一種改進的三磷酸腺苷二鈉的生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種改進的三磷酸腺苷二鈉的生產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]三磷酸腺苷二鈉,化學(xué)名:腺嘌呤核苷一 5’ 一三磷酸酯二鈉鹽三水合物,分子式:C10H14N5Na2O13P3.3H20,分子量:605.19,是核苷酸衍生物,參與體內(nèi)脂肪、蛋白質(zhì)、糖、核酸以及核苷酸的代謝。當(dāng)體內(nèi)吸收、分泌、肌肉收縮及進行生化合成反應(yīng)等需要能量時,三磷酸腺苷即分解成二磷酸腺苷及磷酸基,同時釋放出能量。三磷酸腺苷二鈉能夠穿透血-腦脊液屏障,能提高神經(jīng)細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和重建能力、促進神經(jīng)突起的再生長。三磷酸腺苷二鈉是輔酶類藥物,臨床用于因組織損傷、細(xì)胞酶活力下降所致的各種疾病。如心力衰竭,心肌炎、心肌梗塞、腦動脈硬化、冠狀動脈硬化、進行性肌萎縮、腦出血后遺癥、急慢性肝炎、肝硬化和聽力障礙等,還用于進行性肌萎縮、腦溢血后遺癥、心功能不全、心肌疾病及肝炎等治療。
[0003]中國專利CN200710019776.8,公開了一種三鱗酸腺苷二鈉的生產(chǎn)方法,包括下列步驟:(1)先加自來水于反應(yīng)鍋中,同時開動攪拌,用夾套加熱至43-45?,然后投放蔗糖、葡萄糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀,使其溶解,停止加熱,用循環(huán)水降溫,當(dāng)溫度降至40-42?以下時,投放速凍酵母泥,并用夾套加熱緩慢升溫;(2)用二倍于硫酸鎂體積的自來水溶解硫酸鎂,另外用水:腺苷液=12:1的比例先將自來水加熱至80°C,將腺苷溶解;(3)當(dāng)反應(yīng)鍋內(nèi)溫度至25±1°C時,依次投放硫酸鎂、腺苷液,并將反應(yīng)料液加熱至38-40°C,停止加熱,保溫2h,此時開始取樣測定腺苷的轉(zhuǎn)達化率,當(dāng)反應(yīng)達到三磷酸腺苷二鈉一條帶時,反應(yīng)結(jié)束;(4)滅活、調(diào)酸堿,反應(yīng)結(jié)束立即放掉夾套中熱水,一邊通冷卻水降溫,一邊投放冰于反應(yīng)鍋中,降溫至6-8°C時停止加冰,用磷酸調(diào)節(jié)pH3.0-4.0,靜置I小時后,再調(diào)節(jié)PH6.5-7.5,再靜置30分鐘后開始壓榨,當(dāng)反應(yīng)液壓榨結(jié)束后,再用純化水頂洗濾餅,30分鐘后,取水頂液檢測,當(dāng)三磷酸腺苷二鈉濃度< 0.1%時即停止水頂,然后將水頂液與壓榨液混勻,檢驗三磷酸腺苷二鈉濃度0.5-1%、透光度多90%方為合格,將混合液送分離工段處理;(5)樹脂分離:上樣:將上述混合液加純凈水稀釋至0.3-0.5%上樹脂柱,上樣8小時后每2小時檢測流出液中ATP濃度,當(dāng)上樣流出液中ATP ^ 0.1 %時停止上樣,改水頂,2小時后再進行上樣,直到上樣結(jié)束;水洗雜質(zhì):上樣結(jié)束,用純化水正進洗滌至流出液A257S 0.5 ;然后反進水洗至樹脂上層無混濁機械雜質(zhì)且流出液A 257S 0.5結(jié)束;稀鹽洗雜質(zhì):水洗結(jié)束,用0.05%稀氯化鈉溶液反進流洗,每2小時取樣,測流出液中ATP濃度,當(dāng)流出液中ATP濃度多0.1 %時,反進流洗雜質(zhì)結(jié)束,改正進,每2小時取樣,測流出液中ATP濃度,若濃度多0.5%時,開始洗脫;洗脫:當(dāng)液位降至樹脂上沿20cm處時,用2%濃鹽液進行洗脫,收集洗脫液,結(jié)束后送至脫色;(6)脫色:洗脫液先用二十萬分子量的中空纖維超濾膜進行第一次超濾去蛋白,再添加活性炭,攪拌30分鐘以上后靜置30分鐘,然后將脫色液送至精密過濾器超濾除熱原;(7)超濾、結(jié)晶:超濾:將脫色液再用納膜式超濾器進行第二次超濾除熱原,再送去:結(jié)晶;結(jié)晶:超濾液先用3N鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.0,然后用夾套熱水升溫至30-32°C,同時開始攪拌,溫度達到32°C,開始加入95%乙醇,并保持溫度30_32°C,當(dāng)鍋內(nèi)出現(xiàn)白色混獨時,停止加乙醇,繼續(xù)攪拌半小時,然后開夾套冷卻,將料液冷卻至室溫;離心結(jié)晶液,濕品先用乙醇淋洗,再用無水乙醇浸泡,最后離心30分鐘甩干,將濕品放入濕品存入室中,母液送蒸餾回收崗位進行回收;將濕品均勻地鋪入盤中,放入烘箱內(nèi),真空干燥溫度控制在38-42°C,16小時后取出將其搗碎,而后每5小時翻料I次,待濕品烘至40小時后,取樣品送分析室測快速失重,當(dāng)快速失重〈5%,即可出料;將干品放入干品存放室中保存,得產(chǎn)品。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中,例如ATP等藥品一般是按照國家食品要監(jiān)督管理局或者藥典等指導(dǎo)文件建議的工藝步驟進行生產(chǎn),如果藥品生產(chǎn)企業(yè)對已經(jīng)拿到批文的產(chǎn)品變更生產(chǎn)工藝,需要重新報批,會增加人力物力成本。因此,既然有指導(dǎo)文件的建議,藥品生產(chǎn)廠家一般不會隨意變更生產(chǎn)工藝。但是隨著時代的發(fā)展,技術(shù)的進步,以及環(huán)保節(jié)能的要求,對現(xiàn)有技術(shù)的改進也在不斷進行當(dāng)中,每一次改進都是對現(xiàn)有技術(shù)的不斷完善,相應(yīng)的也是在節(jié)約成本。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種改進的三磷酸腺苷二鈉的生產(chǎn)方法。
[0006]本發(fā)明所述一種改進的三磷酸腺苷二鈉的生產(chǎn)方法,包括如下步驟:
[0007]I)生化反應(yīng)
[0008](I)硫酸鎂溶液、腺苷溶液、苯扎溴銨溶液的制備:
[0009]①用少量反滲透水溶解硫酸鎂制成硫酸鎂溶液;
[0010]②用適量室溫的反滲透水溶解腺苷制成腺苷溶液;
[0011]③用適量的反滲透水溶解苯扎溴銨稀釋成5%苯扎溴銨溶液;
[0012](2)投放速凍酵母:加反滲透水于反應(yīng)鍋中,開動攪拌用夾套熱水加熱至40-450C,投放蔗糖及磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀,使其溶解,待其全部溶解后,停止加熱,開循環(huán)水降溫,當(dāng)溫度降至40°C以下時,投放速凍酵母,并用夾套熱水緩慢升溫;
[0013](3) ATP生化反應(yīng):當(dāng)反應(yīng)鍋內(nèi)溫度升至20°C ± I時,依次投放硫酸鎂溶液、苯扎溴銨溶液、腺苷溶液,反應(yīng)開始計時,將反應(yīng)液繼續(xù)加熱至36-39°C,保溫,待有氣泡溢出,開始取樣測定ATP轉(zhuǎn)化率,當(dāng)反應(yīng)達到ATP —條帶時,反應(yīng)結(jié)束;
[0014](4)滅活、調(diào)酸堿:反應(yīng)結(jié)束,立即放掉夾套熱水,迅速投放大量冰于反應(yīng)鍋內(nèi),并通冷卻水降溫,當(dāng)溫度降至4°C以下,用磷酸調(diào)pH至2.5-3.0,I小時后,再用液堿調(diào)pH至5.5-6.0,調(diào)好堿后30分鐘開始壓榨,壓榨完畢,再用反滲透水頂洗濾餅,水頂液合并壓榨液,檢驗含量、透光度,合格送分離工段處理;
[0015]2)樹脂分離
[0016](I)串柱上樣:將壓榨液及水頂液稀釋至0.2-0.45%,上D296樹脂柱,流速為4-6L/min,定時檢測流出液,查看是否有ATP漏出;當(dāng)流出液中ATP濃度多0.03%時,停止上樣,用反滲透水正頂至流出液ATP濃度< 0.01 %后,繼續(xù)上樣,如此反復(fù)直至上樣結(jié)束;
[0017](2)水洗雜質(zhì):串柱上樣結(jié)束,用反滲透水正進洗滌至流出液A257miS 0.2 ;然后反進水洗至樹脂上層無渾濁機械雜質(zhì)且流出液A257nmS 0.2后結(jié)束;流速控制在4-6L/min ;
[0018](3)稀鹽洗雜質(zhì):水洗結(jié)束,用 ρΗ2.0-2.2 的 0.04mol/LNaCl—0.01mol/L HCl 稀鹽液反進流洗,流速為6-10L/min ;每小時取樣,測流出液中ATP濃度,當(dāng)流出液中ATP濃度^ 0.03%時,反進洗雜質(zhì)結(jié)束;改正進,正進流速不變,每小時取樣一次,測流出液中ATP的濃度,當(dāng)流出液中ATP濃度多0.025 %時,每半小時取樣一次監(jiān)測;當(dāng)流出液pH跳至2-4,且ADP基本洗盡或只有ATP時,洗滌結(jié)束,開始洗脫;
[0019](4)洗脫:用 ρΗ3.5-3.8 的 lmol/LnaCl-0.01mol/L HCl 濃鹽液進行洗脫,當(dāng)洗脫流出液ATP濃度>0.38%時,收集洗脫液,送脫色;當(dāng)洗脫流出液ATP濃度〈0.38%時,即停止收集;
[0020]3)精制
[0021](I)脫色:洗脫液根據(jù)色澤加入0.1-0.5%活性炭和0.1-0.3%硅藻土攪拌I小時脫色,離心分離過濾后,脫色液經(jīng)檢驗合格后送超濾除蛋白;
[0022](2)超濾:將脫色液用〈I萬分子量的超濾膜進行超濾除蛋白,合格后送去結(jié)晶;
[0023](3)結(jié)晶:超濾液先用CP級HCl調(diào)pH至2.5-3.3,再用> I萬分子量的超濾膜進行超濾除蛋白,合格后放入結(jié)晶釜,開動攪拌,開始加入95% (v/v)乙醇,出現(xiàn)白色混濁