專利名稱：一種芳香化酶抑制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及動物性別研究領域，具體地說是關于來曲唑作為芳香化酶抑制劑在誘導斜帶石斑魚提前性逆轉中的應用。
背景技術：
斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)，屬鱸形目、鮨科、石斑魚亞科，石斑魚屬。其肉質鮮美，營養(yǎng)豐富，為餐桌中的上等佳肴。其生長快、市場價格高且穩(wěn)定，是目前我國沿海地區(qū)重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類。斜帶石斑魚是一種雌性先熟的雌雄同體魚類，開始為雌性，在體長為500～750mm時發(fā)生性逆轉，雄性需6齡左右才成熟，在人工繁殖時常會遇到難以同時得到功能性雄性和雌性親魚的問題，給種苗生產(chǎn)造成很大困難。因此，如何使斜帶石斑魚提早性轉變，盡早獲得功能性的雄魚顯得非常重要。目前，在誘導斜帶石斑魚提前性逆轉的研究中，主要還是應用性類固醇激素，如甲基睪酮(MT)。但MT是一種禁藥，不易購買，而且使用后可能會造成環(huán)境激素污染。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)來曲唑也能夠作為芳香化酶抑制劑，能夠誘導斜帶石斑魚提前性逆轉。目前，來曲唑主要用于治療婦女的乳腺癌，而用于控制魚類性別還無報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種購買容易、使用方便、副作用小的芳香化酶抑制劑。
芳香化酶是動物體內催化雄激素向雌激素轉化的一個關鍵酶，通過抑制芳香化酶活性可降低體內雌激素的水平，從而提高動物體內雄激素與雌激素的比例，誘導動物向雄性方向發(fā)展。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)來曲唑(1etrozole)能夠作為芳香化酶抑制劑，能夠有效抑制雌激素的產(chǎn)生，但對腎上腺類固醇激素的代謝無影響，因此，這是一個選擇性很強的芳香化酶抑制劑。
本發(fā)明應用投喂來曲唑以誘導斜帶石斑魚提前性逆轉的方法，操作簡單方便，可供人工養(yǎng)殖，效果顯著，有很大的經(jīng)濟價值。另外，來曲唑不是一種性激素，不會對環(huán)境造成激素污染。


圖1為實驗進行20天，來曲唑組中一條斜帶石斑魚的性腺切片圖；圖2為實驗進行20天，空白對照組中一條斜帶石斑魚的性腺切片圖；圖3為實驗進行40天，來曲唑組中一條斜帶石斑魚的性腺切片圖；圖4為實驗進行40天，空白對照組中一條斜帶石斑魚性腺切片圖；圖5為實驗進行60天，來曲唑組中一條已完成性逆轉的斜帶石斑魚的性腺切片圖；圖6為實驗進行60天，來曲唑組中一條已處在性逆轉后期的斜帶石斑魚的性腺切片圖；
圖7為實驗進行60天，空白對照組中一條斜帶石斑魚的性腺切片圖。
具體實施例方式
實施例1從廣東省大亞灣附近水域漁排網(wǎng)箱購買2齡斜帶石斑魚40尾，體重0.6～1Kg，暫養(yǎng)于大亞灣水產(chǎn)試驗中心漁排網(wǎng)箱(5*5*3m)。暫養(yǎng)2周后，斜帶石斑魚隨機分為兩組，每組20尾，分養(yǎng)于兩個網(wǎng)箱，其中一個箱為來曲唑組，另外一個箱為空白對照組。實驗在2003年5～8月間進行，平均水溫26.5～29.6℃。
投喂方法如下把冰鮮魚打成魚漿，再添加適當比例的配合餌料、高質魚油、水制作餌料。空白對照組只投喂餌料，來曲唑組則在餌料中添加來曲唑，按每公斤餌料添加2mg來曲唑的比例添加。每天定時投喂2次，投餌量約為魚體重的5％，未吃完的殘餌及時清除。
在實驗進行到20、40和60天時從各組隨機抽取5尾魚，解剖取其性腺樣品。性腺樣品用波恩氏固定液液(Bouin’s)固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度為5～8μM，哈利氏蘇木精-伊紅染色，Olympus BX40型顯微鏡下觀察性腺發(fā)育狀況，并拍照。
實驗結果(1)實驗進行到20天時，從來曲唑組取樣5條魚，組織切片觀察，發(fā)現(xiàn)其中一條魚出現(xiàn)初級精母細胞，如圖1所示，其余4條在切片中未發(fā)現(xiàn)初級精母細胞。因此，處理20天時，來曲唑組有20％的魚發(fā)生性逆轉；而空白對照組魚性腺與實驗開始時無明顯變化，性腺仍處在II期卵巢，如圖2所示。
(2)實驗進行到40天時，從來曲唑組取樣5條魚，組織切片觀察，發(fā)現(xiàn)所有的魚的性腺切片圖中都出現(xiàn)了精巢組織，其中4條魚的性腺切片中出現(xiàn)了大量的精巢組織，已處在性逆轉后期，如圖3所示。而空白對照組性腺與實驗開始時一樣無明顯變化，性腺仍處在II期卵巢，如圖4所示。
(3)實驗進行到60天時，從來曲唑組中取樣5條魚，組織切片觀察，發(fā)現(xiàn)其中有3條魚完成了性逆轉，如圖5所示；另外兩條存在少量退化的初級卵母細胞，如圖6所示。因此，處理60天時，有60％的斜帶石斑魚完成了性逆轉，其余處在性逆轉后期。而空白對照組性腺切片顯示其性腺仍處在II期卵巢，如圖7所示。
從上面的結果看出投喂來曲唑(2mg/Kg飼料)20天時，有部分2齡斜帶石斑魚(20％)開始了性逆轉；投喂40天后，大部分2齡斜帶石斑魚(80％)處在性逆轉的后期；投喂60天后，大部分2齡斜帶石斑魚(60％)完成了性逆轉，性腺由卵巢變成了精巢。在整個實驗過程中，空白對照組斜帶石斑魚性腺變化不明顯，一直處在II期卵巢。這些結果表明給2齡斜帶石斑魚投喂來曲唑(2mg/Kg飼料)，經(jīng)過60天的處理，能有效地誘導其提前性逆轉。
權利要求
1.一種芳香化酶抑制劑，其特征在于所述的芳香化酶抑制劑為來曲唑。
2.根據(jù)權利要求1所述的芳香化酶抑制劑，其特征在于所述的來曲唑在誘導動物雄性化中的應用。
3.根據(jù)權利要求2所述的芳香化酶抑制劑，其特征在于所述的來曲唑在誘導雌雄同體魚類提前性逆轉中的應用。
4.根據(jù)權利要求3所述的芳香化酶抑制劑，其特征在于所述的來曲唑在誘導斜帶石斑魚提前性逆轉中的應用。
全文摘要
一種芳香化酶抑制劑。芳香化酶是動物體內催化雄激素向雌激素轉化的一個關鍵酶，通過抑制芳香化酶活性可降低體內雌激素的水平，從而提高動物體內雄激素與雌激素的比例，誘導動物向雄性方向發(fā)展。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)來曲唑能夠作為芳香化酶抑制劑，在誘導斜帶石斑魚提前性逆轉中，操作簡單方便，效果顯著，有很大的經(jīng)濟價值。另外，來曲唑不是一種性激素，不會對環(huán)境造成激素污染。
文檔編號A61K31/4196GK1628659SQ20041005119
公開日2005年6月22日 申請日期2004年8月24日 優(yōu)先權日2004年8月24日
發(fā)明者張為民, 張勇, 張利紅, 林浩然 申請人:中山大學