專利名稱：一種膠原蛋白人工皮膚的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種純天然膠原蛋白人工皮膚的制備方法，用于燒、燙傷及創(chuàng)傷引起 的皮膚缺損治療，覆蓋創(chuàng)面和供皮區(qū)，保持創(chuàng)面干凈，有效控制疼痛，并能誘導(dǎo)自體皮膚修 復(fù)，屬于生物醫(yī)藥及材料科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
皮膚是人體的最大器官，自體皮移植是治療皮膚缺損最有效的方法，但大面積的 皮膚缺損常使得自體皮供應(yīng)不足，是制約大面積燒、燙、創(chuàng)傷皮膚治療成功率的“瓶頸”。人 工皮膚作為一種皮膚創(chuàng)傷修復(fù)材料和損傷皮膚的替代品，可以使皮膚大面積和深度燒傷的 患者，在自體皮不夠的情況下，覆蓋創(chuàng)面并使之恢復(fù)因皮膚創(chuàng)傷喪失的生理功能。臨床燒傷科常用無菌紗布覆蓋切痂后的創(chuàng)面，但紗布不能降解吸收，不能誘導(dǎo)皮 膚組織再生修復(fù)且與創(chuàng)面粘結(jié)，除去紗布時(shí)給病人帶來很大痛苦。最理想的皮膚創(chuàng)面覆蓋物應(yīng)當(dāng)具有以下性質(zhì)無抗原性、可作為細(xì)菌屏障、較好的 柔韌性、能誘導(dǎo)自體皮膚再生、支架最終被降解、可適應(yīng)不規(guī)則創(chuàng)口表面、易于保存、一次手 術(shù)即可完成移植、價(jià)格不昂貴。符合上述條件的皮膚替代物目前還未存在。為克服自體供皮不足的困難，從自愿捐獻(xiàn)者獲得的同種異體皮是最常用的暫時(shí)代 用品，經(jīng)過加工處理后，用液氮冰凍保存，當(dāng)需要時(shí)，異體皮被迅速解凍應(yīng)用，異體皮將為燒 傷創(chuàng)面提供暫時(shí)的生物敷料，并與宿主建立短暫的血運(yùn)，直到宿主識(shí)別出異體皮上面表達(dá) 的外源性抗原表面物質(zhì)，啟動(dòng)機(jī)體的免疫機(jī)制，產(chǎn)生排斥反應(yīng)。但異體皮不易獲得，處理和 儲(chǔ)藏成本較高，只能為創(chuàng)面提供暫時(shí)的覆蓋，受體也常面臨病毒感染的威脅。臨床上也使用 豬皮作為人工皮膚，被加工后制成膜片或篩網(wǎng)狀的均質(zhì)真皮結(jié)構(gòu)，用于暫時(shí)覆蓋清潔創(chuàng)面、 淺11°傷口和供皮區(qū)，保持創(chuàng)面干凈并有效控制疼痛，但它們最終要被排斥，又由于其原料 來源的個(gè)體差異，導(dǎo)致產(chǎn)品的均一性及可重復(fù)性較差，至今尚無批量上市產(chǎn)品。也有用不同的材料制成的人工合成膜作為人工皮膚。明膠海綿是最早使用的止血 吸收敷料，但其引導(dǎo)細(xì)胞生長性能不如膠原。多糖類如甲殼糖，糖胺多糖，透明質(zhì)酸等類材 料有促進(jìn)細(xì)胞生長的功能，例如甲殼糖有消炎殺菌、促角質(zhì)細(xì)胞生長作用，為良好的細(xì)胞生 長基質(zhì)材料，但隨著用量增加，有抑制成纖維細(xì)胞生長的作用，同時(shí)材料的彈性低，質(zhì)脆。聚 氨酯，滌綸，尼龍，硅橡膠等為生物惰性材料，不降解，不能進(jìn)行生理代謝，只能用做外層敷 料。乙丙交酯等生物降解材料，可降解，可代謝，但如果其分子量小則強(qiáng)度不夠，分子量大難 溶于水，溶解時(shí)出現(xiàn)降解，影響材料的機(jī)械強(qiáng)度，并且其降解之后的產(chǎn)物使其周圍組織酸度 提高，出現(xiàn)無菌性炎癥。膠原蛋白為人工皮膚的重要組分，是細(xì)胞分化、生長的營養(yǎng)基質(zhì)，有增加結(jié)締組織 修復(fù)和再生的作用，但其存在的缺點(diǎn)是無彈性、強(qiáng)度低。常用的戊二醛交聯(lián)法可稍微增加其 強(qiáng)度，但導(dǎo)致脆性大大增加，且殘留的戊二醛對(duì)皮膚、黏膜有刺激性和致敏作用，有致癌、致 畸的可能。隨著組織工程學(xué)的發(fā)展，種植細(xì)胞的復(fù)合人工皮膚的研究已成為近年來研究的熱點(diǎn)，但仍停留在實(shí)驗(yàn)室探索階段，離產(chǎn)業(yè)化還有很遠(yuǎn)的距離。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種純天然膠原蛋白人工皮膚的制備方法，其制備的人工皮 膚無免疫排斥反應(yīng)，成本低廉，原料來源廣泛，具有較好的粘性、彈性和透氣隔菌的微小氣 孔，用于覆蓋皮膚缺損區(qū)作為表皮、真皮的臨時(shí)替代物，保持創(chuàng)面干凈并有效控制疼痛，誘 導(dǎo)自體皮膚再生修復(fù)。本發(fā)明提出的純天然膠原蛋白人工皮膚的制備方法，包括以下步驟(1)制備膠原蛋白溶液取哺乳動(dòng)物的肌腱，去除油脂，用滅菌溶液浸泡消毒滅 菌，取出后漂洗干凈，然后將肌腱浸泡于體積百分比為1 5%的酸溶液中，并加入胃蛋白 酶溶液，使每毫升酸溶液中的胃蛋白酶為20 25國際活性單位，搖晃混勻，在室溫下浸泡 至溶液粘度為700 lOOOcp (厘泊)，過濾除渣得高濃度膠原蛋白溶液；(2)在上述膠原蛋白溶液中按1 5%的體積比加入增塑劑(即每毫升膠原溶液 中加入0. 01 0. 05毫升的增塑劑)，混合后倒入一平面上自流成0. 1 0. 5mm的薄膜；(3)將上述薄膜冷凍干燥；(4)將凍干后的薄膜以15 20kGy劑量6tlCo輻照滅菌。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明根據(jù)天然皮膚膠原蛋白豐富及異種膠原蛋白免疫原性 低、生物相容性好、能誘導(dǎo)組織再生的特點(diǎn)，采用最簡便的方法提取出高純度的動(dòng)物膠原蛋 白，制備出的人工皮膚既具有豬皮人工皮膚和同種異體皮膚的優(yōu)越性能，同時(shí)克服了其免 疫排斥反應(yīng)(經(jīng)本發(fā)明提出的工藝，膠原蛋白的免疫原性已被去除)、價(jià)格昂貴和來源受限 的缺陷，通過加入適當(dāng)比例的增塑劑大大提高了膠原蛋白膜的彈性和韌性，且提高了其對(duì) 創(chuàng)面的粘附性。獨(dú)特的冷凍干燥工藝使其具有透氣隔菌的微小氣孔，且大幅度地節(jié)省了生 產(chǎn)時(shí)間和能耗，達(dá)到產(chǎn)品質(zhì)量的均一性和可重復(fù)性，可實(shí)現(xiàn)批量生產(chǎn)，成本大大降低。本發(fā) 明可望為臨床提供一種性能優(yōu)越、價(jià)格適中的新型人工皮膚產(chǎn)品，用于燒、燙傷及創(chuàng)傷引起 的皮膚缺損治療，保持創(chuàng)面干凈，有效控制疼痛，并能誘導(dǎo)自體皮膚修復(fù)。把肌腱去除油脂 后用滅菌溶液浸泡消毒滅菌，而不用其他方式消毒滅菌，是為了防止蛋白質(zhì)變性。制備膠原蛋白溶液均在無菌條件下進(jìn)行，也就是說，用滅菌溶液浸泡肌腱消毒滅 菌，取出后用已滅菌的去離子水充分漂洗，然后將肌腱浸泡于已滅菌的酸溶液中(容器需 事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已除菌的胃蛋白酶溶液，并置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻。該嚴(yán) 格的無菌工藝使產(chǎn)品的熱源(內(nèi)毒素)含量控制在很低水平。肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的酸溶液中，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻，在 室溫下浸泡至適宜粘度即過濾除渣得高濃度膠原蛋白溶液。避免了敞開攪拌帶來的微生物 污染，無需粉碎、鹽析、透析等工藝步驟既可大大節(jié)省成本，又有利于大批量生產(chǎn)。優(yōu)選的冷凍干燥的具體過程為先將上述薄膜在-15°C至_25°C下預(yù)凍6小時(shí)以 上，然后置于冷凍干燥機(jī)中在冷凍倉的溫度保持在15 32°C下抽真空升華18 24小時(shí)， 然后去真空出冷凍倉。抽 真空干燥前將上述膠原蛋白薄膜在-15°C至_25°C冰箱中預(yù)凍，即可保證冰凍 的透徹、避免在隨后的真空干燥中塌陷變形，又大大地節(jié)省了能耗。常規(guī)方法是在凍干機(jī)中 預(yù)凍的，這樣會(huì)多消耗大量能源。
輻照滅菌時(shí)，將輻照劑量控制在15 20kGy既保證了產(chǎn)品滅菌的徹底，又減輕了 對(duì)蛋白質(zhì)的損傷，避免產(chǎn)品發(fā)黃、變脆。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例1(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的豬腿肌腱25g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用洗潔精清洗以徹底 去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用84消毒液浸泡15分鐘消毒滅菌，取出后用已滅菌的 去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 1 %的乙酸溶液中(容器需事 先經(jīng)滅菌處理)，并加入已除菌的40000U (國際單位)胃蛋白酶溶液，使每毫升乙酸溶液中 的胃蛋白酶為20國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻，在室溫下浸泡24小時(shí)至溶 液粘度為700cp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取0. 5ml聚乙二醇(分析純)加入50毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻 后倒入22 X 15 X 3cm不銹鋼平底盤中自流成0. Imm的薄膜。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_22°C冰箱中 預(yù)凍6小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華18小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在28 °C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按5X3cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)塑料膜密封、包裝后送輻照中 心以15kGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例2(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的牛腿的肌腱30g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用0. IN的NaoH溶 液清洗以徹底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用2%戊二醛溶液浸泡18分鐘消毒滅菌， 取出后用已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 3%的磷 酸溶液中(容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的44000U (國際單位)胃蛋白酶溶 液，使每毫升磷酸溶液中的胃蛋白酶為22國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻， 在室溫下浸泡18小時(shí)至溶液粘度為750cp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取Iml山梨醇(分析純)加入80毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻后倒 入22 X 15 X 3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 2mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_17°C冰箱中 預(yù)凍8小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華20小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在30°C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按10X6cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)鋁箔膜密封、包裝后送輻照 中心以17kGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例3(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的馬腿的肌腱35g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用洗潔精清洗以徹底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用0. 4%的過氧乙酸溶液浸泡20分鐘消毒滅菌，取出 后用已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 2%的鹽酸溶 液中(容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的48000U(國際單位)胃蛋白酶溶液， 使每毫升鹽酸溶液中的胃蛋白酶為24國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻，在室 溫下浸泡12小時(shí)至溶液粘度為SOOcp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取5ml甘油(丙三醇)加入100毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻后倒入 22 X 15 X 3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 3mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純 天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在-20°C冰箱中 預(yù)凍10小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華24小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在25 °C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按10X5cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)塑料膜密封、包裝后送輻照 中心以ISkGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例4(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的羊腿的肌腱50g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用洗潔精清洗以徹 底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用11倍稀釋的新潔爾滅溶液浸泡25分鐘消毒滅菌， 取出后用已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 4%的硫 酸溶液中(容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的50000U(國際單位)胃蛋白酶溶 液，使每毫升硫酸溶液中的胃蛋白酶為25國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻， 在室溫下浸泡10小時(shí)至溶液粘度為850cp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取6ml木糖醇(分析純)加入200毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻后倒 入25 X 15 X 3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 5mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_16°C冰箱中 預(yù)凍12小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華22小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在32 °C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按8X4cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)鋁箔膜密封、包裝后送輻照中 心以20kGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例5(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的狗腿的肌腱50g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用洗潔精清洗以徹 底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用0. 5%洗必泰(氯己定)溶液浸泡15分鐘消毒滅 菌，取出后用已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 5% 的硝酸溶液中(容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的46000U(國際單位)胃蛋白 酶溶液，使每毫升硝酸溶液中的胃蛋白酶為23國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混 勻，在室溫下浸泡10小時(shí)至溶液粘度為lOOOcp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取8ml乙二醇(分析純)加入200毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻后倒 入25 X 15 X 3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 2mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。
(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_18°C冰箱中 預(yù)凍7小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華21小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在20°C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按8X4cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)塑料膜密封、包裝后送輻照中 心以16kGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例6(1)膠原 蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的驢腿的肌腱45g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用洗潔精清洗以徹 底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用70%的乙醇溶液浸泡30分鐘消毒滅菌，取出后用 已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 4%的磷酸溶液中 (容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的50000U(國際單位)胃蛋白酶溶液，使每 毫升磷酸溶液中的胃蛋白酶為25國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻，在室溫下 浸泡10小時(shí)至溶液粘度為900cp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取IOml新戊二醇(分析純)加入200毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻 后倒入22X12X3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 4mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_15°C冰箱中 預(yù)凍11小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華24小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在15 °C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按7X3. 5cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)塑料膜密封、包裝后送輻照 中心以16. 5kGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例7(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的騾腿的肌腱45 g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用0. IN的NaoH 溶液清洗以徹底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用70%的乙醇溶液浸泡30分鐘消毒滅 菌，取出后用已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 4% 的乙酸溶液中(容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的50000U(國際單位)胃蛋白 酶溶液，使每毫升乙酸溶液中的胃蛋白酶為25國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混 勻，在室溫下浸泡10小時(shí)至溶液粘度為900cp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取IOml季戊四醇(分析純)加入200毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻 后倒入22X12X3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 4mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_25°C冰箱中 預(yù)凍11小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華24小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在15 °C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按7X3. 5cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)塑料膜密封、包裝后送輻照 中心以16. 5kGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例8
(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的鹿腿的肌腱40g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用0. IN的NaoH溶 液清洗以徹底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用70%的乙醇溶液浸泡30分鐘消毒滅菌， 取出后用已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 4%的乙 酸溶液中(容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的48000U(國際單位)胃蛋白酶溶 液，使每毫升乙酸溶液中的胃蛋白酶為24國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混勻， 在室溫下浸泡10小時(shí)至溶液粘度為lOOOcp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取IOml季戊四醇(分析純)加入200毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻 后倒入22X12X3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 4mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_23°C冰箱中 預(yù)凍11小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華24小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在15 °C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按7X3. 5cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)塑料膜密封、包裝后送 輻照 中心以16. 5kGy劑量6tlCo輻照滅菌。實(shí)施例9(1)膠原蛋白溶液的制備取經(jīng)檢疫后合格的兔腿的肌腱50g，仔細(xì)剔除脂肪、肌肉組織后用洗潔精清洗以徹 底去除油脂，然后用自來水漂洗4次，用0. 5%洗必泰(氯己定)溶液浸泡15分鐘消毒滅 菌，取出后用已滅菌的去離子水漂洗4次，肌腱不必粉碎直接浸泡于已滅菌的2000ml 5% 的硝酸溶液中(容器需事先經(jīng)滅菌處理)，并加入已過濾除菌的46000U(國際單位)胃蛋白 酶溶液，使每毫升硝酸溶液中的胃蛋白酶為23國際活性單位，置于無菌環(huán)境下不斷搖晃混 勻，在室溫下浸泡10小時(shí)至溶液粘度為lOOOcp左右即過濾除渣得膠原蛋白溶液。(2)取8ml乙二醇(分析純)加入200毫升的上述膠原蛋白溶液中，充分混勻后倒 入25 X 15 X 3cm不銹鋼平底盤中自流成0. 2mm的薄膜，多余的溶液吸出備用。(3)將上述薄膜冷凍干燥即成具有粘性、彈性和多孔隙的純天然膠原蛋白人工皮 膚。冷凍干燥的溫度控制流程為先將上述自流成膠原蛋白薄膜的平底盤在_19°C冰箱中 預(yù)凍11小時(shí)，然后迅速置于冷凍干燥機(jī)中抽真空升華21小時(shí)，同時(shí)電加熱使冷凍倉的溫度 保持在20°C，去真空出冷凍倉。(4)將凍干后的薄膜按8X4cm規(guī)格裁切后用醫(yī)用級(jí)鋁箔膜密封、包裝后送輻照中 心以16kGy劑量6tlCo輻照滅菌。
權(quán)利要求
一種膠原蛋白人工皮膚的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)制備膠原蛋白溶液取哺乳動(dòng)物的肌腱，去除油脂后，用滅菌溶液浸泡消毒滅菌，取出后漂洗干凈，然后將肌腱浸泡于體積百分比為1～5％的酸溶液中，并加入胃蛋白酶溶液，使每毫升酸溶液中的胃蛋白酶為20～25國際活性單位，搖晃混勻，在室溫下浸泡至溶液粘度為700～1000cp，過濾除渣得膠原蛋白溶液；(2)在上述膠原蛋白溶液中按1～5％的體積比加入增塑劑，混合后倒入一平面上自流成0.1～0.5mm的薄膜；(3)將上述薄膜冷凍干燥；(4)將凍干后的薄膜以15～20kGy劑量60Co輻照滅菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述哺乳動(dòng)物的肌腱為豬腿、牛腿、羊腿、 狗腿、驢腿、騾腿、鹿腿、兔腿或馬腿肌腱的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述滅菌溶液為新潔爾滅、乙醇、戊二醛、 84消毒液、過氧乙酸中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于制備膠原蛋白溶液均在無菌條件下進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述酸溶液為乙酸、磷酸、硫酸、硝酸或鹽 酸溶液的一種。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的增塑劑為乙二醇，丙三醇，季戊四醇， 新戊二醇，木糖醇，山梨醇、聚乙二醇中的一種。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于冷凍干燥的具體過程為先將上述薄膜 在-15°C至_25°C條件下預(yù)凍6小時(shí)以上，然后置于冷凍干燥機(jī)中，在冷凍倉的溫度保持在 15 32°C下抽真空升華18 24小時(shí)，然后去真空出冷凍倉。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述預(yù)凍是抽真空干燥前將薄膜放置在冰箱 中預(yù)凍。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種純天然膠原蛋白人工皮膚的制備方法。根據(jù)天然皮膚膠原蛋白豐富及異種膠原蛋白免疫原性低、生物相容性好、能誘導(dǎo)組織再生的特點(diǎn)，先制備高濃度動(dòng)物膠原蛋白溶液，然后與一定比例的增塑劑充分混合，將混合液倒入平底盤中自流成薄膜，冷凍干燥即為具有較好粘性、彈性和多孔隙的人工皮膚。用本法制備出的人工皮膚具有臨床廣泛應(yīng)用的豬皮人工皮膚和同種異體皮膚的優(yōu)越性能，同時(shí)克服了其免疫排斥反應(yīng)和價(jià)格昂貴、來源受限的缺陷，提高了膠原蛋白膜的粘性和彈性，且具有能透氣隔菌的微小氣孔，可為臨床提供一種性能優(yōu)越、價(jià)格適中的新型人工皮膚產(chǎn)品，用于燒、燙傷及創(chuàng)傷引起的皮膚缺損治療，保持創(chuàng)面干凈，有效控制疼痛，并能誘導(dǎo)自體皮膚修復(fù)，突破制約皮膚缺損治療成功率的“瓶頸”——供皮不足。
文檔編號(hào)A61L27/56GK101874903SQ20091023499
公開日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2009年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月20日
發(fā)明者胡慶柳 申請(qǐng)人:胡慶柳