專利名稱：病毒聚合酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及RNA依賴性RNA聚合酶的抑制劑，尤其是那些黃病毒屬(Flaviviridae)家族的病毒聚合酶，更具體涉及HCV聚合酶。
背景技術(shù)：
在美國估計每年約新出現(xiàn)30,000例丙型肝炎病毒(HCV)感染(Kolykhalov，A.A.；Mihalik，K.；Feinstone，S.M.；Rice，C.M.；2000；J.Virol.742046-2051)。HCV不易由宿主的免疫防御清除；感染HCV的人口中有85％變成慢性感染。許多這些持續(xù)感染導致慢性肝病，包含肝硬化及肝細胞癌(Hoofnagle，J.H.；1997；Hepatology 2615S-20S)。估計全球約有17000萬人為HCV攜帶者，且與HCV相關(guān)的末期肝病現(xiàn)為導致肝移植的主要原因。僅在美國，丙型肝炎每年即有約8,000至10,000個死亡病例。若沒有有效的干預，在未來10至20年內(nèi)預期該數(shù)量將變?yōu)楝F(xiàn)在的三倍。并無疫苗可預防HCV感染。
以干擾素或干擾素與利巴偉林(ribavirin)的組合治療慢性感染的患者是目前唯一認可的療法。最近，PEG化的干擾素(PEG化干擾素α-2a(PegasysTM，Roche)和PEG化干擾素α-2b(PEG-IntroTM，Schering))在一些國家被認可上市用于治療慢性丙型肝炎感染，兩者都可以單獨和與利巴韋林組合使用。但據(jù)報道這些治療在少于60％的病例中獲得了持續(xù)反應(yīng)。
HCV屬于黃病毒屬家族、丙型肝炎病毒屬(genus hepacivirus)，其包括三種小的、有包膜的正鏈RNA病毒屬(Rice，C.M.；1996；“Flaviviridaetheviruses and their replication”；pp.931-960in Fields Virology；Fields，B.N.；Knipe，D.M.；Howley，P.M.(eds.)；Lippincott-Raven Publishers，PhiladelphiaPa.)。HCV的9.6kb基因組是由側(cè)接5′及3′非翻譯區(qū)(NTR)的長可讀框(ORF)所構(gòu)成。該HCV 5′NTR長度為341個核苷酸，且作用為用于不依賴于帽的翻譯啟動的內(nèi)部核糖體進入位點(Lemon，S.h.；Honda，M.；1997；Semin.Virol.8274-288)。該HCV多聚蛋白以共翻譯及翻譯后方式被切割成至少10個單獨的多肽(Reed，K.E.；Rice，C.M.；1999；Curr.Top.Microbiol.Immunol.24255-84)。該結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)源自該多聚蛋白N-末端部分的信號肽酶。兩個病毒性蛋白酶介導下游斷裂而產(chǎn)生非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白質(zhì)，其作用為HCV RNA復制酶的成分。該NS2-3蛋白酶跨越NS2的C-端一半及NS3的N-端三分之一，并催化NS2/3位點的順式切割。NS3的相同部分還編碼NS3-4A絲氨酸蛋白酶的催化區(qū)，所述酶在4個下游位點進行切割。NS3的C-端三分之二在HCV分離株(isolate)中為高度保守的，具有RNA-結(jié)合、RNA-刺激的NTPase及RNA解鏈活性。雖然NS4B及NS5A磷蛋白也可以為復制酶的成分，但其具體作用仍未知。該C-端多聚蛋白質(zhì)斷裂產(chǎn)物，NS5B，為具有RNA-依賴性RNA聚合酶(RdRp)活性的HCV復制酶的延長亞基(Behrens，S.E.；Tomei，L.；DeFrancesco，R.；1996；EMBO J.1512-22；andLohmann，V.；Krner，F(xiàn).；Herian，U.；Bartenschlager，R.；1997；J.Virol.718416-8428)。近來已證明破壞NS5B活性的突變在黑猩猩模型中可消除RNA感染性(Kolykhalov，A.A.；Mihalik，K.；Feinstone，S.M.；Rice，C.M.；2000；J.Virol.742046-2051)。
新的、具體的抗-HCV治療的發(fā)展為高度優(yōu)先的，且對復制必須的病毒特異性功能為藥物發(fā)展最引人注意的目標。哺乳動物中不存在有RNA依賴性RNA聚合酶，且此酶似乎為病毒復制所必須的事實將提示該NS5B聚合酶為抗-HCV療法的理想靶。WO 01/47883，WO 02/04425，WO 03/000254，WO 03/0007945，WO 03/010140，WO 03/026587，WO 03/101993，WO04/005286，WO 2004/064925，WO 2004/065367和WO 2004/087714提出NS5B抑制劑可用于HCV的治療。
HCV的NS5B聚合酶的吲哚抑制劑揭示在WO 03/010141。然而，本發(fā)明的抑制劑不同于該等揭示在WO 03/010141中的抑制劑，其在細胞-基礎(chǔ)HCV RNA復制實驗中表現(xiàn)出來意想不到的良好活性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供一新系列化合物，其對于HCV聚合酶具有好至很好的抑制活性和/或在細胞-基礎(chǔ)的HCV RNA復制實驗中具有意想不到的良好活性。
本發(fā)明另一目標對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說得自下列描述和實例。
在本發(fā)明的第一方面，提供式I表示的化合物，或其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，包括其鹽或酸類。
其中A或B為N且另一個B或A為C，其中兩個C-原子之間的-----代表雙鍵以及在C-原子和N-原子之間的-----代表單鍵；R1為H或(C1-6)烷基；R2選自鹵素、氰基、(C1-6)烷基、(C2-6)鏈烯基、(C2-6)炔基、(C3-7)環(huán)烷基、芳基和Het；該芳基和Het是任選地被R21取代；其中R21為一、二或三個取代基，其各自選自-OH、-CN、-N(RN2)RN1、鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、Het和-CO-N(RN2)RN1；其中該(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；R3為(C5-6)環(huán)烷基，任選地被一至四個鹵素原子取代；R4和R7各自獨立地選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基，(C1-6)烷硫基、-NH2、-NH(C1-6)烷基、-N((C1-6)烷基)2和鹵素；R5和R6之一選自COOH、-CO-N(RN2)RN1、芳基、Het和(C2-6)鏈烯基，其中芳基、Het、(C2-6)鏈烯基和RN1或任何在RN2和RN1之間形成的雜環(huán)基是各自任選地被R50取代；其中R50為一、二或三個取代基，其各自獨立地選自(C1-6)烷基、-COOH，-OH、氧代、-N(RN2)RN1，-CO-N(RN2)RN1和鹵素，其中(C1-6)烷基是任選地被芳基或-N(RN2)RN1取代；且R5和R6的另一個選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基和N(RN2)RN1；R8為(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基或(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-；其中該烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基各自任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；R9和R10各自獨立地選自(C1-6)烷基；或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烯基或具有1至3個各自獨立地選自O(shè)，N和S的雜原子的4-，5-或6-員雜環(huán)；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)基是在各自情況下任選地被(C1-4)烷基所取代；RN1選自H、(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-、-CO-(C1-6)烷基、-CO-O-(C1-6)烷基和Het；其中該(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基、-CO-(C1-6)烷基和-CO-O-(C1-6)烷基中各烷基和環(huán)烷基部分任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；且RN2為H或(C1-6)烷基，或RN2和RN1可以連接，并與其相連接的氮原子共同形成4-、5-、6-或7-員飽和、不飽和或芳香含N雜環(huán)基或8-、9-、10-或11-員含N飽和、不飽和或芳香雜雙環(huán)，各自任選地還具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子；其中由RN2和RN1形成的雜環(huán)或雜雙環(huán)是任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基所取代；其中Het定義為一4-、5-、6-或7-員雜環(huán)，具有1至4個雜原子，其各自選自O(shè)，N和S，該雜環(huán)可以為飽和、不飽和或芳香的，或8-、9-、10-或11員雜雙環(huán)，在可能的位置具有1至5個雜原子，其各自選自O(shè)、N和S，該雜環(huán)可以為飽和、不飽和或芳香的。
如前文中所述的式(I)的化合物包括在本發(fā)明的范疇內(nèi)，其至少連接有“可檢測標識”、“親和標記”和“光活性基團”之一。
根據(jù)本發(fā)明的化合物普遍顯示具有抗HCV聚合酶的抑制活性。根據(jù)本發(fā)明的具體化合物可利用HCV的RNA依賴性RNA聚合酶抑制RNA合成，特別是利用HCV編碼的NS5B酶。再者，根據(jù)本發(fā)明的化合物在細胞基礎(chǔ)的HCV RNA復制實驗中顯示意想不到的到的良好活性。本發(fā)明提供的化合物的另一好處為它們對其他聚合酶的低至極低或甚至無顯著的活性。
在本發(fā)明第二方面，提供根據(jù)本發(fā)明化合物的式I化合物或其藥學上可接受的鹽或酯或其組合物的用途，作為HCV聚合酶抑制劑，優(yōu)選作為由HCV編碼的酶NS5B的RNA依賴性RNA聚合酶活性抑制劑。
在本發(fā)明第三方面，提供根據(jù)本發(fā)明化合物的式I化合物或其藥學上可接受的鹽或酯或其組合物的用途，作為HCV復制的抑制劑。
在本發(fā)明第四方面，提供根據(jù)本發(fā)明化合物的式I化合物或其藥學上可接受的鹽或酯或其組合物的用途，用作治療或預防哺乳動物HCV感染。
在本發(fā)明第五方面，提供抑制由HCV編碼的酶NS5B的RNA-依賴RNA聚合酶活性的方法，包括在酶NS5B的RNA-依賴RNA聚合酶活性受到抑制的條件下，使酶NS5B暴露在有效量的式I化合物中。
在本發(fā)明第六方面，提供抑制HCV復制的方法，包括在HCV復制受到抑制的條件下，使受到HCV感染的細胞暴露在有效量的式I化合物中。
在本發(fā)明第七方面，提供治療或預防哺乳動物HCV感染的方法，包括給藥于該哺乳動物有效量的根據(jù)本發(fā)明的式I化合物，或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物。
在本發(fā)明第八方面，提供治療或預防哺乳動物HCV感染的方法，包括給藥于該哺乳動物有效量的式I化合物，或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物，并組合至少一種抗病毒藥物。
在本發(fā)明第九方面，提供用于治療或預防HCV感染的藥物組合物，包含有效量根據(jù)本發(fā)明的式I化合物，或其藥學上可接受的鹽或酯，以及藥學上可接受的載體。
根據(jù)具體實施例方式，本發(fā)明的藥物組合物還包含治療有效量的一種或多種抗病毒藥物?？共《舅幬锏膶嵗?但不限于)利巴韋林和金剛烷胺(amantadine)。
根據(jù)另一具體具體實例，本發(fā)明的藥物組合物還包含至少一種作為抗病毒藥物的其他抗-HCV劑。
根據(jù)另一具體實施方式
，本發(fā)明的藥物組合物包含另外的免疫調(diào)節(jié)劑作為其他抗-HCV劑。其他免疫調(diào)節(jié)劑的實例包括(但不限于)α-、β-、δ-、γ-、τ和ω-干擾素及其聚乙二醇化形式(pegylated forms)。
根據(jù)另一具體實施方式
，本發(fā)明的藥物組合物還包含至少一種HCV聚合酶的其他抑制劑作為其他抗-HCV劑。
根據(jù)另一具體實施方式
，本發(fā)明的藥物組合物還包含至少一種HCVNS3蛋白酶的抑制劑作為其他抗-HCV劑。
根據(jù)另一具體實施方式
，本發(fā)明的藥物組合物還包含至少一種在HCV生命周期中其他靶標的抑制劑作為其他抗-HCV劑。其他靶標的這樣的抑制劑實例包括(但不限于)抑制如下靶標的藥物，所述靶標選自HCV解旋酶、HCV NS2/3蛋白酶和HCV IRES，以及干擾其他病毒靶標功能的藥物，包括(但不限于)NS5A蛋白質(zhì)。
在本發(fā)明第十方面，提供根據(jù)本發(fā)明式I化合物的用途，或其藥學上可接受的鹽或酯或其組合物的用途，用于制備用于治療和/或預防黃病毒屬病毒感染優(yōu)選HCV感染的藥物。
在本發(fā)明第十一方面是制品主題，該制品包含能夠有效治療或預防HCV感染或抑制HCV的NS5B聚合酶的組合物，以及包裝材料，該包裝材料包含顯示該組合物可用于治療丙型肝炎病毒的標識，標識中寫明該組合物包含根據(jù)本發(fā)明式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯。
發(fā)明詳述除非另有說明否則將使用下列定義如本文中所使用，術(shù)語“(C1-n)烷基”，其中n為整數(shù)，單獨或與其他基團組合，是分別指包含1至n個碳原子的非環(huán)直鏈或支鏈烷基基團。這樣的烷基實例包括(但不限于)甲基、乙基、正-丙基、1-甲基乙基(異-丙基)、正-丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)、正戊基等。在下述中，術(shù)語Me代表甲基。
如果烷基被鹵素取代，優(yōu)選為被氟單-、二-或三取代或被氯或溴單取代。
如本文中所使用，術(shù)語“(C2-n)鏈烯基”，其中n為整數(shù)，單獨或與其他基團組合，是指包含2至n個碳原子的不飽和、非環(huán)直鏈或支鏈基團，其中至少有兩個碳原子通過雙鍵互相鍵合。這樣的鏈烯基的實例包括(但不限于)乙烯基(乙烯基)、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基等。該術(shù)語包括(C2-n)鏈烯基的順式和反式異構(gòu)體及其混合物。(C2-n)鏈烯基可在其任何碳原子上被取代，否則其將帶有氫原子。
如本文中所使用，術(shù)語“(C2-n)炔基”，其中n為整數(shù)，單獨或與其他基團組合，指包含2至n個碳原子的非環(huán)、直鏈或支鏈基團，其中至少有兩個碳原子通過三鍵鍵合。這樣的炔基的實例包括(但不限于)乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基和1-丁炔基。(C2-n)炔基基團可在其任何碳原子上被取代，否則其將帶有氫原子。
如本文中所使用，術(shù)語“(C3-n)環(huán)烷基”，其中n為整數(shù)，單獨或與其他基團組合，指包含3至n個碳原子的環(huán)烷基。這樣的環(huán)烷基的實例為包括(但不限于)環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
如本文中所使用，術(shù)語“(C5-n)環(huán)烯基”，其中n為整數(shù)，單獨或與其他基團組合，指包含5至n個碳原子的不飽和環(huán)狀基團。實例包括(但不限于)環(huán)戊烯基和環(huán)己烯基。
如本文中所使用，術(shù)語“(C3-m)環(huán)烷基-(C1-n)烷基-”，其中n和m為整數(shù)，單獨或與其他基團組合，指含有三至m個碳原子的環(huán)烷基共價結(jié)合到具有1至n個碳原子的支鏈或直鏈烷基。(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-的實例包括(但不限于)環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、1-環(huán)丙基乙基、2-環(huán)丙基乙基、1-環(huán)丁基乙基、2-環(huán)丁基乙基、1-環(huán)戊基乙基、2-環(huán)戊基乙基、1-環(huán)己基乙基、2-環(huán)己基乙基等。
如本文中所使用，術(shù)語“保護性基團”定義為可用在合成轉(zhuǎn)變期間的保護性基團，這些實例列在Greene，“Protective Groups in Organic Chemistry”，John Wiley & Sons，New York(1981)及“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，Vol.3，Academic Press，New York(1981)中。
羧基基團通常被保護成酯，酯可被切斷而得到羧酸?？墒褂玫谋Ｗo性基團包括(但不限于)1)烷基酯例如甲基、乙基、三甲基硅烷基乙基和叔丁基，2)芳烷基酯例如苯甲基和被取代苯甲基，或3)可利用弱堿處理或弱還原性方法切斷的酯，例如三氯乙基和苯甲酰甲基酯。
如本文中所使用，術(shù)語“芳基”，單獨或與其他基團組合，指6-或10員芳基，即含有六或十個碳原子的芳基基團。實例包括(但不限于)苯基、1-萘基或2-萘基。
如本文中所使用，術(shù)語“Het”定義為具有1至4個各自獨立地選自O(shè)，N和S的雜原子的4-、5-、6-或7-員雜環(huán)基，可以為飽和、不飽和或芳香的，或8-、9-、10-或11員雜雙環(huán)，在可能的位置具有1至5個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子，除非另有說明否則該環(huán)可以為飽和、不飽和或芳香的。
如本文中所使用，術(shù)語“雜原子”指O、S或N。
如本文中所使用，術(shù)語“雜環(huán)”，單獨或與其他基團組合，指可利用將氫原子從五-、六-或七-員飽和或不飽和(包括芳香的)的含有一至四個選自氮、氧和硫的雜原子的雜環(huán)中除去而衍生出來的單價游離基。該雜環(huán)的實例包括(但不限于)吖啶(azetidine)、吡咯烷、四氫呋喃、噻唑烷、吡咯、噻吩(thiophene)、乙內(nèi)酰脲(hydantoin)、二氮雜(diazepine)、1H-咪唑、異唑、噻唑、四唑、哌啶、哌嗪、高哌啶(homopiperidine)、高哌嗪(homopiperazine)、1，4-二烷、4-嗎啉、4-硫嗎啉、吡啶、吡啶-N-氧化物或嘧啶，或下列雜環(huán) 如本文中所使用，術(shù)語“9-或10-員雜雙環(huán)”或“雜雙環(huán)”，單獨或與其他基團組合，指如上定義稠合到一個或多個其他環(huán)(雜雙環(huán)基或任何其他環(huán))上的雜環(huán)基。該雜雙環(huán)的實例包括(但不限于)吲哚、苯并咪唑、噻唑并[4，5-b]-吡啶、喹啉(quinoline)或香豆素，或如下列所示 如本文中所使用，術(shù)語“鹵”或“鹵素”指鹵素原子并包括氟、氯、溴和碘。
如本文中所使用，術(shù)語“OH”是指羥基基團。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知羥基基團可被等價的官能團取代。包括在本發(fā)明范疇內(nèi)的這些價官能團實例包括(但不限于)醚、巰基、硫醚和伯、仲或叔胺。
如本文中所使用，術(shù)語“SH”是指巰基基團。在本發(fā)明范疇內(nèi)，任何時候出現(xiàn)的“SH”或“SR”基團，其皆可由任何其他適合的氧化態(tài)所取代，例如SOR、SO2R或SO3R。
如本文中所使用，術(shù)語“(C1-n)烷氧基”是指還鍵合到(C1-n)烷基基團的氧原子。(C1-6)烷氧基的實例包括(但不限于)甲氧基(CH3O-)、乙氧基(CH3CH2O-)、正丙氧基(CH3CH2CH2O-)、1-甲基乙氧基(異丙氧基；(CH3)2CHO-)、1，1-二甲基乙氧基(叔丁氧基；(CH3)3CO-)等。當(C1-n)烷氧基基團被取代時，理解為在其(C1-n)烷基部分被取代。
如本文中所使用，術(shù)語“(C1-n)烷硫基”是指還鍵合到(C1-n)烷基基團的硫原子。(C1-6)烷硫基的實例包括(但不限于)甲硫基(CH3S-)、乙硫基(CH3CH2S-)、正丙硫基(CH3CH2CH2S-)、1-甲基乙硫基(異丙硫基；(CH3)2CHS-)、1，1-二甲基乙硫基(叔丁硫基(CH3)3CS-)等。當(C1-n)烷硫基基團被取代時，理解為在其(C1-n)烷基部分取代。
術(shù)語“氧代”如本文中所使用，指通過雙鍵作為取代基連接至碳原子的氧原子(＝O)。
術(shù)語“被取代”在連接具有超過一個部分的基團仲被使用，例如(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-，這樣的取代適用于兩個部分，即烷基和環(huán)烷基部分的其中一部分或兩者都能被已定義的取代基取代。
如本文中所使用，術(shù)語“COOH”指羧酸基團。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知羧酸基團可由官能團等價物代替。本發(fā)明所包括的該官能團等價物實例包括(但不限于)酯、酰胺、酰亞胺、硼酸、膦酸(phosphonic acids)、磺酸、四唑類、三唑類、N-?；酋；０奉?RCONHSO2NR2)和N-?；酋０奉?RCONHSO2R)。
如本文中所使用，術(shù)語“官能團等價物”指元素或基團或其被取代的衍生物，其可由具有相似電子、雜化或鍵合性質(zhì)的元素或基團所代替。
下列符號 和 可在子式中互換地使用以表示該鍵，或在螺環(huán)基團的情況表示鍵合到如上定義的該分子其他部分上的原子。
如本文中所使用，術(shù)語“可檢測標識”指可和聚合酶連接或和本發(fā)明化合物連接的任何基團，這樣的連接使得當該化合物與該聚合酶靶標聯(lián)系時，該標識使得該化合物可直接或間接得到識別，從而該化合物可檢測、測量和定量。該“標識”的實例包括(但不限于)熒光標識、化學發(fā)光標識、比色標識、酶標記、放射性同位素和親和標記，例如生物素。利用熟知的方法將該標識連接在化合物上或聚合酶上。
如本文中所使用，術(shù)語“親和標記”指(可連接到聚合酶或本發(fā)明化合物的)配位體，其對受體的強親和力可用于從溶液中萃取該配位體所連接的實體。該配位體的實例包括(但不限于)生物素或其衍生物、組胺多肽、聚精氨酸、直鏈淀粉糖部分或可被具體抗體辨識的已定義表位。利用熟知的方法將該親和標記連接在化合物上或聚合酶上。
如本文中所使用，術(shù)語“光反應(yīng)基團”指被光活化從惰性基團轉(zhuǎn)變成反應(yīng)活性物種的基團，例如自由基。該基團可用作例如光親和性標識。該基團的實例包括(但不限于)二苯酮(benzophenones)、疊氮化合物等。
術(shù)語“其鹽”指根據(jù)本發(fā)明化合物的任何酸及/或堿加成鹽；優(yōu)選為其藥學上可接受的鹽。
術(shù)語“藥學上可接受的鹽”指式(I)的化合物的鹽，在可靠的醫(yī)學判斷范疇內(nèi)，適用于和人類或比較低等動物的組織接觸而不會有不適當毒性、刺激、過敏反應(yīng)等問題，符合合理的利益/危險比，一般而言水溶性或油溶性或可分散且對這些預期用途有效。該術(shù)語包括藥學上可接受的酸加成鹽和藥學上可接受的堿加成鹽。適用鹽的實例可在例如S.M.Birge等，J.Pharm.Sci.，1977，66，pp.1-19中發(fā)現(xiàn)。
術(shù)語“藥學上可接受的酸加成鹽”指這些鹽保留有生物有效性和游離堿的性質(zhì)且不是生物上或其他方面所不希望的，其為與無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸等所形成，以及與有機酸例如醋酸、三氟醋酸、己二酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、丁酸、樟腦酸、樟腦磺酸(camphorsulfonic acid)、肉桂酸、檸檬酸、二葡萄糖酸、乙烷磺酸、谷氨酸、乙醇酸、甘油膦酸、半硫酸(hemisulfic acid)、己酸、甲酸、富馬酸、2-羥基乙磺酸(羥乙基磺酸)、乳酸、羥基馬來酸、蘋果酸、丙二酸、扁桃酸、均三甲基苯磺酸(mesitylenesulfonic acid)、甲磺酸、萘磺酸、煙酸、2-萘磺酸、草酸、雙羥萘酸(pamoic acid)、果膠酯酸、苯基醋酸、3-苯丙酸、特戊酸、丙酸、丙酮酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、對氨基苯磺酸(sulfanilicacid)、酒石酸、對-甲苯磺酸、十一烷酸等所形成。
術(shù)語“藥學上可接受的堿加成鹽”指這些鹽保留有生物有效性和游離酸的性質(zhì)且沒有生物上或其他方面所不希望的，其為與無機堿例如氨或金屬陽離子例如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、鎂、鋁等或銨的氫氧化物、碳酸鹽或二碳酸鹽所形成。尤其優(yōu)選銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。衍生自藥學上可接受的有機無毒堿的鹽包括伯、仲和叔胺類的鹽、季胺化合物、被取代的胺類包括天然存在的被取代胺類、環(huán)胺類和堿性離子交換樹脂，例如甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、乙基胺、二乙基胺、三乙基胺、異丙基胺、三丙基胺、三丁基胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二環(huán)己基胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、海巴明(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、亞乙基二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、四甲基銨化合物、四乙基銨化合物、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、二苯甲基胺、N，N-二苯甲基苯乙基胺、1-二苯羥甲胺(1-ephenamine)、N，N′-二苯甲基亞乙基二胺、聚胺樹脂等。尤其優(yōu)選的有機無毒堿為異丙基胺、二乙基胺、乙醇胺、三甲基胺、二環(huán)己基胺、膽堿和咖啡因。
術(shù)語“其酯”指化合物的任何酯，其中該分子的任何羧基官能團被烷氧基羧基官能團所代替，包括(但不限于)其藥學上可接受酯。
術(shù)語“藥學上可接受酯”如本文中所使用，可單獨或和另一取代基結(jié)合，指式(I)化合物的酯，其分子中任何羧基官能團(但優(yōu)選為羧基端)被烷氧基羰基官能團所代替 其酯的R部分選自烷基(例如甲基、乙基、正丙基、叔丁基、正丁基)；烷氧基烷基(例如甲氧基甲基)；烷氧基?；?例如乙酰氧基甲基)；芳烷基(例如苯甲基)；芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)；芳基(例如苯基)，任選地被鹵素、(C1-4)烷基或(C1-4)烷氧基取代。其他適用的酯可在Design of prodrugs，Bundgaard，H.Ed.Elsevier(1985)中發(fā)現(xiàn)。這些藥學上可接受酯注射至哺乳動物體內(nèi)時，其通常會在體內(nèi)水解并轉(zhuǎn)變成式(I)化合物的酸形式。關(guān)于上述的這些酯，除非另有說明否則任何存在的烷基部分有利地含有1至16個碳原子，尤其是1至6個碳原子。存在于該酯的任何芳基部分有利地含有苯基基團。具體而言，該酯可為(C1-16)烷基酯、未被取代的苯甲酯或被至少一個鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、硝基或三氟甲基取代的苯甲酯。
術(shù)語“抗病毒藥物”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳動物體內(nèi)病毒的形成和/或復制的藥物(化合物或生物制品)。該藥物包括在哺乳動物體內(nèi)干擾宿主或干擾病毒形成和/或復制所需病毒機制的藥物?？共《舅幬锇?但不限于)利巴韋林、金剛烷胺、VX-497(merimepodib，VertexPharmaceuticals)、VX-498(Vertex Pharmaceuticals)、利聲顯(Levovirin)、韋拉米丁(Viramidine)、賽普林(Ceplene)(二鹽酸組胺(maxamine))、XTL-001和XTL-002(XTL Biopharmaceuticals)。
術(shù)語“其他抗-HCV藥物”如本文中所使用，指能有效減輕或預防丙型肝炎相關(guān)疾病癥狀的這些藥物。該藥物可選自免疫調(diào)節(jié)藥物、HCV NS3蛋白酶的抑制劑、HCV聚合酶的其他抑制劑或在HCV生命周期中其他靶標的抑制劑。
術(shù)語“免疫調(diào)節(jié)劑”如本文中所使用，指能有效強化或加強哺乳動物體內(nèi)免疫系統(tǒng)反應(yīng)的這些藥物(化合物或生物制品)。這些免疫調(diào)節(jié)劑包括(但不限于)第I類干擾類(例如α-，β-，δ-和ω干擾素、τ-干擾素、共有干擾素(consensus interferons)和脫唾液酸(asialo)-干擾素)、第II類干擾系(例如γ-干擾素)及其聚乙二醇化形式(pegylated forms)。
術(shù)語“HCV NS3蛋白酶的抑制劑”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳動物體內(nèi)的HCV NS3蛋白酶功能的藥物(化合物或生物制品)。這些HCVNS3蛋白酶抑制劑包括(但不限于)下列所描述的這些化合物WO 99/07733，WO 99/07734，WO 00/09558，WO 00/09543，WO 00/59929，WO 02/060926，US 2002/0177725，WO 03/053349，WO 03/062265，WO 03/064416，WO03/064455，WO 03/064456，WO 03/099316，WO 03/099274，WO 2004/032827，WO 2004/037855，WO 2004/043339，WO 2004/072243，WO 2004/093798，WO2004/094452，WO 2004/101602，WO 2004/101605，WO 2004/103996、經(jīng)鑒定為BILN 2061的Boehringer Ingelheim臨床候選者以及經(jīng)鑒定為VX-950的Vertex臨床候選者。
術(shù)語“HCV聚合酶的其他抑制劑”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳動物體內(nèi)HCV聚合酶功能的藥物(化合物或生物制品)，其中該藥物具有不同于根據(jù)本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)且優(yōu)選為結(jié)合于不同于根據(jù)本發(fā)明化合物靶標部位的HCV聚合酶部位。HCV聚合酶其他抑制劑包括非核苷類，例如下列所描述的這些化合物WO 2004/087714(IRBM)、WO 04/005286(Gilead)、WO 04/002977(Pharmacia)、WO 04/002944(Pharmacia)、WO04/002940(Pharmacia)、WO 03/101993(Neogenesis)、WO 03/099824(Wyeth)、WO 03/099275(Wyeth)、WO 03/099801(GSK))、WO 03/097646(GSK)、WO03/095441(Pfizer)、WO 03/090674(Viropharma)、WO 03/084953(B&CBiopharm)、WO 03/082265(Fujisawa)、WO 03/082848(Pfizer)、WO03/062211(Merck)、WO 03/059356(GSK)、EP 1321463(Shire)、WO03/040112(Rigel)、WO 03/037893(GSK)、WO 03/037894(GSK)、WO03/037262(GSK)、WO 03/037895(GSK)、WO 03/026587(BMS)、WO03/002518(Dong Wha)、WO 03/000254(Japan Tobacco)、WO 02/100846A1(Shire)、WO 02/100851A2(Shire)、WO 02/098424 A1(GSK)、WO02/079187(Dong Wha)、WO 03/02/20497(Shionogi)、WO 02/06246(Merck)、WO 01/47883(Japan Tobacco)、WO 01/85172A1(GSK)、WO 01/85720(GSK)、WO 01/77091(Tularik)、WO 00/18231(Viropharma)、WO00/13708(Viropharma)、WO 01/10573(Viropharma)、WO 00/06529(Merck)、EP 1 256 628 A2(Agouron)、WO 02/04425(Boehringer Ingelheim)、WO03/007945(Boehringer Ingelheim)、WO 03/010140(Boehringer Ingelheim)、WO03/010141(Boehringer Ingelheim)、WO 2004/064925(Boehringer Ingelheim)及WO 2004/065367(Boehringer Ingelheim)。HCV聚合酶的其他抑制劑也包括核苷類似物，例如下列描述的這些化合物WO 04/007512(Merck/Isis)、WO04/003000(Idenix)、WO 04/002999(Idenix)、WO 04/0002422(Idenix)、WO04/003138(Merck)、WO 03/105770(Merck)、WO 03/105770(Merck)、WO03/093290(Genelabs)、WO 03/087298(Biocryst)、WO 03/062256(Ribapharm)、WO 03/062255(Ribapharm)、WO 03/061385(Ribapharm)、WO03/026675(Idenix)、WO 03/026589(Idenix)、WO 03/020222(Merck)、WO03/000713(Glaxo)、WO 02/100415(Hoffmann-La Roche)、WO02/1094289(Hoffmann-La Roche)、WO 02/051425(Mitsubishi)、WO02/18404(Hoffmann-La Roche)、WO 02/069903(Biocryst Pharmaceuticals Inc.)、WO 02/057287(Merck/Isis)、WO 02/057425(Merck/Isis)、WO01/90121(Idenix)、WO 01/60315(Shire)和WO 01/32153(Shire)。
術(shù)語“HCV生命周期中另外靶標的抑制劑”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳動物體內(nèi)HCV的形成和/或復制而不是利用抑制HCV的RNA依賴性RNA聚合酶的藥物(化合物或生物制品)，該藥物包括在哺乳動物體內(nèi)干擾宿主或干擾病毒形成和/或復制所需病毒機制的藥物。HCV生命周期中另外靶標的抑制劑包括(但不限于)抑制選自HCV解旋酶、HCV NS2/3蛋白酶和HCV IRES靶標的藥物以及干擾其他病毒靶標功能的藥物，該靶標包括(但不限于)NS5A蛋白質(zhì)。
術(shù)語“HIV抑制劑”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳動物體內(nèi)HCV形成和/或復制的藥物(化合物或生物制品)。該藥物包括在哺乳動物體內(nèi)干擾宿主或干擾HIV病毒形成和/或復制所需病毒機制的藥物。HIV抑制劑包括(但不限于)核苷抑制劑、非-核苷抑制劑、蛋白酶抑制劑、融合抑制劑和整合酶抑制劑。
術(shù)語“HAV抑制劑”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳動物體內(nèi)HAV形成和/或復制的藥劑(化合物或生物制品)。該藥物包括在哺乳動物體內(nèi)干擾宿主或干擾HAV形成和/或復制所需病毒機制的藥物。該HAV抑制劑包括(但不限于)甲型肝炎病苗，例如Havrix(GlaxoSmithKline)、VAQTA(Merck)和Avaxim(Aventis Pasteur)。
術(shù)語“HBV抑制劑”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳動物體內(nèi)HBV形成和/或復制的藥物(化合物或生物制品)。該藥物包括在哺乳動物體內(nèi)干擾宿主或干擾HBV形成和/或復制所需病毒機制的藥物。該HBV抑制劑包括抑制HBV病毒性DNA聚合酶的藥物或HBV疫苗。HBV抑制劑的具體實例包括(但不限于)拉米夫定(Epivir-HBV)、阿德福韋酯(AdefovirDipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)、FTC(Coviracil)、DAPD(DXG)、L-FMAU(Clevudine)、AM365(阿墨雷德(Amrad))、Ldt(泰布韋丁(Telbivudine))、麥洛維-LdC(monoval-LdC)(弗特西他賓(Valtorcitabine))、ACH-126,443(L-Fd4C)(阿契里恩(Achillion))、MCC478(禮來(Eli Lilly))、瑞西佛(Racivir)(RCV)、氟(Fluoro)-L和D核苷、羅波斯塔黃酮(Robustaflavone)、ICN 2001-3(ICN)、賓姆(Bam)205(諾維羅絲(Novelos))、XTL-001(XTL)、亞胺糖(Imino-Sugars)(Nonyl-DNJ)(Synergy)、HepBzyme；以及免疫調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品例如干擾素α2b、HE2000(Hollis-Eden)、表位多肽(Theradigm)(Epimmune)、EHT899(Enzo Biochem)、胸腺肽(Thymosin)α-1(Zadaxin)、HBV DNA疫苗(PowderJect)，HBV DNA疫苗(Jefferon Center)、HBV抗原(OraGen)、BayHepB(拜爾(Bayer))、Nabi-HB(納比(Nabi))和抗-乙型肝炎(肯基因(Cangene))；以及HBV疫苗產(chǎn)品，例如下列所示安在時乙肝疫苗(Engerix B)、雷康百維克斯乙肝疫苗(Recombivax HB)、金海韋乙肝疫苗(GenHevac B)、照顧肝疫苗(Hepacare)、生-肝乙肝疫苗(Bio-Hep B)、雙雷斯疫苗(TwinRix)、康維克斯(Comvax)、海塞維克(Hexavac)。
術(shù)語“第I類干擾素”如本文中所使用，指選自所有和第I型受體結(jié)合的干擾素。這些干擾素包括天然和合成產(chǎn)生的第I類干擾素。第I類干擾素實例包括(但不限于)α-、β-、δ-、ω-干擾素、τ-干擾素、共有干擾素、脫唾液酸(asialo)-干擾素及其聚乙二醇化形式(pegylated forms)。
術(shù)語“第II類干擾素”如本文中所使用，指自所有和第II型受體結(jié)合干擾素群中選出的干擾素。這些干擾素包括天然和合成產(chǎn)生的第II類干擾素。第II類干擾素的實例包括(但不限于)γ-干擾素及其聚乙二醇化形式(pegylated forms)。
如上所討論，也包括組合治療，其中式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯是和至少一種選自下列的其他藥物共同給藥抗病毒藥物、免疫調(diào)節(jié)劑、HCV NS3蛋白酶的抑制劑、HCV聚合酶的另外抑制劑、HCV生命周期中其他靶標的抑制劑、HIV抑制劑、HAV抑制劑和HBV抑制劑。這些藥物的實例已在上述定義部分中提供。這些藥物尤其優(yōu)選的實例如下所列■抗病毒藥物利巴韋林或金剛烷胺；■免疫調(diào)節(jié)劑第I類干擾素、第II干擾素或其聚乙二醇化形式(pegylatedforms)；■HCV NS3蛋白酶抑制劑；■HCV聚合酶的其他抑制劑核苷或非-核苷抑制劑；■HCV生命周期中其他靶標的抑制劑，其抑制選自下列的靶標NS3解旋酶、HCV NS2/3蛋白酶和內(nèi)部核醣體進入位點(IRES)，或者是干擾NS5A蛋白質(zhì)功能的藥物；■HIV抑制劑核苷抑制劑、非-核苷抑制劑、蛋白酶抑制劑、融合抑制劑或整合酶抑制劑；或■HBV抑制劑抑制HBV病毒DNA聚合酶的藥物或是HBV疫苗的藥物。
這些其他藥物可和本發(fā)明化合物組合以創(chuàng)造單一藥物劑型。或者這些其他藥劑可以作為多種劑型的一部分，例如使用試劑盒，而分別給藥于病人。這些其他藥物可在式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或酯給藥前、給藥同時或給藥后給藥。
如本文中所使用，術(shù)語“治療”指根據(jù)本發(fā)明化合物或組合物的給藥，以減輕或消除丙型肝炎疾病的癥狀和/或減輕病人的病毒負載。
如本文中所使用，術(shù)語“預防”指根據(jù)本發(fā)明化合物或組合物當個人暴露到該病毒后但在該疾病的癥狀出現(xiàn)前和/或在達到血液中病毒可檢測程度前的給藥。
優(yōu)選實施方式除非另有說明否則，包括(但不限于)R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R21、R50、RN1、RN2、A、B和Het的所有基團和取代基具有如前文或本文之后所定義的定義。在下述中，對根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的實施方式、基團和取代基進行描述。
核心本發(fā)明包含式Ia的化合物 或者，本發(fā)明包含式Ib的化合物 R1.
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實施方式R1選自H、甲基和乙基。
更優(yōu)選地，R1為甲基。
R2優(yōu)選地，R2選自鹵素、氰基、(C1-4)烷基、(C2-4)鏈烯基、(C2-4)炔基、(C3-6)環(huán)烷基、苯基和選自下式的Het 其中該苯基和Het為未被取代或被R21取代，其中R21如本文中所定義。
更優(yōu)選地，R2選自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、環(huán)丙基、苯基和選自下式的Het
其中該苯基和Het為未被取代或被R21取代，其中R21如本文中所定義。
R21優(yōu)選地，R21為1、2或3取代基，其各自獨立地選自-1至3個取代基，其各自獨立地選自鹵素；和-1至2個取代基，其各自獨立地選自a)羥基、(C1-4)烷基或(C1-4)烷氧基；其中該烷基和烷氧基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-NRN2RN1其中RN1選自H、(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基、-CO-O-(C1-3)烷基和Het；其中每個該(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基和-CO-O-(C1-3)烷基的烷基部分是任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-6)烷氧基的取代基所取代；且其中該Het為5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或具有1至2個各自獨立地選自N，O和S的雜原子的芳香雜環(huán)基；且RN2為H或(C1-3)烷基；c)-CONRN2RN1，其中RN2和RN1各自獨立地選自H和(C1-3)烷基；以及d)Het，其中該Het為5-或6-員單環(huán)的雜環(huán)基，其具有1，2或3個各自獨立地選自N，O和S的雜原子。
更優(yōu)選地，R21為1，2或3個取代基，其各自獨立地選自-1至2個取代基，各自獨立地選自氟、氯和溴；和
-1至2個取代基，其各自獨立地選自a)羥基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1-甲基乙氧基；其中該甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和1-甲基乙氧基任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-N(CH3)2或-NHRN1其中RN1選自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基；其中所述甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-3)烷氧基的取代基所取代；c)-CONH2；以及d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-嗎啉代。
因此優(yōu)選地，R2選自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、環(huán)丙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、
更優(yōu)選地，R2選自環(huán)丙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、
更優(yōu)選地，R2選自 最優(yōu)選地，R2選自 R3優(yōu)選地，R3為環(huán)戊基或環(huán)己基，各自任選地被一或二個氟原子所取代。
更優(yōu)選地，R3為環(huán)戊基或環(huán)己基。
R4和R7優(yōu)選地R4為H或鹵素且R7為H。
更優(yōu)選地，R4為H或Cl且R7為H。
最優(yōu)選地，R4和R7皆為H。
R5和R6優(yōu)選地，R5和R6之一選自a)被COOH或CONHRN1取代的(C2-4)鏈烯基，其中RN1選自H和(C1-3)烷基、該鏈烯基任選地還被一或二個各自獨立地選自(C1-3)烷基和鹵素的取代基所取代；b)苯基或Het，各自任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基取代i.-OH、氧代、COOH；ii.任選地被苯基或-N(RN2)RN1所取代的(C1-3)烷基，其中RN1和RN2各自獨立地選自H和(C1-3)烷基，或RN1和RN2與其相連接的氮原子共同形成5-或6-員單環(huán)、飽和、不飽和或芳香含N雜環(huán)，該雜環(huán)任選地還具有一或二個各自獨立地選自N，O和S的雜原子；以及iii.-N(RN2)RN1；其中RN1選自H、(C1-3)烷基和-CO(C1-3)烷基且RN2為H或(C1-3)烷基；其中Het為5-或6-員單環(huán)、飽和、不飽和或芳香雜環(huán)，具有1至3個各自獨立地選自O(shè)，N和S的雜原子；和c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、NHRN1、(C1-3)烷基和(C1-3)烷氧基，其中RN1選自H和-CO-O-(C1-6)烷基。
更優(yōu)選地，R5和R6之一選自a)被COOH或-CONH2取代的(C2-4)鏈烯基，并任選地還被一或二個選自(C1-3)烷基和鹵素的取代基取代；和b)苯基或Het，各自任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基取代i.-OH、氧代、COOH；ii.(C1-3)烷基，任選地被苯基、-N(CH3)2或 取代；以及iii.-NH2，-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式
c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-O-CH(CH3)2。
更優(yōu)選地，R5和R6之一選自a)-CH＝CH-COOH或-CH＝CH-CONH2，各自任選地被一或二個選自甲基、乙基和氟的取代基取代；和b)任選地被NH2取代的苯基，或Het，任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代i.-OH、氧代、COOH；ii.甲基或乙基，各自任選地被苯基、-N(CH3)2或 取代；和iii.-NH2、-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式 c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-O-CH(CH3)2。
還更優(yōu)選地，R5和R6之一選自-COOH、
且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-O-CH(CH3)2。
最優(yōu)選地，R5和R6之一為 且R5和R6的另一個為H。
或者最優(yōu)選地，R5和R6之一選自 且R5和R6的另一個為H。
R8優(yōu)選地，R8選自(C1-5)烷基、(C4-6)環(huán)烷基和(C3-4)環(huán)烷基-(C1-3)烷基，其中該(C1-5)烷基是任選地被(C1-3)烷氧基或被一至三個氟原子所取代。
更優(yōu)選地，R8選自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基。
最優(yōu)選地R8為甲基。
R9和R10優(yōu)選地，R9和R10各自獨立地選自(C1-3)烷基，或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-6)環(huán)烷基、(C5-6)環(huán)烯基或具有1至2個各自獨立地選自O(shè)和N的雜原子的5-或6-員單環(huán)雜環(huán)；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)各自任選地被(C1-4)烷基取代。
更優(yōu)選地，基團 選自 更優(yōu)選地，基團 選自 最優(yōu)選地，基團 為 式I的化合物是包括在本發(fā)明的范疇內(nèi) 其中A或B為N且B或A的另一個為C，其中在兩個C-原子之間的-----代表雙鍵且C-原子和N-原子之間的-----代表單鍵；R1為H或(C1-6)烷基；R2為鹵素、芳基或Het；該芳基和Het是任選地被R21取代；其中R21為一、二或三個取代基，其各自獨立地選自-OH，-CN，-N(RN2)RN1、鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、Het和-CO-N(RN2)RN1；其中該烷基、烷氧基和烷硫基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；R3為(C5-6)環(huán)烷基，任選地被一至四個鹵素原子所取代；R4和R7各自獨立地選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基，(C1-6)烷硫基、-NH2、-NH(C1-6)烷基、-N((C1-6)烷基)2和鹵素；R5和R6之一選自COOH、-CO-N(RN2)RN1、Het和(C2-6)鏈烯基，其中Het、(C2-6)鏈烯基及RN1或在RN2和RN1之間形成的任何雜環(huán)各自任選地被R50取代；其中R50為一、二或三個取代基，其各自獨立地選自(C1-6)烷基、-COOH，-N(RN2)RN1，-CO-N(RN2)RN1和鹵素；且R5和R6的另一個選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基和N(RN2)RN1；R8為(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基或(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-；其中該烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基各自任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；R9和R10各自獨立地選自(C1-6)烷基；或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烯基或具有1至3個雜原子的4-，5-或6-員雜環(huán)，該雜原子各自獨立地選自O(shè)、N和S；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)基各自任選地被(C1-4)烷基取代；RN1選自H、(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-、-CO-(C1-6)烷基、-CO-O-(C1-6)烷基和Het；其中所有該烷基和環(huán)烷基是任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；且RN2為H或(C1-6)烷基，或RN2和RN1可以連接，并與其相連接的氮原子共同形成4-、5-、6-或7-員飽和或不飽和含N雜環(huán)，或8-、9-、10-或11-員含N雜雙環(huán)，各自還具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子；其中該由RN2和RN1形成的雜環(huán)或雜雙環(huán)是任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；其中Het定義為具有1至4個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-、5-、6-或7-員雜環(huán)，可以為飽和、不飽和或芳香的，或在可能位置具有1至5個各自獨立地選自O(shè)、N和S還原雜原子還原8-、9-、10-或11員雜雙環(huán)，可以為飽和、不飽和或芳香的；或其鹽。
式(I)尤其是式Ia或Ib的化合物也包括在本發(fā)明范疇內(nèi)，其中R1選自H、甲基和乙基；R2選自鹵素、氰基、(C1-4)烷基、(C2-4)鏈烯基、(C2-4)炔基、(C3-6)環(huán)烷基、苯基和選自下式的Het 其中該苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21為1，2或3個取代基，其各自獨立地選自-1，2或3個取代基，其各自獨立地選自鹵素；和-1或2個取代基，其各自獨立地選自a)羥基、(C1-4)烷基或(C1-4)烷氧基；其中該烷基和烷氧基是各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-NRN2RN1其中RN1選自H、(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基、-CO-O-(C1-3)烷基和Het；其中每個該(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基和-CO-O-(C1-3)烷基的烷基部分是任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-6)烷氧基的取代基所取代；且其中該Het為具有1或2個各自獨立地選自N，O和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或芳香雜環(huán)；且RN2為H或(C1-3)烷基；c)-CONRN2RN1，其中RN2和RN1各自獨立地選自H和(C1-3)烷基；和
d)Het，其中該Het為具有1，2或3個各自獨立地選自N，O和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)雜環(huán)；R3為環(huán)戊基或環(huán)己基，各自任選地被一至四個氟原子所取代；R4為H或鹵素且R7為H；R5和R6之一選自a)被COOH或CONHRN1取代的(C2-4)鏈烯基，其中RN1選自H和(C1-3)烷基，該鏈烯基任選地還被一或二個各自獨立地選自(C1-3)烷基和鹵素取代基所取代；b)苯基或Het，各自任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代i.-OH、氧代、COOH；ii.任選地被苯基或-N(RN2)RN1取代的(C1-3)烷基，其中RN1和RN2各自獨立地選自H和(C1-3)烷基，或RN1和RN2連接，并與其相連接的氮原子共同形成5-或6-員單環(huán)、飽和、不飽和或芳香含N雜環(huán)，該雜環(huán)任選地還具有一或二個各自獨立地選自N，O和S的雜原子；和iii.-N(RN2)RN1；其中RN1選自H、(C1-3)烷基和-CO(C1-3)烷基且RN2為H或(C1-3)烷基；其中Het為具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或芳香雜環(huán)；及c)COOH；且R5和R6的另一個選自H，NHRN1、(C1-3)烷基和(C1-3)烷氧基，其中RN1選自H和-CO-O-(C1-6)烷基；R8選自(C1-5)烷基、(C4-6)環(huán)烷基和(C3-4)環(huán)烷基-(C1-3)烷基，其中該(C1-5)烷基是任選地被(C1-3)烷氧基或一至三個氟原子所取代；且R9和R10各自獨立地選自(C1-3)烷基，或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-6)環(huán)烷基、(C5-6)環(huán)烯基或具有1-2個選自O(shè)和N的雜原子的5或6員雜環(huán)；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)是任選地被(C1-4)烷基取代。
更優(yōu)選地，R1選自H、甲基和乙基；R2選自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、環(huán)丙基、苯基和選自以下的Het 其中該苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21為1，2或3個取代基，其各自獨立地選自-1至2個取代基，其各自獨立地選自氟、氯和溴；和-1至2個取代基，其各自獨立地選自a)羥基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1-甲基乙氧基；其中該甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和1-甲基乙氧基任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-N(CH3)2或-NHRN1其中RN1選自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基；其中該甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-3)烷氧基還原取代基所取代；c)-CONH2；以及d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-嗎啉代；R3為環(huán)戊基或環(huán)己基，各自任選地被一或二個氟原子所取代；R4為H或鹵素且R7為H；R5和R6之一選自a)被COOH或-CONH2取代的(C2-4)鏈烯基，并任選地還被一或二個選自(C1-3)烷基和鹵素的取代基所取代；和
b)苯基或Het，各自任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代i.-OH、氧代、COOH；ii.(C1-3)烷基，任選地被苯基、-N(CH3)2或 取代；及iii.-NH2，-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式 c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-OCH(CH3)2；R8選自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基；且該基團 選自 更優(yōu)選地R1選自H、甲基和乙基；R2選自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、環(huán)丙基、苯基和選自下式基團的Het
其中該苯基和Het為未被取代或被R21取代，其中R21為1，2或3個取代基，其各自獨立地選自-1至2個取代基，其各自獨立地選自氟、氯和溴；及-1至2個取代基，其各自獨立地選自a)羥基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1-甲基乙氧基；其中該甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和1-甲基乙氧基任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-N(CH3)2或-NHRN1，其中RN1選自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基；其中該甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-3)烷氧基的取代基所取代；c)-CONH2；及d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-嗎啉代；R3為環(huán)戊基或環(huán)己基，其任選地被一或二個氟原子所取代；R4為H或Cl且R7為H；R5和R6之一選自a)-CH＝CH-COOH或-CH＝CH-CONH2，各自任選地被一或二個選自甲基、乙基和氟的取代基所取代；及b)任選地被NH2取代的苯基，或任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代的Heti.-OH、氧代、COOH；
ii.甲基或乙基，各自任選地被苯基、-N(CH3)2或 取代；和iii.-NH2、-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式； c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-OCH(CH3)2；R8選自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基；且基團 選自 最優(yōu)選地，R1為甲基；R2選自 R3為環(huán)戊基或環(huán)己基；R4和R7皆為H；
R5和R6之一為 或 且R5和R6的另一個為H；R8為甲基；且基團 為 或者最優(yōu)選地，R1為甲基；R2選自 R3為環(huán)戊基或環(huán)己基；R4和R7皆為H；R5和R6之一為 且R5和R6的另一個為H；R8為甲基；且基團 為 存在于表1至4中式I的每個單一化合物也包括在本發(fā)明范疇內(nèi)。
聚合酶活性式(I)化合物利用HCV的RNA依賴性RNA聚合酶抑制RNA合成的能力，可通過任何能夠測量HCV RNA依賴性RNA聚合酶活性的方法加以證實。適用的實驗描述在實施例中。
RNA依賴性RNA聚合酶活性的特化為了證實本發(fā)明化合物是通過HCV聚合酶的特定抑制而起作用，該化合物可在測量RNA-依賴性RNA聚合酶而非HCV聚合酶的活性的實驗中，或是在DNA依賴性RNA聚合酶實驗中，試驗其抑制活性。
細胞基礎(chǔ)的HCV RNA復制活性本發(fā)明化合物抑制細胞中HCV RNA復制的能力，可通過該化合物在細胞基礎(chǔ)的HCV RNA復制實驗中的抑制性活性而得到證實。適用的實驗描述在實施例中。
當式(I)的化合物或其治療上可接受鹽之一用作抗病毒劑時，其可以在介質(zhì)(vehicle)中經(jīng)由口服、局部或全身系統(tǒng)性地給藥于哺乳動物，包括(但不限于)人類、牛、豬、狗、貓、兔子或小鼠，介質(zhì)包括一種或多種藥學上可接受載體，其中的比例由化合物的溶解度和化學性質(zhì)、所選的給藥途徑和標準生物實踐來決定。
對于口服給藥而言，該化合物或其治療上可接受的鹽可配制成單位劑型，例如膠囊或片劑，各自在藥學上可接受載體中含有預定量的活性成份，范圍從約1至約500mg。
對于局部給藥而言，該化合物可配制于藥學上可接受介質(zhì)中，含有約0.1％至約5％，優(yōu)選地約0.5％至約5％的活性劑。這樣的制劑可以是溶液、乳膏或洗液的形式。
對于系統(tǒng)性給藥而言，式(I)的化合物可組合藥學上可接受介質(zhì)或載體經(jīng)由靜脈內(nèi)注射、皮下注射或肌肉注射給藥。對于注射給藥，優(yōu)選為化合物用在無菌水性介質(zhì)的溶液中，其可以還含有其他溶質(zhì)例如緩沖劑或防腐劑，以及足量的藥學上可接受的鹽或葡萄糖，以便使得溶液等滲。
可用于上述提及的制劑的適用介質(zhì)或載體描述在醫(yī)藥文獻中，例如在“Remington′s The Science and Practice of Pharmacy”，第19版，MackPublishing Company，Easton，Penn.，1995中或在“Pharmaceutical DosageForms And Drugs Delivery Systems”，第6版，H.C.Ansel等，Eds.，Williams &Wilkins，Baltimore，Maryland，1995。
化合物的劑量將隨著給藥形式以及所選擇的具體活性劑而改變。再者，它將隨著接受治療的具體宿主而改變。一般而言，治療隨著小量增加而起始，直到在該情況下達到最適作用為止。一般而言，式I的化合物最希望的給藥的濃度水平是一般而言將提供抗病毒效用的結(jié)果，而不會引起任何損傷或有害的副作用。
對于口服給藥而言，該化合物或治療上可接受鹽可以范圍約每天每公斤體重0.01至約200mg進行給藥，優(yōu)選的范圍為約每公斤0.05至約100mg。
對于系統(tǒng)性給藥，式(I)的化合物可以劑量為每天每公斤體重約0.01mg至約100mg進行給藥，盡管前述變化將會發(fā)生。每天每公斤體重約0.05mg至約50mg的范圍的劑量水平是為了達到有效結(jié)果的最希望的使用劑量。
當本發(fā)明的組合物包含式I化合物與一種或多種其他治療性或預防性藥物的組合時，該化合物和其他藥物以單一治療方案通常給藥都應(yīng)該以介于約10％至100％之間的劑量存在，且更優(yōu)選介于約10％和80％的劑量之間。
當這些化合物或它們的藥學上可接受的鹽與藥學上可接受載體共同配制時，得到的組合物可給藥于哺乳動物例如人類的活體內(nèi)，以抑制HCV聚合酶或以治療或預防HCV病毒感染。該治療也可利用本發(fā)明化合物組合下列藥物而達到，包括(但不限于)免疫調(diào)節(jié)劑，包括(但不限于)α-，β-，δ-，γ-，τ-和ω-干擾素或其聚乙二醇化形式；其他抗病毒藥物，例如利巴韋林、金剛烷胺；HCV NS5B聚合酶的其他抑制劑；在HCV生命周期中其他靶標的抑制劑，包括(但不限于)抑制靶標的藥物，所述靶標包括(但不限于)HCV解旋酶、HCV NS2/3蛋白酶、HCV NS3蛋白酶和HCV IRES，以及干擾其他病毒靶標包括(但不限于)NS5A蛋白質(zhì)的功能的藥物；或其組合。其他藥物可與本發(fā)明化合物組合以創(chuàng)造單一劑型?；蛘哌@些其他藥物可作為多種劑型的一部分分開給藥于哺乳動物。
方法和合成根據(jù)本發(fā)明化合物的合成是優(yōu)選地由下列描述在圖解1中的一般步驟來完成。
圖解1 式I的化合物，其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9和R10如前文定義，是優(yōu)選地利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的羧基-活化試劑通過通式II的羧酸和通式III的胺類偶合而制備，如上圖解1所說明。這些試劑包括(但不限于)TBTU、HATU、BOP、BrOP、EDAC、DCC、異丁基氯甲酸酯等?；蛘撸ㄊ絀I的羧酸可使用標準試劑而轉(zhuǎn)變?yōu)橄嘞鄳?yīng)的酸氯化物，之后和通式III的胺衍生物偶合。在R5或R6含有酯-保護的羧酸基團的情況中，進行皂化反應(yīng)(利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方案)，以獲得游離羧酸的最終抑制劑產(chǎn)物。
式II的中間體羧酸可利用描述在WO 03/010141的方法或利用下列實例中描述的方法制備。式III的中間體胺類可根據(jù)下圖解2和圖解3中概述的方法制備。
圖解2 圖解1中通式III的胺中間體可由式IV的相應(yīng)二胺前體通過和適當?shù)摩粒?二取代氨基酸氯化物氫氯化物進行偶合而制備。得自相應(yīng)α，α-二取代氨基酸的適當α，α-二取代氨基酸氯化物氫氯化物的制備可按照WO03/007945或WO 03/010141中所描述的進行，或按照E.S.Uffelman等人(Org.Lett.1999，1，1157)描述的方法或其改變方式進行。在該偶合反應(yīng)中形成的酰胺中間體之后利用和醋酸一起加熱而環(huán)化，以提供通式III的胺類中間體。
圖解3 或者，圖解1中的通式III的胺類中間體可由通式IV的相應(yīng)二胺前體，通過和適當?shù)腂oc-保護的α，α-二取代氨基酸偶合而制備，如圖解3所說明，利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的偶合試劑，例如TBTU、HATU、BOP、BrOP、EDAC、DCC、異丁基氯甲酸酯等。適當?shù)腂oc-保護的α，α-二取代氨基酸可由游離α，α-二取代氨基酸利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準條件而制備，例如和Boc2O(二-叔丁基二碳酸酯)在叔胺例如三乙基胺等存在下進行反應(yīng)。在偶合反應(yīng)中形成的酰胺中間體之后利用和醋酸一起加熱而環(huán)化。為了提供圖解1中通式III胺中間體而進行Boc基團的去保護作用，可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準試劑來進行。這樣的試劑包括(但不限于)三氟醋酸，HCl在二烷中的溶液等。
圖解2和3中的通式IV的二胺前體優(yōu)選地可利用實施例中描述的方法包括這些方法的任何變通方法來制備，和/或利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其他合成步驟來制備。
圖解1中通式III的胺中間體，其中R5和R6之一為-CH＝C(R50a)-COOR，其中R50a選自H、(C1-6)烷基和鹵素且其中R為例如甲基或乙基，可由通式III的相應(yīng)胺中間體或其經(jīng)適合保護的衍生物，其中R5和R6之一為-COOR，其中R為例如甲基或乙基，通過下圖解4的方法而制備。圖解4特別地說明了通式III的胺中間體的制備，其中R5為-CH＝C(R50a)-COOR，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當了解當R6為-COOR時，經(jīng)圖解的方法或其變通方法將得到R6為-CH＝C(R50a)-COOR的產(chǎn)物。同時，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，當將上圖解2和3中的通式IV的二胺前體或其經(jīng)適當保護的衍生物或在其制備中適用的中間體，其中R5和R6之一為-COOR，轉(zhuǎn)變成通式IV的二胺前體，或其經(jīng)適當保護的衍生物或在其制備中適用的中間體，其中R5和R6之一為-CH＝C(R50a)-COOR，其中R50a和R如前述所定義時，也可使用圖解4的方法或其變通方法。
圖解4 上圖解4中的通式IIIa經(jīng)適當保護的胺中間體可通過用適合的還原劑例如DIBAL-H等處理而轉(zhuǎn)變成通式IIIb的醇中間體。適用的保護性基團(PG)包括(但不限于)氨基甲酸酯保護性基團，例如Boc(叔丁基氧基羰基)等。由上圖解1中的通式III的胺中間體制備通式IIIa的經(jīng)保護胺中間體，可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準方法來制備。醇中間體IIIb可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準氧化劑例如1，1，1-三(乙酰基氧基-1，1-二氫-1，2-苯并間二氧雜環(huán)戊烯(benziodoxol)-3-(1H)-酮(也稱為Dess-Martin Periodinane)等而轉(zhuǎn)變成醛中間體IIIc。
醛中間體IIIc可利用標準Horner-Emmons方法或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的相關(guān)過程例如Wittig方法等，接著利用熟知的標準方法進行PG基團的去保護而轉(zhuǎn)化成通式IIId的胺中間體。在PG基團為Boc的情況下，這樣的方法包括(但不限于)用酸處理，例如三氟醋酸，溶解在二烷的HCl等。
圖解1中的通式III的胺中間體，其中R5和R6之一為-C(R50)＝CH-COOR，其中R50為(C1-6)烷基且其中R為例如甲基或乙基，可由上圖解4中的中間體IIIc利用下圖解5的方法制備。盡管圖解5特別地說明通式III的胺中間體其中R5為-C(R50)＝CH-COOR的制備，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解當R6為-CHO時，該圖解說明的方法或其變通方法將得到其中R6為-C(R50)＝CH-COOR的產(chǎn)物。同時，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解圖解5的方法或其變通方法也可用于當將上圖解2或3中的通式IV的二胺前體，或其經(jīng)適當保護的衍生物或其制備中適用的中間體，其中R5和R6之一為-CHO，轉(zhuǎn)變成通式IV的二胺前體，或其經(jīng)適當保護的衍生物，或在其制備中適用的中間體，其中R5和R6之一為-C(R50)＝CH-COOR的情況，其中R50和R如前文中所定義。
圖解5 醛中間體IIIc(得自圖解4)可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的適合的親核烷基化劑例如烷基鋰等進行烷基化，然后用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的氧化劑例如1，1，1-三(乙?；趸?1，1-二氫-1，2-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-3-(1H)-酮(也稱為Dess-Martin periodinane)等將該中間體仲醇氧化成酮，從而實現(xiàn)了轉(zhuǎn)化成通式IIIf的酮。該酮IIIf之后可利用標準Horner-Emmons方法或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的相關(guān)方法例如Wittig方法等，接著利用熟知的標準方法進行PG基團的去保護而轉(zhuǎn)化成通式IIId的胺中間體。在PG基團為Boc的情況下，該方法包括(但不限于)用酸處理，例如三氟醋酸，溶解在二烷中的HCl等。
或者，圖解1中的通式III的胺中間體，其中R5和R6之一為-CH＝C(R50a)-COOR，其中R50a選自H、(C1-6)烷基和鹵素且其中R為(C1-6)烷基，可由通式III的相應(yīng)胺中間體或其經(jīng)適當保護的衍生物，其中R5和R6之一為X，其中X為離去基例如鹵素原子、磺酸酯等，利用圖解6中描述和下列實施例中另外描述的Heck反應(yīng)的典型條件而制備。盡管圖解6特別地說明通式III的胺中間體其中R5為-C(R50)＝CH-COOR的制備，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解當R6為X時，該圖解說明的方法或其變通方法將得到其中R6為-C(R50)＝CH-COOR的產(chǎn)物。同時，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解圖解6的方法或其變通方法也可用于當將上圖解2或3中的通式IV的二胺前體，或其經(jīng)適當保護的衍生物或其制備中適用的中間體，其中R5和R6之一為X，轉(zhuǎn)變成通式IV的二胺前體，或其經(jīng)適當保護的衍生物，或在其制備中適用的中間體，其中R5和R6之一為-C(R50)＝CH-COOR的情況，其中R50和R如前文中所定義。
圖解6

實施例本發(fā)明在下列非限制性實施例中將進一步詳細說明。如本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，當需要保護反應(yīng)成分免于接觸到空氣或濕氣時反應(yīng)在氮氣或氬氣中進行。溫度以攝氏度表示?？焖偕V法在硅膠上進行。溶液百分比或比值除非另有說明否則代表體積對體積關(guān)系。利用電子噴霧質(zhì)譜儀記錄質(zhì)譜分析結(jié)果。分析性HPLC在標準條件下進行，采用Combiscreen ODS-AQ C18反相柱，YMC，50×4.6mm i.d.，5μM，120A于220nM進行，用下表中描述的線性梯度(溶劑A為0.1％TFA于H2O中；溶劑B為0.1％TFA于CH3CN中)進行洗脫

下列縮寫或符號可用于前文中和后文中AcOH醋酸；Ac2O醋酸酐；BOC或Boc叔丁基氧基羰基；BOP苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸鹽；BroP溴三(二甲基氨基)六氟磷酸鹽；Bu丁基；CPS每秒計數(shù)；DAST(二乙基氨基)硫三氟化物；
dba二亞苯甲基丙酮；DCC1，3-二環(huán)己基碳二亞胺；DCM二氯甲烷；DCMA二環(huán)己基甲基胺；DIBAL-H二-異丁基鋁氫化物；DMEM改進的Earle培養(yǎng)基；DMFN，N-二甲基甲酰胺；DMSO二甲基亞砜；EC5050％有效濃度；DEAC見EDC；EDC1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸；ES-電子噴霧(負離子化)；ES+電子噴霧(正離子化)；Et乙基；Et2O二乙基醚；EtOAc乙酸乙酯；EtOH乙醇；FBS胎牛血清；Fmoc9-芴基甲氧基羰基；HATUO-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽；HBTUO-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽；HOAT1-羥基-7-氮雜苯并三唑；HOBt1-羥基苯并三唑；HPLC高效液相色譜法；iPr或i-Pr異丙基；Me甲基；MeCN乙腈；MeOH甲醇；MS(ES)電子噴霧質(zhì)譜儀；NMR核磁共振光譜儀；PBS磷酸鹽緩沖液；
Ph苯基；PG保護基；PVDF聚偏二氟乙烯；RT室溫(約25℃)；TBME叔丁基甲基醚；TBTU2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸鹽；tBu叔丁基；Tf三氟甲基磺?；?；TfO三氟甲基磺酸酯；TFA三氟醋酸；THF四氫呋喃；TLC薄層色譜法；TMS三甲基硅烷基；Troc三氯乙氧基羰基。
實施例13-(3，3-二氟環(huán)戊基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯 步驟1將吲哚-6-羧酸1-1(5.0g，31.0mmol)溶解在MeOH(100mL)中，加入催化量的H2SO4(1.0mL)并在回流下攪拌反應(yīng)混合物16小時。將少量的固體K2CO3加入，以中和過量的H2SO4并在RT持續(xù)攪拌1h。將反應(yīng)混合物在真空下濃縮以除去MeOH，用NaHCO3飽和水溶液(～50mL)稀釋并用EtOAc(～200mL)萃取。用鹽水(100mL)清洗有機層，在無水MgSO4中干燥并濃縮至干燥。將得到的殘留物利用快速柱色譜法加以純化，利用在己烷中的30％EtOAc作為洗脫液，以得到純的甲酯1-2(4.78g，88％收率)。
步驟2將步驟1中得到的甲酯1-2(3.31g，18.9mmol)溶解在MeCN(50mL)中并加入催化量的Yb(OTf)3(586mg，0.95mmol)。將2-環(huán)戊烯-1-酮(7.76mL，94.5mmol)加入并在回流下攪拌反應(yīng)混合物16小時。在真空下將MeCN溶劑除去，將殘留物再溶解在EtOAc(～200mL)中，并用飽和NaHCO3水溶液(～100mL)、H2O(50mL)和鹽水(50mL)萃取。將有機層用無水MgSO4干燥并在真空中濃縮至干。利用快速柱色譜法將殘留物純化之后，利用在己烷中的40％EtOAc作為溶液梯度，將希望的環(huán)戊酮加合物1-3分離，得到米色粉末(3.4g，70％收率)。
步驟3將NaH(60％油中分散體，770mg，19.2mmol)于0℃時緩慢加到步驟2得到的環(huán)戊酮加合物中間體1-3(3.81g，14.8mmol)的無水DMF(150mL)溶液中。將反應(yīng)混合物于0℃下攪拌5分鐘，然后滴加入MeI(1.2mL，19.2mmol)并0℃下持續(xù)攪拌3小時。將混合物加溫至RT并通過加入NH4Cl飽和水溶液(200mL)使反應(yīng)終止。用EtOAc(2×500mL)萃取混合物并利用NH4Cl飽和水溶液(2×200mL)H2O(200mL)和鹽水(200mL)清洗有機層。將合并的有機層利用無水MgSO4干燥，蒸發(fā)至干并利用快速柱色譜法純化殘留物(利用在己烷中的30％EtOAc作為洗脫液)以分離N-甲基吲哚中間體1-4的米色固體(3.1g，77％收率)。
步驟4在密封管中，將得自步驟3的N-甲基吲哚中間體1-4(1.4g，5.16mmol)和DAST(2.7mL，20.6mmol)溶解在CH2Cl2(50mL)中并在回流下攪拌3天。將混合物緩慢倒入NaHCO3飽和水溶液(～50mL)中并當CO2不再產(chǎn)生時，利用CH2Cl2(2×100mL)萃取該混合物。將合并的有機層用鹽水(50mL)清洗，利用無水MgSO4干燥并濃縮至干。將殘留物利用快速柱色譜法(利用溶劑梯度己烷中的從10％至20％的EtOAc)加以純化，以分離出3-(3，3-二氟環(huán)戊基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯1-5(750mg，50收率)。
利用描述在WO 03/010141的方法將3-(3，3-二氟環(huán)戊基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯1-5轉(zhuǎn)化成式IIa的羧酸中間體，其中R2如前文中所定義。這些中間體可利用上圖解1及描述在WO 03/010141中的方法轉(zhuǎn)化成通式I的化合物。
實施例2(E)-3-(3-氨基-4-甲基氨基苯基)丙烯酸甲酯 步驟1將4-氯-3-硝基肉桂酸2-1(500mg，2.2mmol)和甲基胺在THF(2M，8mL，16mmol)中的溶液的混合物在密封管中于80℃下加熱20小時。之后將混合物冷卻至室溫并濃縮得到橙色固體2-2，其不需進一步純化在下述步驟中使用。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員很顯而易見的是，在上圖解2和3中的通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適合的R8-NH2代替上述步驟1中的甲基胺(CH3NH2)而制備。
步驟2將從步驟1得到的粗4-甲基氨基-3-硝基肉桂酸中間體2-2(488mg，2.2mmol)溶解在甲醇(20mL)中并加入重氮甲烷的乙醚溶液直到HPLC分析顯示該酸已完全轉(zhuǎn)化成甲酯為止。將該溶液濃縮至干得到540mg的甲酯2-3的橙色固體，其不需進一步純化而使用在步驟3中。
步驟3將從步驟2中得到的粗甲酯2-3(540mg，～2.2mmol)和SnCl2二水合物(2.25g，10mmol)溶解在乙醇(20mL)中并在80℃下攪拌混合物4小時。經(jīng)過那段期間之后，將混合物冷卻至室溫，并緩慢加到NaHCO3飽和水溶液中。利用乙酸乙酯(100mL)萃取反應(yīng)混合物，將有機層用無水MgSO4干燥并在減壓下將溶劑除去。利用快速柱色譜法中使用己烷于乙酸乙酯中的梯度(從50％至30％)將殘留物純化得到(E)-3-(3-氨基-4-甲基氨基苯基)丙烯酸甲酯2-4的黃色固體(245mg)。
實施例3(E)-3-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-1-甲基-IH-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯 將從實施例2得到的(E)-3-(3-氨基-4-甲基氨基苯基)丙烯酸甲酯2-4(40mg，0.194mmol)懸浮在CH2Cl2(3mL)中并加入依照E.S.Uffelman等人(Org.Lett.1999，1，1157)描述的適用方法制備得到的1-氨基環(huán)丁烷羧酸氯化物氫氯化物(31mg，0.18mmol)。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物2小時，然后濃縮以得到白色固體。之后將該固體溶解在醋酸(5mL)中并加熱至60℃20小時。將反應(yīng)的粗產(chǎn)物利用NaHCO3飽和水溶液稀釋并利用CH2Cl2(2×50mL)和鹽水萃取，將有機層用無水MgSO4干燥并在減壓下將溶劑除去以得到(E)-3-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯3-1的淡棕色泡沫體(53mg)。
實施例4(E)-3-(2-{1-[(3-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]環(huán)丁基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)丙烯酸 將由描述在WO 03/010141的方法制備而得的3-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羧酸4-1(31.1mg，0.97mmol)、由化合物2-4的乙酯類似物利用描述在實施例3中描述的類似的方法制備而得到的(E)-3-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯4-2(27.7mg，0.97mmol)、HATU(47.9mg，0.126mmol)和Et3N(58μL，0.42mmol)的DMSO(2mL)溶液在RT下攪拌3小時。此期間之后，加入NaOH(280μL，2.5N)并將反應(yīng)混合物在RT下攪拌16小時。利用加入幾滴醋酸將反應(yīng)混合物加以中和并在反相C18、半制備型HPLC柱(使用溶劑梯度從5％至100％MeCN于水中(所有溶劑皆含0.1％的三氟醋酸))加以純化，以分離出最終抑制劑(E)-3-(2-{1-[(3-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]環(huán)丁基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)丙烯酸4-3(化合物4001，表4)的白色無水固體，具有＞95％的同質(zhì)性(homogeneity)(45mg，78％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ1.48-1.58(m，2H)，1.75-1.85(m，6H)，1.85-1.95(m，1H)，2.05-2.15(m，1H)，2.69-2.76(m，2H)，2.98-3.10(m，3H)，3.63(s，3H)，3.82(s，3H)，6.59(d，J＝16Hz，1H)，7.42(dd，J＝0.8 & 5.7Hz，1H)，7.51(d，J＝7.7Hz，1H)，7.53(d，J＝8.5Hz，1H)，7.65(d，J＝8.5Hz，1H)，7.71(d，J＝8.4Hz，1H)，7.76(d，J＝16Hz，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，7.92(ddd，J＝1.6&7.8Hz，1H)，8.01(s，1H)，8.04(s，1H)，8.73(d，J＝4.1Hz，1H)，9.45(s，1H)。
實施例53-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羧酸(1-[5-((E)-2-氨基甲酰基乙烯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基]環(huán)丁基}酰胺 步驟1將3-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羧酸5-(利用WO 03/010141中描述的方法制備)和(E)-3-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸乙酯4-2偶合，接著進行乙酯的皂化，利用實施例4中描述的類似方法得到(E)-3-(2-{1-[(3-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]環(huán)丁基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)丙烯酸5-2(化合物4003，表4)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.50-1.58(m，2H)，1.78-1.20(m，7H)，2.05-2.15(m，1H)，2.65-2.75(m，2H)，2.97-3.10(m，3H)，3.66(s，3H)，3.18(s，3H)，6.57(d，J＝16.0Hz，1H)，7.55(dd，J＝1.0 & 8.4Hz，1H)，7.68(2d，J＝8.4Hz，2H)，7.75(d，J＝16.0Hz，1H)，7.78(d，J＝11.0Hz，1H)，8.00(s，1H)，8.07(s，1H)，8.68(d，J＝2.3Hz，1H)，8.78(d，J＝1.2Hz，1H)，8.82(dd，J＝0.8 & 2.2，1H)，9.44(brs，1H)。
步驟2將(E)-3-(2-{1-[(3-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]環(huán)丁基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)丙烯酸5-2(化合物4003，表4；60mg，0.087mmol)、TBTU(68mg，0.18mmol)、碳酸氫銨(20mg，0.26mmol)和Et3N(36μL，0.26mmol)的DMSO(23mL)溶液于RT下攪拌3h。利用加入幾滴醋酸將反應(yīng)混合物加以中和并在反相C18、半制備型HPLC柱(使用溶劑梯度從5％至100％MeCN于水中(所有溶劑皆含0.1％的三氟醋酸))加以純化，以分離出抑制劑3-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[5-((E)-2-氨基甲?；蚁┗?-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基]環(huán)丁基}酰胺5-3(化合物1005，表1)的淡黃色無水固體，具有＞95％同質(zhì)性(17mg，34％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.65-1.75(m，2H)，1.92-2.15(m，8H)，2.73-2.82(m，2H)，3.04-3.10(m，2H)，3.15-3.25(m，1H)，3.79(s，3H)，3.81(s，3H)，6.65(d，J＝15.8Hz，1H)，7.06(brs，1H)，7.53(brs，3H)，7.61(d，J＝15.7Hz，1H)，7.68(dd，J＝1.0&8.4Hz，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，7.90(s，1H)，8.20(s，1H)，8.80(d，J＝2.5Hz，1H)，8.91(d，J＝1.2Hz，1H)，8.95(dd，J＝2.1&3.7，1H)，9.23(s，1H)。
實施例64-氨基-2-甲基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯
步驟1將2-甲基-5-硝基苯甲酸6-1(10.0g，55.2mmol)的MeOH(200mL)和H2SO4(1.0mL)溶液加熱至回流并同時攪拌～3天。在真空下蒸發(fā)溶劑并將殘留物再溶解在EtOAc(～200mL)中，用冷H2O(～50mL)、冷的NaHCO3飽和水溶液(～50mL)和冷鹽水(～50mL)清洗。之后用無水MgSO4將有機層干燥并濃縮至干，得到甲酯6-2的白色固體，不須經(jīng)純化而使用于步驟2中。
步驟2向在步驟1中得到的粗甲酯6-2(～55.2mmol)的MeOH(200mL)溶液中加入Pearlman催化劑(在碳上的20％氫氧化鈀，1.0g)并在H2的環(huán)境下于RT下攪拌混合物20小時。將混合物經(jīng)由Celite過濾并濃縮至干。將殘留物再溶解在THF(200mL)中，加入Ac2O(6.2mL，66mmol)并在RT下攪拌溶液3小時。在真空下將反應(yīng)混合物濃縮至干并將殘留物再溶解在最小體積的t-Bu甲基醚(～150mL)中。將該醚懸浮液在RT下攪拌1小時，加入己烷(～100mL)以沉淀出希望的乙酰基化中間體的白色固體。利用己烷清洗固體并干燥以得到乙?；衔?-3，具有高純度(10.1g，88％收率)。
步驟3將由步驟2中得到的乙?；?-3(8.42g，40.6mmol)和硝酸鉀(5.0g，50mmol)的AcOH∶H2SO4(1∶1比率，200mL)的溶液于RT下攪拌2小時并于40℃下再攪拌兩小時。之后將粗反應(yīng)混合物緩慢倒入冰(～1L)上并混合20分鐘。將形成的沉淀物過濾并用水清洗數(shù)次以得到主要為兩種產(chǎn)物的混合物，希望的4-硝基異構(gòu)體6-4與不希望的6-硝基異構(gòu)體6-5(1∶2比率)，在快速柱色譜法中利用30％EtOAc在己烷中作為洗脫液而加以分離。將純4-硝基異構(gòu)體6-4分離得到黃色固體(2.05g，20％收率)。
步驟4將由步驟3得到的4-硝基中間體6-4(2.05g，8.13mmol)溶解在THF(50mL)中，并在將溶液冷卻至0℃，然后緩慢加入MeI(2.51mL，40.6mmol)和t-BuONa(4.46g，46.4mmol)。將反應(yīng)混合物于RT下攪拌15小時，加入H2O(～50mL)并用叔丁基甲基醚(～20mL)清洗水性混合物。用1N HCl將水層酸化至pH 3，然后用EtOAc(～100mL)萃取。用鹽水(～50mL)清洗有機層，以無水MgSO4進行干燥并濃縮至干得到N-甲基化化合物6-6的膠狀泡沫體，其可直接用于步驟5而不須經(jīng)純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，上圖解2和3中通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可在上述步驟4中利用適當?shù)腞8-X代替碘化甲基(CH3I)制備而得，其中X為離去基，例如Cl、Br、I、甲磺酸酯(mesylate)、對甲苯磺酸酯(tosylate)、三氟甲磺酸酯(triflate)等。
步驟5將得自步驟4的甲基化衍生物6-6(～8mmol)的MeOH(10mL)和HCl(8N，15mL)溶液于70℃下攪拌20小時。在真空下蒸發(fā)溶劑并將殘留物在NaHCO3飽和水溶液(20mL)和EtOAc(50mL)之前分配。用鹽水清洗有機層，利用無水MgSO4干燥并濃縮得到甲酯6-7的橙色固體(1.54g)，其可用于步驟6中不須經(jīng)純化。
步驟6將得自步驟5的粗甲酯6-7(1.54g，6.7mmol)的MeOH(30mL)溶液在催化氫化條件下利用Pd/C(10％，150mg)于H2氣壓下在RT下處理2小時。將反應(yīng)混合物利用Celite過濾并濃縮得到4-氨基-2-甲基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯6-8的紫色固體(1.33g)，其已經(jīng)足夠純化(由NMR證實)不需再純化而使用。
實施例72-(1-叔-丁氧基羰基氨基環(huán)丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-羧羧甲酯
將1-((1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基)環(huán)丁烷羧酸(1.40g，6.5mmol)溶解在CH2Cl2(45mL)中并和TBTU于Et3N存在下反應(yīng)30分鐘以預活化該酸。將得自實施例6的4-氨基-2-甲基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯6-8(1.33g，6.85mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液于30分鐘期間緩慢加入并持續(xù)攪拌反應(yīng)混合物20小時。將反應(yīng)混合物濃縮至干并將殘留物再溶解在AcOH(10.0mL)中并在70℃下攪拌2小時以達到苯并咪唑環(huán)的環(huán)化作用。將反應(yīng)混合物濃縮至干并將殘留物溶解在EtOAc(～250mL)中，用NaHCO3飽和水溶液(2×100mL)和鹽水(100ml)萃取。將有機層用無水MgSO4干燥并蒸發(fā)至干。利用快速柱色譜法(利用溶劑梯度從40％至50％EtOAc于己烷中)純化殘留物，以得到純的2-(1-叔-丁氧基羰基氨基環(huán)丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲酯7-1的米色固體(1.41g，55％收率)并回收未反應(yīng)的二胺基起始物質(zhì)。
利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準試劑將2-(1-叔丁氧基羰基氨基環(huán)丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲酯7-1轉(zhuǎn)化成圖解1中得通式III的胺中間體。該試劑包括(但不限于)三氟醋酸，HCl在二烷中得溶液等。圖解1中通式III的相應(yīng)胺中間體利用實施例4的方法可再制成圖解1中通式I的抑制劑。
實施例8(E)-3-[2-(1-氨基-環(huán)丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基-丙烯酸乙基酯
步驟1將得自實施例7的2-(1-叔-丁氧基羰基氨基環(huán)丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲酯7-1(1.41g，3.8mmol)溶解在THF(40mL)中并將溶液冷卻至0℃。將DIBAL-H(18mL，1M溶于THF中，18mmol)溶液緩慢加入并在0℃下將反應(yīng)混合物攪拌1小時，之后于50℃攪拌4小時。將反應(yīng)混合物冷卻至RT。將酒石酸鉀鈉(1M，50mL)溶液極為緩慢地加入并在RT下持續(xù)緩慢攪拌1小時。在真空中濃縮該溶液以除去大部分的THF并用EtOAc(～200mL)萃取。用NaHCO3飽和水溶液(50mL)和鹽水(50mL)清洗有機層、用無水MgSO4干燥并濃縮至干。利用快速柱色譜法純化殘留物，其溶劑梯度從己烷中50％EtOAc至純EtOAc然后至EtOAc中3％MeOH，以得到純醇8-1的黃色固體(1.09g，84％收率)。
步驟2將得自步驟1的醇8-1(1.09g，3.16mmol)和Dess-Martin periodinane(1.70g，4.0mmol)的CH2Cl2(40mL)溶液于RT下攪拌2小時。在真空下將溶劑蒸發(fā)并利用快速柱色譜法純化殘留物，使用EtOAc∶己烷(1∶1比)，以得到純的醛8-2(605mg，56％收率)。
步驟3將三乙基-2-膦酰基丙酸酯(0.228mL，1.06mmol)的THF(5.4mL)溶液冷卻至0℃并加入NaH(42.5mg，于油中60％，1.06mmol)。在0℃下攪拌該混合物30分鐘，然后緩慢加入得自步驟2的醛8-2(300mg溶于3mL的THF，0.874mmol)溶液，并在RT下持續(xù)攪拌20小時。用EtOAc(～100ml)稀釋該混合物并用NaHCO3飽和水溶液(2×30mL)和鹽水(30mL)清洗。將有機層用無水MgSO4干燥并濃縮至棕色殘留物，接著利用快速柱色譜法加以純化，使用的溶劑梯度為從40％至60％EtOAc在己烷中，以得到N-Boc-被保護的酯8-3的黃色泡沫體(85mg，23％收率)。
步驟4BOC保護基的水解可通過加入溶于二烷(2mL)的4N HCl并在RT中攪拌該溶液1小時，定量地完成。在真空下將溶劑蒸發(fā)后，分離出純的(E)-3-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基丙烯酸乙酯8-4的黃色固體(79mg)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在該方法步驟3中使用的三乙基-2-膦?；狨タ捎眠m當?shù)谋蝗〈苌锎?，以制備上圖解中通式IIIe的類似物，其中R50如前文中所定義。此外，甲酯也可利用適當試劑以類似的方法制備。上通式IIIe的化合物8-4及其類似物可利用實施例4的方法再制成圖解1中通式I的抑制劑。
實施例93-氟-4-硝基苯甲醛 步驟1在雙頸燒瓶(裝有內(nèi)溫度計)中于-10℃下加入冰AcOH(252mL)、醋酸酐(252.0mL)和2-氟-4-甲基-1-硝基苯9-1(25.0g，161mmol)。將濃硫酸(40mL)于5分鐘期間滴加入該冷溶液中，接著極為緩慢地加入氧化鉻(VI)(45g，450mmol)；加入的速率必須極為緩慢(～1.5小時)以維持溫度在10℃以下。在加入CrO3時，清澈的無色溶液變成琥珀色，并在添加結(jié)束后變成深棕色。在添加完成之后，再攪拌該反應(yīng)混合物45分鐘(HPLC分析顯示反應(yīng)完成～70％)。將類似焦油的部分懸浮液倒入冰中(1.6L)且用H2O稀釋得到的泥狀物，最多不超過總量3L，在該點時產(chǎn)物將開始沉淀。在過濾之后，用冷H2O清洗米色固體以得到白色固體。然后將該固體懸浮在冷2％NaHCO3(250mL)溶液中，過濾并再用冷H2O清洗，以得到二乙酸酯9-2(22g，含有一些未反應(yīng)的起始物質(zhì))的白色固體，可用于步驟2中。
步驟2在螺旋蓋樣品瓶中，將得自步驟1的二乙酸酯9-2(1.0g，3.7mmol)溶解在冰醋酸(10.0mL)中，接著加入H2O(1.0mL)和濃HCl(1.0mL)。將得到的部分可溶性混合物于115℃加熱45分鐘。在真空下除去大部分溶劑以得到膠狀殘留物，將剩余酸和H2O與CH2Cl2-己烷共沸兩次，以得到期望的半純3-氟-4-硝基苯甲醛9-3的黃色固體(600mg)。該化合物再利用快速柱色譜法(使用20％EtOAc在己烷中作為洗脫液)純化，以除去少量未反應(yīng)的2-氟-4-甲基-1-硝基苯9-1(～35％總收率)。
實施例10(E)-3-(4-氨基-3-(甲基氨基)苯基)丙烯酸乙酯 步驟1將NaH(在油中60％分散體，314mg，7.84mmol)于0℃下加到三乙基膦?；阴?1.37mL，6.90mmol)的THF(13mL)溶液中，并將混合物攪拌30分鐘。在該期間之后，加入得自實施例9的3-氟-4-硝基苯甲醛9-3(1.06g，6.27mmol)并在室溫下持續(xù)攪拌16小時。通過加入H2O(20mL)使該反應(yīng)停止并將產(chǎn)物萃取至EtOAc(2×100mL)中。用鹽水清洗合并的有機層，用無水MgSO4干燥并濃縮以得到肉桂酸酯10-1的淺橙色固體，以可用于步驟2中，不需經(jīng)過純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在肉桂酸雙鍵上帶有各種取代基的類似物的制備可利用適當?shù)娜〈苌锎姹痉椒ㄖ惺褂玫娜一Ⅴ；阴セ蚶眠m當酮類代替醛9-3而進行。此外，肉桂酸甲酯也可用類似方法使用適當試劑來制備。
步驟2將得自步驟1的肉桂酸酯10-1(～6.27mmol)和甲基胺(2M在THF中，6.3mL，12.5mmol)溶解在DMSO(6mL)中并在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時。自那段反應(yīng)期間之后，用EtOAc(100mL)稀釋該混合物并用H2O(3×30mL)和鹽水(50mL)清洗有機層，用無水MgSO4干燥并濃縮，得到粗甲基氨基中間體10-2的橙色固體。該產(chǎn)物可用于步驟3中，不須經(jīng)過純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，上圖解2和3中通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適當?shù)腞8-NH2代替步驟2中的甲基胺(CH3NH2)而進行。
步驟3將得自步驟2的3-甲基氨基-4-硝基肉桂酸酯10-2(2-2，～150mg)和SnCl2二水合物(950mg，4.2mmol)溶解在乙醇(10mL)中并在80℃下攪拌反應(yīng)混合物20小時。將混合物冷卻至室溫并濃縮至干。將殘留物溶解在乙酸乙酯(100mL)中并緩慢加到NaHCO3飽和水溶液中并攪拌30分鐘。之后用冰的冷鹽水萃取有機層，用無水MgSO4干燥并在減壓下除去溶劑。利用快速柱色譜法(使用梯度從70％至60％的己烷于乙酸乙酯中)純化殘留物得到(E)-3-(4-氨基-3-(甲基氨基)苯基)丙烯酸乙酯10-3的黃色固體(100mg)。
(E)-3-(4-氨基-3-(甲基氨基)苯基)丙烯酸乙酯可依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的胺衍生物，并使用實施例4的方法再制成圖解1中通式1的抑制劑。
實施例115-氨基-2-甲基-4-甲基氨基苯甲酸甲酯
步驟1將2-甲基-4-硝基芐腈11-1(2.53g，15.6mmol)于NaOH水溶液(10％m31.0mL)和H2O2水溶液(10％，16mL)中的溶液于回流下攪拌2.5小時。冷凝器中的水循環(huán)停止5-10分鐘(以除去溶解氨)之后并恢復水流并再持續(xù)回流1.5小時。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，一滴滴加入HCl(濃)直到pH為～3，此時羧酸11-2會以橙色固體沉淀出來(3.60g)。該羧酸可用在步驟2中，不須經(jīng)純化。
步驟2將得自步驟1的酸11-2(3.60g，15.6mmol)的MeOH(30mL)和HCl(4NHCl于二烷中，2.0mL)的溶液加熱至回流48小時。在真空中將溶劑蒸發(fā)至干，并將得到的殘留物再溶解在EtOAc(200mL)中。將該溶液利用NaHCO3飽和水溶液(100mL)和鹽水(100mL)清洗，用MgSO4干燥并蒸發(fā)至干，得到酯中間體11-3的黃色固體(2.38g)。該物質(zhì)可用在步驟3中，不需經(jīng)過純化。
步驟3將KNO3(760mg，7.5mmol)非常緩慢地加到得自步驟2且經(jīng)過預冷至0℃的酯11-3(1.27g，6.5mmol)的H2SO4(濃，13.0mL)溶液中。攪拌幾分鐘之后，除去冰浴并在RT下攪拌反應(yīng)混合物20小時。之后將反應(yīng)混合物緩慢倒入冰(～50mL)上并攪拌直到冰溶解為止并將期望的二硝基產(chǎn)物11-4沉淀出來并過濾(～1.55g的淡黃色且微濕固體)。該化合物可這樣用于步驟4中。
步驟4向得自步驟3的二硝基中間體11-4(1.55g，6.45mmol)的THF(15.0mL)溶液中于0℃下加入甲基胺溶液(2M于THF中，15.2mL，32.3mmol)，將冰浴除去并在RT下攪拌反應(yīng)混合物1.5小時。將溶液濃縮以除去一些THF，之后用EtOAc(～100mL)稀釋。利用H2O(～50mL)和鹽水(～50mL)清洗有機層，用無水MgSO4干燥并濃縮得到甲基氨基中間體11-5的橙色固體(1.26g)。該化合物可用于步驟5中不需再純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在上圖解2和3中的通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適合的R8-NH2代替上述步驟4中的甲基胺(CH3NH2)而制備。
步驟5向得自步驟4的甲基氨基衍生物11-5(1.25g，5.58mmol)的EtOH-H2O(110mL，1∶1比)溶液中加入K2CO3(4.62g，33.5mmol)和Na2S2O4，并在RT下將混合物攪拌3小時。加入更多H2O(～30mL)并在真空中濃縮混合物以除去大部分EtOH。之后利用EtOAc(～200mL)稀釋反應(yīng)混合物并用鹽水分離并萃取出有機層。將有機層用無水MgSO4干燥并在真空中濃縮得到5-氨基-2-甲基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯11-6(927mg，86％收率)的棕色固體。
化合物11-6可依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化為圖解1中通式III相應(yīng)的胺中間體，其中R6為CH3且R5為-COOCH3。這些胺中間體可依照實施例8中方法再轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的胺中間體，其中R6為CH3且R5為-CH＝C(R50)-COOR。圖解1中的通式III所有胺中間體可利用實施例4的方法再制成圖解1中通式I的抑制劑。
實施例12(E)-3-(5-氨基-2-乙氧基-4-(甲基氨基)苯基)丙烯酸甲酯 步驟1將2-乙氧基-4-硝基苯甲酸12-1(1.56g；7.38mmol)溶解在甲醇(15mL)中并將得到的溶液于0℃下攪拌。將疊氮甲烷的乙醚溶液緩慢地加入直到溶液持續(xù)呈黃色并再攪拌20分鐘。將溶劑蒸發(fā)得到甲酯12-2的灰黃色固體(1.66g，定量)，其可用于步驟2，不需再純化。
步驟2將得自步驟1的酯12-2(1.60g；7.10mmol)溶解在無水甲苯中并將溶液在氮氣中冷卻至-78℃。將二異丁基鋁氫化物的四氫呋喃(1M；8mL；8mmol)溶液加入并讓反應(yīng)混合物加溫至環(huán)境溫度。1小時后以及再1.5小時后將另外兩份DIBAL-H以該方式(7及10mL)加入。最后一次加入后0.5小時，將反應(yīng)冷卻至0℃并緩慢加入1N HCl(25mL)并強力攪拌該混合物0.5小時。之后將有機溶劑蒸發(fā)并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水性殘留物并用水(50mL)和鹽水(50mL)清洗。之后將合并的萃取物利用MgSO4干燥并蒸發(fā)得到醇12-3的灰黃色纖維固體(1.40g；定量)，其可這樣用于步驟3中。
步驟3將1，1，1-三(乙酰基氧基-1，1-二氫-1，2-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-3-(1H)-酮(Dess-Martin periodinane)(2.32g；5.47mmol)的二氯甲烷(40mL+5mL清洗)混濁溶液加到得自步驟2的醇12-3(0.98g；4.97mmol)的DCM(40mL)攪拌溶液中并在環(huán)境溫度下氮氣下攪拌該反應(yīng)。4小時之后，加入飽和NaHCO3/10％Na2S2O3(1∶1，160mL)并強力攪拌該混合物直到相層清晰(約0.5小時)。將有機相分離，并用二氯甲烷(50mL)萃取水相并用飽和NaHCO3(2×150mL)清洗。之后將合并的有機相用MgSO4干燥并蒸發(fā)產(chǎn)生醛12-4的灰黃色固體(960mg；99％)，其可這樣用于步驟4中。
步驟4將氫化鈉(95％干粉末；158mg；6.25mmol)懸浮在無水THF(10mL)溶液中并于0℃下氮氣中加入三甲基膦?；宜狨?0.945mL；5.84mmol)得到無法攪拌的白色固體物質(zhì)。然后滴加入得自步驟3的醛12-4(950mg；4.87mmol)的THF(7mL+3mL清洗)溶液，得到黃色且白色固體緩慢溶解。加完之后，將反應(yīng)加溫至環(huán)境溫度。15小時之后，將混濁的反應(yīng)混合物蒸發(fā)成淡黃色固體，其可用乙酸乙酯(2×50mL)萃取并用飽和NaHCO3(3×75mL)清洗。將合并的萃取物用MgSO4干燥并蒸發(fā)得到肉桂酸酯12-5的淡黃色固體(1.212g；99％)其可用于步驟5中，不需再純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在該方法中所用的三甲基膦?；宜狨タ杀贿m當?shù)娜〈难苌锎?，以制備在肉桂酸酯雙鍵上帶有各種取代基的類似物。
步驟5將得自步驟4的4-硝基-2-乙氧基肉桂酸酯12-5(303mg，1.206mmol)溶解在濃硫酸(3mL)中并將溶液冷卻至0℃。將硝酸鉀(128mg，1.27mmol)加入并將混合物于室溫下攪拌3.5小時。完成之后將反應(yīng)混合物倒在冰上并利用過濾將沉淀固體收集起來。用水清洗粗產(chǎn)物12-6，在真空下干燥并不需純化而用于步驟6(390mg)中。
步驟6將得自步驟5的二硝基衍生物12-6(390mg)溶解在THF(3mL)中并加入甲基胺的THF溶液(溶液于THF中2M，3.02mL)。攪拌30分鐘之后，在減壓下除去揮發(fā)物且橙色固體12-7可這樣用于步驟7中。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在上圖解2和3通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適合的R8-NH2代替上述步驟6中的甲基胺(CH3NH2)而制備。
步驟7將得自步驟6的硝基芳烴12-7懸浮在EtOH(12mL)和水(12mL)的混合物中并加入K2CO3(1.00g，6當量)，接著加入亞硫酸氫鈉(1.26g，6當量)。在室溫下攪拌該混合物4小時并在減壓下除去EtOH。用EtOAc萃取殘留物并用鹽水清洗有機相并干燥(MgSO4)。除去溶劑并用快速色譜法純化殘留物(50至75％EtOAc于己烷中)得到(E)-3-(5-氨基-2-乙氧基-4-(甲基氨基)苯基)丙烯酸甲酯12-8(162mg)。
可利用描述在實施例3或7的方法將(E)-3-(5-氨基-2-乙氧基-4-(甲基氨基)苯基)丙烯酸甲酯12-8轉(zhuǎn)化成實施例1中通式III的胺中間體并利用實施例4的方法再制成圖解1中通式1的抑制劑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)知道，圖解1中通式I的該抑制劑，其中R6為-OCH3且R5為-CH＝C(R50)-COOR可利用實施例12的方法制備，用相同于化合物12-1的前體開始制備，除了其中該乙氧基被甲氧基代替。
實施例134-氨基-2-甲氧基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯
步驟1將2-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯13-1(6.21g，29.4mmol)懸浮在MeOH(100mL)中并加入20％Pd(OH)2/C(500mg)。在氫氣下(1atm)攪拌該混合物18小時。利用過濾將催化劑除去并在減壓下將溶劑蒸發(fā)，得到化合物13-2(5.256g)的殘留物，其可這樣用于步驟2中。
步驟2將得自步驟1的苯胺13-2(5.23g)溶解在THF(50mL)中并加入醋酸酐(2.984g)。在室溫下攪拌該混合物過夜。在減壓下將白色懸浮液濃縮成白色泥漿，加入叔丁基甲基醚(TBME，20mL)并在攪拌時緩慢加入己烷(100mL)。之后將懸浮液再攪拌2小時并利用過濾將固體收集起來。用己烷清洗產(chǎn)物13-3并在空氣中干燥(6.372g)。
步驟3將90％硝酸(9mL)用水(9mL)稀釋并冷卻至0℃。將得自步驟2的該酰苯胺(anilide)化合物13-3(5.905g)一次性加入并在冰水浴中攪拌該混合物30分鐘。之后將反應(yīng)混合物滴加到冰水(700mL)中并利用過濾將沉淀的黃色固體收集起來，用水清洗并在空氣中干燥。1H NMR顯示出該橙色固體(5.907g)由2∶1混合物所組成。由上得到的水性濾液利用EtOAc萃取，得到另外的1g物質(zhì)，并和第一次得到的合并，接著利用快速色譜法在硅膠上使用0.1％EtOAc的CHCl3溶液作為洗脫液進行純化。得到橙色固體13-4(4.11g)(一種異構(gòu)體)。
步驟4將得自步驟3的硝基酰苯胺13-4(3.580g)溶解在THF(50mL)種并將溶液在冰中冷卻。碘甲烷(4.155mL，66.7mmol，5當量)和叔丁氧化鈉(6.414g，66.7mmol，5當量)分兩部分以3.5小時間隔加入。在第二次加入后于室溫下持續(xù)再攪拌20小時。在減壓下將THF蒸發(fā)并加入水(100mL)。用TBME(100mL)清洗深紅色溶液。用濃HCl酸化水相并用EtOAc(2×100mL)萃取。將合并的有機萃取液干燥并濃縮得到化合物13-5的深紅色粉末(3.78g)，其可直接用于步驟5中。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，上圖解2和3中通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可在上述步驟4中利用適當?shù)腞8-X代替碘化甲基(CH3I)而制備，其中X為離去基，例如Cl、Br、I、甲磺酸酯(mesylate)、對甲苯磺酸酯(tosylate)、三氟甲磺酸酯(triflate)等。
步驟5將得自步驟4的游離羧酸13-5(3.75g)懸浮在8M HCl(100mL)中并將混合物于100℃攪拌8小時。冷卻至室溫下，在真空中蒸發(fā)揮發(fā)物并將殘留物與MeOH進行共蒸發(fā)三次。
步驟6將得自步驟5的殘留物再懸浮在MeOH(100mL)中并在冰水中冷卻。將亞硫酰氯(5.10mL，5當量)滴加入并在65℃下攪拌該懸浮液4小時。在減壓下除去揮發(fā)物并將殘留物13-6和MeOH(100mL)且之后和甲苯(2×100mL)進行共蒸發(fā)兩次。
步驟7然后將得自步驟6的殘留物13-6溶解在MeOH(200mL)中，加入20％Pd(OH)2/C(500mg)，并將混合物在1atm氫氣下攪拌過夜。之后利用過濾將催化劑除去，并將溶液蒸發(fā)至干。將殘留物溶解在EtOAc中并用NaHCO3水溶液清洗該溶液并干燥(MgSO4)。將溶劑除去得到固體，懸浮在TBME(50mL)中并加熱至60℃30分鐘。然后將等體積的己烷緩慢加入該熱溶液中并將沉淀的4-氨基-2-甲氧基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯13-7利用過濾收集起來，用TBME-己烷清洗并干燥(2.00g)。
4-氨基-2-甲氧基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯13-7可依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的相應(yīng)的胺中間體。這些胺中間體可依循實施例8的方法再轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的胺中間體，其中R5為-OCH3且R6為-CH＝C(R50)-COOR。圖解1中通式III的所有這些胺中間體，可利用實施例4的方法再制成圖解1中通式I的抑制劑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解實施例13的方法可用于得自實施例12的化合物12-2或其類似物，其中該乙氧基被甲氧基代替，以產(chǎn)生圖解2或3中的通式IV的二胺前體，其中R6為OCH3或OEt。該二胺前體也可依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的胺中間體，并利用實施例4的方法再制成圖解1中通式I的抑制劑。
實施例14N2-甲基-4-(1H-[1，2，3]三唑-4-基)苯-1，2-二胺 步驟1將得自實施例9的3-氟-4-硝基苯甲醛9-3(2.0g，11.8mmol)溶解在THF(30mL)中并將過量的甲基胺(2M溶于THF，～21mL，42mmol)加入。將反應(yīng)混合物于RT下攪拌直到由HPLC確認完全轉(zhuǎn)化為止(～2-3小時)。然后將混濁溶液蒸發(fā)至橙色固體，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取并用1N HCl(震蕩直到深紅勃根地色(burgundy colour)消散為止；100mL)、水(100mL)和鹽水(60mL)清洗。將合并的萃取物利用無水MgSO4干燥并蒸發(fā)得到甲基氨基中間體14-1的橙色粉末，其用于步驟2中，不需要純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在上圖解2和3種的通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適當?shù)腞8-NH2代替上述步驟1中的甲基胺(CH3NH2)而制備。
步驟2將n-BuLi(2.5M于THF中，14.4mL，36.0mmol)于無水THF(60mL)的溶液于-78℃緩慢加入到TMS-疊氮甲烷(10％于己烷中，18mL，36.0mmol)的溶液中。將該混合物于-78℃攪拌30分鐘，之后緩慢加入得自步驟1的甲基氨基中間體14-1(2.16g，12.0mmol，溶解在2mL THF中)。將反應(yīng)混合物于-78℃攪拌1小時，之后加溫至RT并再攪拌3小時，之后加入H2O使反應(yīng)停止。將粗混合物在NaHCO3飽和水溶液(30mL)和EtOAc(60mL)之間分配，再用EtOAc(2×60mL)萃取水層并用鹽水清洗合并的有機層，用無水MgSO4干燥并濃縮至干。將殘留物利用快速柱色譜法(使用20％EtOAc在己烷中作為洗脫液)純化得到期望的炔14-2的淡棕色固體(445mg，～21％收率)。
步驟3在厚壁壓力管中，將得自步驟2的炔14-2(260mg，1.48mmol)溶解在無水DMSO(6.0mL)中并將TMS-疊氮化物(0.392mL，2.96mmol)加入。將反應(yīng)加熱至140℃2小時，然后冷卻并用EtOAc(50mL)萃取并用鹽水(2×50mL)清洗。將有機層用無水MgSO4干燥并蒸發(fā)獲得粗三唑14-3的黃棕色固體，其用于步驟4中不需再純化。
步驟4將得自步驟3的粗三唑中間體14-3(～1.10mmol)溶解在EtOH(10mL)和H2O(6mL)中得到起始物的一些沉淀，將K2CO3(0.91g，6.58mmol)和亞硫酸氫鈉(1.15g，6.58mmol)加入并將反應(yīng)混合物于RT下攪拌2小時。之后用EtOAc(50mL)萃取反應(yīng)混合物，利用H2O(50mL)和鹽水(30mL)清洗有機層，用無水MgSO4干燥并蒸發(fā)得到棕色膠質(zhì)，其含有N2-甲基-4-(1H-[1，2，3]三唑-4-基)苯-1，2-二胺14-4(于其他次要產(chǎn)物之中)。
將粗N2-甲基-4-(1H-[1，2，3]三唑-4-基)苯-1，2-二胺不須經(jīng)純化而依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的相應(yīng)的胺中間體，再利用實施例4的方法進一步制成圖解1中通式I的抑制劑。
實施例15N2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1，2-二胺
步驟1向4-氯-2-氟-1-硝基苯15-1(1.18g，6.72mmol)的DMSO(7mL)溶液中加入甲基胺(2M溶于THF中，13.6mL，26.9mmol)的溶液并在RT下攪拌該反應(yīng)混合物24小時。用EtOAc(～300mL)稀釋該溶液，用H2O(3×50mL)和鹽水(50mL)清洗有機層，用無水MgSO4干燥并在真空中濃縮得到甲基氨基衍生物15-2的黃色固體(1.19g)。將粗物質(zhì)用在步驟2中，不需再純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在上圖解2和3中的通式IV的其他的二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適當?shù)腞8-NH2代替上述步驟1中的甲基胺(CH3NH2)而制備。
步驟2將得自步驟1的甲基氨基衍生物15-2(105mg，0.56mmol)和N-甲基哌嗪(0.5mL)的混合物加熱至90℃并攪拌3小時，之后在RT下再攪拌15小時。將反應(yīng)混合物用EtOAc(～50mL)稀釋并用H2O(3×10mL)和鹽水(20mL)清洗有機層，用無水MgSO4干燥并在真空中濃縮得到哌嗪衍生物15-3的黃色固體(140mg)，其用在步驟3中不用再純化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解帶有其他取代基的哌嗪衍生物可在上述步驟2中用來代替N-甲基哌嗪，以制備用于形成式(I)的其他化合物的中間體。
步驟3在得自步驟2的哌嗪衍生物15-3(140mg)的EtOH(6mL)溶液中加入Pd/C(10％，25mg)并在H2氣下于RT中攪拌該混合物15小時。將混合物過濾并將溶液蒸發(fā)得到相當純的期望產(chǎn)物N2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1，2-二胺15-4的紫色油(133mg)。
將N2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1，2-二胺15-4不需再純化而依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的相應(yīng)的胺中間體，并再利用實施例4的方法制成圖解1中通式I的抑制劑1。
實施例164-咪唑-1-基-N2-甲基苯-1，2-二胺 利用實施例15的方法制備4-咪唑-1-基-N2-甲基苯-1，2-二胺16-1，除了在步驟2中用咪唑代替N-甲基哌嗪。4-咪唑-1-基-N2-甲基苯-1，2-二胺16-1可依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的相應(yīng)的胺中間體，并再利用實施例4的方法制成圖解1中通式I的抑制劑。
實施例174-(2-氨基噻唑-4-基)-N1-甲基苯-1，2-二胺 步驟1將4-氯-3-硝基苯乙酮17-1(3.00g，15.0mmol)和甲基胺(15.0mL，2M溶于THF，30.0mmol)的混合物放在密封壓力管中并在80℃下攪拌6小時及在RT下攪拌20小時。將反應(yīng)混合物濃縮至干，并利用快速柱色譜法純化殘留物(使用20-30％己烷于EtOAc中)，以分離出期望的純產(chǎn)物17-2的橙色固體(980mg，34％收率)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在上圖解2和3中的通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適當?shù)腞8-NH2代替上述步驟1中的甲基胺(CH3NH2)而制備。
步驟2向得自步驟1的4-甲基氨基-3-硝基苯乙酮中間體17-2(700mg，3.6mmol)的二烷∶乙醚(10mL，1∶1比)溶液中緩慢加入Br2(0.20mL，3.96mmol)并將反應(yīng)混合物于RT下攪拌20小時。將該反應(yīng)混合物濃縮至干并將殘留物再溶解在EtOAc(200mL)中。用NaHCO3飽和水溶液(2×100mL)和鹽水(100mL)清洗該溶液，利用無水MgSO4干燥并濃縮至干，得到粗溴酮中間體17-3(1.0g)，其用于步驟3，不需純化。
步驟3將得自步驟2的溴酮中間體17-3(1.0g)和硫脲(548mg，7.2mmol)的i-PrOH(30mL)溶液于70℃攪拌1小時。將該混合物冷卻至RT并將形成的沉淀物過濾，用二乙醚清洗并干燥得到期望的氨基噻唑中間體17-4的橙色固體(～1.0g)。該化合物用于步驟4中不用純化。
步驟4將得自步驟3的硝基中間體17-4(500mg，～2mmol)和SnCl2二水合物(2.25g，10mmol)的EtOH(15mL)溶液于80℃攪拌16小時。將混合物緩慢倒至NaHCO3中并強力攪拌30分鐘。利用CH2Cl2(2×200mL)萃取混合物并將合并的有機層利用無水Na2SO4干燥并濃縮至干。將殘留物利用快速柱色譜法純化(使用溶劑梯度從30％己烷于EtOAc中至100％EtOAc，然后至3％MeOH于EtOAc中)，以回收未反應(yīng)的起始物和純二胺產(chǎn)物4-(2-氨基噻唑-4-基)-N1-甲基苯-1，2-二胺17-5(167mg，38％收率)。
將4-(2-氨基噻唑-4-基)-N1-甲基苯-1，2-二胺17-5依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的相應(yīng)的胺中間體，再利用實施例4的方法制成圖解1中通式I的抑制劑。
圖解1中通式I的抑制劑或在其制備中的適用中間體，其氨基噻唑取代基的游離氨基基團，可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法將其烷基化，或利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法將其乙?；缬么姿狒?、乙酰氯等處理?；蛘咴谏鲜霾襟E3中利用適用的N被取代的硫脲代替硫脲將得到其中游離氨基基團被取代的中間體。
實施例184-氨基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯
步驟1向間氯苯甲酸18-1(12.5g，79.8mmol)的硫酸(100mL)溶液中于40℃分批緩慢加入硝酸鉀(約總量的一半；22.0g，218mmol)，同時攪拌(溫度維持在低于70℃)。之后將溶液緩慢加熱至105℃，將剩下的KNO3緩慢加入(將溫度維持在低于110℃)，最后將溶液加熱至130℃15分鐘，冷卻至RT并倒到冰上(～500mL)。將形成的黃色固體過濾，用水(50mL)清洗、風干2小時，得到期望產(chǎn)物18-2和未知副產(chǎn)物以2∶1混合的混合物13.25g(67％)。該混合物用于步驟2中。
步驟2將得自步驟1的粗二硝基羧酸18-2(～13g)溶解在甲醇(100mL)中并非常緩慢地加入硫酸(13.0mL)，因為該反應(yīng)為極放熱反應(yīng)。在回流下攪拌反應(yīng)混合物18小時。將溶液倒至冰上(～500mL)并用EtOAc(2×100mL)萃取產(chǎn)物。將有機層利用5％NaHCO3(3×100mL)水溶液清洗，用無水MgSO4干燥并蒸發(fā)，得到期望的二硝基甲酯中間體18-3(9.54g，69％收率)。
步驟3向上述的二硝基芳基氯化物18-3(9.5g，36.5mmol)的DMF(20mL)溶液于0℃攪拌加入甲基胺(2M溶于THF，39.2mL，74.7mmol)。幾分鐘之后形成結(jié)晶固體，將懸浮液加溫至RT并持續(xù)攪拌2小時。將反應(yīng)混合物于H2O(200mL)和EtOAc(100mL)之間分配，并用5％NaHCO3水溶液(100mL)和鹽水(3×100mL)清洗有機層，用無水MgSO4干燥并將溶劑蒸發(fā)至干得到期望產(chǎn)物18-4的黃橙色固體(7.09g，76％收率)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在上圖解2和3中的通式IV的其他二胺中間體，其中R8不是甲基，可利用適當?shù)腞8-NH2代替上述步驟3中的甲基胺(CH3NH2)而制備。
步驟4向上面得到的二硝基苯胺中間體18-4的EtOH/H2O(100mL，1∶1比)懸浮液中于強力攪拌下加入K2CO3(10.3g，74.5mmol)，接著分批加入亞硫酸氫鈉(13.0g，74.5mmol)。黃色懸浮液轉(zhuǎn)變成血紅色然后黑色，變得更為均質(zhì)(輕微放熱)，然后變成雙相，并形成白色沉淀。于RT下攪拌30分鐘后，使EtOH部分蒸發(fā)并用H2O(100mL)稀釋殘留物。將反應(yīng)混合物以EtOAc(2×75mL)萃取，將合并的有機層以無水MgSO4干燥并蒸發(fā)產(chǎn)生黑色無定形固體18-5(1.26g，55％)，其這樣用于步驟5中。
步驟5向由上得到的三苯胺18-5(400mg，2.05mmol)的乙腈(5mL)的攪拌冰冷溶液在氮氣下加入三乙基胺(0.57mL)，接著滴加入TrocCl(0.282mL，2.05mmol)。將深紫色溶液攪拌并于2小時內(nèi)加溫至RT。將溶劑蒸發(fā)，并將殘留物加到EtOAc(30mL)中，用5％NaHCO3水溶液(2×20mL)和鹽水(20mL)清洗，用無水MgSO4干燥并將溶劑蒸發(fā)至干。利用快速色譜將殘留物純化(利用TLC級硅膠和溶劑梯度從30％至60％EtOAc于己烷中進行洗脫)得到期望產(chǎn)物18-6的米色無定形固體(459mg，60％收率)。
步驟6于以上Troc保護的苯胺衍生物18-6(100mg，0.27mmol)于CH2Cl2(1mL)的攪拌溶液中加入吡啶(0.032mL，0.4mmol)接著加入Fmoc-Cl(80mg，0.31mmol)。將反應(yīng)混合物于RT下攪拌2小時。用EtOAc(30mL)稀釋混合物，用5％水溶液NaHCO3(2×10mL)清洗懸浮液，用無水MgSO4干燥并蒸發(fā)至干。利用快速色譜法將殘留物純化(利用TLC級硅膠和溶劑梯度從20％至30％EtOAc于己烷中進行洗脫)得到兩種Fmoc保護的期望產(chǎn)物18-7樣品；47mg極純產(chǎn)物及100mg略低純度的產(chǎn)物。
步驟7將雙重保護(經(jīng)Troc-和Fmoc-保護)的三苯胺(trianinile)衍生物18-7(100mg，～0.17mmol)溶解在THF(1mL)和醋酸(0.25mL)中，接著加入全新活化鋅(20.0mg，0.31mmol)。將反應(yīng)混合物在氮氣下于RT強力攪拌2小時。以HPLC監(jiān)測反應(yīng)的進展并在2小時后只觀察到～30％的轉(zhuǎn)化，因此再加入鋅(15mg)并于60℃下持續(xù)攪拌4小時。將反應(yīng)混合物利用EtOAc(30mL)稀釋，用Celite過濾并將濾液在冰浴中冷卻并用5％水溶液NaHCO3(20mL)清洗；必須小心以預防過量壓力形成。用鹽水清洗有機層，以無水MgSO4干燥并將溶劑蒸發(fā)，得到單保護中間體4-氨基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯18-8的白色結(jié)晶固體(68mg，96％收率)。
將化合物18-8依照實施例3或7的方法轉(zhuǎn)化成圖解1中通式III的相應(yīng)經(jīng)Fmoc-保護的胺中間體，再使用實施例4的方法制成以上通式Ic的經(jīng)Fmoc-保護的抑制劑。通式Ic的這些經(jīng)Fmoc-保護的抑制劑，或在這些合成中適當?shù)慕?jīng)Fmoc-保護的胺中間體，也可利用實施例8中步驟1，2和3的方法，轉(zhuǎn)化成以上通式Id的經(jīng)Fmoc-保護的抑制劑。在這兩種情況中，可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的利用哌啶來處理而除去Fmoc保護基且酯基團的皂化可在堿性條件下發(fā)生(本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的下列方案)得到抑制劑，例如化合物1032(表1)和3060(表3)。將這些抑制劑的游離氨基團再和本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的試劑，例如異丙基氯甲酸酯等，形成抑制劑例如化合物1033(表1)。
實施例192-(5-溴嘧啶-2-基)-3-環(huán)戊基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸
步驟1將溴吲哚19-1(如WO 03/010141中實施例12所描述的方法而制備)(3.0g，8.9mmol，1當量)溶解在無水DME(20mL)中并加入三-(2-呋喃基)膦(260mg，1.1mmol，0.12當量)、三乙基胺(3.0mL，21.5mmol，2.4當量)和Pd(OAc)2(65mg，0.28mmol，0.03當量)。將混合物利用通過其中的起泡Ar而清洗10分鐘，并將頻哪醇硼烷(pinacolborane)(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二硼烷(dioborolane)；3.0mL，20mmol，2.2當量)利用注射器加入。將得到的深棕色混合物于68℃下在氬氣下攪拌16小時。之后將反應(yīng)混合物冷卻至RT并將5-溴-2-碘嘧啶(3.0g，10.5mmol，1.18當量)作為固體加入，接著小心緩慢地加入K3PO4(10.5g，47.1mmol，5.4當量)于水中(7mL)的冷懸浮液?；蛘?，K3PO4的加入可預先在5-溴-2-碘嘧啶的加入之前加入。之后將深棕色混合物在氬氣下加熱至80℃24小時。將反應(yīng)混合物冷卻至RT并倒進10％NaCl水溶液(100mL)中。將棕色懸浮液利用EtOAc(150mL)萃取，用水(2×50mL)和鹽水(100mL)清洗萃取液，并干燥且濃縮至50mL。在冰箱中冷卻2小時得到米色沉淀物，利用過濾收集，用少量的EtOAc清洗并干燥。在真空中將濾液濃縮并將殘留物在丙酮(20mL)中漿化，加熱至沸騰并在冰箱中冷卻過夜。過濾固體并將合并的固體再利用色譜法加以純化，使用CHCl3作為溶劑，得到期望的吲哚酯19-2的米色固體，具有77％收率。
步驟2將酯19-2(300mg，0.72mmol)懸浮在DMSO(10mL)中并將懸浮液溫和地加熱以溶解固體。將微渾的黃色溶液冷卻并攪拌加入2.5N NaOH(2.0mL，5.0mmol，8.6當量)，并于RT下持續(xù)攪拌4小時。將混合物緩慢倒到0.5NHCl(200mL)中。利用過濾將黃色沉淀收集起來并用水清洗并干燥，得到化合物19-3(273mg，94％收率，100％同質(zhì)性)。
實施例203-環(huán)戊基-1，2-二甲基-6-吲哚羧酸 將2-溴吲哚衍生物19-1(1.009g，3.00mmol，如WO 03/010141中的實施例12描述的方法制備)于氬氣下溶解在無水THF(25mL)并將溶液冷卻至-78℃。將n-BuLi(2.0M于己烷中，1.60mL，3.20mmol)滴加入并將混合物攪拌15分鐘。將MeI(0.37mL，2.00mmol)加入并再持續(xù)攪拌30分鐘。之后將反應(yīng)混合物加溫至RT并在減壓下除去揮發(fā)物。將殘留物溶解在TBME(100mL)中并將溶液用鹽水(2×25mL)清洗。將萃取液干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮，并利用快速色譜法使用0-15％EtOAc于己烷中作為洗脫液以純化殘留物。得到期望的2-甲基吲哚衍生物20-1的蠟狀固體(0.658g，80％收率)MS-ES m/z272.1(MH+)。將甲酯20-1以一般的方法皂化(NaOH/DMSO)得到相應(yīng)的羧酸20-2，具有96％收率MS-ES m/z 258.1(MH+)。
實施例213-環(huán)戊基-2-乙烯基-1-二甲基-6-吲哚羧酸 將2-溴吲哚19-1(由WO 03/010141的實施例12描述的方法所制備)(5.000g，14.87mmol)溶解在無水二烷(50mL)中，并加入乙烯三丁基錫(4.82mL，16.50mmol)。將溶液利用打入N2的氣泡15分鐘而加以脫氣。將雙(三苯基膦)鈀(II)氯化物(0.350g，0.50mmol)加入并將混合物在氮氣下加熱至100℃過夜。將其他催化劑(0.350g，0.50mmol)加入并持續(xù)再加熱48小時，在該點TLC分析顯示反應(yīng)幾乎完成。將反應(yīng)混合物冷卻至RT并利用小硅膠墊過濾，用THF清洗。將濾液于減壓下濃縮并將殘留物利用快速色譜法使用5-15％EtOAc在己烷中作為洗脫液而加以純化。得到期望的2-乙烯基吲哚酯21-1的褐色固體(2.92g，69％收率)MS-ES m/z 284.1(MH+)。將甲酯21-1以一般方法(NaOH/DMSO)皂化得到相應(yīng)的羧酸21-2，具有93％收率MS-ESm/z 270.1(MH+)。
實施例223-環(huán)戊基-2-乙基-1-甲基-6-吲哚羧酸 將2-乙烯基吲哚酯21-1(實施例21)(0.250g，0.88mmol)溶解在MeOH(15mL)中并將溶液于10％Pd(OH)2/C(50mg)進行氫化(1atm H2氣)18h。之后利用過濾將催化劑除去并在減壓下將濾液蒸發(fā)得到粗酯22-1。將殘留物溶解在DMSO并用NaOH以一般方法進行皂化，得到期望的2-乙基吲哚衍生物22-2的白色固體(0.211g，88％收率)MS-ES m/z 272.1(MH+)。
實施例233-環(huán)戊基-2-(2-丙烯基)-1-甲基-6-吲哚羧酸 將2-甲錫烷基吲哚23-1(1.280g，2.34mmol；利用描述在WO 03/010141中的方法制備)、三苯基膦(0.065g，0.25mmol)、CuI(0.045g，0.24mmol)、LiCl(0.200g，4.72mmol)和2-溴丙烯(0.444mL，5.00mmol)溶解在DMF(6mL)中并將懸浮液利用通入氬氣氣泡20分鐘而脫氣。加入Pd2(dba)3(0.035g，0.034mmol)并再脫氣10分鐘后，將反應(yīng)混合物加熱至100℃過夜。之后將懸浮液用TBME(100mL)稀釋并用鹽水清洗(2×25mL)。將萃取物干燥(MgSO4)并在減壓下濃縮得到殘留物，利用快速色譜法純化，使用5-10％EtOAc在己烷中作為洗脫液。得到期望的2-(2-丙烯基)吲哚23-2的米色固體(0.57g，81％收率)MS-ES m/z 298.1(MH+)。將甲酯23-2以一般方法皂化(NaOH/DMSO)得到相應(yīng)的羧酸23-3，具有96％收率MS-ES m/z 284.1(MH+)。
實施例243-環(huán)戊基-2-異丙基-1-甲基-6-吲哚羧酸 依照實施例22中對于2-乙基類似物所描述的相似方法，得到2-異丙基吲哚衍生物24-2的白色固體(88％收率)MS-ES m/z 286.1(MH+)。
實施例253-環(huán)戊基-2-環(huán)丙基-1-甲基-6-吲哚羧酸 將環(huán)丙基溴化物(0.471g，3.90mmol)溶解在無水THF(20mL)中并在氬氣壓下將溶液冷卻至-78℃。將nBuLi(0.1M在己烷中，3.60mL，3.60mmol)加入并將混合物攪拌15分鐘。之后加入ZnBr2(0.878g，3.90mmol)的THF(15mL)溶液，使混合物最高加溫至RT并將反應(yīng)攪拌15分鐘。將2-溴吲哚19-1(如WO 03/010141中實施例12所描述的方法制備)(1.009g，3.00mmol)的THF(15mL)溶液加入，接著加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.289g，0.25mmol)。將混合物于回流中攪拌24小時，在該點時起始物質(zhì)仍然存在，但通過加入AcOH(2mL)使反應(yīng)停止。將揮發(fā)物在減壓下除去并將殘留物利用TBME(100mL)提取。用NaHCO3飽和水溶液清洗萃取液并干燥(MgSO4)。在減壓下蒸發(fā)得到殘留物，可經(jīng)快速色譜法利用0-15％EtOAc于己烷中作為洗脫液而加以純化，得到期望的2-環(huán)丙基吲哚酯25-1的淺綠色固體(0.540g，60％收率)MS-ES m/z 298.1(MH+)。甲酯25-1可用一般方法皂化(NaOH/DMSO)得到相應(yīng)的羧酸25-2，具有80％收率MS-ES m/z284.1(MH+)。
實施例263-環(huán)戊基-1-甲基-2-(1-吡唑基)-6-吲哚羧酸 將2-溴吲哚19-1(如WO 03/010141中實施例12所描述的方法制備)(1.00g，2.97mmol)和吡唑(2.00g，20.4mmol，9.9當量)加到密封管中并將混合物加熱至160℃72小時。之后將反應(yīng)混合物冷卻至RT并加載到快速色譜柱上。利用40-100％EtOAc的己烷溶液當成洗脫液，洗脫該產(chǎn)物。將回收的物質(zhì)(1.60g)，其中含有吡唑，溶解在THF/MeOH/水的混合物中并用1N NaOH堿性。之后在減壓下使有機層蒸發(fā)并將殘留物用濃HCl處理，以沉淀出期望的2-吡唑基吲哚羧酸26-1(0.400g，43％收率)。
在吲哚環(huán)的C-2含有其他N-聯(lián)雜環(huán)取代基的類似物可利用類似方法制備，用氮為基礎(chǔ)的雜環(huán)開始制備，例如咪唑類和三唑類。
實施例27(E)-3-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯 步驟1將2，4-二氯硝基苯(27-1)(61g，0.32mmol)，三乙基胺(68mL，0.48mol)和2.0M甲基胺的THF(500mL，1.0mol)溶液在氬氣下在裝有Graham冷凝器的3-L圓底燒瓶中混合。之后在40℃加熱攪拌該溶液并有白色固體(Et3NH+Cl-)開始形成。加熱～6小時后，TLC(在20％乙酸乙酯的己烷中)顯示該反應(yīng)完成約～60％。加入另外二當量的甲基胺的THF(330mL)溶液，并在40℃再攪拌加熱該混合物16小時。TLC顯示所有起始物全都被消耗。讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫并利用過濾除去白色固體并用THF整個清洗。在減壓下使濾液濃縮并再溶解在800mL的二氯甲烷中，用水和鹽水清洗并用Na2SO4干燥。在真空中將溶劑除去得到化合物27-2的橙色固體(59.5g，定量)，其純度足夠可用于下一步驟。
步驟2在干燥壓管中于氬氣下加入化合物27-2(2.88g，15mmol)、Pd2(dba)3(414mg，0.45mmol)、P(t-Bu)3(0.1M溶于二烷的溶液，18mL，1.8mmol)和N，N-二環(huán)己基甲基胺(3.6mL，16.5mmol)。將丙烯酸正丁酯(2.4mL，16.5mmol)利用氬氣脫氣35分鐘，然后加到該混合物中。然后將管密封并在110℃下攪拌加熱該混合物過周末。將反應(yīng)冷卻至環(huán)境溫度并用乙酸乙酯(200mL)稀釋。讓混合物經(jīng)過硅膠墊過濾而除去將固體殘留物并用乙酸乙酯(700mL)洗。在真空中濃縮濾液并和己烷共蒸發(fā)三次。之后將紅色固體用己烷(40mL)于60℃攪拌。并將混合物冷卻至0℃15分鐘并利用過濾收集紅色固體并用己烷清洗，接著在高真空下再度進行干燥(3.4g，81％收率)。由NMR得知產(chǎn)物27-3約90％純度，其他產(chǎn)物可利用快速柱純化而從濾液中獲得。
步驟3使用實施例11步驟5的方法將化合物27-3轉(zhuǎn)化為化合物27-4。
步驟4使用實施例3的方法將化合物27-4轉(zhuǎn)化為化合物27-5。
實施例28(E)-3-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-7-氯-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯
步驟1將4-氨基-3-硝基苯甲酸28-1(15.00g，82mmol)溶解在AcOH(200mL)中并加入磺酰氯(6.62mL，82mmol)。在RT攪拌該混合物2小時，之后再加入另外的硫酰氯(1.5mL)完成反應(yīng)。在于RT下再攪拌1小時后，將該反應(yīng)混合物倒至冰上并利用過濾收集沉淀。用水清洗產(chǎn)物28-2，風干并直接用在下一步驟。
步驟2將粗產(chǎn)物28-2溶解在MeOH(300mL)中并加入濃H2SO4(1mL)。讓混合物回流2天，在該點之后轉(zhuǎn)換率約～75％完成。在減壓下將揮發(fā)物除去并在EtOAc和水之間分配。利用Na2CO3飽和水溶液的緩慢加入使得混合物堿性化并得以將有機相分離。將萃取物用鹽水清洗、干燥(Na2SO4)并濃縮得到28-3的米色固體(12.32g)，其可直接用于下一步驟。
步驟3將硝基苯胺28-3(11.32g，49mmol)、亞硫酸氫鈉(35.54g，204mmol)和NaHCO3(17.15g，204mmol)溶解在3∶2EtOH/水(600mL)中。將橙色混合物于RT下攪拌20小時。然后在減壓下將EtOH除去并用EtOAc萃取產(chǎn)物。將萃取物用水和鹽水清洗、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)得到化合物28-4的棕色固體(4.60g，46％收率)，其不需經(jīng)純化即可用在下一步驟。
步驟4將二胺28-4(1.00g，5.0mmol)、N-Boc-1-氨基環(huán)丁烷羧酸(1.07g，5.0mmol)、HATU(2.20g，5.8mmol)和Et3N(2.10mL，15.0mmol)溶解在DMF(30mL)中并于RT下攪拌該混合物2天。將反應(yīng)混合物倒至冰上并利用過濾收集沉淀的固體。利用水清洗該物質(zhì)，并溶解在EtOAc中并用鹽水萃取。之后將溶液干燥(Na2SO4)并在減壓下濃縮。將殘留物溶解在AcOH中并加熱至80℃3小時。HPLC分析顯示完全轉(zhuǎn)化成期望的苯并咪唑衍生物。在減壓下除去AcOH，使殘留物用EtOAc提取并用NaHCO3水溶液和鹽水清洗該溶液，經(jīng)過干燥(MgSO4)之后，除去溶劑得到化合物28-5的橙色固體(563mg)，其可直接用于下一步驟中。
步驟5將苯并咪唑28-5(1.63g，4.29mmol)和K2CO3(2.96g，21.45mmol)懸浮在DMF(10mL)中并加入碘甲烷(0.27mL，4.30mmol)。于RT下攪拌該混合物3小時。之后將反應(yīng)混合物倒至冰上并利用過濾收集沉淀固體。將該物質(zhì)用水清洗，溶解在EtOAc中并將該溶液用5％檸檬酸水溶液和鹽水清洗兩次，經(jīng)過干燥(MgSO4)之后在減壓下除去揮發(fā)物，得到化合物28-6的棕色固體(1.44g)，其可直接用于下一步驟。
步驟6將甲酯28-6(1.22g，3.10mmol)溶解在THF(30mL)中并在RT下分幾個小部分加入LiBH4(0.243g，11.14mmol)。然后于40℃下攪拌該混合物16小時。由于轉(zhuǎn)化尚未完成，加入另外的LiBH4(0.100g，4.6mmol)，并于70℃另外再攪拌該混合物3小時。將反應(yīng)混合物冷卻至RT并將殘留物用EtOAc稀釋。小心地加入水并使得有機相分離。用水和鹽水清洗萃取物并干燥(MgSO4)。將粗醇28-7(961mg)和其他批次的產(chǎn)物合并并利用快速色譜法加以純化。
步驟7將得自以上的純化醇28-7(0.450g，1.02mmol)溶解在DCM(20mL)中并加入Dess-Martin periodinane(0.551g，1.30mmol)。于RT下攪拌該混合物2小時。然后加入(乙酯基亞甲基)三苯基正膦(0.550g，1.58mmol)，并將混合物回流20小時。之后在減壓下將揮發(fā)物除去并將殘留物溶解在1∶1TFA-DCM中，以便除去Boc保護基。于RT下攪拌1小時后，在減壓下除去揮發(fā)物并將殘余物在EtOAc和1N HCl之間分配。分離出含有產(chǎn)物的水相，用2M Na2CO3中和并用EtOAc萃取2X。將萃取物干燥(Na2SO4)并濃縮得到化合物28-8的白色泡沫(212mg)，通過快速色譜法中使用80-100％EtOAc在己烷中作為洗脫液而加以純化。將期望的苯并咪唑片段(fragment)的白色固體(66mg)。
實施例295-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-3H-[1，3，4]二唑-2-酮 步驟1將10N HCl(2mL)加到3-氟-4-硝基-苯甲酸(29-1)(10g，54.0mmol)的300mL MeOH溶液中并使溶液回流15小時。之后將混合物濃縮，用EtOAc稀釋殘留物，并將有機相用2X水和NaHO3飽和水溶液清洗、干燥(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到10.45g(97％收率)化合物29-2的白色固體。該化合物可用在下一反應(yīng)中。
步驟2將甲基胺(于THF中的2N溶液，80mL)于0℃滴加到化合物29-2(10g，50.2mmol)于100mL THF的溶液中。將該混合物于0℃再攪拌20分鐘，之后于室溫下再攪拌15小時。然后將揮發(fā)物蒸發(fā)，并用EtOAc稀釋殘留物并用2X水、NaHO3飽和水溶液清洗有機相、干燥(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到10.21g(96％收率)29-3的橙色固體。該化合物可用于下一反應(yīng)中。
步驟3將鈀(10％碳上，1g)加到化合物29-3(10g，47.6mmol)于400mL THF-無水EtOH的1/1混合溶液中。在氫氣下攪拌該混合物16小時，然后將該溶液過濾以除去催化劑并濃縮得到8.5g(99％收率)化合物29-4的灰白色固體。該化合物可用于下一反應(yīng)中。
步驟4使用實施例7的方法將化合物29-4轉(zhuǎn)化為化合物29-5。
步驟5將化合物29-5(730g，2.03mmol)和肼單水合物(500μL，10.3mmol)于5mL乙醇中的混合物于85℃下在具有螺旋帽的小瓶中加熱72小時。之后將該溶液濃縮、用CH2Cl2稀釋并用水清洗有機層。將有機層干燥(Na2SO4)、過濾并蒸發(fā)得到642mg(88％)化合物29-6的灰白色固體。其可用于下一步驟中。
步驟6將三乙基胺(190μL，1.36mmol)加到化合物29-6(350mg，0.97mmol)和1，1’-羰基二咪唑(190mg，1.17mmol)的THF(5mL)溶液中。在室溫下攪拌該混合物15小時。將揮發(fā)物除去并用將殘留物用EtOAc稀釋，用水、鹽水清洗，并將有機層干燥(Na2SO4)、過濾和蒸發(fā)得到318mg(85％收率)化合物29-7的蠟狀白色固體，其可用于下一步驟中。
步驟7將TFA(3mL)滴加到化合物29-7(150mg，0.39mmol)的二氯甲烷(10mL)的懸浮液中并將得到的溶液攪拌1小時。將揮發(fā)物蒸發(fā)得到150mg(定量收率)的期望化合物29-8的三氟醋酸鹽，其為米色固體。
實施例305-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-3-甲基-3H-1，3，4-二唑-2-酮
將碳酸鉀(32mg，0.32mmol)加到化合物29.7(80mg，0.21mmol)的DMF(1mL)溶液中。將該懸浮液在室溫下攪拌15分鐘。然后將碘甲烷(12.5μL，0.2mmol)加入并在室溫下攪拌該混合物3小時。將混合物用EtOAc稀釋，用水(3X)、鹽水清洗，然后將有機相干燥(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到67mg(81％收率)的米色固體。使用實施例29步驟7中描述的TFA處理得到57mg(定量收率)的期望化合物30-1的三氟醋酸鹽，其為米色固體。
化合物30-1可利用實施例4和34步驟1的方法偶合至通式II的吲哚中間體得到式I的化合物。
實施例315-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基-2H-吡唑-3-醇 步驟1將NaOH(10N，11mL，110mmol)加到化合物29-5(5.0g，13.9mmol)在3∶2∶1THF、MeOH和水混合(180mL)的溶液中并將該溶液在室溫下攪拌過夜。然后將混合物濃縮，利用1N HCl將pH值調(diào)整至4并用EtOAc萃取混合物。將有機層用鹽水清洗、干燥(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到化合物31-1(3.94g，82％收率)的白色固體。該化合物可用于下一反應(yīng)中。
步驟2將1，1’-羰基二咪唑(702mg，4.33mmol)加到化合物31-1(1g，2.90mmol)的THF(24mL)溶液中。將該溶液攪拌15小時，然后于0℃滴加到丙二酸陰離子(將Et3N(0.81mL，5.80mmol)和MgCl2(690mg，7.25mmol)加到丙二酸單乙酯鉀鹽(1g，5.96mmol)的乙腈(10mL)溶液中，接著在室溫下攪拌2.5小時而制得)的溶液中。然后將得到的混合物緩慢加溫至室溫并總共攪拌約48小時。將該混合物濃縮并加入甲苯。將該混合物冷卻至10-15℃并通過添加1M HCl直到pH達到3-4而緩慢水解。然后分離相層并用EtOAc稀釋有機層，用水清洗、干燥并蒸發(fā)得到黃色油。利用快速色譜法將產(chǎn)物純化(洗脫液∶己烷∶AcOEt 4∶6)得到885mg(74％收率)化合物31-2的白色固體。
步驟3將甲基肼(29μL，0.55mmol)加到化合物31-2(100mg，0.24mmol)的EtOH(2.5mL)溶液中。于80℃攪拌該混合物15小時。然后將該混合物濃縮并加入水，接著利用1N HCl的加入將pH值調(diào)整至6-7。用EtOAc將水層萃取3次并將有機層干燥(MgSO4)和濃縮得到94mg(98％收率)的淡黃色固體。利用實施例29步驟7描述的方法用TFA的二氯甲烷溶液處理，得到93mg(定量收率)的化合物31-3的三氟醋酸鹽。
化合物31-3可利用實施例4和34步驟1的方法偶合至通式II的吲哚中間體得到式I的化合物。
實施例325-[2-(1-氨基環(huán)丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-3H-1，3，4-噻二唑-2-酮 步驟1將TBTU(380mg，1.18mmol)和三乙基胺(380μL，2.73mmol)加到化合物31-1(350mg，1.01mmol)和肼基甲酸乙酯(ethyl carbazate)(120mg，1.15mmol)在DMF(5mL)的溶液中。將該混合物于室溫下攪拌15小時，然后用EtOAc稀釋。將得到的有機懸浮液用2X水和1X NaHCO3飽和水溶液清洗。然后將THF加到有機層中得到溶液，干燥(MgSO4)、過濾和濃縮。將殘留物用EtOAc研磨得到290mg(66％)化合物32-1的米色固體。該化合物可用于下一反應(yīng)中。
步驟2將Lawesson試劑(70mg，0.17mmol)于100℃加到化合物32-1(150mg，0.35mmol)于二烷(10mL)的溶液中。將得到的混合物于100℃下攪拌8小時然后在140℃下攪拌4小時。然后將該混合物冷卻至100℃并加入另外部分的Lawesson試劑(70mg，0.17mmol)。然后于100℃將溶液加熱15小時。將混合物濃縮至干并利用EtOAc研磨固體殘余物并過濾。將得到的米色固體(100mg)利用實施例29步驟7中描述的TFA處理得到93mg化合物32-2的三氟醋酸鹽。
化合物32-2可利用實施例4和34步驟1的方法偶合至通式II的吲哚中間體得到式I的化合物。
實施例33[1-(1-甲基-6-嘧啶-2-基-1H-苯并咪唑-2-基)環(huán)丁基]氨基甲酸叔丁基酯 步驟1將市售購得的1，3-二溴苯33-1(4.1mL，33.9mmol)溶解在濃硫酸(35mL)中，在冰浴中冷卻。將硝酸鉀(3.4g，33.9mmol)緩慢加入(以小量分批)因此可將內(nèi)反應(yīng)溫度維持在10℃以下。將反應(yīng)混合物再攪拌30分鐘，之后并倒入1L冰中。將形成的黃色沉淀物(33-2)過濾并用水清洗。在減壓下干燥并可直接用在下述步驟中。
步驟2將化合物33-2(6.3g，22.4mmol)和甲基胺氫氯化物(3.0g，44.8mmol)于DMF(50mL)中的混合物冷卻至0℃。將三乙基胺(9.4mL，67mmol)加入，并將混合物于RT下攪拌3.5小時，然后加熱至70℃過夜。將混合物倒入水中并將得到的沉淀物過濾。用EtOAc(3X)萃取濾液并將萃取液用水(3X)和飽和NaCl清洗、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮得到化合物33-3和33-4的混合物，其為橙色固體(4.8g)并可用于下一步驟中。
步驟3利用描述在實施例11步驟5描述的方法使得進行硝基化合物33-3與Na2S2O4/K2CO3的還原反應(yīng)。利用柱色譜法使用溶劑梯度EtOAc于己烷中從17％至25％，將化合物33-5(1.5g，～20％，3個步驟的收率)從反應(yīng)混合物中分離出來。
步驟4使用描述在實施例7中的方法將二苯胺33-5轉(zhuǎn)化為化合物33-6。
步驟5將氬氣以氣泡方式打入化合物33-6(300mg，0.79mmol)、氯化鋰(67mg，1.6mmol)，PPh3(31mg，0.12mmol)和2-三丁基甲錫烷基嘧啶(365mg，0.99mmol)于DMF(6.0mL)的混合物中15分鐘。將Pd(PPh3)4(91mg，0.079mmol)和CuI(15mg，0.079mmol)加入并將混合物于100℃加熱24小時。將混合物用EtOAc稀釋并將有機相用水和鹽水清洗，然后干燥(MgSO4)并濃縮得到黃色油，其利用快速色譜法純化(己烷∶EtOAc3∶7至2∶8)得到化合物33-7的黃色固體(100mg，24％)。
利用實施例29步驟7中描述的標準條件可將化合物33-7去保護并將得到的胺利用實施例4和34步驟1的方法偶合至通式II的吲哚中間體得到式I的化合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，帶有相似雜環(huán)或芳香基團的類似中間體的制備，可利用該方法或其變化方法進行?；蛘撸襟E5的偶合反應(yīng)可利用熟知的Suzuki反應(yīng)中的條件進行(A.Suzuki，Pure Appl.Chem.(1994)66，213；N.Miyaura and A.Suzuki，Chem.Rev.(1995)95，2457)。
實施例34(E)-3-[2-(1-{[2-(5-溴嘧啶-2-基)-3-環(huán)戊基-1-甲基-1H-吲哚-6-羰基]-氨基}-環(huán)丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-丙烯酸
使用實施例4的方法將化合物19-3(實施例19)和化合物34-1(使用實施例3的方法由化合物10-2制備而得)偶合得到化合物34-2(化合物3085，表3)的深黃色固體(9.3％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ1.63(bs，2H)，1.80-1.95(m，6H)，1.95-2.10(m，2H)，2.70(ddd，J＝9.3&10.6Hz，2H)，2.99(m，2H)，3.65-3.75(m，1H)，3.76(s，3H)，3.85(s，3H)，6.54(d，J＝15.6Hz，1H)，7.52(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(d，J＝8.4Hz，1H)，7.64(d，J＝8.2Hz，1H)，7.70(d，J＝15.9Hz，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.86(s，1H)，8.12(s，1H)，9.18(s，2H)，9.20(s，1H)，12.25(s，1H)。
實施例353-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[1-甲基-6-(5-氧代-4，5-二氫-1，3，4-二唑-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-環(huán)丁基}-酰胺 步驟1將TBTU(350mg，1.09mmol)和三乙基胺(380mL，2.73mmol)加到化合物35-1(化合物1025，表1)(487mg，0.89mmol)和肼基甲酸叔丁基酯(130mg，0.98mmol)的DMF(8mL)溶液中。并將混合物在室溫下攪拌2小時，然后并用EtOAc稀釋。將得到的有機懸浮液用2X水和1X NaHCO3飽和水溶液清洗。然后將THF加到有機層中并將得到的溶液干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。將殘留物用EtOAc研磨得到421mg(72％)化合物35-2的米色固體。該化合物可用于下一反應(yīng)中。
步驟2將TFA(3mL)滴加到化合物35-2(200mg，0.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中并將得到的溶液攪拌2小時。將揮發(fā)物蒸發(fā)得到170mg(定量收率)化合物35-3的三氟醋酸鹽，其可直接使用不須再純化。
步驟3將1，1’-羰基二咪唑(25mg，0.15mmol)一次性加到化合物35-3(100mg，0.13mmol)和三乙基胺(80μL，0.57mmol)在2mL THF的溶液中并將得到的溶液于室溫下攪拌4小時。然后將該混合物在減壓下濃縮，用4mL DMSO稀釋并直接在反相C18半制備HPLC柱(使用溶劑梯度從5％H2O于MeCN中至100％MeCN)進行純化，以分離化合物35-4(化合物1128，表1)的黃色無定形固體，其具有＞95％同質(zhì)性(29mg，39％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ1.54-1.68(m，2H)，1.79-1.93(m，6H)，1.94-2.05(m，1H)，2.09-2.21(m，1H)，2.75-2.85(m，2H)，3.05-3.25(m，3H)，3.69(s，3H)，3.90(s，3H)，7.49(m，1H)，7.57-7.72(m，3H)，7.82-7.92(m，2H)，7.94-8.02(m，1H)，8.06-8.15(m，2H)，8.78(d，J＝3.9Hz，1H)，9.45(s，1H)，12.62(s，1H)。
實施例363-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[6-(5-氨基-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基]環(huán)丁基}酰胺 將C-(二-咪唑-1-基)-亞甲基胺(25mg，0.16mmol)一次性加到化合物35-3(實施例35)(80mg，0.14mmol)的THF(4mL)溶液中。將得到的溶液加熱至70℃16小時，之后觀察到白色沉淀。然后在減壓下將反應(yīng)物濃縮，并溶解在4mL DMSO中并直接在反相C18半制備HPLC柱(使用溶劑梯度從5％H2O于MeCN中至100％MeCN)進行純化，以分離化合物36-1(化合物1129，表1)的黃色無定形固體，其具有＞95％同質(zhì)性(19mg，23％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ1.54-1.67(m，2H)，1.79-1.94(m，6H)，1.95-2.06(m，1H)，2.11-2.23(m，1H)，2.74-2.84(m，2H)，3.19-3.05(m，3H)，3.69(s，3H)，3.91(s，3H)，7.49(dd，J＝1.8&5.7Hz，1H)，7.59-7.71(m，3H)，7.86-7.92(m，2H)，7.96-8.01(m，1H)，8.06-8.10(m，1H)，8.10(s，1H)，8.78(d，J＝4.3Hz，1H)，9.51(s，1H)。
實施例373-環(huán)戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羧酸[1-(1-甲基-6-1，3，4-二唑-2-基-1H-苯并咪唑-2-基)環(huán)丁基]酰胺 將化合物35-3(實施例27)(50mg，0.09mmol)和原甲酸三乙酯(1mL，6mmol)的二烷(3mL)懸浮液于回流下加熱18小時。將得到的幾乎清澈的溶液蒸發(fā)至干并將殘留物溶解在DMSO(1mL)中，并在反相C18半制備HPLC柱(使用溶劑梯度從5％H2O于MeCN中至100％MeCN)進行純化，以分離化合物37-1(化合物1130，表1)的黃色無定形固體，其具有＞95％同質(zhì)性(27mg，53％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ1.55-1.68(m，2H)，1.79-1.93(m，6H)，1.95-2.04(m，1H)，2.12-2.20(m，1H)，2.82-2.74(m，2H)，3.15-3.05(m，3H)，3.69(s，3H)，3.92(s，3H)，7.49(dd，J＝2.2&5.3Hz，1H)，7.56-7.73(m，3H)，7.93-8.05(m，3H)，8.11(s，1H)，8.33(s，1H)，8.79(d，J＝4.3Hz，1H)，9.37(s，1H)，9.44(s，1H)。
實施例383-環(huán)戊基-2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[1-甲基-6-(5-氧代-4，5-二氫-1，3，4-二唑-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-環(huán)丁基}-酰胺 將TBTU(45mg，0.14mmol)和三乙基胺(49mL，0.35mmol)加到化合物38-1(利用在WO 03/010141中描述的方法制備)(45mg，0.13mmol)和化合物29-8(實施例29)(45mg，0.11mmol)的DMF溶液中。將溶液攪拌15小時，并直接在反相C18半制備HPLC柱(使用溶劑梯度從5％H2O于MeCN中至100％MeCN)進行純化，以分離化合物38-2(化合物1143，表1)的黃色無定形固體，其具有＞95％同質(zhì)性(23mg，34％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ1.54-1.68(m，2H)，1.79-1.93(m，6H)，1.93-2.04(m，1H)，2.07-2.20(m，1H)，2.72-2.82(m，2H)，3.00-3.15(m，3H)，3.67(s，3H)，3.89(s，3H)，7.57-7.72(m，3H)，7.79-7.95(m，3H)，8.10(s，2H)，8.80(d，J＝2.9Hz，1H)，9.45(s，1H)，12.63(s，1H)。
實施例39NS5B RNA依賴性RNA聚合酶活性的抑制如WO 03/010141中描述的方法，進行本發(fā)明的化合物對丙型肝炎病毒RNA依賴性聚合酶(NS5B)抑制劑活性的試驗。
實施例40NS5B RNA依賴性RNA聚合酶抑制的特異性如WO 03/010141中描述的方法，，除了以脊髓灰質(zhì)病毒聚合酶代替HCV NS5B聚合酶外，按照HCV聚合酶描述的形式進行本發(fā)明化合物對脊髓灰質(zhì)病毒RNA依賴性RNA聚合酶抑制劑活性的試驗。該化合物也可以先前描述的實驗形式進行對抑制小牛胸腺DNA依賴性RNA聚合酶II(McKercher等，2004Nucleic Acids Res.32422-431)的描繪。
實施例41細胞基礎(chǔ)的螢光素酶報道基因HCV RNA復制實驗細胞培養(yǎng)除了復制子細胞是利用0.25mg/mL G418所選擇的以外，如先前所述(Lohman等，1999.Science 285110-113；Vroljik等，2003J.Virol Methods110201-209)建立具有編碼經(jīng)修飾的螢光素酶報道基因(作為螢光素酶-FMDV2A-新霉素磷酸轉(zhuǎn)化酶融合基因表達)的穩(wěn)定次基因組HCV復制子的Huh-7細胞。被所選細胞表達的螢光素酶的量直接與HCV復制的水平直接相關(guān)。這些細胞，記作MP-1細胞，是維持在補充有10％FBS和0.25mg/mL新霉素的Dulbecco’s Modified Earle Medium(DMEM)(標準培養(yǎng)基)中。這些細胞通過胰蛋白酶消化傳代，并在90％FBS/10％DMSO中冷凍。實驗期間，使用補充有10％FBS并含有0.5％DMSO并缺乏新霉素的DMEM培養(yǎng)基(實驗培養(yǎng)基)。實驗當天，將MP-1細胞胰蛋白酶消化并在實驗培養(yǎng)基中稀釋成100000細胞/mL。將100μL分布到黑色96-孔ViewPlateTM(Packard)的每個孔中。之后將板放在37℃用5％CO2培養(yǎng)兩小時。
試劑與材料

受試化合物的制備將在100％DMSO中的受試化合物在實驗培養(yǎng)基中進行第一次稀釋至最后DMSO濃度為0.5％。將溶液超聲波震蕩15分鐘并以0.22μM Millipore濾器組過濾到聚丙烯深孔滴定板(Polyprolylene Deep-Well Titer Plate)的柱3，將適當體積轉(zhuǎn)移至實驗培養(yǎng)基中以得到供試驗的起始濃度(2x)。在柱2和4至12中，加入200μL實驗培養(yǎng)基(含有0.5％DMSO)。利用將200μL從柱3轉(zhuǎn)移至柱4，然后由柱4移至柱5，系列直到柱11而制備出一系列的稀釋液(1/2)。柱2和12為無抑制對照。
試驗化合物加入細胞中
將來自化合物稀釋板中每個孔100μL體積轉(zhuǎn)移至細胞板(Cell Plate)(使用兩個柱作為“無抑制對照”，十個[10]柱用于劑量反應(yīng))的相應(yīng)孔中。將細胞培養(yǎng)板于37℃下和5％CO2培養(yǎng)72小時。
螢光素酶實驗接下來72小時培養(yǎng)期間，將培養(yǎng)基從96-孔實驗板中取出并將體積100μL且預先加溫至室溫的1X Glo裂解緩沖液(Promega)加到每個孔中。將板放置在室溫下培養(yǎng)10分鐘，并偶爾加以震蕩。將黑色膠帶貼在板底。將預先加溫至室溫的100μL Bright-Glo螢光素酶底物(Promega)加到每個板中，接著溫和混合。在Packard Topcount儀器中利用Data ModeLuminescence(CPS)測定螢光度，該儀器中是1分鐘的計數(shù)延遲和2秒鐘的計數(shù)時間

培養(yǎng)板的每個孔中的熒光度測定(CPS)是測量在各種濃度的抑制劑存在時HCV RNA復制量。抑制性％利用下列方程式計算抑制性％＝100-[CPS(抑制劑)/CPS(對照)×100]符合Hill模式的非線性曲線用在抑制-濃度數(shù)據(jù)，且50％有效濃度(EC50)可利用SAS軟體來計算(Statistical Software；SAS Institute，Inc.Cary，N.C.)。
化合物表列在下表1至4中的所有化合物被發(fā)現(xiàn)在實施例41中描述的細胞基礎(chǔ)的HCV RNA復制實驗中具有意想不到的良好活性。
每個化合物的保留時間(tR)可利用描述在實施例中的標準分析性HPLC條件來測量。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，保留時間值對于具體測量條件很敏感。因此，即使使用溶劑、流速、線性梯度等的相同條件，滯留時間值可以在測量時，因為例如使用不同HPLC儀器而改變。即使使用相同儀器來測量，該值也可以在測量時，因為例如使用不同的各自HPLC柱而改變，或是使用相同儀器和相同各自柱測量時，該值可以因為例如各自測量之間發(fā)生不同偶發(fā)事件而改變。
表1 其中R2、R3、R5、R6、R9和R10如表中所示。













表2 其中R2、R3、R5、R6、R9和R10如表中所示。






表3 其中R2、R4、R5、R8、R9和R10如表中所示。










表4 其中R1、R2、R3、R5、R6、R9和R10如表中所示。





權(quán)利要求
1.如式(I)所示的化合物，或其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，包括其鹽或酯 其中A或B為N且另一個B或A為C，其中在兩個C-原子之間的-----代表雙鍵并且在C-原子和N-原子之間的-----代表單鍵；R1為H或(C1-6)烷基；R2選自鹵素、氰基、(C1-6)烷基、(C2-6)鏈烯基、(C2-6)炔基、(C3-7)環(huán)烷基、芳基和Het；該芳基和Het任選地被R21取代；其中R21為一、二或三個取代基，各自獨立地選自-OH、-CN、-N(RN2)RN1、鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、Het和-CO-N(RN2)RN1；其中該(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；R3為(C5-6)環(huán)烷基，任選地被一至四個鹵素原子取代；R4和R7各自獨立地選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基，(C1-6)烷硫基、-NH2、-NH(C1-6)烷基、-N((C1-6)烷基)2和鹵素；R5和R6之一選自COOH、-CO-N(RN2)RN1、芳基、Het和(C2-6)鏈烯基，其中芳基、Het、(C2-6)鏈烯基和RN1或任何在RN2和RN1之間形成的雜環(huán)各自任選地被R50取代；其中R50為一、二或三個取代基，各自獨立地選自(C1-6)烷基、-COOH、-OH、氧代、-N(RN2)RN1，-CO-N(RN2)RN1和鹵素，其中(C1-6)烷基任選地被芳基或-N(RN2)RN1取代；且R5和R6的另一個選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基和N(RN2)RN1；R8為(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基或(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-；其中該烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基各自任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；R9和R10各自獨立地選自(C1-6)烷基；或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-7)環(huán)烷基、(C5-7)環(huán)烯基或具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-，5-或6-員雜環(huán)；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)基在各種情況下任選地被(C1-4)烷基所取代；RN1選自H、(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-、-CO-(C1-6)烷基、-CO-O-(C1-6)烷基和Het；其中該(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基、-CO-(C1-6)烷基和-CO-O-(C1-6)烷基中各烷基和環(huán)烷基部分各自任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；且RN2為H或(C1-6)烷基，或RN2和RN1可以連接，與它們相連接的氮原子共同形成4-、5-、6-或7-員飽和、不飽和或芳香含N雜環(huán)或8-、9-、10-或11-員飽和、不飽和或芳香含N雜雙環(huán)，各自任選地還具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子；其中由RN2和RN1形成的雜環(huán)或雜雙環(huán)是任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基所取代；其中Het定義為具有1至4個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-、5-、6-或7-員雜環(huán)，該雜環(huán)可以為飽和、不飽和或芳香的，或在可能的位置具有1至5個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的8-、9-、10-或11員雜雙環(huán)，該雜雙環(huán)可以為飽和、不飽和或芳香的。
2.如權(quán)利要求1所述的式(Ia)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R21如權(quán)利要求1所定義。
3.如權(quán)利要求1所述的式(Ib)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R21如權(quán)利要求1所定義。
4.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R1選自H、甲基和乙基。
5.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R2選自鹵素、氰基、(C1-4)烷基、(C2-4)鏈烯基、(C2-4)炔基、(C3-6)環(huán)烷基、苯基和Het，Het選自下列基團 其中該苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21如權(quán)利要求1所定義。
6.如權(quán)利要求5的化合物，其中R2選自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、環(huán)丙基、苯基和Het，該Het選自下列基團 其中該苯基和Het未被取代或被R21取代。
7.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R21為1、2或3個取代基，該取代基各自獨立地選自-1至3個取代基，各自獨立地選自鹵素；以及-1至2個取代基，各自獨立地選自a)羥基、(C1-4)烷基或(C1-4)烷氧基；其中該烷基及烷氧基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-NRN2RN1其中RN1選自H、(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基、-CO-O-(C1-3)烷基和Het；其中所述各(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基和-CO-O-(C1-3)烷基中的烷基部分任選地被選自鹵素和(C1-6)烷氧基的一、二或三個取代基所取代；且其中該Het為具有1或2個各自獨立地選自N、O和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或芳香雜環(huán)；且RN2為H或(C1-3)烷基；c)-CONN2RN1，其中RN2和RN1各自獨立地選自H和(C1-3)烷基；以及d)Het，其中該Het為具有1、2或3個各自獨立地選自N、O和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)雜環(huán)。
8.如權(quán)利要求7的化合物，其中R21為1、2或3個取代基，該取代基各自獨立地選自-1至2個取代基，各自獨立地選自氟、氯和溴；和-1至2個取代基，各自獨立地選自a)羥基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1-甲基乙氧基；其中該甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和1-甲基乙氧基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-N(CH3)2或-NHRN1其中RN1選自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基；其中該甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-3)烷氧基的取代基所取代；c)-CONH2；及d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-嗎啉代。
9.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R3為任選地被一或二個氟原子取代的環(huán)戊基或環(huán)己基。
10.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R4為H或鹵素且R7為H。
11.如權(quán)利要求10的化合物，其中R4為H或Cl且R7為H。
12.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R5和R6之一選自a)被COOH或CONHRN1取代的(C2-4)鏈烯基，其中RN1選自H和(C1-3)烷基，該鏈烯基任選地還被一或二個各自獨立地選自(C1-3)烷基和鹵素的取代基所取代；b)苯基或Het，各自任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代i.-OH、氧代、COOH；ii.任選地被苯基或-N(RN2)RN1取代的(C1-3)烷基，其中RN1和RN2各自獨立地選自H和(C1-3)烷基，或RN1和RN2連接，并與其相連接的氮原子共同形成5-或6-員單環(huán)、飽和、不飽和或芳香含N雜環(huán)，該雜環(huán)任選地還具有一或二個各自獨立地選自N、O和S的雜原子；以及iii.-N(RN2)RN1；其中RN1選自H、(C1-3)烷基和-CO(C1-3)烷基且RN2為H或(C1-3)烷基；其中Het為具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或芳香雜環(huán)；及c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、NHRN1、(C1-3)烷基和(C1-3)烷氧基，其中RN1選自H和-CO-O-(C1-6)烷基。
13.如權(quán)利要求12的化合物，其中R5和R6中之一選自a)被COOH或-CONH2取代的(C2-4)鏈烯基，該鏈烯基任選地還被一或二個選自(C1-3)烷基和鹵素的取代基所取代；以及b)苯基或Het，各自任選地還被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代i.-OH、氧代、COOH；ii.任選地被苯基、-N(CH3)2或 取代的(C1-3)烷基；及iii.-NH2、-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式 c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-O-CH(CH3)2。
14.如權(quán)利要求13的化合物，其中R5和R6中之一選自a)-CH＝CH-COOH或-CH＝CH-CONH2，各自任選地被一或二個選自甲基、乙基和氟的取代基所取代；以及b)任選地被NH2取代的苯基，或任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代的Heti.-OH、氧代、COOH；ii.甲基或乙基，各自任選地被苯基、-N(CH3)2或 取代；及iii.-NH2、-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式 c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-O-CH(CH3)2。
15.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R8選自(C1-5)烷基、(C4-6)環(huán)烷基和(C3-4)環(huán)烷基-(C1-3)烷基，其中該(C1-5)烷基任選地被(C1-3)烷氧基或一至三個氟原子取代。
16.如權(quán)利要求15的化合物，其中R8選自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基。
17.如上述一項或多項權(quán)利要求的化合物，其中R9和R10各自獨立地選自(C1-3)烷基，或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-6)環(huán)烷基、(C5-6)環(huán)烯基或具有1至2個各自獨立地選自O(shè)和N的雜原子的5-或6-員單環(huán)雜環(huán)；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)各自任選地被(C1-4)烷基取代。
18.如權(quán)利要求17的化合物，其中該基團 選自
19.如權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中A或B為N且另一個B或A為C，其中在兩個C-原子之間的-----代表雙鍵并且在C-原子和N-原子之間的-----代表單鍵；R1為H或(C1-6)烷基；R2為鹵素、芳基或Het；該芳基和Het任選地被R21取代；其中R21為一、二或三個取代基，各自獨立地選自-OH、-CN、-N(RN2)RN1、鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、Het和-CO-N(RN2)RN1；其中該烷基、烷氧基和烷硫基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；R3為(C5-6)環(huán)烷基，任選地被一至四個鹵素原子所取代；R4和R7各自獨立地選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基，(C1-6)烷硫基、-NH2、-NH(C1-6)烷基、-N((C1-6)烷基)2和鹵素；R5和R6之一選自COOH、-CO-N(RN2)RN1、Het和(C2-6)鏈烯基，其中Het、(C2-6)鏈烯基和RN1或任何在RN2和RN1之間形成的雜環(huán)各自任選地被R50取代；其中R50為一、二或三個取代基，各自獨立地選自(C1-6)烷基、-COOH、-N(RN2)RN1、-CO-N(RN2)RN1和鹵素；且R5和R6的另一個選自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基和N(RN2)RN1；R8為(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基或(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-；其中該烷基、環(huán)烷基和環(huán)烷基-烷基各自任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；R9和R10各自獨立地選自(C1-6)烷基；或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-7)環(huán)烷基、(C5-7)環(huán)烯基或具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-，5-或6-員雜環(huán)；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)各自任選地被(C1-4)烷基所取代；RN1選自H、(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基、(C3-7)環(huán)烷基-(C1-6)烷基-、-CO-(C1-6)烷基、-CO-O-(C1-6)烷基和Het；其中所述所有烷基和環(huán)烷基任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基所取代；且RN2為H或(C1-6)烷基，或RN2和RN1可以連接，并與其相連接的氮原子共同形成4-，5-，6-或7-員飽和或不飽和含N雜環(huán)，或8-，9-，10-或11-員含N雜雙環(huán)，各自還具有1至3個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子；其中由RN2和RN1形成的雜環(huán)或雜雙環(huán)是任選地被一、二或三個各自獨立地選自鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基所取代；其中Het定義為具有1至4個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-，5-，6-或7-員雜環(huán)，該雜環(huán)可以為飽和、不飽和或芳香的，或在可能的位置具有1至5個各自獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的8-、9-、10-或11員雜雙環(huán)，該雜雙環(huán)可以為飽和、不飽和或芳香的。
20.如權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1選自H、甲基和乙基；R2選自鹵素、氰基、(C1-4)烷基、(C2-4)鏈烯基、(C2-4)炔基、(C3-6)環(huán)烷基、苯基和Het，該Het選自下式基團 其中該苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21為1，2或3個取代基，該取代基各自獨立地選自-1，2或3個取代基，各自獨立地選自鹵素；和-1或2個取代基，各自獨立地選自a)羥基、(C1-4)烷基或(C1-4)烷氧基；其中該烷基和烷氧基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-NRN2RN1其中RN1選自H、(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基、-CO-O-(C1-3)烷基和Het；其中所述各(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基和-CO-O-(C1-3)烷基的烷基部分任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-6)烷氧基的取代基所取代；且其中該Het為具有1至2個各自獨立地選自N、O和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或芳香雜環(huán)；且RN2為H或(C1-3)烷基；c)-CONRN2RN1，其中RN2及RN1各自獨立選自H及(C1-3)烷基，以及d)Het，其中該Het為具有1，2或3個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)雜環(huán)；R3為環(huán)戊基或環(huán)己基，各自任選地被一至四個氟原子所取代；R4為H或鹵素且R7為H；R5和R6之一選自a)被COOH或CONHRN1取代的(C2-4)鏈烯基，其中RN1選自H和(C1-3)烷基，該鏈烯基任選地還被一或二個各自獨立地選自(C1-3)烷基和鹵素的取代基取代；b)苯基或Het，各自任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基取代i.-OH、氧代、COOH；ii.任選地被苯基或-N(RN2)RN1取代的(C1-3)烷基，其中RN1和RN2各自獨立地選自H和(C1-3)烷基，或RN1和RN2連接，與它們相連接的氮原子共同形成5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或芳香含N雜環(huán)，該雜環(huán)任選地還具有一或二個各自獨立地選自N、O和S的雜原子；和iii.-N(RN2)RN1；其中RN1選自H、(C1-3)烷基和-CO(C1-3)烷基且RN2為H或(C1-3)烷基；其中該Het為具有1至3個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-或6-員單環(huán)飽和、不飽和或芳香雜環(huán)；和c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、NHRN1、(C1-3)烷基和(C1-3)烷氧基，其中RN1選自H和-CO-O-(C1-6)烷基；R8選自(C1-5)烷基、(C4-6)環(huán)烷基和(C3-4)環(huán)烷基-(C1-3)烷基，其中該(C1-5)烷基任選地被(C1-3)烷氧基或一至三個氟原子所取代；且R9和R10各自獨立地選自(C1-3)烷基，或R9和R10連接，并與其相連接的碳原子共同形成(C3-6)環(huán)烷基、(C5-6)環(huán)烯基或具有1至2個選自O(shè)和N的雜原子的5-或6-員雜環(huán)；其中該環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)是任選地被(C1-4)烷基取代。
21.如權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1選自H、甲基和乙基；R2選自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、環(huán)丙基、苯基及選自下列基團的Het 其中該苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21為1，2或3個取代基，各自獨立地選自-1至2個取代基，各自獨立地選自氟、氯和溴；和-1至2個取代基，各自獨立地選自a)羥基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1-甲基乙氧基；其中該甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和1-甲基乙氧基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-N(CH3)2或-NHRN1，其中RN1選自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基；其中該甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-3)烷氧基的取代基取代；c)-CONH2；及d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-嗎啉代；R3為環(huán)戊基或環(huán)己基，各自任選地被一或二個氟原子所取代；R4為H或鹵素且R7為H；R5和R6之一選自a)被COOH或-CONH2取代的(C2-4)鏈烯基，并且任選地還被一或二個選自(C1-3)烷基和鹵素的取代基取代；和b)苯基或Het，各自任選地還被一或二個各自獨立地選自以下的取代基取代i.-OH、氧代、COOH；ii.(C1-3)烷基，任選地被苯基、-N(RN3)2)或 取代；及iii.-NH2，-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式 c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-OCH(CH3)2；R8選自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基；且基團 選自
22.如權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1選自H、甲基和乙基；R2選自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、環(huán)丙基、苯基及選自下列基團的Het 其中該苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21為1，2或3個取代基，該取代基各自獨立地選自-1至2個取代基，各自獨立地選自氟、氯和溴；和-1至2個取代基，各自獨立地選自a)羥基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或l-甲基乙氧基；其中該甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和1-甲基乙氧基各自任選地被一、二或三個鹵素原子取代；b)-N(CH3)2或-NHRN1，其中RN1選自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基；其中該甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任選地被一、二或三個選自鹵素和(C1-3)烷氧基的取代基取代；c)-CONH2；及d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-嗎啉代；R3為環(huán)戊基或環(huán)己基，各自任選地被一或二個氟原子所取代；R4為H或Cl且R7為H；R5和R6之一選自a)-CH＝CH-COOH或-CH＝CH-CONH2，各自任選地被一或二個選自甲基、乙基和氟的取代基所取代；及b)任選地被NH2取代的苯基或任選地被一或二個各自獨立地選自以下的取代基所取代的Heti.-OH、氧代、COOH；ii.甲基或乙基，各自任選地被苯基、-N(CH3)2或 取代；及iii.-NH2、-N(CH3)2和-NHCOCH3；其中Het選自下式 c)COOH；且R5和R6的另一個選自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和-NHCO-OCH(CH3)2；R8選自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基；且 基團選自
23.用于治療或預防HCV感染的藥物組合物，其包含有效量的如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物，或其藥學上可接受的鹽或酯，以及藥學上可接受的載體。
24.如權(quán)利要求23的組合物，其還包含治療有效量的一種或多種抗病毒藥物。
25.如權(quán)利要求24的組合物，其中該抗病毒藥物選自利巴韋林和金剛烷胺。
26.如權(quán)利要求24的組合物，其中該抗病毒藥物為其他抗HCV藥物。
27.如權(quán)利要求26的藥物組合物，其中該其他抗-HCV藥物是選自α-、β-、δ-、γ-、τ-和ω-干擾素及其聚乙二醇化形式的免疫調(diào)節(jié)劑。
28.如權(quán)利要求26的組合物，其中該其他抗-HCV藥物為另外的HCV聚合酶抑制劑。
29.如權(quán)利要求26的組合物，其中該其他抗-HCV藥物為另外的HCVNS3蛋白酶抑制劑。
30.如權(quán)利要求26的組合物，其中該其他抗-HCV藥物為HCV生命周期中另外靶標的抑制劑。
31.如權(quán)利要求30的組合物，其中該HCV生命周期中另外靶標的抑制劑選自抑制以下靶標的藥物以及干擾MS5A蛋白質(zhì)功能的藥物，所述靶標選自HCV解旋酶、HCV NS2/3蛋白酶和HCV IRES。
32.如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物作為HCV聚合酶抑制劑的用途。
33.如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物作為由HCV編碼的酶NS5B的RNA依賴性RNA聚合酶活性抑制劑的用途。
34.如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物作為HCV復制抑制劑的用途。
35.如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物用于治療或預防哺乳動物的HCV感染的用途。
36.如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物與另外的抗病毒藥物組合用于治療或預防哺乳動物的HCV感染的用途。
37.抑制由HCV編碼的酶NS5B的RNA-依賴性RNA聚合酶活性的方法，包括在該酶NS5B的RNA-依賴性RNA聚合酶活性被抑制的條件下，將該酶NS5B暴露于有效量的如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物中。
38.抑制HCV復制的方法，包括在HCV的復制被抑制的條件下，將被HCV感染的細胞暴露于如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物中。
39.治療或預防哺乳動物中HCV感染的方法，包括對哺乳動物給藥有效量的如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物。
40.治療或預防哺乳動物中HCV感染的方法，包括對哺乳動物給藥有效量的如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物，以及另外的抗病毒藥。
41.如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物，在制備用于治療和/或預防黃病毒屬病毒感染的藥物中的用途。
42.如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，或其組合物，在制備用于治療和/或預防HCV感染的藥物中的用途。
43.制品，其包含有效治療HCV感染或抑制HCV的NS5B聚合酶的組合物及包括顯示該組合物可用于治療丙型肝炎病毒感染的標示的包裝材料，其中該組合物包含如權(quán)利要求1-22中的一項或多項權(quán)利要求的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于作為病毒聚合酶抑制劑的如式(I)代表的化合物的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，或其鹽或酯，式I中A或B是氮并且B或A的另一個是C，基團R
文檔編號A61K31/4184GK1922174SQ200580005539
公開日2007年2月28日 申請日期2005年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月20日
發(fā)明者尤拉·S·桑特里佐斯, 凱瑟琳·沙博特, 皮埃爾·博利厄, 克里斯琴·布羅丘, 馬丁·波伊里爾, 蒂莫西·A·斯坦默斯, 邦克漢姆·撒沃尼克漢姆, 瓊·蘭庫爾特 申請人:貝林格爾·英格海姆國際有限公司