抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群及其制備方法
【專利摘要】抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群及其制備方法，本發(fā)明涉及抗骨質(zhì)疏松的藥物及其制備方法。本發(fā)明是為解決現(xiàn)有治療骨質(zhì)疏松的藥物以西藥為主，而西藥對(duì)人體副作用大，且治療效果也不佳的問(wèn)題，本發(fā)明的制備得到總環(huán)烯醚萜苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85%～95%的有效部位群，其中莫諾苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%～65%，馬錢(qián)苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%～30%。方法：一、稱取山茱萸藥材煎煮后進(jìn)行濃縮，得到濃縮藥液；二、進(jìn)行水提醇沉，得到水提醇沉濃縮液；三、預(yù)處理大孔吸附樹(shù)脂，得到樹(shù)脂柱；四、使水提醇沉濃縮液通過(guò)樹(shù)脂柱，然后用乙醇洗脫，得到洗脫液；五、減壓蒸餾回收步驟四得到的洗脫液中的乙醇，然后濃縮，最后減壓干燥，得到山茱萸有效部位集物。
【專利說(shuō)明】抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及抗骨質(zhì)疏松的藥物及其制備方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]骨質(zhì)疏松是中年以上患者最普遍的疾病之一并代表了最普遍的公共健康問(wèn)題，超過(guò)50%的絕經(jīng)期婦女和超過(guò)20%年齡大于50歲的男性患有此病。在全世界范圍內(nèi)，有超過(guò)2億人患有骨質(zhì)疏松，其中在歐洲、日本和美國(guó)就有7500萬(wàn)。每年有超過(guò)150萬(wàn)人因骨質(zhì)疏松而引起的髖部、脊椎和腕部骨折。骨質(zhì)疏松性骨折可導(dǎo)致高死亡率、高致殘率，降低人的靈活性和生活質(zhì)量。超過(guò)50%患有髖部骨折的婦女需要輔助設(shè)備進(jìn)行日常生活活動(dòng)，其中有20%的人會(huì)在一年內(nèi)死去，還有相當(dāng)一部分人需要長(zhǎng)期照顧。由于人口老齡化在今后相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)必然將加大骨質(zhì)疏松和骨折所帶來(lái)的負(fù)擔(dān)。鑒于問(wèn)題的嚴(yán)重性，預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松將是所有國(guó)家健康機(jī)構(gòu)的主要任務(wù)之一。因此，研發(fā)防治骨質(zhì)疏松的現(xiàn)代中藥，將有重大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
[0003]針對(duì)骨質(zhì)疏松癥對(duì)中老年人健康和人類社會(huì)構(gòu)成嚴(yán)重威脅，以及目前尚缺乏療效確切且毒副作用小治療藥物的事實(shí)，以具有補(bǔ)腎作用的中藥經(jīng)典方劑六味地黃丸為切入點(diǎn)。六味地黃丸是傳統(tǒng)的補(bǔ)腎藥，主治小兒“五遲五軟”，通過(guò)補(bǔ)腎作用研究，以及腎主骨的理論和六味地黃丸治療骨質(zhì)疏松的臨床實(shí)踐，山茱萸是其主要藥物，將主治癥定位于防治骨質(zhì)疏松。以山茱萸防治骨質(zhì)疏松為切入點(diǎn)，迅速、準(zhǔn)確的鎖定潛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，結(jié)合藥效學(xué)驗(yàn)證及體外定向分離富集制備有效部位，進(jìn)行治療骨質(zhì)疏松的中藥新藥研究。
[0004]在骨質(zhì)疏松癥的治療方面目前尚缺乏有效的措施使骨質(zhì)疏松癥患者的骨量恢復(fù)正常，藥物應(yīng)用也十分有限，而且存在許多爭(zhēng)議。例如國(guó)外一般列為首選的雌激素替代療法雖然對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥有一定的改善作用，但需長(zhǎng)年服藥(二年以上)，其存在誘發(fā)生殖系統(tǒng)惡性腫瘤等嚴(yán)重副作用也已被證實(shí)。其它如鈣劑、維生素D、氟化物等的治療效果均受到質(zhì)疑。因此研究實(shí)用、方便、科學(xué)有效的藥物，仍然是廣大學(xué)者探索的目標(biāo)。中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥在擁有大量臨床實(shí)踐和豐富診療經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)骨質(zhì)疏松癥的防治作出了很多的貢獻(xiàn)。中醫(yī)理論認(rèn)為腎藏精生髓主骨。腎腎精虧損，精不生髓，骨失所養(yǎng)，其本在腎。精充實(shí)則骨健化生有源，骨得其養(yǎng)則堅(jiān)固有力；若腎精虧損則骨髓化生乏源，骨失其養(yǎng)就會(huì)出現(xiàn)骨骼脆弱，腰膝酸軟等癥狀。故其治療應(yīng)以補(bǔ)腎為本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明是為解決現(xiàn)有治療骨質(zhì)疏松的藥物以西藥為主，而西藥對(duì)人體副作用大，且治療效果也不佳的問(wèn)題，而提供抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群及其制備方法。
[0006]本發(fā)明的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群是以山茱萸為原料，利用大孔吸附樹(shù)脂技術(shù)制備得到總環(huán)烯醚萜苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85%~95%的有效部位群，其中所述的總環(huán)烯醚萜苷中莫諾苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%~65%，馬錢(qián)苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%~30%。
[0007]本發(fā)明的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法按以下步驟進(jìn)行:[0008]一、稱取山茱萸藥材，然后加入質(zhì)量為山茱萸藥材質(zhì)量5~7倍的水進(jìn)行煎煮，煎煮I~3次，每次煎煮1.5h~2.5h，每次煎煮后分離煎煮液和藥渣，收集煎煮液，然后對(duì)所得藥渣進(jìn)行下一次煎煮，合并各次煎煮液靜置20h~24h后，于常壓下用紗布過(guò)濾，得到濾液，將得到的濾液在溫度為60~80°C的條件下，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10~1.30，得到濃縮藥液；
[0009]二、向步驟一得到的濃縮藥液中加入體積濃度為70%~85%的乙醇，使?jié)饪s液醇沉至濃縮藥液中乙醇的體積濃度為0.5%~1.5%，靜止IOh~14h，抽濾，收集濾液，減壓蒸餾回收濾液中的乙醇，使濾液濃縮至濃度為(1.20~1.50)g生藥/mL，得到水提醇沉濃縮液；
[0010]三、用體積濃度為93%~97%的乙醇浸泡大孔吸附樹(shù)脂20h~24h，漂去上層漂浮的雜質(zhì)及細(xì)小顆粒，待大孔吸附樹(shù)脂充分溶脹后用抽濾瓶抽干乙醇大孔樹(shù)脂內(nèi)、外部含有的乙醇，完成預(yù)處理，然后將預(yù)處理后的大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，裝柱后用20%~30%乙醇洗脫至流出液加水不變渾濁為止，再用體積為4~6個(gè)樹(shù)脂柱體積的水洗脫至無(wú)醇味，得到樹(shù)脂柱；
[0011]四、將步驟二得到的水提醇沉濃縮液以1.0BV/h~1.5BV/h的速度通過(guò)步驟三得到的樹(shù)脂柱，然后用體積為13~17個(gè)樹(shù)脂柱體積的水以洗脫速度為2BV/h~2.5BV/h洗脫樹(shù)脂柱，棄去水洗液，再用體積為8~12個(gè)樹(shù)脂柱體積、體積濃度為8%~12%的乙醇以洗脫速度為1.0BV/h~2.0BV/h洗脫樹(shù)脂柱，得到第一次洗脫液，重復(fù)洗脫操作8~10次，收集各次洗脫液，得到乙醇洗脫液；其中步驟二得到的水提醇沉濃縮液中生藥質(zhì)量與步驟三中預(yù)處理前的大孔吸附樹(shù)脂的質(zhì)量比為1: (4~5);
[0012]五、減壓蒸餾回收步驟四得到的乙醇洗脫液中的乙醇，然后濃縮至相對(duì)密度為1.1~1.5，最后進(jìn)行減壓干燥，得到抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群。
[0013]本發(fā)明的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群是以山茱萸為原料，利用大孔吸附樹(shù)脂技術(shù)成功制備出了主要成分莫諾苷含量高于52%、馬錢(qián)苷含量高于16%、總環(huán)烯醚萜苷含量高于95%的有效部位群。本發(fā)明確定了可行性強(qiáng)、重現(xiàn)性高，并可工業(yè)化生產(chǎn)的提取富集工藝。將山茱萸莫諾苷等成分群作為六味地黃丸治療骨質(zhì)疏松的有效組分進(jìn)行深入研究，藥理研究表明，通過(guò)促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化、抑制成骨細(xì)胞的凋亡、上調(diào)0PG/RANKL的比率、增加骨形成和減少骨吸收從而明顯回調(diào)地塞米松和去卵巢誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松模型的各項(xiàng)指標(biāo)的具有良好抗骨質(zhì)疏松作用的有效部位群。該新組方具有療效確切、針對(duì)性強(qiáng)的特點(diǎn)，可應(yīng)用與醫(yī)藥領(lǐng)域。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1為試驗(yàn)一的高壓液相色譜圖；其中a為供試品即實(shí)施例得到的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群，b為混合對(duì)照品，I代表莫諾苷，2代表馬錢(qián)苷；
[0015]圖2為試驗(yàn)三中2.1-1血清堿性磷酸酶含量對(duì)比柱形圖；
[0016]圖3為試驗(yàn)三中2.1-1I血清抗酒石酸酸性磷酸酶含量對(duì)比柱形圖；
[0017]圖4為試驗(yàn)三中2.1-1I1、血清鈣含量對(duì)比柱形圖；
[0018]圖5為試驗(yàn)三中2.1-1V、血清磷含量對(duì)比柱形圖；
[0019]圖6為試驗(yàn)三中2.2的LVh的制備及骨密度的檢測(cè)對(duì)比柱形圖；
[0020]圖7為試驗(yàn)三中2.3的L5的制備及凹入試驗(yàn)最大載荷的檢測(cè)對(duì)比柱形圖；[0021]圖8為試驗(yàn)三中2.4的第0周、第6周和第12周的大鼠體重對(duì)比柱形圖；其中a為第0周，b為第6周，c為第12周；
[0022]圖9為試驗(yàn)四中2.1-1血清堿性磷酸酶含量對(duì)比柱形圖；
[0023]圖10為試驗(yàn)四中2.1-1I血清抗酒石酸酸性磷酸酶含量對(duì)比柱形圖；
[0024]圖11為試驗(yàn)四中2.1-1I1、血清鈣含量對(duì)比柱形圖；
[0025]圖12為試驗(yàn)四中2.1-1V、血清磷含量對(duì)比柱形圖；
[0026]圖13為試驗(yàn)四中2.2的LVy的制備及骨密度的檢測(cè)對(duì)比柱形圖；
[0027]圖14為試驗(yàn)四中2.3的L5的制備及凹入試驗(yàn)最大載荷的檢測(cè)對(duì)比柱形圖；
[0028]圖15為試驗(yàn)四中2.4的第O周和第12周的大鼠體重對(duì)比柱形圖；其中a為第0周，b為第12周。
【具體實(shí)施方式】
[0029]【具體實(shí)施方式】一:本實(shí)施方式的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群是以山茱萸為原料，利用大孔吸附樹(shù)脂技術(shù)制備得到總環(huán)烯醚萜苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85%~95%的有效部位群，其中所述的總環(huán)烯醚萜苷中莫諾苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%~65%，馬錢(qián)苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%~30%。
[0030]【具體實(shí)施方式】二:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一不同的是:其中所述的總環(huán)烯醚萜苷中莫諾苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為55%~65%，馬錢(qián)苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%~30%。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一相同。
[0031]【具體實(shí)施方式】三:本實(shí)施方式的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法按以下步驟進(jìn)行:
[0032]一、稱取山茱萸藥材，然后加入質(zhì)量為山茱萸藥材質(zhì)量5~7倍的水進(jìn)行煎煮，煎煮I~3次，每次煎煮1.5h~2.5h，每次煎煮后分離煎煮液和藥渣，收集煎煮液，然后對(duì)所得藥渣進(jìn)行下一次煎煮，合并各次煎煮液靜置20h~24h后，于常壓下用紗布過(guò)濾，得到濾液，將得到的濾液在溫度為60~80°C的條件下，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10~1.30，得到濃縮藥液；
[0033]二、向步驟一得到的濃縮藥液中加入體積濃度為70%~85%的乙醇，使?jié)饪s液醇沉至濃縮藥液中乙醇的體積濃度為0.5%~1.5%，靜止10h~14h，抽濾，收集濾液，減壓蒸餾回收濾液中的乙醇，使濾液濃縮至濃度為(1.20~1.50)g生藥/mL，得到水提醇沉濃縮液。
[0034]三、用體積濃度為93%~97%的乙醇浸泡大孔吸附樹(shù)脂20h~24h，漂去上層漂浮的雜質(zhì)及細(xì)小顆粒，待大孔吸附樹(shù)脂充分溶脹后用抽濾瓶抽干乙醇大孔樹(shù)脂內(nèi)、外部含有的乙醇，完成預(yù)處理，然后將預(yù)處理后的大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，裝柱后用20%~30%乙醇洗脫至流出液加水不變渾濁為止，再用體積為4~6個(gè)樹(shù)脂柱體積的水洗脫至無(wú)醇味，得到樹(shù)脂柱；
[0035]四、將步驟二得到的水提醇沉濃縮液以1.0BV/h~1.5BV/h的速度通過(guò)步驟三得到的樹(shù)脂柱，然后用體積為13~17個(gè)樹(shù)脂柱體積的水以洗脫速度為2BV/h~2.5BV/h洗脫樹(shù)脂柱，棄去水洗液，再用體積為8~12個(gè)樹(shù)脂柱體積、體積濃度為8%~12%的乙醇以洗脫速度為1.0BV/h~2.0BV/h洗脫樹(shù)脂柱，得到第一次洗脫液，重復(fù)洗脫操作8~10次，收集各次洗脫液，得到乙醇洗脫液；其中步驟二得到的水提醇沉濃縮液中生藥質(zhì)量與步驟三中預(yù)處理前的大孔吸附樹(shù)脂的質(zhì)量比為1: (4~5);
[0036]五、減壓蒸餾回收步驟四得到的乙醇洗脫液中的乙醇，然后濃縮至相對(duì)密度為1.1~1.5，最后進(jìn)行減壓干燥，得到抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群。
[0037]【具體實(shí)施方式】四:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三不同的是:步驟一中加入質(zhì)量為山茱萸藥材質(zhì)量6倍的水進(jìn)行煎煮，煎煮2次，每次煎煮2h。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三相同。
[0038]【具體實(shí)施方式】五:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三或四不同的是:步驟一中減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三或四相同。
[0039]【具體實(shí)施方式】六:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至五之一不同的是:步驟二中使濾液濃縮至濃度為1.40g生藥/mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至五之一相同。
[0040]【具體實(shí)施方式】七:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至六之一不同的是:步驟三中再用體積為5個(gè)樹(shù)脂柱體積的水洗脫至無(wú)醇味。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至六之一相同。
[0041]【具體實(shí)施方式】八:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至七之一不同的是:步驟四中將步驟二得到的水提醇沉濃縮液以1.1BVA~1.4BV/h的速度通過(guò)步驟三得到的樹(shù)脂柱。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至七之一相同。
[0042]【具體實(shí)施方式】九:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至八之一不同的是:步驟四中將步驟二得到的水提醇沉濃縮液以1.2BV/h~1.3BV/h的速度通過(guò)步驟三得到的樹(shù)脂柱。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至八之一相同。
[0043]【具體實(shí)施方式】十:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至九之一不同的是:步驟四中然后用體積為15個(gè)樹(shù)脂柱體積的水以洗脫速度為2.lBV/h~2.4BV/h洗脫樹(shù)脂柱，棄去水洗液，再用體積為10個(gè)樹(shù)脂柱體積、體積濃度為10%的乙醇以洗脫速度為1.5BV/h洗脫樹(shù)脂柱。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至九之一相同。
[0044]【具體實(shí)施方式】十一:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至十之一不同的是:步驟四中然后用體積為15個(gè)樹(shù)脂柱體積的水以洗脫速度為2.2BV/h洗脫樹(shù)脂柱。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至十之一相同。
[0045]【具體實(shí)施方式】十二:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至十一之一不同的是:步驟五中然后濃縮至相對(duì)密度為1.2~1.4。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至十一之一相同。
[0046]【具體實(shí)施方式】十三:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】三至十二之一不同的是:步驟五中然后濃縮至相對(duì)密度為1.3。其他步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】三至十一之二相同。
[0047]用以下試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果
[0048]實(shí)施例1、本實(shí)施例的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法按以下步驟進(jìn)行:
[0049]一、稱取24Kg山茱萸藥材，然后加入質(zhì)量為山茱萸藥材質(zhì)量6倍的水進(jìn)行煎煮，煎煮2次，每次煎煮2h，第一次煎煮后分離煎煮液和藥渣，收集煎煮液，然后對(duì)所得藥渣進(jìn)行第二次煎煮，合并2次煎煮固液混合物靜置4h后，于常壓下用四層紗布過(guò)濾，得到濾液，將得到的濾液在溫度為70°C的條件下，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20，得到濃縮藥液；
[0050]二、向步驟一得到的濃縮藥液中加入體積濃度為80%的乙醇，使?jié)饪s液醇沉至濃縮藥液中乙醇的體積濃度為1.0%，靜止12h，抽濾，收集濾液，減壓蒸餾回收濾液中的乙醇，使濾液濃縮至濃度為1.40g生藥/mL，得到水提醇沉濃縮液；
[0051]三、用體積濃度為95%的乙醇浸泡大孔吸附樹(shù)脂24h，漂去上層漂浮的雜質(zhì)及細(xì)小顆粒，待大孔吸附樹(shù)脂充分溶脹后用抽濾瓶抽干乙醇，完成預(yù)處理，然后將預(yù)處理后的大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，裝柱后用乙醇洗脫至流出液加水不變渾濁，再用體積為5個(gè)樹(shù)脂柱體積的水洗脫，此時(shí)洗脫液已無(wú)醇味，得到樹(shù)脂柱；
[0052]四、將步驟二得到的水提醇沉濃縮液以1.3BV/h的速度通過(guò)步驟三得到的樹(shù)脂柱，然后用體積為15個(gè)樹(shù)脂柱體積的水以洗脫速度為2BV/h洗脫樹(shù)脂柱，棄去水洗液，再用體積為10個(gè)樹(shù)脂柱體積、體積濃度為10%的乙醇以洗脫速度為1.50BV/h洗脫樹(shù)脂柱，得到第一次洗脫液，重復(fù)洗脫操作9次，收集各次洗脫液，得到乙醇洗脫液；其中步驟二得到的水提醇沉濃縮液中生藥質(zhì)量與步驟三中預(yù)處理前的大孔吸附樹(shù)脂的質(zhì)量比為1:4 ；
[0053]五、減壓蒸餾回收步驟四得到的乙醇洗脫液中的乙醇，然后濃縮至相對(duì)密度為1.3，最后進(jìn)行減壓干燥，得到抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群。
[0054]試驗(yàn)一、用安捷倫1200高效液相色譜儀，對(duì)實(shí)施例1的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群進(jìn)行高壓液相色譜檢測(cè):
[0055]檢測(cè)條件:
[0056]色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18 (200X4.6mm, 5 μ ),迪馬科技；保護(hù)柱:EasyGuardII C18Kit保護(hù)柱，迪馬科技；洗脫條件:甲醇冰(體積比為28:72)等度洗脫20min ;流速:1.0mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):242nm ;柱溫:30°C?；旌蠈?duì)照品溶液的制備:
[0057]過(guò)程: [0058]混合對(duì)照品溶液的制備:
[0059]取莫諾苷對(duì)照品7mg，精密稱定，置25mL容量瓶中。加適量蒸餾水，充分溶解后加入蒸餾水定容至25mL ;其中所述的莫諾苷對(duì)照品純度大于98%。
[0060]取馬錢(qián)苷對(duì)照品約9mg，精密稱定，置25mL容量瓶中。加適量蒸餾水，充分溶解后加蒸餾水定容至25mL ;其中所述的馬錢(qián)苷對(duì)照品購(gòu)自中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心。
[0061]分別精密量取莫諾苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2mL，馬錢(qián)苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2mL，置于25mL容量瓶中蒸餾水加至刻度混勻，即得混合對(duì)照品溶液；其中莫諾苷、馬錢(qián)苷的濃度分別為23.6 μ g/mL、30.7 μ g/mL。
[0062]供試品溶液的制備:
[0063]取實(shí)施例1得到的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群10mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加蒸餾水充分溶解，室溫放置，加蒸餾水至刻度，然后用0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，取20mL濾液作為供試品溶液；其中所述的供試品溶液中實(shí)施例1得到的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的濃度為60 μ g/mL。
[0064]標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0065]取5mL混合對(duì)照品溶液于0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，自動(dòng)進(jìn)樣2 μ L、6 μ L、10 μ L、14 μ L、20 μ L、30 μ L，HPLC檢測(cè)，以峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1-1。
[0066]表1線性關(guān)系結(jié)果表[0067]
【權(quán)利要求】
1.抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群，其特征在于抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群是以山茱萸為原料，利用大孔吸附樹(shù)脂技術(shù)制備得到總環(huán)烯醚萜苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85%~95%的有效部位群，其中所述的總環(huán)烯醚萜苷中莫諾苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%~65%，馬錢(qián)苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù) 15% ~30%ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群，其特征在于抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群是以山茱萸為原料，利用大孔吸附樹(shù)脂技術(shù)制備得到總環(huán)烯醚萜苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85%~95%的有效部位群，其中所述的總環(huán)烯醚萜苷中莫諾苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為55%~65%，馬錢(qián)苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%~30%。
3.制備如權(quán)利要求1所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的方法，其特征在于抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法按以下步驟進(jìn)行: 一、稱取山茱萸藥材，然后加入質(zhì)量為山茱萸藥材質(zhì)量5~7倍的水進(jìn)行煎煮，煎煮1~3次，每次煎煮1.5h~2.5h，每次煎煮后分離煎煮液和藥渣，收集煎煮液，然后對(duì)所得藥渣進(jìn)行下一次煎煮，合并各次煎煮液靜置20h~24h后，于常壓下用紗布過(guò)濾，得到濾液，將得到的濾液在溫度為60~80°C的條件下，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10~1.30，得到濃縮藥液； 二、向步驟一得到的濃縮藥液中加入體積濃度為70%~85%的乙醇，使?jié)饪s液醇沉至濃縮藥液中乙醇的體積濃度為0.5%~1.5%，靜止IOh~14h，抽濾，收集濾液，減壓蒸餾回收濾液中的乙醇，使濾液濃縮至濃度為(1.20~1.50) g生藥/mL，得到水提醇沉濃縮液； 三、用體積濃度為93%~97%的乙醇浸泡大孔吸附樹(shù)脂20h~24h，漂去上層漂浮的雜質(zhì)及細(xì)小顆粒，待大孔吸附樹(shù)脂充分溶脹后用抽濾瓶抽干乙醇大孔樹(shù)脂內(nèi)、外部含有的乙醇，完成預(yù)處理，然后將預(yù)處理后的大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，裝柱后用20%~30%乙醇洗脫至流出液加水不變渾濁為止，再用體積為4~6個(gè)樹(shù)脂柱體積的水洗脫至無(wú)醇味，得到樹(shù)脂柱； 四、將步驟二得到的水提醇沉濃縮液以1.0BV/h~1.5BV/h的速度通過(guò)步驟三得到的樹(shù)脂柱，然后用體積為13~17個(gè)樹(shù)脂柱體積的水以洗脫速度為2BV/h~2.5BV/h洗脫樹(shù)脂柱，棄去水洗液，再用體積為8~12個(gè)樹(shù)脂柱體積、體積濃度為8%~12%的乙醇以洗脫速度為1.0BV/h~2.0BV/h洗脫樹(shù)脂柱，得到第一次洗脫液，重復(fù)洗脫操作8~10次，收集各次洗脫液，得到乙醇洗脫液；其中步驟二得到的水提醇沉濃縮液中生藥質(zhì)量與步驟三中預(yù)處理前的大孔吸附樹(shù)脂的質(zhì)量比為1: (4~5); 五、減壓蒸餾回收步驟四得到的乙醇洗脫液中的乙醇，然后濃縮至相對(duì)密度為1.1~1.5，最后進(jìn)行減壓干燥，得到抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法，其特征在于步驟一中加入質(zhì)量為山茱萸藥材質(zhì)量6倍的水進(jìn)行煎煮，煎煮2次，每次煎煮2h。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法，其特征在于步驟一中減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法，其特征在于步驟二中使濾液濃縮至濃度為1.40g生藥/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法，其特征在于步驟三中再用體積為5個(gè)樹(shù)脂柱體積的水洗脫至無(wú)醇味。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法，其特征在于步驟四中將步驟二得到的水提醇沉濃縮液以1.lBV/h~1.4BV/h的速度通過(guò)步驟三得到的樹(shù)脂柱。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法，其特征在于步驟四中然后用體積為15個(gè)樹(shù)脂柱體積的水以洗脫速度為2.2BV/h洗脫樹(shù)脂柱，棄去水洗液，再用體積為10個(gè)樹(shù)脂柱體積、體積濃度為10%的乙醇以洗脫速度為1.5BV/h洗脫樹(shù)脂柱。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗骨質(zhì)疏松的山茱萸有效部位群的制備方法，其特征在于步驟五中然后濃縮至相對(duì)密度為1.3。
【文檔編號(hào)】A61K36/40GK103463168SQ201310460656
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】王喜軍, 張愛(ài)華, 孫暉 申請(qǐng)人:王喜軍