專利名稱：：無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有強(qiáng)效抗乙肝病毒活性和較低細(xì)胞毒性的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，其制備方法及其用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。
背景技術(shù)：
：乙型病毒性肝炎是威脅人民生命健康的重大疾病，治療乙肝的根本途徑是抗病毒治療。目前臨床有效的抗乙肝病毒藥物主要為干擾素和拉米夫定。但是，干擾素治療的有效率只有30-50%,而且具有劑量限制性的毒副作用。例如，拉米夫定具有確切的抗乙肝病毒作用，但是，長期使用易產(chǎn)生耐藥性，連續(xù)用藥2年后，耐藥性的發(fā)生率高達(dá)40-50%，由此可引發(fā)肝炎的急性發(fā)作等嚴(yán)重后果。核苷酸類似物在細(xì)胞內(nèi)毋需磷酸化，因此能夠克服拉米夫定的耐藥性，而且自身不產(chǎn)生耐藥性。其代表性藥物阿德福韋酯已在歐美獲準(zhǔn)上市。但是，阿德福韋酯有一定的細(xì)胞毒性，臨床應(yīng)用能夠產(chǎn)生腎臟毒性；而且，與拉米夫定相似，阿德福韋酯治療在停藥后，會(huì)出現(xiàn)乙肝病毒復(fù)制的反跳，引起乙肝的復(fù)發(fā)。根據(jù)抗HIV藥物研究的成功經(jīng)驗(yàn)，通過聯(lián)合用藥的COCKTAIL的療法，能夠有效克服抗藥性，加快病毒的清除。乙肝感染的人數(shù)是HIV感染人數(shù)的IO多倍，但是與抗HIV藥物相比，臨床有效的抗乙肝病毒藥物還屈指可數(shù)。歐洲專利EP0785208公開了結(jié)構(gòu)如下的一系列無環(huán)核苷膦酸酯化合物其中，R!代表烷氧基，烷基等單取代基；R2代表氫或烷基，R3和R4代表氫，烷基等。其中化合物2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[2—[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤(MCC-478)已經(jīng)進(jìn)入臨床研究。仍然迫切需要研究和開發(fā)新的具有不同結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和作用機(jī)理的抗乙肝藥物，
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供具有抗乙肝病毒活性的式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物其中，嘌呤環(huán)6位的巰基連接于五元雜芳環(huán)上的不同位置，X代表S或0原子；Y代表五元雜芳環(huán)上不同位置上取代的甲基、曱氧基或面原子，R"戈表H或甲基；各R2各自獨(dú)立地代表H、CH2CF3、CH2-0C0R3或CH2OCOOR3;113代表C廠C6烷基或取代烷基，所述的取代基選自曱基，乙基，丙基，丁基，異丙基，異丁基或特丁基等。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物Y其中，噪呤環(huán)6位的巰基連接于五元雜芳環(huán)上的不同位置，X代表S或0原子；Y代表五元雜芳環(huán)上不同位置上取代的甲基、甲氧基或卣原子，R"戈表H或曱基；各R2各自獨(dú)立地代表H、CH2CF3、CH廣0C0R3或CH2OCOOR3;R3代表C廣C6烷基或取代烷基，所述的取代基選自甲基，乙基，丙基，丁基，異丙基，異丁基或特丁基等。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及上述式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物的制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及包含上述式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物以及一或多種藥物載體或賦形劑的藥物組合物。本發(fā)明的再一個(gè)方面涉及上述式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的化合物選自2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(3-甲基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲基噻吩-2-基-)疏基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-曱氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(4-曱氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲氧基呋喃-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-呤Ua-9);2-氨基-6-(4-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-(2-膦?；籽趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-(2-膦?；鶗跹趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-(2-膦?；籽趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦?；鶗跹趸一鵠-噤呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基-乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基曱氧基)膦酰基曱氧基-乙基]-噤呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基-曱基)膦?；籽趸?乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤；和2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤。本發(fā)明的式I化合物可通過如下合成路線來制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>具體來說，首先使三氟乙醇于三氯化磷在80－90。C攪拌反應(yīng)4小時(shí)，分餾，制得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯；使2-氯乙醇或2-氯丙醇與多聚曱醛在冰浴冷卻下與干燥氯化氫作用下，生成2-氯乙基氯曱醚或2-氯丙基氯曱醚；然后使2-氯乙基氯甲醚或2-氯丙基氯曱醚與上述制得的三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯于160。C攪拌反應(yīng)5小時(shí)反應(yīng)，得到二(2，2，2-三氟乙基)亞磷?；一然蚨?2，2，2-三氟乙基)亞磷酰基丙基氯，其再與2-氨基-6-氯-嘌呤在80X:-1001C攪拌反應(yīng)，得到關(guān)鍵中間體ffl;接下來使中間體ffl與取代或未取代的2/3-巰基噻吩或2/3-巰基呋喃在80°C-1201C攪拌反應(yīng)得到R2為三氟乙基的目標(biāo)化合物Ia;將Ia與三甲基溴硅烷在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，使三氟乙酯水解后，得到目標(biāo)化合物的游離酸Ib，Ib再與烷酰氧基甲基氯或烷氧羰基氧基甲基氯在室溫反應(yīng)，即可得到R2為CH2-0C0R3或CH20COOR3的目標(biāo)化合物Ic，其中R3如前述式I中定義。因此，本發(fā)明式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的制備可描述為(a)使三氟乙醇與三氯化磷反應(yīng)，制得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯CF3CH2OH+PCI3-P(OCH2CF3)3(b)使2-氯乙醇(R產(chǎn)H)或2-氯丙醇(R產(chǎn)CH3)與多聚甲醛在干燥氯化氫作用下，生成2-氯乙基氯甲醚或2-氯丙基氯曱醚CICH2(j:H-OH+(CH20)3-CICH2(j)H-OCH2CI、(c)使步驟(b)得到的2-氯乙基氯曱醚或2-氯丙基氯甲醚與步驟(a)制得的三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯反應(yīng)，得到二(2，2，2-三氟乙基)亞磷?；一然蚨?2，2，2-三氟乙基)亞磷?；萈(OCH2CF3)3+CICH^H-OCH2CI-^CICH2H-OCH2P(OCH2CF3)2(d)使步驟(c)的產(chǎn)物與2-氨基-6-氯-嘌呤反應(yīng)，得到關(guān)鍵中間體III:NLlV、NT》+CICH2(jH-OCH2P(OCH2CF3)2--^N^^N^N-CH2CF3H2N人N^"^H2NN^^Ov"1CH2CF3III(e)使步驟(d)得到的中間體IE與取代或未取代的2/3-巰基噻吩或2/3-巰基呋喃反應(yīng)得到式I化合物的特例式Ia化合物叉^V。VP、=。哭,~~^義丄29-TQXHN,、N^^丫23,&0-CH2CF3其中R2為三氟乙基；(f)使式Ia化合物的三氟乙酯水解后，得到式I化合物的另一個(gè)特例式Ib游離酸l3lb(CH3)^BroHI-Ho-ploo-Rs.義H:(g)使式Ib化合物再與烷酰氧基曱基氯或烷氧羰基氧基甲基氯反應(yīng)，即可得到式I化合物的另一個(gè)特例式Ic化合物其中，112為CH2-OCOR3或CH20COOR3，R3如前述式I中定義。本發(fā)明中的術(shù)語"可藥用鹽"可以是與無機(jī)酸形成的藥用鹽，例如硫酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽；也可以是與有機(jī)酸形成藥用鹽，例如乙酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、曱磺酸鹽、苯曱酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽等。本發(fā)明式I中具有酸性基團(tuán)的化合物可以與堿金屬或堿土金屬如鈉離子、鉀離子、銨離子、釣離子、鋅離子、鎂離子等形成藥用鹽，優(yōu)選但不限于鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽。本發(fā)明化合物或其可藥用鹽可以形成溶劑化物，例如水合物、醇合物等。上述化合物還可以是前藥或可在體內(nèi)代謝代謝后釋放出所述活性成分的形式。選擇和制備適當(dāng)?shù)那八幯苌锸潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知技術(shù)。如上所述，本發(fā)明化合物可用于制備治療乙肝病毒感染的藥物。本發(fā)明化合物或其可藥用鹽可以單獨(dú)或以藥物組合物的形式給藥。本發(fā)明藥物組合物可根據(jù)給藥途徑配成各種適宜的劑型。使用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體，包含賦形劑和助劑，它們有利于將活性化合物加工成可以在藥學(xué)上使用的制劑。適當(dāng)?shù)闹苿┬问饺Q于所選擇的給藥途徑，可以按照本領(lǐng)域熟知的常識(shí)進(jìn)行制造。給藥途徑可以是口服、非腸道或局部給藥，優(yōu)選口服和注射形式給藥。可以口服的藥物制劑包括膠嚢劑和片劑等。病人吞咽有困難時(shí)，也可以釆用舌下片或者其他非吞咽的方式給藥。本發(fā)明化合物也可以配制用于腸胃外給藥或者透皮給藥或者經(jīng)粘膜給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本發(fā)明化合物可以采用合適的藥物釋放系統(tǒng)(DDS)以得到更有利的效果。另外需要指出，本發(fā)明化合物使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、營養(yǎng)狀況、化合物的活性強(qiáng)度、服用時(shí)間、代謝速率、病癥的嚴(yán)重程度以及診治醫(yī)師的主觀判斷。優(yōu)選的使用劑量介于0.01-100mg/kg體重/天。具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例用于具體地解釋本發(fā)明，然而本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。反應(yīng)中所用到的所有原料和試劑均可通過商購獲得。實(shí)施例12-氨基-6-(噻吩-2-基-)疏基-9-[2_[雙(2，2，2_三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤Ua-l)1.12-巰基噢吩的合成將2.86g鎂屑懸浮于48ml無水乙醚中，在氮?dú)庀拢?小時(shí)內(nèi)滴加16克2-溴噻吩。滴加完畢，再回流反應(yīng)3小時(shí)。然后，將反應(yīng)液冷卻到-45tl，加入3.16g粉末硫，于-45C攪拌反應(yīng)1.5小時(shí)，再于室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1.5小時(shí)，加入5ral水和36.8ml6M鹽酸。用乙醚提取3次，4Qml/次，合并有機(jī)層，用飽和鹽水洗，再用硫酸鎂千燥。減壓蒸干，分餾，得4.5g，沸點(diǎn)120X3/0.1鵬Hg。1.22-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)-膦?；籽趸鵠-乙基氯的合成在46克三氟乙醇中，加入21克三氯化磷，在80-90X:攪拌反應(yīng)4小時(shí)。分級(jí)蒸餾，得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯41克，130-131■C/74-78nimHg。將26克2-氯乙醇和IO克多聚甲醛懸浮于50ml二氯甲烷中，冰浴冷卻；攪拌下，于(TC通干燥氯化氫10小時(shí)，分去水層，將有機(jī)層用無水氯化鈣干燥，濾去固體后蒸餾，得到氯乙基氯甲醚24克，沸點(diǎn)78-82X:/30mmHg將18克氯乙基氯甲醚與40克三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯混合，于160t;攪拌反應(yīng)5小時(shí)。減壓蒸去溶劑后，分餾得到二(2，2，2-三氟乙基)-膦?；一龋悬c(diǎn)125-128匸/3mmHg。1.32-氨基-6-氯-9-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)-膦酰基曱氧基]乙基-嘌呤(III,)的合成將30克2-氨基-6-氯嘌呤和27mlDBU加于700ml二甲基曱酰胺中，于80X:攪拌1小時(shí)。再加入二(2，2，2-三氟乙基)膦?；一?3克，于IOO'C攪拌5小時(shí)，冷卻后減壓蒸干。以硅膠柱層析分離，用氯仿/甲醇(1:0.05)洗脫，得到Hh25.6克，熔點(diǎn)102-103X:。^-NMR:5(ppm，CDC13):7.82(s，1H);5.18(b，2H);4.40(m，4H);4.30(t，2H);3.95(m，4H)。1.42-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤()的合成在100ml二甲基甲酰胺中，加入7.8克m!、2,2ml三乙胺和4克2-巰基噻吩，于ioox:攪拌2小時(shí)，冷卻，減壓蒸干。殘留物用硅膠柱層析分離，用氯仿/曱醇(1:0.05)洗脫。收集所需組分，減壓蒸干，得到化合物Ia-13.41克，產(chǎn)率37.4%。^一NMR:5(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.58-7.60(dd，1H);7.35(dd，1H);7.12-7.14(dd，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實(shí)施例22-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-噤呤(Ia-2)用3-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照l.1的方法，制備3-巰基瘞吩。參照1.4的方法，用3-巰基痿吩代替2-巰基瘞吩與IIIi反應(yīng)，制備I廣2，產(chǎn)率34.6%。力-NMR:S(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);4.92(b，2H);4.33—4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實(shí)施例32-氨基-6-(3-曱基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-3)用3-甲基-2-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備3-甲基-2-巰基瘞吩。參照1.4的方法，用3-甲基-2-巰基噻吩代替S-巰基噻吩與IIh反應(yīng)，制備Ir3,產(chǎn)率28.2%。力-服R:S(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.50-7.54(d，1H);7.25-7.30(d，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H);2.37(s，3H)。實(shí)施例42-氨基-6-(5-曱基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤Ua-4)用5-甲基-2-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備5-曱基-2-巰基噻吩。參照1.4的方法，用5-曱基-2-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與IIh反應(yīng)，制備L-4,產(chǎn)率20.6%。^-NMR:5(ppm，CDCh):7.78(s，1H);7.54(s，1H);7.23(s,1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H);2.31(s，3H)。實(shí)施例52-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-5)用3-溴呋喃代替2-溴潘吩，參照1.1的方法，制備3-巰基呋喃。參照1.4的方法，用3-巰基呋喃代替2-巰基噻吩與IIh反應(yīng)，制備Ia-5，產(chǎn)率30.5%。力-職5(pp邊，CDC13):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4,28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實(shí)施例62-氨基-6-(5-甲氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-6)6.12-甲氧基-5-溴噻吩的合成將5克2-甲氧基噻吩溶于6.6毫升二氯甲烷中，室溫?cái)嚢柘?，滴?.5克溴。滴加完畢，再攪拌1小時(shí)。加入5毫升飽和的亞硫酸氫鈉溶液終止反應(yīng)。分出水層，將有機(jī)層用IO亳升水洗，再用無水疏酸鈉干燥。過濾，蒸干得3.42克2-曱氧基-5-溴噻吩。6.22-氨基-6-(5-曱氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-6)的合成用2-曱氧基-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照l.l的方法，制備2-甲氧基-5-巰基噻吩。參照1.4的方法，用2-曱氧基-5-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與Hh反應(yīng)，制備Ia-6，產(chǎn)率18.1%。力-NMR:5(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.55(d，1H);7.32(d，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m,4H);4,26-4=28(t，2H);3.92-3.94(m,4H)，3.86(s，3H)。實(shí)施例72-氨基-6-(4-甲氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-嘌呤Ua-7)用3-甲氧基噻吩代替2-甲氧基噻吩，參照6.1的方法，制備3-甲氧基-5-溴噻吩。用3-曱氧基-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備3-甲氧基-5-巰基噻吩。參照1.4的方法，用3-曱氧基-5-巰基噻吩代替2-巰基瘞吩與in!反應(yīng)，制備1「7，產(chǎn)率12.8%。力-匿5(ppm，CDCh):7.73(s，1H);7.30(s，1H);7.16(s，1H);4.92(b,2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H);3.86(s，3H)。實(shí)施例82-氨基-6-(5-甲氧基呋喃-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-8)用2-曱氧基呋喃代替2-甲氧基噻吩，參照6.1的方法，制備3-甲氧基-5-溴呋喃。用3-甲氧基-5-溴呋喃代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備3-甲氧基-5-巰基呋喃。參照1.4的方法，用3-甲氧基-5-巰基呋喃代替2-巰基噻吩與m!反應(yīng)，制備Ia-8，產(chǎn)率30.5%。力-NMR:5(ppm，CDCh):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)，3.84(s，3H)。實(shí)施例92-氨基-6-(5-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-呤(K-9)用2-氯噻吩代替2-甲氧基噻吩，參照6.1的方法，制備2-氯-5—溴漆喻。用2-氯-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照l.l的方法，制備2-氯—5-巰基參吩。參照1.4的方法，用2-氯-5-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與in,反應(yīng)，制備Ia-9，產(chǎn)率17.5%。^-NMR:S(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.52(d，1H);7.25(d，1H);4.92(b,2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實(shí)施例102-氨基-6-(4-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-10)用3-氯噻吩代替2-曱氧基噻吩，參照實(shí)施例6.1的方法，制備3-氯-5-溴噻吩。用3-氯-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照實(shí)施例1.1的方法，制備3-氯-5-巰基漆汾。參照實(shí)施例1.4的方法，用3-氯-5-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與IIh反應(yīng)，制備Ia-lO,產(chǎn)率13.4%。H-NMR:S(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.32(s，1H);7.14(s，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)'實(shí)施例112-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-(2-膦酰基曱氧基乙基)-嘌呤(Ib-l)在氮?dú)庀?，將Ia-12g懸浮于20ml無水乙氰中，加入7g三甲基溴硅烷，室溫?cái)嚢?6小時(shí)，硅膠薄層檢測(cè)原料消失。減壓旋干溶劑，得殘留物，加入10ml水，產(chǎn)生白色沉淀，加入12ml丙酮，室溫?cái)嚢?4小時(shí)。過濾，將濾餅5ml丙酮洗2次，用5ml無水乙醚洗l次，得Ib-l1.2g，熔點(diǎn)210'C(分解)，產(chǎn)率85.7%。力-NMR:S(ppm，CDC13):7.82(s，1H);7.51-7.56(dd，1H);7.32(dd，1H);7.06-7.10(dd，1H);4.79(b，2H);4.23-4.25(t，2H);3.91-3.93(m，4H)。。實(shí)施例122-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-(2-膦?；鶗跹趸一?-噤呤(Ib-2)參照實(shí)施例11的方法，用Ia-2代替Ia-l與三甲基溴硅烷反應(yīng)，制備1「2，熔點(diǎn)215'C(分解)，產(chǎn)率76.4%。'H-NMR:5(ppm，CDCh):7.75(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);4.92(b，2H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實(shí)施例132-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-(2-膦酰基甲氧基乙基)-噤呤(Ib-3)參照實(shí)施例11的方法，用Ia-5代替Ia-1與三甲基溴硅烷反應(yīng)，制備Ib-3，熔點(diǎn)215X:(分解)，產(chǎn)率70.6%。'H-NMR:5(ppm，CDCh):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d,1H);6.64(m，1H);4.92(b，2H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實(shí)施例142-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基甲氧基)膦?；鶗跹趸一鵠-嘌呤Uc-l)在氮?dú)庀拢蚍磻?yīng)器中依次加入5ml干燥的乙腈，0.5gIb-1，lgN，-二環(huán)己基-4-嗎啉脒及1.3g新戊酰氯甲酯，于室溫?cái)嚢?4小時(shí)。將反應(yīng)混合物減壓蒸干，以硅膠柱層析分離，用二氯曱烷/甲醇(95:5)洗脫，得L-l0.32g。，H-NMR:S(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.51—7.56(dd，1H);7.32(dd，1H);7.06-7.10(dd,1H);5.65(m，4H);5.02(b,2H);4.11(t，2H);3.80(t，2H);3.52(d，2H);2.52(s，3H);1.21(s，18H)。實(shí)施例152-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦酰基甲氧基乙基]-噤呤(L-2)參照實(shí)施例14的方法，用Ib-2代替If1與新戊酰氯曱酯反應(yīng)，制備1。-2，產(chǎn)率24%。工H-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);5.65(m，4H);5.02(b，2H);4.11(t，2H);3.80(t，2H);3.52(d，2H);2.52(s，3H);1.21(s，18H)。實(shí)施例162-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤(1。-3)參照實(shí)施例14的方法，用Ib-3代替I「1與新戊酰氯甲酯反應(yīng)，制備I廣3，產(chǎn)率20.9%。^-NMR:S(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，1H);5.65(m，4H);5.02(b，2H);4.11(t，2H);3.80(t，2H);3.52(d，2H);2.52(s，3H);1.21(s，18H)。實(shí)施例172-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦?；籽趸?乙基]-嘌呤(1。_4)在氮?dú)庀?，將O.5gIb-l加到10ml二曱基甲酰胺中，然后加入0.4g三乙胺，0.6g氯甲基異丙基碳酸酯，于50"C油浴中攪拌24小時(shí)。將反應(yīng)混合物減壓蒸干，以硅膠柱層析分離，用二氯甲烷/異丙醇(95:5)洗脫，得L-40.23g。H-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.51-7.56(dd，1H);7.32(dd，1H);7.06-7.10(dd，1H);5.9(b，2H);5.55-5.7(m，4H);4.82-5.02(m，2H);4.36(dd,1H);4.14(dd，2H);3.9-3.99(m，2H);3.7(dd，1H);1.29-1.32On.12H);1.17(d，3H)。實(shí)施例182-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦?；鶗跹趸?乙基]-嘌呤U。-5)參照實(shí)施例17的方法，用1「2代替1「1與氯曱基異丙基碳酸酯反應(yīng)，制備1。-5，產(chǎn)率10.6%。力-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.55-7.59(d,1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);5.9(b，2H);5.55-5.7(m，4H);4.82-5.02(m，2H);4.36(dd，lH);4.14(dd,2H);3.9-3.99(m，2H);3.7(dd，1H);1.29-1.32(m.12H);1.17(d，3H)。實(shí)施例192-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基-甲基)膦?；籽趸?乙基]-嘌呤(Ie-6)參照實(shí)施例17的方法，用1「3代替1廣1與氯甲基異丙基碳酸酯反應(yīng)，制備1。-6，產(chǎn)率18%。力-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，lH);5.9(b，2H);5.55-5.7(m，4H);4.82-5.02(m:2H);4.36(dd，lH);4.14(dd，2H);3.9-3.99(m，2H);3.7(dd，1H);1.29-1.32(m.12H);1.17(d，3H)。實(shí)施例202-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤(Ia-ll)的合成參照方法1.2，由1-氯-2-丙醇代替2-氯乙醇與三聚甲醛反應(yīng)得到1-氯-2-氯甲氧基丙基，后者與三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯反應(yīng)，得到二(2，2，2-三氟乙基)-膦?；?，沸點(diǎn)80-841C/25-30mmHg。參照方法1.3，二(2，2，2-三氟乙基)-膦酰基丙基氯與2-氨基_6-氯嘌呤縮合得到2-氨基-6-氯-9-[雙(2，2,2-三氟乙基)-膦?；籽趸鵠丙基-嘌呤1112，熔點(diǎn)119-120r。力-NMR:5(ppm，CDCh):7.85(s，1H);5.20(b，2H);4.35-4.40(m，4H);4.96-4.06(m，2H);3.78—3.82(m，1H);3.53-3.57(d，2H)，1.28-1.30(d，3H)。參照方法1.4，用IIl2代替IIL與2-巰基噻吩反應(yīng)，得到Ia-ll，產(chǎn)率11.8%。丄H-NMR:5(ppm，CDC13):7.58-7.60(dd，1H);7.35(dd，1H);7.12-7.14(dd，1H);4.85(b，2H);4,42-4.48(m，4H);4.00-4.03(m，2H);3.90(s，3H);3.86(s，3H);3.76-3.80(m，1H);3.51-3.55(d,2H)，1.27-1.29(d，3H)。實(shí)施例212-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；鶗跹趸鵠丙基]-嘌呤(Ia-12)的合成參照方法1.4，用lll2代替ffl,與3-巰基噻吩反應(yīng)，得到18-12，產(chǎn)率12.4%。H-NMR:5(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);4.85(b，2H);4.42—4.48(m，4H);4.00-4.03(m，2H);3.90(s，3H);3.86(s，3H);3.76-3.80(m，1H);3.51-3.55(d，2H)，1.27-1.29(d，3H)。實(shí)施例222-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；鶗跹趸鵠丙基]-嘌呤(Ia-13)的合成參照方法i.4，用m2代替n^與3-巰基呋喃反應(yīng)，得到Ia-13,產(chǎn)率14%。^一NMR:5(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7,13(d，1H);6.64(m，1H);4.85(b，2H);4.42-4.48(m，4H);4.00-4.03(m，2H);3.90(s，3H);3.86(s,3H);3.76-3.80(m，1H);3.51-3.55(d，2H),1.27-1.29(d，3H)。實(shí)施例23生物活性測(cè)定用HepG2.2.15細(xì)胞體外試驗(yàn)法測(cè)定了目標(biāo)化合物對(duì)HBVDM的抑制作用和細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)方法通過定量PCR法測(cè)定目標(biāo)化合物對(duì)HBVDNA的抑制作用HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)于含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，在5%C02培養(yǎng)箱中孵育。然后將細(xì)胞接種于96孔板中，細(xì)胞數(shù)3X104，繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%左右，棄去舊培養(yǎng)液，加入含不同濃度藥物的新培養(yǎng)液，設(shè)置3個(gè)平行孔；每隔2天更換培養(yǎng)液。在給藥后第10天，取100m1上清，通過定量pcr的方法，測(cè)定hbvdna的含量，計(jì)算50%抑制濃度，即為ICs。值。通過MTT法測(cè)定目標(biāo)化合物的細(xì)胞毒性HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，在5%0)2培養(yǎng)箱中孵育。然后將細(xì)胞接種于96孔板中，細(xì)胞數(shù)5X104，繼續(xù)培養(yǎng)3天，加入含不同濃度藥物的新培養(yǎng)液，設(shè)置3個(gè)平行孔；在給藥后第3天，加入MTT至7.5mg/ml，繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)，棄去上清，加入含10%吐溫X-IOO異丙醇，120p1/孔，再加入O.4pl/孔，用酶聯(lián)儀測(cè)定540nin處的吸收，計(jì)算50%抑制濃度，即為CCs。值。結(jié)果見表l。表1.本發(fā)明化合物的ICs。值和CCs。值<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>權(quán)利要求1.式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物其中，嘌呤環(huán)6位的巰基連接于五元雜芳環(huán)上的不同位置，X代表S或O原子；Y代表五元雜芳環(huán)上不同位置上取代的甲基、甲氧基或鹵原子，R1代表H或甲基；各R2各自獨(dú)立地代表H、CH2CF3、CH2-OCOR3或CH2OCOOR3；R3代表C2-C6烷基或取代烷基，所述的取代基選自甲基，乙基，丙基，丁基，異丙基，異丁基或特丁基等。2.權(quán)利要求l的化合物，其選自2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-噪呤；2-氨基-6-(3-甲基噻吩-2-基-)硫基-9-U-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-噤呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)疏基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲氧基噻吩-2-基-)疏基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-噪呤；2-氨基-6-(4-甲氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲氧基呋喃-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-呤；2-氨基-6-(4-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-噪呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-(2-膦?；鶗跹趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-(2-膦?；籽趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-(2-膦?；籽趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基甲氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2_雙(新戊酰氧基甲氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基-乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基曱氧基-乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基-曱基)膦?；鶗跹趸?乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2,2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基)膦酰基曱氧基]丙基]-噤呤；和2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦酰基曱氧基]丙基]-嘌呤。3.式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物的制備方法，該方法包括(a)使三氟乙醇與三氯化磷反應(yīng)，制得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯CF3CH2OH+PCI3-P(OCH2CF3)3(b)使2-氯乙醇或2-氯丙醇與多聚曱醛在干燥氯化氫作用下，生成2-氯乙基氯曱醚或2-氯丙基氯甲醚<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(c)使步驟(b)得到的2-氯乙基氯甲醚或2-氯丙基氯甲醚與步驟(a)制得的三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯反應(yīng)，得到二(2，2，2-三氟乙基)亞磷?；一然蚨?2,2，2-三氟乙基)亞磷?；?lt;formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(d)使步驟(c)的產(chǎn)物與2-氨基-6-氯-嘌呤反應(yīng)，得到關(guān)鍵中間體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(e)使步驟(d)得到的中間體III與取代或未取代的2/3-巰基噻吩或2/3-巰基咬喃反應(yīng)得到式I化合物的特例式Ia化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>,義,、，、i/Q—CH,CF，H，N'、N'M丫23O—CH2CF3la其中R2為三氟乙基;(f)使式Ia化合物的三氟乙酯水解后，得到式I化合物的另一個(gè)特例式Ib游離酸lalb(g)使式lb化合物再與烷酰氧基曱基氯或烷氧羰基氧基曱基氯反應(yīng)，即可得到式I化合物的另一個(gè)特例式Ic化合物lb其中，R2為CH2-OCOR3或CH2OCOOR3，R3如前述式I中定義。(CH3)^BrCH2CF33CH2CF3CICH,OCOR,P=0orCICH2OCOOR3OH4.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1所述的式I無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物以及一或多種可藥用載體或賦形劑。5.權(quán)利要求1所述的式I無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及式I無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，水合物或溶劑合物，其中，各取代基的定義如說明書所述。本發(fā)明還涉及所述式I化合物的制備方法，含有該化合物的藥物組合物，及其用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。文檔編號(hào)A61P31/12GK101293899SQ200710097600公開日2008年10月29日申請(qǐng)日期2007年4月28日優(yōu)先權(quán)日2007年4月28日發(fā)明者仲伯華,狄吳,廖明陽,?？∑?陳蘭福,馬華智申請(qǐng)人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所