專(zhuān)利名稱：草花有效部位及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種草花(棉花花)有效部位及其制備方法和用途，尤其是該有效部位在制備預(yù)防或治療老年期癡呆藥物中的用途。
背景技術(shù)：
老年期癡呆是危害老年人身心健康的常見(jiàn)病，多發(fā)病。目前全世界65歲以上人群中老年期癡呆患病率約為10％，85歲以上可達(dá)47％，在發(fā)達(dá)國(guó)家中，該病在死亡原因中名列第4位，僅次于心臟病，癌和中風(fēng)。我國(guó)的老年期癡呆患病率略低于發(fā)達(dá)國(guó)家，但隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)、文化事業(yè)的發(fā)展，壽命延長(zhǎng)，老年人口占總?cè)丝诘谋壤龑⒓哟?。隨著老年人口增加，老年期癡呆患者急劇地增多。老年期癡呆患者的癥狀主要表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能減退，并伴有行為障礙及情緒異常波動(dòng)等，直至生活不能自理，給家庭和社會(huì)造成了巨大的壓力。因此開(kāi)發(fā)治療老年期癡呆藥物是當(dāng)務(wù)之急。在國(guó)外開(kāi)發(fā)治療老年期癡呆藥物的焦點(diǎn)主要集中在乙酰膽堿酯酶抑制劑，如1996年首次上市的乙酰膽堿酯酶抑制劑一他可林(Tacrine)，1997年上市的多奈哌齊以及正在進(jìn)行的乙酰膽堿酶抑制劑有Metrifonate，Velnacrine maleate等。由于乙酰膽堿酯酶全身分布，其副作用較大，限制了它們的治療效果。
草花(又稱棉花花)為錦葵科錦屬植物草棉或陸地棉的花瓣。維吾爾醫(yī)用于治療益心補(bǔ)腦，安神養(yǎng)神，消腫祛炎。用于腦弱神疲，心悸心煩，機(jī)體炎腫，皮膚瘙癢，燒傷熱痛等。草花的天然資源豐富，未見(jiàn)有毒性報(bào)告，迄今為止，從草花中提取有效部位用于預(yù)防或治療老年期癡呆癥未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種草花有效部位及其制備方法和用途，是在中國(guó)專(zhuān)利031591949基礎(chǔ)上的進(jìn)一步研究。本發(fā)明采用溶劑提取或大孔吸附樹(shù)脂法或溶劑提取和大孔吸附樹(shù)脂組合集成法制備的草花有效部位，該有效部位按常規(guī)制藥方法制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑；或?qū)⒂行Р课慌c中、西藥配伍制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑用于治療老年期癡呆的藥物。
本發(fā)明所述的采用溶劑提取或大孔吸附樹(shù)脂法或溶劑提取和大孔吸附樹(shù)脂組合集成法制備的草花有效部位，該有效部位含有50-90％重量的總黃酮成分，制備方法按下列步驟進(jìn)行a、將草花原藥材加6-10倍量的溶劑水或醇或水與醇的混合物，浸泡提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；b、將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用乙酸乙酯和/或正丁醇進(jìn)行萃??；c、將萃取物減壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為50-90％有效部位；d、或?qū)⒉襟Ea的濃縮物過(guò)濾并稀釋后通過(guò)大孔樹(shù)脂，用水或5-10％乙醇洗脫除掉雜質(zhì)后，再用濃度為15-95％乙醇洗脫，蒸干，得到含有50-90％草花總黃酮的有效部位。
步驟a的醇為甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，其濃度為45-95％。
步驟b中所述大孔樹(shù)脂是D101型或具有苯乙烯骨架的大孔樹(shù)脂。
將提取有效部位按常規(guī)制藥方法制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑；或?qū)⒂行Р课慌c中、西藥配伍制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑。
一種草花有效部位的制備方法，按下列步驟進(jìn)行a、將草花原藥材加6-10倍量的溶劑水或醇或水與醇的混合物，其中醇為甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，濃度為15-95％，浸泡提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；b、將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用乙酸乙酯和/或正丁醇進(jìn)行萃??；c、將萃取物減壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為50-90％有效部位；d、或?qū)⒉襟Ea的濃縮物過(guò)濾并稀釋后通過(guò)D101型或具有苯乙烯骨架大孔樹(shù)脂，用水或5-10％乙醇洗脫除掉雜質(zhì)后，再用濃度為15-95％乙醇洗脫，蒸干，得到含量為50-90％草花總黃酮有效部位。
一種草花有效部位作為制備預(yù)防和治療老年期癡呆的藥物的用途。
本發(fā)明草花(棉花花)原藥材經(jīng)干燥并粉碎，以利增大與溶劑的接觸面積，提高效率。
原藥材的提取溶劑使用水、醇類(lèi)、或水與醇類(lèi)的混合物，優(yōu)選的醇類(lèi)包括甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇等或水與醇類(lèi)的混合物，例如濃度為20-99％(體積比)的醇；提取時(shí)溶劑浸過(guò)藥材為宜，溶劑量為原藥重量的2-14倍；提取可以在靜態(tài)或動(dòng)態(tài)下，優(yōu)選在動(dòng)態(tài)條件下；為了提高提取的效率，可以使用超聲波等；提取的溫度是從室溫(例如20℃)到溶劑回流溫度的范圍內(nèi)，優(yōu)選在回流的溫度下；提取可連續(xù)或間歇進(jìn)行，間歇提取時(shí)可重復(fù)1-4次，優(yōu)選2-3次。
合并濾液，濾去藥渣，濃縮至無(wú)醇味，合并濃縮液過(guò)濾并稀釋后通過(guò)大孔樹(shù)脂，用水或5-10％乙醇洗脫除掉雜質(zhì)后，用30-80％乙醇洗脫，優(yōu)選是50-70％的乙醇洗脫，蒸干，得到含有50％-90％草花總黃酮的有效部位。
草花，加6-10倍量40-95％乙醇浸泡24h后滲漉，合并滲漉液，提取液減壓濃縮至無(wú)醇味，用石油醚脫脂，再用乙酸乙酯和/或正丁醇翠取，優(yōu)選使用正丁醇翠取，減壓蒸干，得到草花總黃酮含量為50％-90％有效部位。
本發(fā)明以草花有效部位作為活性成份的藥物組合物。該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。可通過(guò)將草花有效部位與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動(dòng)物使用的任何劑型。草花有效部位在其藥物組合物中的含量通常為0.1-95％重量。
草花有效部位或含有它的藥物組合物以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。
給藥劑型為液體劑型或固體劑型或半固體劑型。液體劑型為溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括o/w型、w/o型和復(fù)乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型為片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑和噴霧劑等；半固體劑型為軟膏劑、凝膠劑和糊劑等。
草花有效部位制成普通制劑或緩釋制劑或控釋制劑或靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將草花有效部位制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑和助流劑；稀釋劑包括淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣和碳酸鈣等；濕潤(rùn)劑包括水、乙醇和異丙醇等；粘合劑包括淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹(shù)脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇等；崩解劑包括干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯和十二烷基磺酸鈉等；潤(rùn)滑劑和助流劑包括滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟和聚乙二醇等。
還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
為了將給藥單元制成膠囊劑，將有效成分草花有效部位與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中；也可將有效成分草花有效部位先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆?；蛭⑼瑁僦糜谟材z囊或軟膠囊中；用于制備草花有效部位片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備草花有效部位的膠囊劑。
為將草花有效部位制成注射劑，用水或乙醇或異丙醇或丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入常用的增溶劑、助溶劑、pH調(diào)劑劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑；增溶劑或助溶劑為泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；pH調(diào)劑劑為磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。
此外，如需要向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。
草花有效部位可增強(qiáng)環(huán)己酰亞胺、東莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的記憶能力。明顯提高Aβ腦室注射所致癡呆小鼠記憶能力作用。草花總黃酮以140mg/kg劑量連續(xù)給藥14天對(duì)Aβ側(cè)腦室注射所致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有明顯影響。
草花總黃酮35mg/kg和140mg/kg劑量連續(xù)給藥14天對(duì)IBO基底前腦Meynert核注射所致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有明顯改善作用。
本實(shí)驗(yàn)室大鼠預(yù)實(shí)驗(yàn)給藥，給藥劑量為5.4g·kg-1，一次給藥后動(dòng)物未見(jiàn)明顯異常，犬灌胃單次給藥毒性試驗(yàn)，最大給藥劑量為5g·kg-1，藥后動(dòng)物未見(jiàn)異常。說(shuō)明草花有效部位毒副作用低。
為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。
草花有效部位藥物組合物的給藥劑量依照所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的個(gè)體情況，給藥途徑和劑型等可以有大范圍的變化。一般來(lái)講，草花有效部位的每天的合適劑量范圍為0.001-150mg/Kg體重，優(yōu)選為0.1-100mg/Kg體重，更優(yōu)選為1-60mg/Kg體重，最優(yōu)選為2-30mg/Kg體重。上述劑量可以一個(gè)劑量單位或分成幾個(gè)劑量單位給藥，這取決于醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及包括運(yùn)用其它治療手段的給藥方案。
本發(fā)明的草花有效部位或組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用。當(dāng)本發(fā)明的草花有效部位與其它治療藥物存在協(xié)同作用時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整它的劑量。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(溶劑法制備有效部位)將草花1公斤加10倍量55％乙醇浸泡24h后滲漉提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；將濃縮提取物用石油醚脫脂，溶于水后，用乙酸乙酯萃取進(jìn)行萃?。粚⑤腿∥餃p壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量過(guò)50％有效部位；實(shí)施例2(大孔樹(shù)脂法制備有效部位)將草花1公斤加6倍量水浸泡24h后滲漉提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮；將步驟a的1公斤用水提取3遍，每遍1小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮，濃縮液稀釋10倍后，緩慢通過(guò)預(yù)先處理好的2kg大孔樹(shù)脂柱，藥液全部通過(guò)D101大孔樹(shù)脂柱后用蒸餾水洗滌，再用5％乙醇洗脫，除掉雜質(zhì)，再用5倍柱體積20％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干，得到草花總黃酮含量為60％有效部位。
實(shí)施例3(溶劑法制備有效部位)將草花1公斤加8倍量95％乙醇浸泡24h后滲漉提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用正丁醇進(jìn)行萃?。粚⑤腿∥餃p壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為70％有效部位；實(shí)施例4(溶劑法制備有效部位)將草花1公斤加8倍量95％乙醇浸泡24h后滲漉提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用乙酸乙酯、正丁醇混合液進(jìn)行萃取；將萃取物減壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為65％有效部位；實(shí)施例5(溶劑法和大孔樹(shù)脂組合集成制備有效部位)將草花草花1公斤加7倍量15％甲醇浸泡24h后滲漉提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用乙酸乙酯進(jìn)行萃??；將萃取物減壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為60％有效部位；將步驟c中的有效部位溶解、過(guò)濾并稀釋后，緩慢通過(guò)預(yù)先處理好的2kg大孔樹(shù)脂柱D101，藥液全部通過(guò)大孔樹(shù)脂柱后用蒸餾水洗滌，再用5％乙醇洗脫，除掉雜質(zhì)，再用5倍柱體積20％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干，得到草花總黃酮含量過(guò)90％有效部位。
實(shí)施例6(溶劑法和大孔樹(shù)脂組合集成制備有效部位)將草花1公斤加8倍量95％乙醇浸泡24h后滲漉提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用正丁醇進(jìn)行萃?。粚⑤腿∥餃p壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為70％有效部位；將步驟c中的有效部位溶解，過(guò)濾并稀釋倍后，緩慢通過(guò)預(yù)先處理好的2kg大孔樹(shù)脂柱，藥液全部通過(guò)具有苯乙烯骨架大孔樹(shù)脂柱后用蒸餾水洗滌，再用5％乙醇洗脫，除掉雜質(zhì)，再用5倍柱體積20％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干，得到草花總黃酮含量90％有效部位。
實(shí)施例7(藥物制劑)取0.5-2份微晶纖維素，與1份草花有效部位混勻，以水為粘合劑，14目篩制粒，18目篩整粒，常規(guī)壓片，然后包衣即得。
實(shí)施例8(藥物制劑)取0.5-2份淀粉，與1份草花有效部位混勻，以水為粘合劑，14目篩制粒，18目篩整粒，裝入膠囊，即得。
實(shí)施例9(藥物制劑)取1-3份聚乙二醇7000，加熱溶化，加入草花有效部位1份，攪拌均勻，然后倒入滴丸機(jī)，90℃保溫，常規(guī)滴制，硅油冷卻，即得。
實(shí)驗(yàn)例10(藥理實(shí)驗(yàn))本發(fā)明草花有效部位作為制備預(yù)防和治療老年期癡呆的藥物的用途的藥理試驗(yàn)。
受試品草花總黃酮對(duì)環(huán)己酰亞胺致小鼠記憶獲得障礙動(dòng)物記憶能力的影響目的觀察受試品草花有效部位對(duì)記憶獲得障礙動(dòng)物記憶能力的影響。
材料及方法材料受試品草花總黃酮，黃色粉末，使用時(shí)用蒸餾水配制成均勻混懸液。
試劑環(huán)己酰亞胺，Sigma公司，批號(hào)091001；陽(yáng)性對(duì)照藥多奈派齊(安理申)，英國(guó)Boots公司制造，衛(wèi)材(中國(guó))藥業(yè)有限公司分裝，批號(hào)5817182。
動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重20-24克，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)SCXK(京)2004-0001。儀器Passive Avoidance Control，大正制藥株式會(huì)社贈(zèng)送。
方法小鼠隨機(jī)分為六組正常對(duì)照組、模型組、多奈派齊(0.75mg/kg)組、草花總黃酮低劑量(25mg/kg)組、草花總黃酮中劑量(50mg/kg)、草花總黃酮高劑量(100mg/kg)組。灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型組給予同體積蒸餾水。連續(xù)給藥三天，每天給藥一次，末次給藥后1小時(shí)(h)，模型組和給藥組腹腔注射(i.p.)環(huán)己酰亞胺(120mg/kg)一次，正常對(duì)照組i.p.同體積生理鹽水。注射后10分鐘，進(jìn)行避暗訓(xùn)練，記錄小鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遇到電擊所需的時(shí)間，24h后重新測(cè)試，記錄進(jìn)入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)。
結(jié)果與正常組小鼠第一次觸電潛伏期(285±34s)和5min內(nèi)觸電次數(shù)(0.2±0.4次/5min)比較，模型組第一次觸電潛伏期(36±24s)和5min內(nèi)觸電次數(shù)(3.4±2.2次/5min)有極顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明造模成功。草花總黃酮高、中、低三個(gè)劑量組第一次觸電潛伏期分別為162±109s、133±128s和126±121s，與模型組比較均有顯著性差異，而多奈派齊為111±121s，與模型組比較有所升高，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
草花總黃酮高劑量組、中劑量組以及多奈哌齊組小鼠5min內(nèi)觸電次數(shù)為1.3±1.7次/5min、1.5±1.5次/5min和1.5±1.0次/5min，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，而草花總黃酮低劑量(1.8±1.8次/5min)對(duì)小鼠5min內(nèi)觸電次數(shù)沒(méi)有影響。(見(jiàn)表1)表1.受試品草花總黃酮對(duì)環(huán)己酰亞胺所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠記憶能力的影響

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與空白組比較，#P＜0.05，##P＜0.01結(jié)論受試品草花總黃酮口服給藥(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)可明顯增強(qiáng)環(huán)己酰亞胺所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的記憶能力。
受試品草花對(duì)對(duì)東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙動(dòng)物記憶能力的影響目的觀察受試品草花總黃酮對(duì)M受體阻斷劑東莨菪堿所致記憶獲得障礙小鼠記憶能力的影響。
材料及方法材料受試品草花總黃酮，黃色粉末，使用時(shí)用蒸餾水配制成均勻混懸液。
試劑東莨菪堿，Merck公司，批號(hào)K29367747。
陽(yáng)性對(duì)照藥多奈派齊(安理申)，英國(guó)Boots公司制造，衛(wèi)材(中國(guó))藥業(yè)有限公司分裝，批號(hào)5817182。
動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重20-24克，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)SCXK(京)2004-0001。
儀器Passive Avoidance Control，日本大正制藥株式會(huì)社贈(zèng)送。
方法小鼠隨機(jī)分為六組正常對(duì)照組、模型組、多奈派齊(0.75mg/kg)組、草花總黃酮低劑量(25mg/kg)組、草花總黃酮中劑量(50mg/kg)、草花總黃酮高劑量(100mg/kg)組。灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型組給予同體積蒸餾水。連續(xù)給藥三天，每天給藥一次，末次給藥后1小時(shí)(h)，模型組和給藥組腹腔注射(i.p.)東莨菪堿(5mg/kg)一次，正常對(duì)照組i.p.生理鹽水。注射后10min，進(jìn)行避暗訓(xùn)練，記錄小鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遇到電擊所需的時(shí)間(s)。24h后重新測(cè)試，記錄進(jìn)入暗室的潛伏期和3min內(nèi)的電擊次數(shù)。
結(jié)果與正常組小鼠第一次觸電潛伏期(223±114s)和5min內(nèi)觸電次數(shù)(0.6±0.9次/5min)比較，模型組第一次觸電潛伏期(26±19s)和5min內(nèi)觸電次數(shù)(3.4±1.8次/5min)有極顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明造模成功。草花總黃酮高、中、低三個(gè)劑量組第一次觸電潛伏期分別為127±134s、109±132s和96±112s，而多奈派齊為108±118s，與模型組比較均有顯著性差異。
草花總黃酮高劑量組小鼠5min內(nèi)觸電次數(shù)為0.9±0.8次/5min，與模型組比較有極顯著差異(P＜0.01)，多奈派齊組為1.3±1.0次/5min，與模型組相比有顯著性差異(P＜0.05)，而AB-8-2中劑量組(2.0±1.7次/5min)和低劑量組(2.2±1.6次/5min)對(duì)小鼠5min內(nèi)觸電次數(shù)沒(méi)有影響。(見(jiàn)表1)表1.受試品AB-8-2對(duì)東莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠記憶能力的影響

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與空白組比較，#P＜0.05，##P＜0.01結(jié)論受試品草花總黃酮口服給藥在25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg劑量下可明顯增強(qiáng)東莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的記憶能力。
草花總黃酮對(duì)Aβ腦室注射致癡呆小鼠記憶能力的影響目的觀察受試品草花總黃酮對(duì)癡呆小鼠記憶能力的影響。
材料及方法材料受試品草花總黃酮，黃色粉末，使用時(shí)用蒸餾水配制成均勻混懸液。
試劑Aβ25-35，Sigma公司產(chǎn)品，貨號(hào)A-4559，批號(hào)114K4773。多奈派齊(安理申)，法國(guó)PFIZER PGM公司生產(chǎn)，衛(wèi)材(中國(guó))藥業(yè)有限公司分裝，批號(hào)4221903。水合三氯乙醛，北京市旭東化工廠產(chǎn)品，批號(hào)020327。
動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重20-24克。由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)SCXK(京)2004-0001。
儀器小鼠水迷宮中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所制作。SR-6N腦立體定位儀日本成茂公司(NARISHIGE)生產(chǎn)。
方法聚集態(tài)老化Aβ25-35制備1mg Aβ25-35肽段溶于500μl滅菌生理鹽水中，濃度為10μg/μl。封口膜封好后，置于37℃孵育7天，使其聚集、老化。
Aβ25-35腦室注射所致小鼠癡呆模型制備小鼠用10％水合氯醛(450mg/kg)麻醉，75％酒精局部消毒，以微量注射器于單側(cè)側(cè)腦室(AP1.0mm，L 4.5mm，H 3.0mm)緩慢注入3μl已老化的凝聚態(tài)Aβ25-35，注射時(shí)間為30s，留針30s，緩慢起針。局部消毒后縫合皮膚，肌注抗生素抗感染。假手術(shù)組的小鼠同側(cè)腦室注射等量的滅菌生理鹽水。
分組及給藥小鼠隨機(jī)分為四組假手術(shù)組、模型組、多奈派齊(0.75mg/kg)組、受試品草花總黃酮(100mg/kg)組。按上述劑量灌胃給藥，假手術(shù)和模型組給予同體積蒸餾水。連續(xù)給藥十二天，從第七天開(kāi)始，于給藥后1h，進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，第一天設(shè)置一個(gè)盲端，第二、三天設(shè)置三個(gè)盲端，第四天設(shè)置四個(gè)盲端，并在此條件下于第五天(給藥第十二天)進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，記錄小鼠從放入至爬上臺(tái)階所需的時(shí)間(s)及進(jìn)入盲端次數(shù)。每次實(shí)驗(yàn)均重復(fù)兩次，每次間隔2-3分鐘。
數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)分析采取t檢驗(yàn)。
結(jié)果模型組小鼠爬上臺(tái)階所需時(shí)間(55.9±47.4s)和進(jìn)入盲端次數(shù)(6.2±6.4次)與假手術(shù)組小鼠(15.1±9.9s和1.4±1.0次)比較有顯著性差異(P＜0.05)，陽(yáng)性對(duì)照藥多奈派齊組小鼠(0.75mg/kg)的爬上臺(tái)階所需時(shí)間(19.9±8.6s)和進(jìn)入盲端次數(shù)(1.7±1.3次)與模型組小鼠比較有顯著性差異(P＜0.05)，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)造模是成功的。與模型組相比，草花總黃酮(100mg/kg)組小鼠爬上臺(tái)階所需時(shí)間(21.3±12.4s)和進(jìn)入盲端次數(shù)(0.9±1.1次)明顯減少，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示有顯著性差異(P＜0.05)(見(jiàn)表1)。
表1.草花總黃酮對(duì)Aβ腦室注射所致癡呆小鼠記憶能力的影響

N＝12，與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與假手術(shù)組比較，#P＜0.05，##P＜0.01結(jié)論受試品草花總黃酮口服給藥在100mg/kg劑量下具有明顯提高Aβ腦室注射所致癡呆小鼠記憶能力作用。
草花總黃酮對(duì)腦室注射Aβ致大鼠記憶獲得障礙學(xué)習(xí)記憶能力的影響
材料及方法材料受試品草花總黃酮，黃色粉末，由中國(guó)科學(xué)院理化技術(shù)研究所提供，以蒸餾水配制成濃度分別為14mg/mL，7mg/mL，3.5mg/mL和1.75mg/mL的均勻混懸液備用。
陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸多奈哌齊片劑(商品名安理申)，法國(guó)PFIZER PGM公司制造，衛(wèi)材藥業(yè)有限公司分裝，產(chǎn)品批號(hào)4222403，分裝批號(hào)4222403A，有效期2005年1月7日至2007年12月。以生理鹽水配制成濃度為0.06mg/mL的均勻混懸液備用。
造模試劑Aβ25-35(Amyloid β-Protein Fragment 25-35)，Sigma公司產(chǎn)品，貨號(hào)A-4559，批號(hào)115K4778。麻醉劑戊巴比妥鈉，北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)020919；將200mg的戊巴比妥鈉溶于20mL的生理鹽水中，配成1％的溶液。
其他藥品和試劑注射用青霉素粉針，華北制藥股份有限公司，批號(hào)E0503315，80萬(wàn)單位/支，有效期至2007年2月，臨用前無(wú)菌生理鹽水配成80萬(wàn)單位/4mL的注射液。5％H2O2(天津市東方化工廠生產(chǎn))取25mL的30％H2O2，加蒸餾水125mL至150mL。
0.2 M磷酸鹽緩沖液(PBS溶液)配制試劑 質(zhì)量(g)NaH2PO4·2H2O 23.712Na2HPO4·12H2O 231.984NaCl 64ddH2O 4000mL0.1M PBS溶液(pH7.4)將0.2M PBS溶液(pH7.4)稀釋二倍即得，4℃保存。
4％多聚甲醛磷酸緩沖液(pH7.4)多聚甲醛160g溶于0.1M PBS溶液2000mL，混合加熱至60℃，冷卻后調(diào)pH為7.4，加0.1M PBS至2000mL，4℃保存。
儀器SR-6N腦立體定位儀日本成茂公司(NARISHIGE)生產(chǎn)。STRON6-90型牙科鉆，韓國(guó)SAESHIN公司生產(chǎn)。大鼠Morris水迷宮北京新天地科技公司生產(chǎn)。大鼠避暗箱中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所研制。
動(dòng)物SD大鼠，雄性，體重240±20g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)SCXK(京)2002-0003。
實(shí)驗(yàn)方法Aβ25-35的聚集老化無(wú)菌條件下在Aβ25-35玻璃瓶中加入高壓滅菌的雙蒸水50μ L，制成20μg/μL的儲(chǔ)備液，再加入450μL的無(wú)菌生理鹽水，配成2μg/μL的工作液。37℃孵育聚集老化4天。
實(shí)驗(yàn)分組將84只大鼠隨機(jī)分為7組假手術(shù)組、模型組、多奈哌齊陽(yáng)性藥物(0.6mg/kg)組，草花總黃酮217.5mg/kg體重治療組，草花總黃酮35mg/kg體重治療組，草花總黃酮70mg/kg體重治療組，草花總黃酮140mg/kg體重治療組，每組12只，灌胃給藥(1mL/100g)，假手術(shù)組和模型組大鼠灌胃給予與藥物組同等容量的蒸餾水。
模型制備動(dòng)物戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉(0.5mL/100g)，固定于腦立體定位儀上，縱向切開(kāi)頭頂部皮膚，分離皮下組織，以5％H2O2適當(dāng)處理顱骨使骨縫清晰。大鼠側(cè)腦室立體定位儀坐標(biāo)為前囟后1.0mm，矢狀縫旁2.0mm，硬腦膜下4.0mm，以骨鉆打開(kāi)顱骨后，微量進(jìn)樣器自腦表面垂直進(jìn)針進(jìn)行注射，Aβ濃度2μg/μL，總體積5μL，2min內(nèi)注射完畢，停針5min，退針1min。注射后粘合皮膚，肌肉注射青霉素預(yù)防感染。假手術(shù)組側(cè)腦室相同坐標(biāo)位點(diǎn)注射等容量的生理鹽水。
給藥各組動(dòng)物于手術(shù)后第二天開(kāi)始進(jìn)行灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組給予等體積的蒸餾水，連續(xù)給藥14天，每天給藥一次。2.5Morris水迷宮，動(dòng)物于給藥第10天開(kāi)始進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，每天訓(xùn)練兩次，每次每只2min，于給藥第12天進(jìn)行水迷宮測(cè)試。Morris水迷宮主要由一不銹鋼制成的園柱形黑色水池和一可移動(dòng)位置的平臺(tái)組成。預(yù)先在水池里注入清水，使水面高出平臺(tái)2cm，水溫控制在20±0.5℃，水中加入黑色墨水，成黑水白鼠對(duì)比。平臺(tái)置于某一象限的中間，大鼠入池位置為站臺(tái)所在位置的對(duì)象限，于象限邊1/2弧度處頭朝池壁入水，每次訓(xùn)練2min。水池上空通過(guò)一攝像機(jī)與監(jiān)視電視和計(jì)算機(jī)相連接。當(dāng)設(shè)定的訓(xùn)練時(shí)間已到或動(dòng)物已爬上平臺(tái)，計(jì)算機(jī)停止跟蹤并記錄下游泳軌跡和自動(dòng)計(jì)算出動(dòng)物在水池中所游過(guò)的路程，找到平臺(tái)所需的時(shí)間(即潛伏期)等指標(biāo)。若動(dòng)物在2min之內(nèi)尚未找到平臺(tái)，則將動(dòng)物拿到平臺(tái)上并使它在上面停留20s，若大鼠在2min內(nèi)找到平臺(tái)，記錄自動(dòng)停止，也讓其在平臺(tái)上停留20s(大鼠找到平臺(tái)后，記錄自動(dòng)停止，然后大鼠基本上就停留在臺(tái)子上不再跳下來(lái)。如果跳下平臺(tái)，就將其重新放回臺(tái)子。然后用秒表計(jì)時(shí)20s)，方結(jié)束一次訓(xùn)練。于給藥第12天進(jìn)行測(cè)試。設(shè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)間為60s。
避暗箱于給藥第13天進(jìn)行避暗箱訓(xùn)練，24h后進(jìn)行避暗箱測(cè)試。避暗箱是由一個(gè)明室和一個(gè)暗室組成的裝置。兩個(gè)室之間有一個(gè)圓形洞口連接。暗室通以40V電壓，并與一記時(shí)器相連，記時(shí)器可以自動(dòng)記錄潛伏期時(shí)間。將大鼠面部背向洞口放置入明室，同時(shí)啟記時(shí)器，動(dòng)物穿過(guò)洞口進(jìn)入暗室受到電擊，即可取出大鼠。24h后正式測(cè)驗(yàn)，記錄每只動(dòng)物從放入明室至首次進(jìn)入暗室遇到電擊所需的時(shí)間(潛伏期)，并記錄每只動(dòng)物3min內(nèi)受到電擊的次數(shù)。
數(shù)據(jù)處理與分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果以(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，各組間結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析和均數(shù)間的多重比較分析(α＝0.05)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表1所示，造模13天后，模型組大鼠尋找平臺(tái)的潛伏期明顯延長(zhǎng)，表明Aβ(10μg/只)腦室注射可造成大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙。與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照藥多奈哌齊組大鼠尋找平臺(tái)潛伏期時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)，表明本試驗(yàn)體系的建立是成功的。與模型組大鼠相比，受試品各給藥組大鼠尋找平臺(tái)的潛伏期均有所縮短，其中AB-8-270mg/kg及140mg/kg兩個(gè)劑量組大鼠尋找平臺(tái)潛伏期的縮短有顯著性差異(P＜0.05)，且與陽(yáng)性對(duì)照藥多奈哌齊組動(dòng)物相比無(wú)顯著性差異。
表1.草花總黃酮對(duì)Aβ腦室注射所致癡呆大鼠Morris水迷宮空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響

每組n＝12；與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05避暗箱結(jié)果由表2所示，與假手術(shù)組相比，造模15天后模型組大鼠受到避暗箱內(nèi)電擊潛伏期有所縮短，3min內(nèi)受到電擊次數(shù)明顯增多，表明Aβ腦室注射可造成大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。
與模型組相比，連續(xù)給藥14天后各給藥組大鼠受到避暗箱內(nèi)電擊的潛伏期均有所延長(zhǎng)，3min內(nèi)受到電擊的次數(shù)均有所減少。多奈哌齊組和AB-8-2(70mg/kg)組大鼠3min內(nèi)受到電擊的次數(shù)有明顯減少(P＜0.05)。
表2草花總黃酮對(duì)Aβ腦室注射所致癡呆大鼠避暗箱學(xué)習(xí)記憶能力的影響

每組n＝12；與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05結(jié)論草花總黃酮在70mg/kg和140mg/kg劑量下連續(xù)給藥14天對(duì)Aβ側(cè)腦室注射所致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有明顯改善作用。
草花總黃酮對(duì)基底前腦Meynert核注射IBO致大鼠記憶獲得障礙的影響材料藥品及試劑受試品草花總黃酮，黃色粉末，由中國(guó)科學(xué)院理化技術(shù)研究所教授提供，批號(hào)04-1，以蒸餾水配制成濃度分別為14mg/mL，7mg/mL和3.5mg/mL的均勻混懸液備用。
陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸多奈哌齊原料藥，重慶桑田藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)20060401。以生理鹽水配制成濃度為0.06mg/mL的均勻混懸液備用。
造模試劑鵝膏蕈氨酸(Ibotenic acid，IBO)1mg包裝，Sigma公司產(chǎn)品，貨號(hào)I2765，批號(hào)066K3775，將1mg IBO溶于250μL的無(wú)菌生理鹽水中，配成4μg/μL溶液備用。
麻醉劑戊巴比妥鈉，北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)020919；將200mg的戊巴比妥鈉溶于20mL的生理鹽水中，配成1％的溶液。
其他藥品和試劑注射用青霉素粉針，華北制藥股份有限公司，批號(hào)E0503315，80萬(wàn)單位/支，有效期至2007年2月，臨用前無(wú)菌生理鹽水配成80萬(wàn)單位/4mL的注射液。5％H2O2(天津市東方化工廠生產(chǎn))，取25mL的30％H2O2，加蒸餾水125mL至150mL。
0.2M磷酸鹽緩沖液(PBS溶液)配制試劑 質(zhì)量(g)NaH2PO4·2H2O 23.712Na2HPO4·12H2O231.984NaCl 64ddH2O 4000mL0.1M PBS溶液(pH7.4)將0.2M PBS溶液(pH7.4)稀釋二倍即得，4℃保存。4％多聚甲醛磷酸緩沖液(pH7.4)多聚甲醛160g溶于0.1MPBS溶液2000mL，混合加熱至60℃，冷卻后調(diào)pH為7.4，加0.1M PBS至2000mL，4℃保存。
儀器SR-6N腦立體定位儀日本成茂公司(NARISHIGE)生產(chǎn)。STRONG-90型牙科鉆，韓國(guó)SAESHIN公司生產(chǎn)。大鼠Morris水迷宮北京新天地科技公司生產(chǎn)。大鼠避暗箱中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所研制。
動(dòng)物SD大鼠，雄性，體重210±10g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)SCXK(京)2002-0003。
方法實(shí)驗(yàn)分組將72只大鼠隨機(jī)分為6組假手術(shù)組，模型組，多奈哌齊陽(yáng)性藥物(0.6mg/kg)組，草花總黃酮低劑量(35mg/kg)組，草花總黃酮中劑量(70mg/kg)組，草花總黃酮高劑量(140mg/kg)組，每組12只。灌胃給藥(1mL/100g)，假手術(shù)組和模型組大鼠灌胃給予與藥物組同等容量的蒸餾水。
模型制備對(duì)動(dòng)物腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉(50mg/kg)，固定于腦立體定位儀上，縱向切開(kāi)頭頂部皮膚，分離皮下組織，以5％H2O2適當(dāng)處理顱骨使骨縫清晰。大鼠基底前腦Meynert核立體定位儀坐標(biāo)為前囟后0.9mm，矢狀縫旁2.6mm，硬腦膜下6.9mm，以骨鉆打開(kāi)顱骨后，微量進(jìn)樣器自腦表面垂直進(jìn)針，進(jìn)行雙側(cè)注射，IBO濃度4μg/μL，每側(cè)1μL，2min內(nèi)注射完畢，停針5min，退針1min。注射后粘合皮膚，肌肉注射青霉素預(yù)防感染。假手術(shù)組基底前腦相同坐標(biāo)注射等容量的生理鹽水。
給藥各組動(dòng)物于手術(shù)后第二天開(kāi)始進(jìn)行灌胃給藥(1mL/100g體重)，假手術(shù)和模型對(duì)照組灌胃給予等體積的蒸餾水，連續(xù)給藥14天，每天給藥一次。
Morris水迷宮動(dòng)物于給藥第10天開(kāi)始進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，每天訓(xùn)練兩次，每次每只120s，于給藥第12天進(jìn)行水迷宮測(cè)試。
Morris水迷宮主要由一不銹鋼制成的園柱形黑色水池和一可移動(dòng)位置的平臺(tái)組成。預(yù)先在水池里注入清水，使水面高出平臺(tái)2cm，水溫控制在20±0.5℃，水中加入黑色墨水，成黑水白鼠對(duì)比。平臺(tái)置于某一象限的中間，大鼠入池位置為站臺(tái)所在位置的對(duì)象限，于象限邊1/2弧度處頭朝池壁入水，每次訓(xùn)練120s。水池上空通過(guò)一攝像機(jī)與監(jiān)視電視和計(jì)算機(jī)相連接。當(dāng)設(shè)定的訓(xùn)練時(shí)間已到或動(dòng)物已爬上平臺(tái)，計(jì)算機(jī)停止跟蹤并記錄下游泳軌跡和自動(dòng)計(jì)算出動(dòng)物在水池中所游過(guò)的路程，找到平臺(tái)所需的時(shí)間(即潛伏期)等指標(biāo)。若動(dòng)物在120s之內(nèi)尚未找到平臺(tái)，則將動(dòng)物拿到平臺(tái)上并使它在上面停留20s，若大鼠在120s內(nèi)找到平臺(tái)，記錄自動(dòng)停止，也讓其在平臺(tái)上停留20s，方結(jié)束一次訓(xùn)練。于給藥第12天進(jìn)行測(cè)試。設(shè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)間為60s。
避暗箱于給藥第13天進(jìn)行避暗箱訓(xùn)練，24h后進(jìn)行避暗箱測(cè)試。避暗箱是由一個(gè)明室和一個(gè)暗室組成的裝置。兩個(gè)室之間有一個(gè)圓形洞口連接。暗室通以40V電壓，并與一記時(shí)器相連，記時(shí)器可以自動(dòng)記錄潛伏期時(shí)間。將大鼠面部背向洞口放置入明室，同時(shí)啟記時(shí)器，動(dòng)物穿過(guò)洞口進(jìn)入暗室受到電擊，即可取出大鼠。24h后正式測(cè)驗(yàn)，記錄每只動(dòng)物從放入明室至進(jìn)入暗室遇到電擊所需的時(shí)間(潛伏期)，并記錄每只動(dòng)物3min內(nèi)受到電擊的次數(shù)。
數(shù)據(jù)處理與分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果以(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，各組間結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析和均數(shù)間的多重比較分析(α＝0.05)。
結(jié)果Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表1所示，造模第13天，模型組大鼠尋找平臺(tái)的潛伏期明顯延長(zhǎng)，表明IBO(8μg/只)基底前腦Meynert核注射可造成大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙。與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照藥多奈哌齊組大鼠尋找平臺(tái)潛伏期明顯縮短(P＜0.05)，表明本試驗(yàn)體系的建立是成功的。與模型組大鼠相比，受試品各給藥組大鼠尋找平臺(tái)的潛伏期均有所縮短，其中AB-8-235mg/kg及140mg/kg兩個(gè)劑量組大鼠尋找平臺(tái)潛伏期有顯著性差異(P＜0.05)，且與陽(yáng)性對(duì)照藥多奈哌齊組動(dòng)物相比無(wú)顯著性差異。
表1.草花總黃酮對(duì)IBO基底前腦Meynert核注射所致癡呆大鼠Morris水迷宮空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響

每組n＝12，*P＜0.05，與假手術(shù)組比較；#P＜0.05，與模型組比較避暗箱結(jié)果由表2所示，與假手術(shù)組相比，造模第15天模型組大鼠受到避暗箱內(nèi)電擊的潛伏期有所縮短，3min內(nèi)受到電擊的次數(shù)增多。與模型組相比，連續(xù)給藥14天各給藥組大鼠受到避暗箱內(nèi)電擊的潛伏期均有所延長(zhǎng)，3min內(nèi)受到電擊的次數(shù)均有所減少，但沒(méi)有明顯差異。
表2.草花總黃酮對(duì)IBO基底前腦Meynert核注射所致癡呆大鼠避暗箱學(xué)習(xí)記憶能力的影響

每組n＝12結(jié)論草花總黃酮在35mg/kg和140mg/kg劑量下連續(xù)給藥14天對(duì)IBO基底前腦Meynert核注射所致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有明顯改善作用。
權(quán)利要求
1.一種采用溶劑提取或大孔吸附樹(shù)脂法或溶劑提取和大孔吸附樹(shù)脂組合集成法制備的草花有效部位，其特征在于該有效部位含有50-90％重量的總黃酮成分，制備方法按下列步驟進(jìn)行a、將草花原藥材加6-10倍量的溶劑水或醇或水與醇的混合物，浸泡提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；b、將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用乙酸乙酯和/或正丁醇進(jìn)行萃取；c、將萃取物減壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為50-90％有效部位；d、或?qū)⒉襟Ea的濃縮物過(guò)濾并稀釋后通過(guò)大孔樹(shù)脂，用水或5-10％乙醇洗脫除掉雜質(zhì)后，再用濃度為15-95％乙醇洗脫，蒸干，得到含有50-90％草花總黃酮的有效部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草花有效部位，其特征在于步驟a的醇為甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，其濃度為45-95％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草花有效部位，其特征在于步驟b中所述大孔樹(shù)脂是D101型或具有苯乙烯骨架的大孔樹(shù)脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草花有效部位，其特征在于將提取有效部位按常規(guī)制藥方法制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑；或?qū)⒂行Р课慌c中、西藥配伍制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑。
5.一種草花有效部位的制備方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行a、將草花原藥材加6-10倍量的溶劑水或醇或水與醇的混合物，其中醇為甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，濃度為15-95％，浸泡提取，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮至無(wú)醇味；b、將濃縮提取物用石油醚脫脂，再用乙酸乙酯和/或正丁醇進(jìn)行萃取；c、將萃取物減壓蒸干，即可得到草花總黃酮含量為50-90％有效部位；d、或?qū)⒉襟Ea的濃縮物過(guò)濾并稀釋后通過(guò)D101型或具有苯乙烯骨架大孔樹(shù)脂，用水或5-10％乙醇洗脫除掉雜質(zhì)后，再用濃度為15-95％乙醇洗脫，蒸干，得到含量為50-90％草花總黃酮有效部位。
6.一種草花有效部位作為制備預(yù)防和治療老年期癡呆的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種草花有效部位及其制備方法和用途，是在中國(guó)專(zhuān)利031591949基礎(chǔ)上的進(jìn)一步研究。本發(fā)明采用溶劑法或大孔吸附樹(shù)脂法或溶劑法和大孔吸附樹(shù)脂組合集成法制備草花有效部位，該有效部位按常規(guī)制藥方法制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑；或?qū)⒂行Р课慌c中、西藥配伍制成膠囊或片劑或口服液或沖劑或注射液或緩釋制劑或控釋制劑用于治療老年期癡呆的藥物。
文檔編號(hào)A61P25/28GK101084946SQ20071012653
公開(kāi)日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2007年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日
發(fā)明者阿吉艾克拜爾·艾薩, 再帕爾·阿不力孜, 朱海波, 帕爾哈提·克熱木, 吳韜, 熱依木古麗, 趙永昕, 楊義 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所