專(zhuān)利名稱(chēng)：一種富集純化桑黃中桑黃總黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種桑黃總黃酮的純化方法，特別是涉及一 種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
桑黃，來(lái)源于真菌類(lèi)擔(dān)子菌綱多孔菌目多孔菌科桑黃的子實(shí)體，拉丁學(xué)名 phellinus igniarius(L. ex Fr)Quel.又名火木層孔菌、猢猻眼、桑耳、針層孔菌。生于楊、 柳、樺、櫟、杜醇、四照花等闊葉樹(shù)干上，造成心材白腐，多年生；利五臟，軟堅(jiān)，排毒，止血，活 血，和胃止瀉。主治淋病，崩漏帶下，癥瘕積聚，癖飲，脾虛泄瀉。主要成分含有葡萄糖、半乳 糖、甘露糖等多糖類(lèi)，木糖氧化酶、過(guò)氧化氫酶、酯酶，麥芽糖酶等多種酶及鐵、鋅、鈣、鎂等 十多種微量元素。近年來(lái)，人們又從桑黃中提出7個(gè)黃酮及2個(gè)香豆素類(lèi)化合物，讓桑黃這 味中藥越來(lái)越重要。桑黃總黃酮能夠提高人體的免疫力，減輕抗癌劑的副作用，所以可用來(lái)輔助腫瘤 病人的放療和化療，另外，桑黃對(duì)女性月經(jīng)不調(diào)等婦科疾病也有療效。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)天 然植物桑黃中含有大量的桑黃總黃酮，由于其原料桑黃可以栽植，來(lái)源廣泛，從中提取桑黃 總黃酮已取得了可喜進(jìn)展。名稱(chēng)為“一種桑黃黃酮及其制備方法和用途”的專(zhuān)利申請(qǐng)中便 公開(kāi)了將桑黃經(jīng)乙醇提取桑黃總黃酮工藝流程。上述專(zhuān)利文獻(xiàn)中的桑黃總黃酮提取工藝主 要是經(jīng)過(guò)用乙醇提取等步驟提取而成，其分離純化效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂 耦合法處理后在進(jìn)行硅膠柱層析分離的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對(duì)較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種 利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃酮的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃酮的方法，其 步驟如下(1)將干桑黃粉碎后用乙醇加熱回流提??；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的桑黃提取液抽濾，將濾液減壓回收乙醇，得初提物；(3)所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 0 2. 5，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減壓 濃縮得桑黃總黃酮粗提物；(4)將所得桑黃總黃酮粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集桑 黃總黃酮各階段洗脫液；(6)將桑黃總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得桑黃總黃酮半成品，其含量為 35%以上；(7)將所得桑黃總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇以不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集桑黃總黃酮各階段洗脫液；(8)將所收集的桑黃總黃酮洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得桑黃總黃 酮，其含量在90%以上。所述的步驟(1)中，桑黃粉碎后過(guò)30 80目篩在進(jìn)行乙醇提取。所述的步驟(1)中，乙醇濃度為80%。所述的步驟(1)中，提取的方法為浸泡法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、連續(xù)提取 法中的一種或一種以上。所述的步驟(1)中，加入乙醇的體積為樺樹(shù)皮粉碎體積的5 10倍。所述的步驟中所用的大孔吸附樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、 S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型樹(shù)脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng) 態(tài)吸附。所述的步驟(5)中所述的洗脫為用40-80%的乙醇進(jìn)行洗脫。所述的在步驟( 和(7)中，所采取的檢測(cè)方法均為薄層色譜法跟蹤檢測(cè)。所述的步驟(7)中所采取的丙酮，甲醇的體積比為1 7 1。本發(fā)明應(yīng)用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法分離純化桑黃總黃酮，對(duì)桑黃總黃酮 的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成 本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35%以上的桑黃總黃酮半成品和含量 90%以上的桑黃總黃酮終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力 強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無(wú)機(jī)鹽 類(lèi)及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附桑黃總黃 酮，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃酮 的方法，其步驟如下(1)將干桑黃粉碎后過(guò)60目篩，用桑黃粉體積5倍的乙醇回流提取3次，每次 1. 5h ；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的桑黃提取液抽濾，將濾液減壓回收乙醇得初提物；(3)所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 0，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減壓濃縮得 桑黃總黃酮粗提物；(4)將所得桑黃總黃酮粗提物用大孔吸附樹(shù)脂層析柱上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù) 脂為天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-II型樹(shù)脂；(5)用40^^50^^60^^70^^80%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂層柱中依次進(jìn)行梯度 洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集桑黃總黃酮各階段洗脫液；(6)將桑黃總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量為35%桑黃總黃酮半成
品 ；(7)將所得桑黃總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集桑黃總黃酮各階段洗脫液；(8)將所收集的桑黃總黃酮洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 92%桑黃總黃酮。實(shí)施案例2 —種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃 酮的方法，其步驟如下(1)將干桑黃粉碎后過(guò)30目篩，用桑黃粉體積8倍的乙醇回流提取3次，每次池；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的桑黃提取液抽濾，將濾液減壓回收乙醇得初提物；(3)所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 3，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減壓濃縮得 桑黃總黃酮粗提物；(4)將所得桑黃總黃酮粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為天津 南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的D4006型樹(shù)脂；(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜 法跟蹤檢測(cè)，收集桑黃總黃酮各階段洗脫液；(6)將桑黃總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量36%桑黃總黃酮半成品。(7)將所得桑黃總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集桑黃 總黃酮各階段洗脫液；(8)將所收集的桑黃總黃酮洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 94%桑黃總黃酮。實(shí)施案例3 —種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃 酮的方法，其步驟如下(1)將干桑黃粉碎后過(guò)80目篩，用桑黃粉體積10倍的乙醇回流提取3次，每次 2. 5h ；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的樺樹(shù)皮提取液抽濾，將濾液減壓回收乙醇得初提物；(3)所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 5，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減壓濃縮得 桑黃總黃酮粗提物；(4)將所得桑黃總黃酮粗提物用大孔吸附樹(shù)脂層析柱子、上進(jìn)行吸附，所用的大孔 樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-9型樹(shù)脂；(5)用40^^50^^60^^70^^80%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂層析柱子中依次進(jìn)行 梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集桑黃總黃酮各階段洗脫液；(6)將桑黃總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量38%桑黃總黃酮半成品。(7)將所得桑黃總黃酮半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集桑黃 總黃酮洗脫液；(8)將所收集的桑黃總黃酮洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 95%桑黃總黃酮。
權(quán)利要求
1.一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃酮的方法，其特 征在于，其步驟如下(1)將干桑黃粉碎后用80%乙醇加熱回流提??；(2)將經(jīng)(1)處理的桑黃提取液過(guò)濾，將濾液減壓回收乙醇得初提物；(3)所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2.0 2. 5，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減壓濃縮 得桑黃總黃酮粗提物；(4)將所得桑黃總黃酮粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度乙醇水溶液對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，收集桑黃總黃酮各階段洗脫液；(6)將桑黃總黃酮洗脫液濃縮回收洗脫劑，得桑黃總黃酮半成品；(7)將所得桑黃總黃酮半成品上硅膠層析柱，并以丙酮、甲醇以不同比例進(jìn)行洗脫，收 集桑黃總黃酮洗脫液；(8)將所收集到得桑黃總黃酮洗脫液進(jìn)行精制得桑黃總黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總 黃酮的方法其特質(zhì)是所述的步驟(1)中，桑黃粉后過(guò)30 80目篩再進(jìn)行乙醇加熱回流提 取。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總 黃酮的方法，其特征是所述的步驟(1)中，提取的方法為浸漬法、回流提取法，滲漉法、煎 煮法、連續(xù)提取法中的一種或一種以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總 黃酮的方法，其特征是；所屬的步驟(1)中，加入乙醇的體積為樺樹(shù)皮粉體積的5 10倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總 黃酮的方法，其特征是步驟(3)中所述吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附步驟中所述的洗 脫為用40 80%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總 黃酮的方法，其特征是在步驟( 和(7)中，洗脫過(guò)程中采用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總 黃酮的方法，其特征是步驟(7)中所采用丙酮，甲醇體積比為1 7 1。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總 黃酮的方法，其特征是在步驟(7)中，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化桑黃中桑黃總黃酮的方法。其特點(diǎn)是應(yīng)用大孔吸附技術(shù)分離純化桑黃總黃酮，對(duì)桑黃總黃酮的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35％以上的桑黃總黃酮半成品和含量90％以上的桑黃總黃酮終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附桑黃總黃酮，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
文檔編號(hào)A61P15/00GK102078339SQ201010623129
公開(kāi)日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者姚德利, 姚德坤, 姚航, 鄭君, 閆峰, 黃運(yùn)生 申請(qǐng)人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司