專利名稱：一種脂質(zhì)微球組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品，特別是涉及一種可以安全的用于人或其他動(dòng)物體內(nèi)的含有疫苗的脂質(zhì)微球組合物，作為新型的疫苗佐劑和輸送系統(tǒng)，特別重要的是本發(fā)明所述脂質(zhì)微球組合物能很好地增強(qiáng)人體對(duì)各種抗原的免疫應(yīng)答，具備優(yōu)良的免疫調(diào)節(jié)功能從而達(dá)到交叉保護(hù)的效果，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
據(jù)2010年1月20日的《科學(xué)-轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)》雜志報(bào)道說，目前在歐洲版本的針對(duì)大流行性的Hmi流感疫苗中所應(yīng)用的疫苗可徹底地改變身體對(duì)流感疫苗的免疫反應(yīng)，并增強(qiáng)身體產(chǎn)生對(duì)多種類型流感的抗體反應(yīng)的能力。佐劑是人們經(jīng)常加入到疫苗之中以增強(qiáng)免疫反應(yīng)的物質(zhì)，但它們本身則沒有功效；這種現(xiàn)象的確切原因仍然讓科學(xué)家們感到困惑。通過增強(qiáng)免疫反應(yīng)，佐劑可讓人們僅用較低劑量的疫苗，而疫苗供應(yīng)在有的時(shí)候可能會(huì)是非常稀缺的，就像是在2009年秋季所看到的季節(jié)性流感疫苗的短缺。這些發(fā)現(xiàn)提示，某些佐劑可極大地改善大規(guī)模疫苗接種的效果，并對(duì)有關(guān)的流感病毒產(chǎn)生交叉性的保護(hù)。在這項(xiàng)研究中，Surender Khurana及其同僚對(duì)機(jī)體在加有或沒有加MF59佐劑的情況下對(duì)某種禽流感疫苗所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)做了精密的比較。他們發(fā)現(xiàn)，將佐劑與疫苗進(jìn)行混合之后可產(chǎn)生能夠識(shí)別范圍更為廣泛的不同流感抗原的抗體，其中包括某些已知的可滅活禽流感病毒的抗體。具體地說，MF59可增加抗禽流感的抗體量，同時(shí)也會(huì)增加抗體類型的多樣性。預(yù)計(jì)這些多樣化的抗體可對(duì)多種類型的流感產(chǎn)生涵蓋面廣泛的保護(hù)作用。目前人們正在研發(fā)許多新型的疫苗佐劑。通過查明佐劑在疫苗中的作用，這些結(jié)果可能會(huì)幫助疫苗制造商選擇那些最有可能對(duì)流感提供更好保護(hù)作用的疫苗。佐劑是非特異性免疫增強(qiáng)劑，當(dāng)與抗原一起注射或預(yù)先注入機(jī)體時(shí)，可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型。由于流感病毒很容易變異，近年來各國(guó)政府和相關(guān)企業(yè)不得不疲于開發(fā)新疫苗， 并為民眾同時(shí)注射新疫苗和季節(jié)性流感疫苗。美國(guó)藥管局的新研究表明，接種含有佐劑的單一流感疫苗有可能使接種者對(duì)多種流感病毒產(chǎn)生免疫力。疫苗佐劑在歐盟國(guó)家和加拿大被廣泛使用。此前有研究顯示，佐劑可以延長(zhǎng)疫苗的有效作用時(shí)間。美國(guó)政府已購買了價(jià)值近7億美元的佐劑，美提供6000萬美元資金，供企業(yè)和研究人員研制新型佐劑。2007年在第九屆國(guó)際呼吸道病毒感染研討會(huì)上披露的兩項(xiàng)臨床研究數(shù)據(jù)首次顯示，配方以葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司(GSK)專利佐劑系統(tǒng)的大流行強(qiáng)裂解抗原 H5N1疫苗，可以提供對(duì)預(yù)防H5W型毒株足夠水平的交叉免疫力，從而在H5W型病毒引發(fā)人類大流行時(shí)，保護(hù)接種過疫苗的人群。第一項(xiàng)研究數(shù)據(jù)顯示，用GSK專利佐劑技術(shù)生產(chǎn)的大流行前流感疫苗中，僅含有非常低水平的越南H5m型抗原，卻能夠在人體誘導(dǎo)強(qiáng)大的針對(duì)印度尼西亞病毒株交叉免疫中和抗體應(yīng)答。和注射不含佐劑疫苗所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)相比，如果在疫苗中添加了佐劑， 在第42天的中和性抗體血清陽轉(zhuǎn)率是前者的25倍。這說明，添加了佐劑的疫苗敏感度要大大高于不添加佐劑的疫苗。第二項(xiàng)研究數(shù)據(jù)表明，同樣在抗原使用量非常低的情況下，GSK專利佐劑大流行前疫苗可以抵抗兩種H5m型流感毒株。臨床前的體內(nèi)研究數(shù)據(jù)表明，含有越南H5m毒株的 GSK佐劑疫苗，不僅可以抵抗疫苗毒株的攻擊，而且可以對(duì)發(fā)生抗原性漂移的印度尼西亞 H5N1毒株的致死性攻擊提供96%的交叉保護(hù)。這提示給予額外的加強(qiáng)免疫，可以期望接種此種流感疫苗，能夠作為流感大流行前的一項(xiàng)應(yīng)對(duì)措施。歐洲專家表示，在世界各種鳥類中呈地方性流行的禽H5W病毒，最有可能成為大流行的毒株。目前GSK專利佐劑系統(tǒng)的大流行強(qiáng)裂解抗原H5m疫苗，已在歐洲生產(chǎn)和使用。復(fù)立達(dá)(英文商品名Fluad)是諾華(Novartis)疫苗公司生產(chǎn)的含創(chuàng)新佐劑MF59 的亞單位流感疫苗。MF59是一種水包油的乳劑，包含鯊烯，0. 5% Tween80和0. 5%三油酸聚山梨脂的水包油乳液。被用于諾華公司的流感疫苗復(fù)立達(dá)中，在歐洲它是第一個(gè)被批準(zhǔn)的添加佐劑的流感疫苗。經(jīng)我國(guó)藥品食品監(jiān)督管理局(SFDA)批準(zhǔn)，2009年，復(fù)立達(dá)流感佐劑亞單位疫苗已經(jīng)被允許上市，成為我國(guó)目前唯一的老年專用流感疫苗。最早用于人類的鋁佐劑，使用研究已經(jīng)有近八十年的歷史，盡管人們?yōu)檠芯啃碌淖魟┡浞礁冻鼍薮笈?，但具有生產(chǎn)許可的新疫苗佐劑依然很少。1999年ECPI世界疫苗大會(huì)認(rèn)為，“WHO或其他衛(wèi)生權(quán)威部門試圖夸大疫苗的絕對(duì)安全性的做法是不妥的，任何醫(yī)藥制品的使用都具有危險(xiǎn)性，即使是最后的兒童疫苗也可能產(chǎn)生嚴(yán)重的個(gè)體與疫苗之間的相互作用”。但無論怎樣，如果沒有嚴(yán)格的毒性檢測(cè)，佐劑疫苗是不會(huì)被批準(zhǔn)使用的，這一原則將始終遵循。美國(guó)生物制品評(píng)價(jià)與研究中心期望繼續(xù)對(duì)佐劑本身、也對(duì)佐劑疫苗混合物的毒性進(jìn)行研究和評(píng)價(jià)。原因很簡(jiǎn)單，因?yàn)槿祟悓⒗^續(xù)面對(duì)新感染疾病的危機(jī)；面對(duì)那些因人類遷移和氣候變化帶來的原有疾病的威脅；現(xiàn)代人類的旅行活動(dòng)會(huì)向新環(huán)境傳播疾病。目前，已有大量關(guān)于佐劑選擇的研究，但人們?nèi)韵Ｍ嗟淖魟┖洼斔拖到y(tǒng)的研究能夠盡早成功，并用于開發(fā)有效的疫苗。已經(jīng)公開的數(shù)十篇外企在華申請(qǐng)的佐劑相關(guān)專利，分析其權(quán)利范圍，多數(shù)以礦物油、角鯊烯和角鯊?fù)闉橛托曰|(zhì)制成的為水包油型的乳化液。其中CN127083.8A， CN1852735、CN10184501和CN101184501專利描述所用的油均為礦物油，這種油注射后，不能被動(dòng)物經(jīng)體內(nèi)代謝和消除，以致它殘留下來作為嚴(yán)重的慢性炎癥和結(jié)癡的來源，因此也絕非能用于制造人類的疫苗佐劑中的組成物；CN1153064、CN10217977A、CN101365485和 CN101678096A主要采用了角鯊烯和角鯊?fù)闉橛托曰|(zhì)，該油是可代謝的，具備可允許用于注射藥品的品質(zhì)，為了乳化完全由C、H兩種元素組成的烷/烯烴類油脂，使用了親水類和親油類2種不同的非離子型表面活性劑乳化制成。MF59與AS03乳狀液是目前最成功的疫苗佐劑，然而在使用上仍有其副作用。事實(shí)上，MF59與AS03所選用的核心油脂角鯊烯，長(zhǎng)久以來即有引起慢性發(fā)炎以及自身免疫破壞性疾病的疑慮，例如波灣戰(zhàn)爭(zhēng)綜合病征(Gulf War Syndrome，GWS)，致使美國(guó)FDA至今遲遲未核準(zhǔn)含有角鯊烯成分的疫苗上市；此外，這些疫苗所選用的乳化劑Span 85與Tween 80， 雖然俱備安全性高的特性，且已被長(zhǎng)久使用于食品、化妝品或作為體內(nèi)注射使用，但是此類型乳化劑皆屬于多元醇類非離子型界面活性劑，無法有效刺激免疫細(xì)胞。因此，經(jīng)由此制備而得的MF59、AS03均屬于疫苗輸送系統(tǒng)，雖然可以利用其抗原控制釋放的能力來增強(qiáng)由病毒抗原所誘導(dǎo)引發(fā)的適應(yīng)性免疫反應(yīng)，達(dá)到對(duì)抗該病毒的效果，卻因?yàn)槿狈γ庖哒{(diào)節(jié)功能， 無法達(dá)到交叉保護(hù)的效果。表1 MF59和AS03乳化佐劑的比較
權(quán)利要求
1.一種脂質(zhì)微球組合物，其特征在于包括有脂質(zhì)微球乳劑和免疫原性組合物兩部分， 脂質(zhì)微球乳劑與免疫原性組合物的比例為10 1至1 10之間，其中脂質(zhì)微球乳劑重量的1 30% (w/w)為醫(yī)藥級(jí)油脂，脂質(zhì)微球乳劑重量的0. 1 10% (w/w)為兩性離子/非離子表面活性劑組合，脂質(zhì)微球乳劑重量的0.01 5% (w/w)為穩(wěn)定劑，余量為水性溶液；免疫原性組合物是單價(jià)至多價(jià)，通常為3價(jià)組合物，其中包含來自一種或一種以上與大流行流感爆發(fā)相關(guān)或具有與大流行流感爆發(fā)相關(guān)的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述脂質(zhì)微球乳劑為外觀帶有淡藍(lán)色乳光或乳白狀液體并均勻分散于水性介質(zhì)中，平均粒徑為50 500nm。
3.權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述的液體，進(jìn)一步通過固化技術(shù)， 制成干燥的粉末或塊狀的脂質(zhì)微球乳劑，臨用前用水性溶液復(fù)性瞬即形成乳化液，平均粒徑為50 500nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述醫(yī)藥級(jí)油脂為至少為經(jīng)過精制的植物油和動(dòng)物油、天然或人工修飾/全合成的油中的一種，優(yōu)選大豆油、中鏈甘油三酯、橄欖油、維生素E中的1種或2種以上的特征組合；所述兩性離子/非離子表面活性劑組合，包含天然或人工修飾/全合成的，優(yōu)選大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及其衍生物、天然的D(L)-維生素E琥珀酸脂聚乙二醇衍生物(TPGS)、聚乙二醇660-12-羥基硬脂酸酯(HS-15)、Poloxamer (188)、聚山梨酯類(Tween-80)的1種或2種以上的特征組合；所述穩(wěn)定劑，優(yōu)選油酸、膽酸或脫氧膽酸及其鈉鹽，甘膽酸鈉中的1種或2種以上的特征組合；所述水性溶液，是免疫原性組合物溶液，或純化水、注射用水、甘油水溶液、緩沖鹽水溶液的1種或2種以上的組合，或臨床上可用的輸液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于含有下列所述a d中的一種或2種以上的特征組合a、乳化液滲透壓在200m0sm/kg-400m Osm/kg之間，優(yōu)選M0-360m0sm/kg之間；b、pH為3 10，優(yōu)選pH為5 8；c、脂質(zhì)微球的平均粒徑在50 500nm之間，優(yōu)選100 300nm之間；d、含有單糖、二糖及多糖、甘露醇作為固化脂質(zhì)微球工藝過程的保護(hù)劑，優(yōu)選二糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述免疫原性組合物包含來自至少三種季節(jié)性流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑，并且任選包含至少一種與大流行流感爆發(fā)相關(guān)或具有與大流行流感爆發(fā)相關(guān)的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述大流行流感病毒株選自人類流感病毒中 A、B、C 型，包含 HlNl，H2N2，H3N2,H5N1, H7N7，H1N2，H9N2，H7N3，H10N7 ；豬型流感病毒 HlNl，H1N2, H3N1, H3N2 ；以及狗或馬型流感病毒H7N7，H3N8 ；或禽流感病毒 H5N1，H7N2, H1N7, H7N3, H13N6, H5N9, H11N6, H3N8, H9N2, H5N2, H4N8,H10N7, H2N2, H8N4, H14N5, H6N5和H12N5中的一種或一種以上的流感病毒組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述流感病毒抗原或其抗原性制劑來自于在卵(雞胚)或細(xì)胞培養(yǎng)物上生長(zhǎng)的流感病毒，或重組基因表達(dá)，合成的免疫原性組合物包括完整病毒、裂解病毒、病毒體或選自HA，NA, Ml, M2的一種或多種純化的抗原。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述的抗原包括但不限于人類抗原，非人類動(dòng)物抗原，植物抗原，細(xì)菌抗原，真菌抗原，病毒抗原，寄生蟲抗原或是癌腫抗原。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述病毒抗原或抗原性制劑是每種流感病毒株每個(gè)人用劑量15 μ g或少于15 μ g HA，優(yōu)選每劑2 7. 5 μ g HA。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述免疫原組合物可獨(dú)立包裝，也可與乳化液混合后包裝或混合后進(jìn)一步固化得到干燥的脂質(zhì)微球組合物。
12.權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)微球組合物的用途，其特征在于含有免疫原性組合物的脂質(zhì)微球組合物的用途為作為疫苗的輸送系統(tǒng)使用，包括靜脈注射、脊椎腔注射、肌內(nèi)注射、 皮下注射、皮內(nèi)注射、經(jīng)呼吸道噴入或吸入、腹腔給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)眼給藥、經(jīng)口給藥、直腸給藥、陰道給藥、局部給藥、透皮給藥。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的脂質(zhì)微球組合物，其特征在于所述疫苗的輸送系統(tǒng)，臨床用于預(yù)防人類宿主或人群的季節(jié)性或大流行流感感染之一或這兩者，所述人類宿主或人群年齡為65歲或以上的老年人、年齡為0 18歲的兒童及青少年，以及年齡為18歲以上的成年人。
全文摘要
一種脂質(zhì)微球組合物，其特點(diǎn)是包括脂質(zhì)微球乳劑和免疫原性組合物，其中脂質(zhì)微球乳劑重量的1～30％(w/w)為醫(yī)藥級(jí)油脂，脂質(zhì)微球乳劑重量的0.1～10％(w/w)為兩性離子/非離子表面活性劑組合，脂質(zhì)微球乳劑重量的0.01～5％(w/w)為穩(wěn)定劑，余量為水性溶液；免疫原性組合物是單價(jià)至多價(jià)，通常為3價(jià)組合物，其中包含來自一種或一種以上與大流行流感爆發(fā)相關(guān)或具有與大流行流感爆發(fā)相關(guān)的流感病毒株的病毒抗原或抗原性制劑。本發(fā)明不僅可作為疫苗優(yōu)良佐劑，還可作為疫苗的輸送系統(tǒng)，適用于疫苗的不同給藥途徑，增加臨床應(yīng)用的順應(yīng)性、多樣性和選擇性，達(dá)到更加廣泛、安全、有效的免疫效果。
文檔編號(hào)A61K39/145GK102293743SQ20101020824
公開日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2010年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月24日
發(fā)明者萬艾玲, 周荔葆, 李淑斌, 段鵬杰, 殷建文, 高軍, 魏曉瑩 申請(qǐng)人:遼寧成大生物股份有限公司