)的膽固醇食物)。
坎地沙坦和羅蘇伐他汀對(duì)于TIMPs表達(dá)的影響apo-E剔除小鼠中通過(guò)高膽固醇食物也提高了TIMP-1和TIMP-2蛋白表達(dá)(P＜0.01vs對(duì)照小鼠)，但是其提高的程度小于MMPs。單獨(dú)的坎地沙坦和羅蘇伐他汀都較小程度地降低了TIMP-1和TIMP-2表達(dá)(P＜0.05vs單獨(dú)的高膽固醇食物)，但是坎地沙坦和羅蘇伐他汀的聯(lián)合物對(duì)于它們的表達(dá)具有更強(qiáng)的抑制效果(P＜0.01vs單獨(dú)的高膽固醇食物，P＜0.05vs高膽固醇食物與坎地沙坦或羅蘇伐他汀)。
權(quán)利要求
1.一種用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的聯(lián)合物，所述聯(lián)合物含有坎地沙坦或其可藥用鹽和羅蘇伐他汀或其可藥用鹽。
2.一種用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物組合物，所述藥物組合物含有如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物和可藥用稀釋劑或載體。
3.一種用于預(yù)防心血管事件的藥物組合物，所述藥物組合物含有如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物和可藥用稀釋劑或載體。
4.如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物，用于制造用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
5.如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物，用于制造用于預(yù)防心血管事件的藥物。
6.如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物，用作用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
7.如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物，用作用于預(yù)防心血管事件的藥物。
8.一種預(yù)防或治療溫血?jiǎng)游锢缛藙?dòng)脈粥樣硬化的方法，所述方法包括施用如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物。
9.一種預(yù)防溫血?jiǎng)游锢缛诵难苁录姆椒?，所述方法包括施用如?quán)利要求1所述的聯(lián)合物。
10.一種試劑盒，所述試劑盒含有如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物；同時(shí)任選含有用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的說(shuō)明。
11.如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合物，其中坎地沙坦為坎地沙坦西酯形式。
全文摘要
本發(fā)明描述了一種含有坎地沙坦和羅蘇伐他汀的聯(lián)合物用于預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化以及預(yù)防心血管事件。
文檔編號(hào)A61K31/4184GK1886136SQ200480034823
公開(kāi)日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2004年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月26日
發(fā)明者J·L·梅哈塔 申請(qǐng)人:阿斯利康(英國(guó))有限公司