專利名稱：減少體脂和調(diào)節(jié)脂肪酸代謝的方法、化合物和組合物的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)的相互參照本申請(qǐng)要求2001年10月31日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)第60/336,289號(hào)和2001年3月27日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)第60/279,542號(hào)的優(yōu)先權(quán)。它們的內(nèi)容分別并入這里以供參考。
關(guān)于由聯(lián)邦政府資助研究和開發(fā)的發(fā)明權(quán)利的申明本發(fā)明在由政府支持第DA12653號(hào)資助下進(jìn)行的，是由國(guó)家衛(wèi)生研究院授予的。政府在本發(fā)明中具有一定的權(quán)利。
發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及脂肪酸乙醇胺，它們的同系物和類似物，以及它們作為藥理學(xué)活性劑在減少體脂、減少食物消費(fèi)和調(diào)節(jié)脂類代謝中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肥胖是世界范圍的健康挑戰(zhàn)，在美國(guó)和其他的發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)到了警戒水平。在美國(guó)大約97,000,000的成年人是超重的。其中40,000,000是肥胖的。肥胖和超重增加了許多疾病的危險(xiǎn)。高血壓、2型糖尿病、異常脂血癥、冠心病、中風(fēng)、膽囊疾病、骨關(guān)節(jié)炎、睡眠呼吸暫停、和其他的呼吸問題以及子宮內(nèi)膜、乳房、前列腺、結(jié)腸癌都和較高的體重有關(guān)。體重較高的人也飽受較高的所有原因死亡率的折磨。根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生研究院，在美國(guó)每年會(huì)大約有280,000的成年人的死亡部分歸因于肥胖。
對(duì)于肥胖和超重的人來說體重減輕是所希望的。體重減輕可以幫助防止許多這樣的后果，尤其是糖尿病和心血管疾病(CVD)。體重減輕還可以降低超重型高血壓患者和非高血壓患者的血壓，降低血清甘油三酸酯水平和提高有益的高密度脂蛋白(HDL)形式膽固醇。體重減輕也通常略微降低總血清膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的水平。體重減輕也可以降低超重和肥胖的人的血糖水平。
雖然體重減輕是理想的，但很難達(dá)到。存在許多治療超重和肥胖以及維持體重減輕的方法。然而，反彈是嚴(yán)重的。大約40％的女性和24％的男性正盡最大努力在任何特定的時(shí)間積極減肥。這些治療的方法包括低熱量和低脂肪飲食；增加體育鍛煉；致力于減少食物攝入的行為療法；藥物治療；手術(shù)以及以上方法的聯(lián)合。
體重減輕的藥物相對(duì)缺乏。藥物如西布曲明、右芬氟拉明、奧利司他、去甲麻黃堿、酚妥拉明或氟苯丙胺在應(yīng)用較長(zhǎng)時(shí)間時(shí)能促進(jìn)肥胖成年人的體重減輕。通常地，然而，長(zhǎng)時(shí)間施用藥物治療體重減輕的藥劑的安全性還不清楚。例如，最近，由于關(guān)注到病人中發(fā)現(xiàn)的瓣膜性心臟病，氟苯丙胺和右芬氟拉明被撤出了市場(chǎng)。面對(duì)無價(jià)值的藥物和高度流行的肥胖和超重，就有需要有新的藥理方法和組合物來提高和維持體重減輕。
脂肪酸乙醇胺(FAE)是動(dòng)植物脂類的不尋常的組成成分，它們?cè)谖醇せ罴?xì)胞中的濃度通常是低的。(Bachur等，J.Biol.Chem.，2401019-1024(1965)；Schmid等，Chem.Phys.lipids，80133-142(1996)；Chapman，K.D.，Chem.Phys.Lipids，108221-229(2000))。然而，F(xiàn)AE的生物合成能根據(jù)多種類的生理和病理刺激而迅速提高，包括接觸煙草細(xì)胞中的真菌病原(Chapman等，Plant Physiol.，1161163-1168(1998))，大鼠大腦神經(jīng)員中的神經(jīng)遞質(zhì)受體的激活(Di Marzo等，Nature，372686-691(1994)；Giuffrida等，Nat.Neurosci.，2358-363(1999))以及接觸小鼠表皮細(xì)胞中代謝應(yīng)激物(Berdyshev等，Biochem.J.，346369-374(2000))。哺乳動(dòng)物組織中刺激依賴的FAE的產(chǎn)生機(jī)制被認(rèn)為包含兩個(gè)協(xié)同的反應(yīng)膜磷脂的裂解，N-?；字Ｒ掖及?NAPE)，由未知的磷脂酶D催化；和NAPE的合成，由鈣離子和環(huán)狀A(yù)MP控制的N-酰基轉(zhuǎn)移酶(NAT)活性催化(Di Marzo等，Nature，372686-691(1994)；Cadas等，J.NeuroSci.63934-3942(1996)；Cadas等.，H.，J.Neurosci.，171226-1242(1997))。
植物和動(dòng)物細(xì)胞都在刺激依賴的狀態(tài)釋放FAEs表明這些化合物也許在細(xì)胞交流中扮演重要的角色。對(duì)于這一觀點(diǎn)的進(jìn)一步的支持來自于發(fā)現(xiàn)聚不飽和FAE，anandamide(花生四烯酸乙醇胺)是大麻酯(cannabinoid)受體的內(nèi)源配體(Devane等，Science，2581946-1949(1992))-在神經(jīng)原細(xì)胞和免疫細(xì)胞中表達(dá)的G蛋白偶聯(lián)的受體，被認(rèn)為是大麻成分Δ9-四氫大麻醇(Δ9-THC)(作為回顧，見參考(Pertwee，R.G.，Exp.Opin.Invest.Drugs，91553-1571(2000))。
兩項(xiàng)觀察資料使其他FAEs也參與大麻酯神經(jīng)傳遞變得不可能。FAE家族包含大部分的飽和和單不飽和的種類，如棕櫚酰乙醇胺和油酰乙醇胺它們不明顯的和大麻酯受體作用(Devane等，Science，2581946-1949(1992))；Griffin等，J.pharmacol.Exp.Ther.，292886-894.(2000))。第二，當(dāng)詳細(xì)研究FAEs的藥理學(xué)性質(zhì)時(shí)，如棕櫚酰乙醇胺，發(fā)現(xiàn)這些性質(zhì)和Δ9-THC的那些是不同的，并且獨(dú)立于已知的非典型大麻酯受體的激活(Calignano等，Nature，394277-281(1998))。因此，F(xiàn)AEs的生物學(xué)意義仍是難以捉摸的。
油酰乙醇胺(OEA)是內(nèi)源大麻酯anandamide的天然類似物。和anandamide一樣，OEA在激素依賴的細(xì)胞中產(chǎn)生，并被酶解而迅速消除，表明在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中有作用。然而，和anandamide不同的是，OEA不激活大麻酯受體，它的生物功能到目前為止基本上還是一無所知。
和維持體重減輕一樣，也需要有另外的方法和藥劑治療肥胖和超重。本發(fā)明通過提供新的方法和藥物組合物，迎合了這種需要，它們和我們現(xiàn)在的發(fā)現(xiàn)有關(guān)，就是油酰乙醇胺(OEA)和其他的脂肪酸乙醇胺化合物(例如棕櫚酰乙醇胺，反油酰乙醇胺)能降低食欲，食物攝入，體重以及體脂和改變脂肪代謝。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了減少哺乳動(dòng)物體脂和治療或預(yù)防肥胖和超重以及和這些健康問題相關(guān)聯(lián)的疾病的化合物、組合物和方法。一方面，本發(fā)明提供方法來減少體脂或體重，治療或預(yù)防肥胖或超重以及通過施用包含脂肪酸鏈烷醇酰胺化合物、它的同系物或類似物的藥物組合物來減少食物攝入，以足夠的劑量給藥來減少體脂、體重或預(yù)防體脂或體重增加。另一方面，本發(fā)明設(shè)計(jì)生產(chǎn)脂肪酸胺化合物、它的同系物、類似物以及它們的藥物組合物和這些方法的應(yīng)用。
在其他實(shí)施方案中，脂肪酸鏈烷醇酰胺或乙醇胺化合物、它的同系物、類似物的脂肪酸部分可以是飽和的或不飽和的，如果是不飽和的可以是單不飽和或多不飽和的。
在一些實(shí)施方案中，脂肪酸鏈烷醇酰胺或乙醇胺化合物、它的同系物、類似物的脂肪酸部分選自油酸、棕櫚酸、反油酸、不飽和十六碳烯、亞油酸、α-亞麻酸和γ-亞麻酸。在特定的實(shí)施方案中，脂肪酸部分有12至20個(gè)碳原子。
其他的實(shí)施方案通過變化脂肪酸酰胺化合物、它的同系物或類似物的脂肪酸部分來提供。這些實(shí)施方案包括引入鏈烷醇酰胺或乙醇胺部分羥基上的飽和或不飽和的低級(jí)(C1-C3)烷基以形成相應(yīng)的低級(jí)烷醚。在另外的實(shí)施方案中，鏈烷醇酰胺或乙醇胺部分的羥基和C2至C6取代或未取代羧酸的羧基結(jié)合形成相應(yīng)的脂肪酸胺脂基。這樣的實(shí)施方案包括脂肪酸鏈烷醇酰胺和脂肪酸乙醇胺和有機(jī)羧酸脂化，如醋酸、丙酸和丁酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，脂肪酸鏈烷醇酰胺是油酸鏈烷醇酰胺。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，脂肪酸鏈烷醇酰胺是油酰乙醇胺。
仍在另一個(gè)實(shí)施方案中，脂肪酸乙醇胺化合物、它的同系物或類似物還包括和脂肪酸乙醇胺氮原子共價(jià)結(jié)合的取代或未取代的低級(jí)(C1-C3)烷基。
在另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的賦形劑和化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，具有化學(xué)式 在該式中，n是0-5，a和b的和為0-4。Z成分選自-C(O)N(R0)-；-(R0)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR0和S，其中R0和R2獨(dú)立選自取代或未取代的烷基、氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)?；⒕榛?homoalkyl)和芳基?；衔镏舅岵糠趾鸵掖及凡糠謨烧呋蚱湟蛔疃嘤兴膫€(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。另外，碳c和d之間的分子鍵可以是不飽和或飽和的。在一些實(shí)施方案中，如上面分子式的脂肪酸乙醇胺是自然產(chǎn)生的化合物。
在本發(fā)明的其他方面，此方法和組合物運(yùn)用脂肪酸乙醇胺和脂肪酸鏈烷醇酰胺化合物、它的同系物和類似物來減少體重，當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥時(shí)，它們能減少其體重(例如大鼠、小鼠、兔、倉鼠、幾內(nèi)亞豬)。
仍在其他方面，本發(fā)明設(shè)計(jì)方法應(yīng)用芳基噻唑烷二酮化合物，雜芳基和芳基羥乙酸型化合物減少體脂、體重和食欲。
本發(fā)明的其他方面提出方法給于受試者應(yīng)用和施用化合物和組合物來減少體重或減低食欲或減少食物攝入或引起哺乳動(dòng)物(例如人類、貓或狗)hypophagia。受試的組合物可通過各種途徑給藥，包括口服。
附圖簡(jiǎn)述

圖1饑餓增加了大鼠體內(nèi)循環(huán)的油酰乙醇胺的水平(a)禁食對(duì)于血漿油酰乙醇胺(油酰乙醇胺OEA)水平影響的時(shí)間進(jìn)程；(b)禁水(18小時(shí))對(duì)血漿油酰乙醇胺水平的影響；(c)禁食(18小時(shí))對(duì)腦脊液(CSF)中油酰乙醇胺水平的影響；(d)禁食對(duì)于血漿anandamide(花生四烯酸乙醇胺，AEA)水平影響的時(shí)間進(jìn)程；(e)禁水(18小時(shí))對(duì)血漿anandamide水平的影響；(f)禁食(18小時(shí))對(duì)腦脊液(CSF)中anandamide水平的影響。結(jié)果表達(dá)為平均值s.e.m.；(*)，P＜0.05；(**)，P＜0.01，每組的n＝10。
圖2脂肪組織是循環(huán)油酰乙醇胺的主要來源饑餓引起大鼠的各種組織中?；D(zhuǎn)移酶(NAT)和脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)活性的變化。(a)脂肪(b)腦(c)肝(d)胃(e)小腸?？諙艡?，自由喂養(yǎng)的動(dòng)物；充滿柵欄，18小時(shí)禁食的動(dòng)物?；钚允莗mol/mg蛋白質(zhì)/分。(*)，P＜0.05，n＝3。
圖3脂肪組織是循環(huán)油酰乙醇胺的主要來源饑餓引起的NAPE和油酰乙醇胺(油酰乙醇胺OEA)的變化在脂肪和肝組織中實(shí)現(xiàn)。(a)油酰乙醇胺前體的結(jié)構(gòu)是堿-1-palmitoenyl-2-花生四烯酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(左邊一組，NAPE1)和堿-1-棕櫚酰-2-花生四烯基酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(右邊一組，NAPE2)；(b)自由喂養(yǎng)(頂)和18-小時(shí)禁食的大鼠(底)中的NAPE1(左邊一組，m/z＝987，去質(zhì)子的分子，[M-H]-)NAPE2(右邊一組，m/z＝1003，[M-H]-)特征性的選擇性離子的代表性HPLC/MS描繪圖(c)禁食(18小時(shí))提高了脂肪中NAPE物質(zhì)的容量但降低了它在肝臟中的容量。對(duì)所有可確認(rèn)的NAPE物質(zhì)定量，包括油酰乙醇胺前體NAPE1和NAPE2以及PEA的前體NAPE3；(d)禁食(18小時(shí))提高了脂肪和肝臟中油酰乙醇胺的容量?？諙艡冢杂晌桂B(yǎng)的動(dòng)物；充滿柵欄，18小時(shí)禁食的動(dòng)物。(*)，P＜0.05，斯氏t檢驗(yàn)；n＝3。
圖4油酰乙醇胺/pranamide選擇性的抑制食物攝入(a)油酰乙醇胺(油酰乙醇胺/OEA/pranamide)(如空方圖)、反油酰乙醇胺(空?qǐng)A圖)、PEA(三角圖)、油酸(實(shí)方圖)和anandamide(實(shí)圓圖)對(duì)禁食24-小時(shí)的大鼠食物攝入的劑量依賴性效應(yīng)。賦形劑(鹽中70％的DMSO，1ml/kg)單獨(dú)對(duì)于短期的事物攝入沒有明顯的作用；(b)油酰乙醇胺(20mg/kg)(方圖)或賦形劑(菱形圖)對(duì)食物攝入hypophagic效應(yīng)的時(shí)間進(jìn)程；(c)賦形劑(V)，氯化鋰(LiCl，0.4M，7.5ml/kg)或油酰乙醇胺(20mg/kg)在有條件的抽樣排斥測(cè)定中的效應(yīng)?？諙艡?，攝入水；充滿柵欄，攝入糖精。賦形劑(V)或油酰乙醇胺(5或20mg/kg)的效應(yīng)對(duì)于(d)水的攝入(表示為ml/4h)；(e)體溫；(f)在熱盤無痛實(shí)驗(yàn)中跳躍的能力；(g)在抬高加迷惑焦慮實(shí)驗(yàn)中打開手臂所花費(fèi)的百分比時(shí)間；(h)在開放領(lǐng)域活性實(shí)驗(yàn)中交叉點(diǎn)的數(shù)量；(i)對(duì)食物動(dòng)作反應(yīng)的數(shù)量。(*)，P＜0.05，各組n＝8-12。
圖5亞慢性(subchronic)油酰乙醇胺給藥對(duì)食物攝入和體重的作用(a)油酰乙醇胺(油酰乙醇胺OEA)(5mg/kg每天一次)(空柵欄)或賦形劑(5％Tween80/5％丙烯乙二醇在滅菌的鹽中；充滿的柵欄)對(duì)累積的食物攝入的作用；(b)油酰乙醇胺(三角圖)或賦形劑(方圖)對(duì)體重變化影響的時(shí)間進(jìn)程；(c)油酰乙醇胺或賦形劑對(duì)凈體重變化影響的時(shí)間進(jìn)程；(d)油酰乙醇胺(5mg/kg)或賦形劑對(duì)累積水?dāng)z入的影響。(*)，P＜0.05；(**)，P＜0.01，每組的n＝10。
圖6油酰乙醇胺引起的厭食癥中外周感覺纖維的作用。賦形劑(V)，油酰乙醇胺(油酰乙醇胺/OEA/pranamide)(5mg/kg)，CCK-8(10μg/kg)和CP-93129(1mg/kg)，一種中樞激活5-HT1B受體的激動(dòng)劑，對(duì)食物攝入的影響，a是對(duì)照大鼠，c是給予辣椒素的大鼠。(b)對(duì)照大鼠和(d)給予辣椒素的大鼠攝入水。(*)，P＜0.05；每組的n＝8-12。
圖7油酰乙醇胺/pranamide增加了c-fos mRNA在不連續(xù)的大腦部位的表達(dá)，這些部位和能量的體內(nèi)平衡和喂養(yǎng)行為相關(guān)(a)放射自顯影照片的偽彩色圖象顯示油酰乙醇胺(右面部分)引起室旁(PVN)和視上(SO)下丘腦核中c-fos mRNA標(biāo)記顯著和選擇性的增長(zhǎng)，正如原位雜交評(píng)估的那樣。從用賦形劑處理過的大鼠來的代表性的部分在左邊顯示。標(biāo)記的密度通過顏色來顯示藍(lán)＜綠＜黃＜紅。(b)對(duì)用賦形劑、油酰乙醇胺、油酸處理過的大鼠的前腦部位[PVN，SO，弓形(Arc)，層II梨形皮層(pir)，腹外側(cè)丘腦(VI)和S1前分支層(S1FL)]中的c-fos cRNA標(biāo)記進(jìn)行定量(c)射自顯影照片顯示經(jīng)過油酰乙醇胺處理的大鼠的孤束核(NST)中35Sc-fos mRNA表達(dá)增加；插入，在NST(表示為紅的)中的c-fos cRNA標(biāo)記通過它的定位和傳出神經(jīng)核(迷走神經(jīng)的舌下神經(jīng)核和背核)相對(duì)較近而被確認(rèn)了，它們表達(dá)乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶mRNA(ChAT)(顯示為紫色)(d)油酰乙醇胺提高了c-fos mRNA在NST中的表達(dá)，但不提高它在舌下神經(jīng)核(HgN)中的表達(dá)。(**)，P＜0.0001，每組的n＝5。
圖8 OEA，油酸(OA)，AEA，PEA和甲基-OEA對(duì)比目魚肌中脂肪酸氧化的影響。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及一項(xiàng)驚奇的發(fā)現(xiàn)就是OEA和其他的脂肪酸鏈烷醇酰胺化合物能減少食物攝入，體重和體脂并能調(diào)節(jié)脂肪酸氧化。已經(jīng)驚奇的發(fā)現(xiàn)油酰乙醇胺(OEA)，到目前為止在哺乳動(dòng)物中還不知道其生物功能的一種天然脂，當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥時(shí)，它是一種有效的減少體脂和控制體重的化合物。美國(guó)專利申請(qǐng)60/279,542，提交于2001年3月27日，由相同的代理人代理并在這里完整的引入作參考，它揭示了OEA和OEA-相似的化合物藥劑能減少哺乳動(dòng)物的體脂和食欲。
除了發(fā)現(xiàn)原型的OEA外，其他的脂肪酸鏈烷醇酰胺化合物和同系物也發(fā)現(xiàn)有活性。
OEA可以作為發(fā)展其他的脂肪酸鏈烷醇酰胺類似化合物的模型，用他們來減少脂肪治療肥胖，包括體重減輕，降低食欲或食物攝入。本發(fā)明提供了這樣的其他化合物如下面所述。
發(fā)現(xiàn)OEA給藥能降低食欲，食物攝入和體重，能應(yīng)用這個(gè)發(fā)現(xiàn)來確定其他脂肪酸乙醇胺化合物、它的同系物或類似物作為控制體重和食欲的藥劑。本發(fā)明提供這樣的藥劑。
定義這里應(yīng)用的縮寫詞有他們?cè)诨瘜W(xué)和生物文章中通常的意義。
取代基通過他們普通的化學(xué)式來區(qū)分，從左到右寫，它們同樣包含化學(xué)上相同的取代物，是從右到左寫結(jié)構(gòu)，例如-CH2O-也可以表述為-OCH2-。
術(shù)語“組合物”如藥物組合物，意思是包含一種產(chǎn)物包括活性成分和惰性成分組成載體，就象任何產(chǎn)物，直接或間接由任何兩種或更多成分組合、絡(luò)合或聚合生成，或由一種或多種成分分解生成，或由一種或更多的成分進(jìn)行其他的反應(yīng)或相互作用而生成。相應(yīng)的，本發(fā)明的藥物組合物包含任何由本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體混合而成的組合物。術(shù)語“藥物組合物”表示適合受試者作為藥物應(yīng)用的化合物，包括動(dòng)物或人類。一種藥物組合物通常包括有效量的活性藥劑和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的化合物包含一種或多種不對(duì)稱的中心，因此就會(huì)產(chǎn)生外消旋體和外消旋的混合物，單個(gè)對(duì)映體，非對(duì)映混合物和獨(dú)立的非對(duì)映體。本發(fā)明意味著包含發(fā)明化合物所有這樣的同分異構(gòu)形式。
這里描述的化合物包含烯式雙鍵，除非特別指出，否則意味著包含E和Z幾何異構(gòu)體。
這里描述的一些化合物會(huì)在不同部位聯(lián)結(jié)氫原子，歸于互變異構(gòu)體。這樣的例子可以是酮和它的烯醇形式，稱為酮-烯醇互變異構(gòu)體。本發(fā)明的分子式也包括單獨(dú)的互變異構(gòu)體和它們的混合物。
本發(fā)明的化合物包括成對(duì)對(duì)映體的非對(duì)映異構(gòu)體。非對(duì)映異構(gòu)體例如，甲醇或乙酸乙酯或它們的混合物。因此獲得的成對(duì)對(duì)映體可以通過常規(guī)的方法，例如應(yīng)用光學(xué)活性酸作為溶劑，來分解成單個(gè)立體異構(gòu)體。
或者，任何發(fā)明化合物的對(duì)映體可以通過應(yīng)用光學(xué)純凈的原始物質(zhì)或已知結(jié)構(gòu)的試劑進(jìn)行立體定向合成來獲得。
如這里所應(yīng)用的，術(shù)語“雜原子”意思包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
這里應(yīng)用的“烷醇”是指一種飽和或不飽和，取代或未取代，有分支或無分支的烷基團(tuán)，它們有羥基取代物或由羥基部分衍生出來的取代物，例如乙醚、酯。烷醇也更適合以氮、硫或氧-位取代物來取代，它包含在Z鍵中(式I)，在“脂肪酸”和烷醇之間。
這里應(yīng)用的“脂肪酸”是指飽和或不飽和，取代或未取代的，分支或無分支的烷基團(tuán)，它們有羧基取代物。理想的脂肪酸是C4-C22酸。脂肪酸也包含的種類是羧基取代物被-CH2-部分所代替。
術(shù)語“烷基”自己或作為另一取代物的一部分，除非另有說明，都是一直鏈或支鏈，或環(huán)狀烷基或它們的化合物，它們可以是完全飽和的，單-或多不飽和的，會(huì)包含2-和多價(jià)的基團(tuán)，擁有指定的碳原子數(shù)。(例如C1-C10指1到10個(gè)碳原子)。飽和的烷基團(tuán)例子包括，但不局限于基團(tuán)如甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、叔-丁基、異丁基、仲-丁基、環(huán)己基、(環(huán)己基)甲基、環(huán)丙甲基、它們的同系物和同分異構(gòu)體，例如正-戊基、正-己基、正-庚基、正-辛基及相類似的。不飽和的烷基包含一個(gè)或多個(gè)雙鍵或三鍵。不飽和烷基的例子包括但不局限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基以及更高的同系物和同分異構(gòu)體。術(shù)語“烷基”除非特別注明，也包含那些下面具體定義烷基的衍生物，如“雜烷基”。烷基局限于碳?xì)浠鶊F(tuán)的叫做“均烷基(homoalkyl)”。
術(shù)語“亞烷基”自己或作為另一取代物的一部分是指從烷烴衍生出來的二價(jià)基團(tuán)，這種烷烴例如但不局限于-CH2CH2CH2CH2-進(jìn)一步包括下面描述為“雜亞烷基”的那些基團(tuán)。典型的，一種烷基(或亞烷基)會(huì)含有1-24個(gè)碳原子，在本發(fā)明中理想的是那些基團(tuán)含有10個(gè)或更少的碳原子。一種“低價(jià)烷基”或“低價(jià)亞烷基”是較短鏈的烷基或亞烷基，通常含有8或更少的碳原子。
術(shù)語“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(硫烷氧基)以它們習(xí)慣的意義應(yīng)用，并且指那些和分子殘基相結(jié)合的烷基，分別經(jīng)氧原子、氨基或硫原子。
術(shù)語“雜烷基”自己或和其他術(shù)語一起，除非另有說明，指穩(wěn)定的直或支鏈，或環(huán)烷基，或它們的化合物，包含所述數(shù)量的碳原子和至少一種雜原子選自O(shè)、N、Si和S，其中氮和硫原子可任選的氧化，氮雜原子可任選的季銨化。雜原子O、N、Si和S可以存在于雜烷基內(nèi)部的任何位置或在烷基和分子殘基結(jié)合的部位。例子包含，但不局限于-CH2-CH2-O-CH3，-CH2-CH2-NH-CH3，-CH2-CH2-N(CH3)-CH3，-CH2-S-CH2-CH3，-CH2-CH2，-S(O)-CH3，-CH2-CH2-S(O)2-CH3，-CH＝CH-O-CH3，-Si(CH3)3，-CH2-CH＝N-OCH3和-CH＝CH-N(CH3)-CH3。兩種雜原子可以是連續(xù)的，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。相似的，術(shù)語“雜亞烷基”自己或作為另一取代物的一部分是指從雜烷基衍化而來的二價(jià)基團(tuán)，例如但不局限于-CH2-CH2-S-CH2-CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。對(duì)于雜亞烷基，雜原子也可以占據(jù)所有鏈的末端或其中之一(例如亞烷基氧基、亞烷基二氧基、亞烷基氨基、亞烷基二氨基及相似物)。進(jìn)一步來說，對(duì)于亞烷基和雜亞烷基聯(lián)系的基團(tuán)，聯(lián)系基團(tuán)的定位不包含它所寫的化學(xué)式的方向。例如，式-C(O)2R’-同時(shí)代表-C(O)2R’-和-R’C(O)2-。
術(shù)語“環(huán)烷基”和“雜環(huán)烷基”，它們自己或和其他術(shù)語結(jié)合在一起，除非另有說明，分別代表“烷基”和“雜烷基”環(huán)狀形式。另外，對(duì)于雜環(huán)烷基，雜原子可以占據(jù)雜環(huán)和分子殘基結(jié)合的部位。環(huán)烷基的例子包括，但不局限于環(huán)戊基、環(huán)己基、1-環(huán)己烯基、3-環(huán)己烯基、環(huán)庚基及相似的基團(tuán)。雜環(huán)烷基的例子包括，但不局限于1-(1，2，5，6-四氫吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-烷基、四氫呋喃-3-烷基、四氫噻吩-2-烷基、四氫噻吩-3-烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基及諸如此類的。
術(shù)語“鹵”或“鹵素”，它們自己或作為另一取代物的一部分，除非特別聲明，指氟、氯、溴、碘原子。另外，術(shù)語如“鹵化烴”包括單鹵化烴和多鹵化烴。例如，術(shù)語“鹵化烴(C1-C4)”包括但不局限于三氟甲烷、2，2，2-三氟乙烷，4-氯丁烷，3-溴丙烷等等。
除非另有說明，術(shù)語“芳基”是指多不飽和的、芳香的烴取代物，可以是單環(huán)或多環(huán)(理想的是1-3個(gè)環(huán))，它們?nèi)诤显谝黄鸹蚬矁r(jià)結(jié)合。術(shù)語“雜芳基”指芳基團(tuán)包含1-4個(gè)雜原子，選自N、O和S，其中氮和硫原子任選的氧化，氮原子任選的季銨化。雜芳基可以通過一雜原子和分子殘基結(jié)合。非限制的芳基和雜芳基例子包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-聯(lián)苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-異噁唑基、4-異噁唑基、5-異噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上面注明的芳基和雜芳基環(huán)體系的取代基選自下面描述的可接受取代基。
簡(jiǎn)單的說，術(shù)語“芳基”包含上面定義的芳基和雜芳基環(huán)。因此，術(shù)語“芳烷基”意味著包含那些由芳基和烷基結(jié)合的基團(tuán)(例如苯甲基、苯乙基、吡啶甲基及諸如此類的)包含那些烷基團(tuán)其中的碳原子(如亞甲基)被例如氧原子所取代(例如苯氧甲基、2-吡啶氧甲基、3-(1-萘氧基)丙基等等)。
上面的每一個(gè)術(shù)語(如“烷基”、“雜烷基”、“芳基”、“雜芳基”)指包括所述基團(tuán)的取代和未取代形式。下面提供了每種基團(tuán)的理想的取代基。
烷基、雜烷基的取代基(包括那些經(jīng)常提到的基團(tuán)，如亞烷基、鏈烯基、雜亞烷基、雜鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基、雜環(huán)鏈烯基)可以是一個(gè)或多個(gè)選自但不局限于-OR’、＝O、＝NR’、＝N-OR’、-NR’R”、-SR’、-鹵素、-SiR’R”R、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R、-NRC(O)2R’、-NR-C(NR’R”R)＝NR””、-NR-C(NR’R”)＝NR、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NRSO2R’、-CN、-NO2數(shù)值可以是從O-(2m’+1)，其中m’是這樣基團(tuán)中碳原子的總數(shù)。R’，R”，R，R””都分別優(yōu)選的指氫、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的雜芳基如被1-3個(gè)鹵素取代的芳基、取代或未取代的烷基、烷氧基或硫烷氧基或芳烷基。如果本發(fā)明的化合物包含不止一個(gè)R基團(tuán)，每個(gè)R基都單獨(dú)選擇如不止一個(gè)這些基團(tuán)出現(xiàn)R’，R”，R，R””可供選擇。當(dāng)R’和R”與相同的氮原子結(jié)合時(shí)，它們可以和氮原子結(jié)合形成一個(gè)5-，6-或7-原子的環(huán)。例如，-NR’R”指，但不局限于，1-吡咯基和4-嗎啉基。從上面取代基的討論中，此文章中一項(xiàng)技術(shù)意味著，術(shù)語“烷基”指那些碳原子結(jié)合的基團(tuán)而不是氫原子基團(tuán)如鹵化烴(例如-CF3和-CH2CF3)以及酰基(例如-C(O)CH3，-C(O)CF3，-C(O)CH2OCH3等等)。
和所描述的烷基取代基相似，芳基和雜芳基取代基也是變化的，選自如鹵素、-OR’、＝O、＝NR’、＝N-OR’、-NR’R”、-SR’、鹵素、-SiR’R”R、-OC(O)R’、，-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R、-NRC(O)2R’、-NR-C(NR’R”R)＝NR””、-NR-C(NR’R”)＝NR、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NRSO2R’、-CN、-NO2、-R’、-N3、-CH(Ph)2、氟(C1-C4)烷氧基和氟(C1-C4)烷基，數(shù)值從0至芳香環(huán)體系上所有開放的化合價(jià)之間變化；其中R’、R”、R和R””優(yōu)選的獨(dú)立選自氫、(C1-C8)烷基和雜烷基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(C1-C4)烷基和(未取代的芳基)氧基-(C1-C4)烷基。當(dāng)本發(fā)明的化合物包含多種R基團(tuán)時(shí)，每個(gè)R基都單獨(dú)選擇如不止一個(gè)這些基團(tuán)出現(xiàn)R’、R”、R、R””可供選擇。
術(shù)語“體脂減少”指減去部分的體脂。
計(jì)算身體質(zhì)量指數(shù)的公式(BMI)是[體重(磅)/身高(英寸)/身高(英寸)]×703。BMI對(duì)于成人的區(qū)分點(diǎn)是一固定數(shù)值，不考慮年齡和性別，使用以下的規(guī)則超重的成人個(gè)體的BMI是在25.0-29.9。肥胖成人的BMI是30.0或更高。體重較輕的成人的BMI低于18.5。正常體重范圍成年人的BMI是在18.5和25之間。對(duì)16歲以下兒童BMI的區(qū)分點(diǎn)定義按照的百分比為超重是同年齡中BMI大于85％的，肥胖是同年齡中BMI大于95％。體重較輕是同年齡中BMI小于5％。正常體重范圍兒童的BMI大于5％低于85％。
術(shù)語“脂肪酸氧化”和脂肪酸(如油酸鹽)轉(zhuǎn)化為酮體有關(guān)。
術(shù)語“肝細(xì)胞”指原始的從肝臟組織產(chǎn)生的細(xì)胞。肝細(xì)胞可以從肝臟組織新鮮的分離出來或建立細(xì)胞索。
術(shù)語“調(diào)節(jié)”是指誘導(dǎo)任何變化，包括增加或減少(如脂肪酸氧化的調(diào)節(jié)劑增加或減少脂肪酸氧化率)。
術(shù)語“肌細(xì)胞”是指由肌肉組織主細(xì)胞衍生而來的細(xì)胞。肌細(xì)胞可以從肌肉組織新鮮的分離出來或建立細(xì)胞索。
術(shù)語“肥胖”表示體重通過體重指數(shù)的測(cè)定超過理論體重的20％。
油酰乙醇胺(OEA)是指下面結(jié)構(gòu)的天然脂 這里的式中“Me”代表甲基。
術(shù)語“體重減輕”指指減去部分的體重。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”包括任何標(biāo)準(zhǔn)的藥物載體、緩沖液、賦形劑，包括磷酸緩沖鹽溶液、水和乳狀液(如油/水或水/油乳狀液)，已經(jīng)各種類型濕劑和/或佐劑。合適的藥物載體和他們的配方在REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES中描述(Mack Publishing Co.，Easton，19th ed.1995)。理想的藥物載體依賴于活性藥劑的給藥方式。特征性的給藥方式描述如下。
術(shù)語“有效量”是指一定的劑量足夠產(chǎn)生想要的結(jié)果。想要的結(jié)果包括受試者客觀或主觀的改善。客觀的改善可以是食欲或渴求食物的欲望下降。主觀的改善可以是體重、體脂或食物的減少或食物消耗的減少或覓食行為的減少。
“預(yù)防性的治療”是一種施用于受試者的療法，這種受試者，沒有表現(xiàn)出疾病的體征或只表現(xiàn)出疾病的早期體征，這種治療的目的是為了降低和體重或體脂增加相關(guān)聯(lián)疾病的發(fā)病危險(xiǎn)。本發(fā)明的化合物可以用作預(yù)防性治療來預(yù)防不理想或不想要的體重增加。
“治療性的處理”是指施用于表現(xiàn)出病理學(xué)體征的受試者的一種治療，其中這種治療的目的是為了減少或消除那些病理體征。
術(shù)語“控制體重”包含體重的減少或一段時(shí)間體重增加的減少。
本發(fā)明的方法、化合物和組合物通常對(duì)于減少或控制哺乳動(dòng)物的體脂和體重是有效的。例如，本發(fā)明的方法、化合物和組合物對(duì)于降低哺乳動(dòng)物食欲或減少hypophagia是有幫助的。本發(fā)明的方法、化合物和組合物也通過提高體重和體脂的減少而有助于預(yù)防或減輕和超重或肥胖相關(guān)的疾病。
本發(fā)明的方法、化合物和組合物包括脂類代謝的調(diào)節(jié)劑，特別是脂肪和脂肪酸代謝。
本發(fā)明的化合物本發(fā)明特定的化合物會(huì)不對(duì)稱的碳原子(光學(xué)中心)或雙鍵；外消旋體、非對(duì)映異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體和單個(gè)同分異構(gòu)體都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明這樣的化合物會(huì)被分離為非對(duì)映異構(gòu)的成對(duì)對(duì)映體，通過從合適的溶劑中部分重結(jié)晶，溶劑可為甲醇或乙酸乙酯或它們的混合物。這樣獲得的成對(duì)對(duì)映體可以通過常規(guī)的方法分解為立體異構(gòu)體，例如應(yīng)用一種任選的活性酸作為溶劑。
或者，本發(fā)明化合物的對(duì)映體可以通過使用任選不知結(jié)構(gòu)的純凈原始材料進(jìn)行立體定向合成而獲得。
本發(fā)明的化合物在它們一個(gè)或多個(gè)原子處有異常比例的原子同位素。例如，化合物會(huì)被同位素放射性的標(biāo)記，如氚或C-14。本發(fā)明化合物的所有同位素變化，不管是放射性的或不是，都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
即時(shí)的化合物可以以它們藥學(xué)上可接受的酸添加劑鹽的形式分離，如從應(yīng)用無機(jī)或有機(jī)酸衍生出來的鹽。這樣的酸包括鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、蟻酸、乙酸、三氟醋酸、丙酸、馬來酸、琥珀酸、丙二酸等等。另外，含有酸功能的特定化合物可以以它們無機(jī)鹽的形式存在，其中的補(bǔ)償離子可選自鈉、鉀、鋰、鈣、鎂和其他，也可以來自有機(jī)堿。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指從藥學(xué)上可接受的無毒的堿或酸配制得到的鹽，包括無機(jī)堿或酸和有機(jī)堿或酸。
本發(fā)明也包括所述化合物的前體藥物，它們?nèi)绻o藥就會(huì)在變?yōu)榛钚运幬镏巴ㄟ^代謝過程而進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化。大體上，這樣的前體藥物是所述化合物的衍生物，它們?cè)诨铙w中穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的有效化合物。選擇和配置合適的前體藥物衍生物的傳統(tǒng)步驟，例如在“Design of Prodrugs”中描述，H.Bundgaard編，Elsevier，1985。本發(fā)明也包含這個(gè)化合物的活性代謝物。
A脂肪酸鏈烷醇酰胺化合物、同系物和類似物本發(fā)明的化合物包括減少體脂的脂肪酸鏈烷醇酰胺化合物，包括脂肪酸乙醇胺化合物，以及它們的同系物和脂肪酸鏈烷醇酰胺的特定的類似物。這樣的化合物通過對(duì)活體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥而表現(xiàn)出降低食欲、食物攝入、和或減少體重或體脂的能力來確認(rèn)和定義。
這樣的脂肪酸鏈烷醇酰胺化合物，同系物和類似物多樣性是預(yù)期的。本發(fā)明的化合物具有下面一般的分子式 在這個(gè)式中，n是0-5，a和b的和為0-4。Z成分選自-C(O)N(R0)-；-(R0)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR0和S，其中R0和R2獨(dú)立選自取代或未取代的烷基、氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)酰基、均烷基和芳基。該化合物脂肪酸部分和鏈烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分這兩者或其一最多有四個(gè)氫原子也可被甲基或雙鍵取代。另外，碳c和d之間的分子鍵可以是不飽和或飽和的。在一些實(shí)施方案中，如上面分子式的脂肪酸乙醇胺是自然產(chǎn)生的化合物。
本發(fā)明還包括下面式子的化合物 在一個(gè)實(shí)施方案中，式Ia化合物的n是0-5，a和b的和為0-4；其中R1和R2獨(dú)立選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)?；?、均烷基和取代或未取代的芳基。在這個(gè)實(shí)施方案中，化合物脂肪酸部分和鏈烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。另外，碳c和d之間的分子鍵可以是不飽和或飽和的。在一些有?；膶?shí)施方案中，?；梢允潜?、乙酸或酪酸并通過酯化連接如R2或?；B接如R1。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，上面的化合物包含特征性的那些脂肪酸基團(tuán)部分如油酸、反油酸、棕櫚酸。這樣的化合物包括油酰乙醇胺、反油酰乙醇胺、棕櫚酰乙醇胺。
油酰乙醇胺在另一實(shí)施方案中，式Ia化合物的n是1-3，a和b的和為1-3；其中R1和R2獨(dú)立選自取氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)?；?。在這個(gè)實(shí)施方案中，以上式化合物脂肪酸部分和鏈烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分的最多四個(gè)氫原子也可被甲基或雙鍵取代。另外，碳c和d之間的分子鍵可以是不飽和或飽和的。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，碳c和d之間的分子鍵可以是不飽和的并且沒有其他的氫原子被取代。仍在它們進(jìn)一步的實(shí)施方案中，R1和R2獨(dú)立選自氫、取代或未取代的C1-C3烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C3)酰基。
典型的化合物提供單甲基取代的化合物，包括式Ia的乙醇胺。這樣的化合物包括 (R)1’-甲基 (S)1’-甲基 (R)2’-甲基 (S)2’-甲基 (R)1-甲基 (S)1-甲基上面分子式的甲基取代化合物特征性的包括那些化合物R1和R2都是H(R)1’-甲基脂肪酸乙醇胺，(S)1’-甲基脂肪酸乙醇胺，(R)2’-甲基脂肪酸乙醇胺，(S)2’-甲基脂肪酸乙醇胺，(R)1-甲基脂肪酸乙醇胺，(S)1-甲基脂肪酸乙醇胺。
反式OEA-式的化合物本發(fā)明的化合物也包括多種OEA類似物。這些化合物包括反式OEA化合物，一般分子式為 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式II的化合物。典型的式II的化合物的n是1-5，a和b的和為0-4。在這種實(shí)施方案中，R2選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)酰基、均烷基和芳基。另外，上式化合物脂肪酸部分和鏈烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。
典型的式II的化合物包含那些化合物，它們的鏈烷醇酰胺位置是乙醇胺，R2是H，a和b都是1，n是1。
式II的化合物的一個(gè)實(shí)施方案是 反式OEA在另一實(shí)施方案中，式II的化合物的n是1-5，a和b的和為1-3。在這個(gè)實(shí)施方案中，R2選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)酰基。另外，上式化合物脂肪酸部分和鏈烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分兩者或其一最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。
油酸烷醇酯化合物本發(fā)明的化合物也包括油酸烷醇酯，一般化學(xué)式為
在一些實(shí)施方案中，式III的化合物的n是1-5，a和b的和是0-4。R2選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)?；⒕榛头蓟?。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分兩者或其一最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。
在一些實(shí)施方案中，式III的化合物的n是1-3，a和b的和是1-3。R2選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)酰基。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。
式III的化合物包含那些化合物，它們的R2是氫，a和b都是1，n是1。式III的化合物的例子包括油酸乙醇酯 式III的化合物也包含單甲基取代的油酸乙醇酯，如(R或S)-2’-甲基油酸乙醇酯；(R或S)-1’-甲基油酸乙醇酯；(R或S))-1’-甲基油酸乙醇酯；分別是 油酸烷醇醚本發(fā)明的化合物也包括油酸烷醇醚，一般化學(xué)式為
在一些實(shí)施方案中，式IV的化合物的n是1-5，a和b的和為0-4。R2選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)?；?、烷基和取代或未取代的芳基。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分兩者或其一最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。
在另外的實(shí)施方案中，式IV的化合物的n是1-3，a和b的和為1-3。R2選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的低級(jí)(C1-C6)酰基。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分兩者或其一最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。
式IV的化合物包含那些化合物，它們的R2是氫，a和b都是1，n是1。式IV的化合物的實(shí)例包括下面(R或S)-1’-油酸乙醇酯和(R或S)-2’-油酸乙醇酯 有極性頭變體的脂肪酸鏈烷醇酰胺類似物本發(fā)明的化合物也包括多種OEA極性頭類似物。這些化合物包括含有脂肪酸部分的化合物，一般化學(xué)式如 在一些實(shí)施方案中，式IV的化合物a和b的和為0-4。在另外的實(shí)施方案中，a和b的和為1-3。在這些實(shí)施方案中，上式化合物最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。另外，碳c和d之間的分子鍵可以是不飽和或飽和的。特別優(yōu)選的實(shí)施方案是油酸脂肪酸部分 上面結(jié)構(gòu)的R3基團(tuán)可以從下面任何一個(gè)選擇HO-(CH2)z-NH-其中z是從1-5，它的烷基部分是不分支的亞甲基鏈。例如 H2N-(CH2)z-NH-其中z是從1-5，它的烷基部分是不分支的亞甲基鏈。例如 HO-(CH2)x-NH-其中x是從1-8，它的烷基部分是分支的或環(huán)狀的。例如 其他R3極性頭基團(tuán)包括例如有呋喃、二氫呋喃、四氫呋喃功能基團(tuán)的化合物 以上結(jié)構(gòu)中，z可以是1-5。
本發(fā)明的化合物包括，例如，那些有R3極性頭基團(tuán)的，以吡咯(pyrole)、吡咯烷和吡咯環(huán)為基礎(chǔ)
以上結(jié)構(gòu)的化合物中，z可以是1-5。
其他典型的極性頭基團(tuán)包括多種咪唑和唑，例如 以上結(jié)構(gòu)的化合物中，z可以是1-5。
唑嘧啶極性頭基團(tuán)也是典型的 具有無極性尾部變化的脂肪酸鏈烷醇酰胺本發(fā)明的化合物包括多種鏈烷醇酰胺和乙醇胺化合物，它們都有多種能變形的非極性的尾巴。這些化合物包括下面式的化合物，其中R代表乙醇胺部分，鏈烷醇酰胺部分或它穩(wěn)定的類似物。是乙醇胺時(shí)，乙醇胺部分優(yōu)選的經(jīng)過它的氨基而不是氧來結(jié)合。

在上面的結(jié)構(gòu)中，m是1-9，p單獨(dú)是1-5。
典型的化合物是 另一典型的化合物是乙醇胺類似物，帶有下面結(jié)構(gòu)式的非極性尾巴 典型的化合物包括脂肪酸鏈烷醇酰胺的類似物。這樣的類似物包括在美國(guó)專利第6,200,998中所講授的那些化合物(這里引入作參考)。這個(gè)參考講授化合物的一般分子式 在上式中，如在美國(guó)專利第6,200,998中所闡述的，Ar1是(1)亞芳基或(2)雜芳基，其中亞苯基和雜亞苯基被從Ra中選擇的1-4個(gè)基團(tuán)任選取代；Ar2是(1)正-取代芳基或(2)正-取代雜芳基，其中所述正取代基選自R；芳基和雜芳基都近一步任選的被獨(dú)立選自Ra的1-4個(gè)基團(tuán)所替代。X和Y分別是O，S，N-Rb或CH2；Z是O或S；n是0-3；R是(1)被選自鹵素的1-4個(gè)基團(tuán)任選取代的C3-10烷基以及C3-6環(huán)烷基，(2)C3-10鏈烯基或(3)C3-8環(huán)鏈烯基；Ra是(1)C1-15烷醇基(2)C1-15烷基(3)C2-15鏈烯基(4)C2-15炔基(5)鹵素(6)ORb(7)芳基或(8)雜芳基，其中所述的烷基、鏈烯基、炔基、烷醇基都是被選自Rc的1-5個(gè)基團(tuán)所任選替代，所述的芳基和雜芳基被選自Rd的1-5個(gè)基團(tuán)所任選替代；Rb是(1)氫(2)C1-10烷基(3)C2-10鏈烯基(4)C2-10炔基(5)芳基(6)雜芳基(7)烷基C1-15雜烷基(8)雜芳基C1-15烷基(9)C1-15烷醇基(10)C3-8環(huán)烷基，其中烷基、鏈烯基、炔基都是被獨(dú)立選自Rc的1-4個(gè)基團(tuán)所任選替代，環(huán)烷基、芳基、雜芳基都是被獨(dú)立選自Rd的1-4個(gè)基團(tuán)所任選替代；或Rc是(1)鹵素，(2)芳基，(3)雜芳基，(4)CN，(5)NO2，(6)ORf，(7)S(O)mRf，m＝0，1或2如果Rf不是H時(shí)m是1或2，(8)NRfRf，(9)NRfCORf，(10)NRfCO2Rf，(11)NRfCON(Rf)2，(12)NRfSO2Rf如果Rf不是H，(13)CORf，(14)CO2Rf，(15)CON(Rf)2，(16)SO2N(Rf)2，(17)OCON(Rf)2或(18)C3-8環(huán)烷基，其中所述的環(huán)烷基、芳基、雜芳基被1-3個(gè)鹵素基或C1-6烷基所任選替代；Rd是(1)從Rc中選擇的基團(tuán)，(2)C1-10烷基，(3)C2-10鏈烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基C1-10烷基或(6)雜芳基C1-10烷基，其中烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基都是被獨(dú)立選自Re的基團(tuán)所任選替代；Re是(1)鹵素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C1-4烷基，(5)C1-4烷氧基，(6)羥基，(7)芳基，(8)芳基C1-4烷基或(9)芳氧基；Rf是(1)氫，(2)C1-10烷基，(3)C2-10鏈烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基，(6)雜芳基，(7)烷基C1-15雜烷基，(8)雜芳基C1-15烷基，(9)C1-15烷醇基，(10)C3-8環(huán)烷基，其中烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷醇基、環(huán)烷基都是被選自Re的1-4個(gè)基團(tuán)所任選替代。
美國(guó)專利第5,859,051號(hào)中講授的類似物也是優(yōu)選的。這些類似物有下面一般的化學(xué)式 在式VII的實(shí)施方案中，如美國(guó)專利第5,859,051號(hào)中所闡述的那樣，R1選自H，C1-6烷基，C5-10芳基和C5-10雜芳基，所述的烷基、芳基或雜芳基任選的被1-3個(gè)Ra基團(tuán)替代；R1選自H、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15炔基、C3-10環(huán)烷基，所述的烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基任選的被1-3個(gè)Ra基團(tuán)替代；R3選自H、NHR1、NH芳基、C1-15烷基、C3-10環(huán)烷基、C2-15鏈烯基、C1-15烷氧基、CO2烷基、OH、C2-15炔基、C5-10芳基、C5-10雜芳基，所述的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基和雜芳基任選的被1-3個(gè)Ra基團(tuán)替代；(Z-W-)是Z-CR6R7-，Z-CH＝CH-，或
R8選自CR6R7，O，NR6和S(O)P；R6和R7獨(dú)立選自H、C1-6烷基；B選自1)5和6元的雜環(huán)包含0-2個(gè)雙鍵，1個(gè)雜原子選自O(shè)，S，N，雜原子在5或6元雜環(huán)的任何位置被取代，雜環(huán)任選的被1-3個(gè)Ra基團(tuán)取代或不取代；2)5和6元的碳環(huán)包含0-2個(gè)雙鍵，碳環(huán)任選的被在5和6元碳環(huán)的任何部位的1-3個(gè)Ra基團(tuán)替代或不取代；3)5和6元的雜環(huán)包含0-2個(gè)雙鍵，3個(gè)雜原子選自O(shè)，S，N，在5或6元雜環(huán)的任何位置被取代，雜環(huán)任選的被1-3個(gè)Ra基團(tuán)取代或不取代；X1和X2獨(dú)立選自H、OH、C1-15烷基、C2-15鏈烯基、C2-15炔基、鹵素、OR3、ORCF3、C5-10芳基、C5-10芳烷基、C5-10雜芳基和C1-10芳基，所述的烷基、鏈烯基、炔基、芳基和雜芳基任選的被1-3個(gè)Ra基團(tuán)替代；Ra代表一組成元素選自鹵素、?；⒎蓟?、雜芳基、CF3、OCF3、-O-、CN、CO2、R3、OR3；SR3、＝N(OR)、S(O)R3、SO2R3、COR3、CO2R3、CON(R3)2、SO2N(R3)2、OCON(R3)2，所述的芳基和雜芳基任選的被1-3個(gè)鹵素或C1-6烷基替代；Y選自S(O)P、-CH2-、-C(O)-、-C(O)NH-、-NR-、-O-、-SO2NH-、-NHSO2；Y1選自O(shè)和C；Z選自CO2R3、R3CO2R3、CONHSO2Me、CONHSO2、CONH2和5-(1H-四唑)；t和v各自是0或1，這樣t+v＝1 Q是包含2-4個(gè)碳原子的直鏈飽和或不飽和烴，p是0-2，條件為Z是CO2R3和B是包含O的5元雜環(huán)，R3不代表甲基。
適合實(shí)施本發(fā)明方法和組合物的另外的類似物包括美國(guó)專利第5,847,008號(hào)、6,090,836號(hào)和6,090,839號(hào)中所講授的化合物。這里都以不與現(xiàn)在發(fā)明沖突的程度完整的引入作參考。
在美國(guó)專利第6,274,608號(hào)中講授了另外多種合適的類似物。例如在美國(guó)專利第6,160,000號(hào)中講授了芳基和雜芳基乙酸及羥乙酸類似物；在美國(guó)專利第6,200,998號(hào)中講授了取代的5-芳基-2，4-噻唑烷二酮類似物；其他可能的類似物如聚不飽和脂肪酸和二十烷酸已經(jīng)知道了(見例如，F(xiàn)orman，BM，Chen，J，和EvansRM，PNAS)944312-4317。這些出版物以不與現(xiàn)在發(fā)明沖突的程度完整引入作參考，他們的化合物可以通過下面的方法篩選檢查來提供例如根據(jù)本發(fā)明對(duì)減少體脂和體重，調(diào)節(jié)脂肪代謝和降低食欲的有用化合物。
脂肪酸鏈烷醇酰胺的合成有效的實(shí)施本發(fā)明的化合物使用本文中所認(rèn)識(shí)到的方法來穩(wěn)定合成和提純。在典型的合成圖解中(圖解1)，一種羧酸和一種乙醇胺(或一種它的O-受保護(hù)的衍生物)在脫水劑存在的條件下反應(yīng)，例如在一合適的溶劑中的二環(huán)己基碳二亞胺。脂肪酸鏈烷醇酰胺通過如提取、重結(jié)晶、沉淀、色譜法等來分離。如果終產(chǎn)物是O-受保護(hù)的加合物，典型的用文章所知道的方法來使之去保護(hù)，提供有自由羥基的脂肪酸加合物。
文中的那些技術(shù)會(huì)認(rèn)識(shí)到以上圖解給出的許多變體是有用的。例如，一種有活性的衍生物，例如，可以應(yīng)用的酸的鹵化芳基和活性酯。相似的，乙二醇(優(yōu)選單O-受保護(hù)的)可以來取代氨基乙醇，結(jié)果是分子兩組分之間酯鍵相聯(lián)系。
反式酯和反式酰胺也通過知道的方法穩(wěn)定合成。例如，一種羥基羧酸在脫水劑存在的條件下和長(zhǎng)鏈烷基(例如C4-C22)胺或羥基衍生物反應(yīng)。在特定的反應(yīng)途徑中，理想的保護(hù)了羥基羧酸的羥基部分。
乙醚和硫醇通過文中那些技術(shù)熟知的方法來配制，例如Williamson合成。例如，一種長(zhǎng)鏈的烷基乙醇或硫醇被一種堿去質(zhì)子化，例如NaH，活性的乙醇衍生物，如鹵素、甲苯磺?；⒓谆酋；掖蓟蛩鼈兊氖鼙Ｗo(hù)的衍生物和所得的陰離子反應(yīng)而形成乙醚或硫醇。
上面所述的方法和它的變化能在以下找到如RECENT DEVELOPMENT IN THESynthesis OF FATTY ACID DERIVATIVES，Knothe G編，Amer.Oil Chemists Society1999；COMPREHENSIVE NATURAL PRODUCTS CHEMISTRY AND OTHER SECONDARYMETABOLITES INCLUDING FATTY ACIDS AND THEIR DERIVATIVES，Nakanishi K編，Pergamon Press，1999；ORGANIC SYNTHSIS COLLECTED VOLUMES I-V，John Wiley和Sons；COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS，卷1-6，Wiley，Interscience，1984；ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATION，卷I-III，Academic Press有限公司1983；Greene T，PROTECTING GROUPSIN ORGANIC SYNTHSIS，第二版，Wiley，Interscience，1991。
應(yīng)用方法、藥物組合物及其用藥應(yīng)用方法本發(fā)明的化合物、組合物和方法(如脂肪酸鏈烷醇酰胺、脂肪酸乙醇胺化合物、類似物和同系物)被應(yīng)用來防止哺乳動(dòng)物體重或體脂增加，包括狗、貓尤其是人。體重減輕是為了美容和治療的目的。這些化合物也被應(yīng)用來降低食欲或引起hypophagia。
本發(fā)明的化合物、組合物和方法也被應(yīng)用來預(yù)防體重在正常范圍內(nèi)的個(gè)人的體重增加和體脂的增長(zhǎng)。這種化合物也應(yīng)用于其他健康的個(gè)人，他們不需要任何藥物的介入來治療和糖尿病或高血壓或癌癥相關(guān)的疾病。在一些實(shí)施方案中，受治療的個(gè)人免于和糖或脂類水平異?；虼x異常相關(guān)的疾病，或免于心血管和腦血管疾病的威脅。這樣的個(gè)人也許無糖尿病并且血糖在正常水平，也可能血脂(如膽固醇)或甘油三脂在正常水平。這樣的個(gè)人免于動(dòng)脈硬化癥，也可能免于其他疾病如癌癥或其他腫瘤、紊亂包括胰島素抵抗，X綜合癥以及胰腺炎。
在其他的實(shí)施方案中，受試者是超重或肥胖的人，他們需要減少體重或體脂。在這些實(shí)施方案中，可以施用這項(xiàng)本發(fā)明的方法、化合物和組合物來提高減輕體重也來預(yù)防體重增加，只要達(dá)到對(duì)于一個(gè)人的性別、年齡和身高來說正常的體重范圍。這種化合物也應(yīng)用于其他健康的個(gè)人，他們不需要任何藥物來治療和糖尿病或高脂血癥或癌癥相關(guān)病癥。這樣的個(gè)人也可能免于心血管和腦血管疾病的危險(xiǎn)因素。在一些實(shí)施方案中，接受治療的個(gè)人免于和糖(如葡萄糖)或脂類代謝相關(guān)的疾病。這種個(gè)人沒有糖尿病以及血糖范圍在正常水平，他們的血脂(如膽固醇、HDL、LDL、總膽固醇)或甘油三脂水平在正常范圍。這樣的個(gè)人不需要治療動(dòng)脈硬化癥。
可以施用本發(fā)明的化合物、方法和組合物來抑制哺乳動(dòng)物的胃口包括貓、狗和人。在一些實(shí)施方案中，這種化合物應(yīng)用于其他健康的個(gè)人，他們不需要任何藥物的介入來治療任何疾病。在一些實(shí)施方案中，個(gè)人不需要預(yù)防性或緩解性治療任何疾病，包括癌癥、糖尿病或高脂血癥。在一些實(shí)施方案中，受治療的個(gè)人免于和異常血糖或脂類水平相關(guān)的疾病。在另外的實(shí)施方案中，受治療的個(gè)人免于心血管和腦血管疾病的威脅。這種個(gè)人沒有糖尿病以及血糖范圍在正常水平，他們的血脂(如膽固醇)或甘油三脂水平在正常范圍。這樣的個(gè)人免于動(dòng)脈硬化癥。
可以施用本發(fā)明的化合物、方法和組合物來調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物，包括貓、狗和人的脂類代謝(例如增加脂肪的分解代謝)。在一些實(shí)施方案中，應(yīng)用這種化合物降低其他健康個(gè)人的食欲。在一些實(shí)施方案中，接受治療的個(gè)人免于和血糖或脂類代謝相關(guān)的疾病(如糖尿病、高膽固醇血癥、低HDL水平或高LDL水平)。這種個(gè)人沒有糖尿病以及血糖范圍在正常水平。他們的血脂或甘油三脂水平在正常范圍。這樣的個(gè)人免于動(dòng)脈硬化癥。
用本發(fā)明的化合物和組合物來進(jìn)行治療，可以根據(jù)一段時(shí)間達(dá)到的體重降低的程度或量來規(guī)定，或個(gè)人達(dá)到BMI在正常范圍。用這項(xiàng)本發(fā)明的化合物和組合物來進(jìn)行治療，在達(dá)到了規(guī)定的量和程度的體重降低或個(gè)人達(dá)到BMI在正常范圍時(shí)，要減少。
可以單獨(dú)施用本發(fā)明的化合物和組合物來達(dá)到降低體重或食欲的目的。
藥物組合物本發(fā)明在另一方面提供了藥物組合物，它包括本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的藥物組合物包括本發(fā)明的化合物，作為活性成分或其藥學(xué)上可接受的鹽，也包括藥學(xué)上可接受的載體和任選的其他治療成分。
所述組合物包括適合口服、直腸、局部、胃腸外(包括皮下、經(jīng)肌肉和靜脈內(nèi))、眼睛(眼科的)、肺部(鼻或口腔吸入)，或鼻腔給藥，但是特定情況最合適的給藥方式部分依賴于所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性，以及活性成分的性質(zhì)。典型的給藥途徑是口服。可以方便的以單位劑量的形式給出組合物，并用藥學(xué)文章中任何熟知的方法來配制。
在實(shí)際的應(yīng)用中，本發(fā)明的化合物可以根據(jù)常規(guī)的藥物化合物技術(shù)合成，作為和藥物載體親密混合的活性成分。載體可表現(xiàn)出多種形式，這依賴于想要給藥的配方形式，例如口服或胃腸外(包括經(jīng)靜脈內(nèi))。在配制用來口服劑量形式的組合物時(shí)，任何通常的介質(zhì)都可以運(yùn)用，如水、乙二醇、油、乙醇、調(diào)味劑、防腐劑、色素等等，以及以口服液體配方，如懸浮液、酏劑和溶液；或載體如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋液、?；瘎?、潤(rùn)滑劑、粘合劑、分解劑等，以及以口服固體的形式，如粉末、硬和軟的膠囊和片劑，固體配方要優(yōu)于液體配方。
由于它們和容易給藥，片劑和膠囊代表了最有利的口服劑量單位形式，在這種情況下，載體明顯是要用的。如果需要，片劑會(huì)通過標(biāo)準(zhǔn)的含水或不含水的技術(shù)來包衣。這樣的組合物能含有至少0.1％的活性化合物。這些組合物中的活性化合物的百分比當(dāng)然會(huì)變化，并大約在2％-60％單位體重左右。在這種治療應(yīng)用的組合物中的活性化合物的量是這樣的，這樣就能獲得治療有效劑量。所述活性化合物也可以鼻腔內(nèi)給藥，如以液滴或噴霧的形式。
片劑、藥丸、膠囊等等也包含一種粘合劑如膠、黃芪膠、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑如磷酸二鈣；分解劑如玉米淀粉、土豆淀粉、褐藻酸；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂；甜劑如蔗糖、乳糖或糖精。當(dāng)一劑量單位形式是膠囊時(shí)，它除了含有上面類型的物質(zhì)外，還含有液態(tài)的載體如脂肪油。
許多其他的物質(zhì)會(huì)存在，作為包衣或修飾劑量單位的物理形式。例如，片劑可以用蟲膠、糖或兩者都用來加上包衣。一種糖漿或酏劑除了活性成分外，可包含作為甜劑的蔗糖，作為防腐劑的木精和丙對(duì)苯，染料和調(diào)味劑如櫻桃紅或橙味。為了防止在經(jīng)過GI途徑上部運(yùn)輸時(shí)降解，組合物可是腸包衣的配方。
給藥本發(fā)明的化合物也可以胃腸外給藥。這些活性化合物的溶液或懸浮液可以在水和表面活性劑如羥丙酯纖維素的合適混合物中配制。膠體溶液也可以在甘油、液態(tài)的聚乙烯乙二醇和它們?cè)谟椭械幕旌衔飦砼渲?。在普通的存?chǔ)和使用環(huán)境下，這些配方包含用來防止微生物滋生的防腐劑。
適合注射應(yīng)用的藥物形式包括無菌的注射溶液或膠體溶液。在所有的情況中所述形式必須是無菌的，并且必須是流動(dòng)的，到方便注射的程度。它在生產(chǎn)和存儲(chǔ)的環(huán)境下必須是穩(wěn)定的，并且來防止微生物的污染作用如細(xì)菌和真菌。載體可以是溶劑或膠體溶液介質(zhì)包含例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙烯乙二醇和液態(tài)的聚乙烯乙二醇)以及它們合適的混合物和植物油。
本發(fā)明的化合物在一廣泛的劑量范圍有效。例如，在治療成年人時(shí)，劑量大概為10-1000mg，需要大概100-500mg或1-100mg。每天使用大概0.05-100mg，更優(yōu)選的0.1-100mg。最優(yōu)選的劑量是每天使用0.1-70mg。在為病人選擇規(guī)則時(shí)，通常一開始必要的將劑量定為每天使用2-70mg，當(dāng)疾病得到控制時(shí)，盡量低的減少劑量大概從每天0.1-10mg開始。例如，在治療成年人時(shí)，可每天大約使用0.05-100mg，優(yōu)選的用大約每天0.1-100mg。確定的劑量將依賴于給藥的方式，治療所希望的給藥方式，被治療的受試者及他的體重，和負(fù)責(zé)醫(yī)生或獸醫(yī)的喜好和經(jīng)驗(yàn)。
一般的，本發(fā)明的化合物可以以單位劑量的形式配制，優(yōu)選的包含0.1-100mg的活性成分和每單位劑量的藥學(xué)上可接受的載體。通常的，適合口服、鼻腔、肺部、或經(jīng)皮膚給藥的劑量形式包括大概0.001-100mg，更優(yōu)選的0.01-50mg和藥學(xué)上可接受的載體和稀釋液混合的化合物。作為存儲(chǔ)和使用，這些配方優(yōu)選的包含一種防腐劑來防止微生物的滋生。
候選化合物合適劑量的施用可以通過任何文中所知的方法，例如口服或直腸、胃腸外、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、真皮下、鼻腔內(nèi)或肌肉內(nèi)給藥。在一些實(shí)施方案中，給藥方法是經(jīng)真皮。候選化合物的合適的劑量可以根據(jù)文中所知經(jīng)驗(yàn)性的決定。合適的或治療的劑量是指在一段時(shí)間能足夠使動(dòng)物的體脂和體重減輕的劑量。候選化合物可以根據(jù)減少體脂和體重的需要來給藥，例如每小時(shí)、每6，8，12或18小時(shí)，每天或每周。
適合口服給藥的配方包括(a)溶液，如有效劑量的懸浮在稀釋液中的小包核酸，如水、鹽水或PEG400；(b)膠囊、香囊或片劑，各自都包含規(guī)定量的活性成分，如液體、固體、顆粒或明膠；(c)合適液體中的懸浮液；和(d)合適的乳劑。片劑形式包含一種或多種乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、磷酸鈣、玉米淀粉、緩沖試劑、潤(rùn)濕劑、防腐劑、調(diào)味劑、染料、分解劑以及藥學(xué)上相容的載體。菱形形式包含調(diào)味劑中的活性成分，例如蔗糖，正如糖錠包含惰性堿基中的活性成分，例如明膠和丙三醇或蔗糖和阿拉伯樹膠乳劑、凝膠及類似的，除了文中所知的活性成分和載體。
注射溶液和懸浮液可從前面描述過的那種無菌粉末、顆粒及片劑來配制。適合胃腸外給藥的配方，例如關(guān)節(jié)內(nèi)給藥(在關(guān)節(jié)內(nèi))，經(jīng)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下途徑，包括水和非水的，等滲無菌注射液。它包含可使配方和受試者血等滲的抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑及溶質(zhì)，以及水和非水無菌懸浮液，它包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。
關(guān)于真皮內(nèi)給藥的途徑，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版(Gennaro等編，Mack Publishing Co.，1985)中揭示了真皮內(nèi)給藥的方法。真皮或皮膚斑是皮內(nèi)給予本發(fā)明化合物的優(yōu)選途徑。斑塊優(yōu)選的提供一種吸收增強(qiáng)劑，如DMSO來增加化合物的吸收。美國(guó)專利第5,962,012和第6,261,595號(hào)揭示了皮內(nèi)藥物傳輸?shù)钠渌緩?。每一?xiàng)都完整引入作參考。
優(yōu)選的斑快包括那些控制藥物傳輸進(jìn)皮膚率的。斑塊會(huì)提供多種劑量體系，分別包括蓄積體系或單一體系。蓄積體系設(shè)計(jì)例如可有4層直接接觸皮膚的粘性層，控制性膜，它控制藥物分子的分散，藥物分子的蓄積以及抗水的底。這樣的一種設(shè)計(jì)在特定的時(shí)間段內(nèi)傳輸了統(tǒng)一劑量的藥物，傳輸率必須低于不同類型皮膚的飽和界限。
單一設(shè)計(jì)，特征性的只有三層粘性層、包含化合物的基質(zhì)聚合體及防水的底。
這樣的設(shè)計(jì)帶來了皮膚飽和量的藥物。因此，皮膚控制了傳輸。當(dāng)藥物量在斑塊中降低到低于飽和水平時(shí)，傳輸率下降。
本發(fā)明的化合物可以和本發(fā)明其他的化合物或其他藥物聯(lián)合使用，它們?cè)陲嬍郴蛑委?、預(yù)防、抑制或減少體脂方面是有用的。因此這樣的化合物可以以通常使用的途徑和劑量和本發(fā)明的化合物同時(shí)或連續(xù)給藥。當(dāng)本發(fā)明的化合物和其他一種或多種藥物同時(shí)應(yīng)用時(shí)，包含這樣的其他藥物和化合物的單位劑量形式的藥物組合物是優(yōu)選的。當(dāng)和一種或多種其他活性成分聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，本發(fā)明的化合物和其他活性成風(fēng)會(huì)比單一應(yīng)用時(shí)使用較低的脊梁。相應(yīng)的，本發(fā)明的藥物組合物包括包含那些除了上面揭示的化合物外的一種或多種其他活性成風(fēng)的組合物。
本發(fā)明化合物的鑒定候選化合物如上面所述的那樣，可以通過文中所知的方法篩選。例如減少體脂的化合物可以應(yīng)用為文中的那些普通技術(shù)人員所熟知的動(dòng)物生物測(cè)定技術(shù)，在活體中辨認(rèn)。實(shí)驗(yàn)性的化合物和合適的賦形劑或能量的控制，可以通過許多途徑來施用(如口服途徑、胃腸外途徑)于實(shí)驗(yàn)受試者，在治療的過程中監(jiān)測(cè)受試者的體重。實(shí)驗(yàn)的受試者是人類或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物(如大鼠、小鼠)。
所述化合物對(duì)于食欲或引起hypophagia或減少食物攝入的影響可以通過例如監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)受試者的食物消耗來評(píng)估。(例如以食物重量或能量?jī)?nèi)容物來測(cè)定吃掉或未吃的量)。所述化合物對(duì)于食欲的影響也通過主觀的方法包括使用受試者對(duì)食欲或?qū)κ澄锟释降膯柧碚{(diào)查來評(píng)估。實(shí)驗(yàn)化合物對(duì)于脂類代謝的影響可以通過監(jiān)測(cè)血脂和脂肪酸氧化來評(píng)估。這些評(píng)估的技術(shù)對(duì)于文中的普通技術(shù)人員來說都是熟知的。這項(xiàng)考察可能是急性、亞急性、慢性或亞慢性的，這要根據(jù)給藥的持續(xù)時(shí)間和或給藥的效果。
體重的減少，例如，可以通過直接測(cè)定動(dòng)物體脂或體重的變化來測(cè)定。所述動(dòng)物可選自小鼠、大鼠、幾內(nèi)亞豬或兔子。所述的動(dòng)物可以是ob/ob小鼠、db/db小鼠或Zucker小鼠或其他體重相關(guān)疾病的動(dòng)物模型。也在人類中實(shí)施臨床研究。
組合的化學(xué)庫近來，關(guān)注集中在應(yīng)用組合化學(xué)庫來幫助生產(chǎn)新的化學(xué)化合物例子。組合化學(xué)庫是由化學(xué)合成或通過組合許多的構(gòu)造塊如試劑的生物合成而產(chǎn)生的各種化合物的集合。例如，線性的組合化學(xué)庫如多肽庫通過組合一系列被稱為氨基酸的化學(xué)構(gòu)造塊形成，通過每種可能的方法以特定的化合物長(zhǎng)度(例如多肽化合物中的氨基酸數(shù)量)。成百上千萬的化學(xué)化合物可以通過這樣的化學(xué)構(gòu)造塊的組合性混合來合成。例如，某一評(píng)論員已發(fā)現(xiàn)100個(gè)可轉(zhuǎn)換的化學(xué)構(gòu)造塊的系統(tǒng)性，組合性混合會(huì)導(dǎo)致1億四聚體化合物或100億五聚化合物的理論合成(Gallop等.J.Med.Chem.37(9)1233(1994))。
配制和篩選組合化學(xué)庫對(duì)于文中的那些技術(shù)員來說是熟知的。這樣的組合化學(xué)庫包括，但不局限于苯并二氮卓類(美國(guó)專利第5,288,514號(hào))，diversomers？如乙內(nèi)酰脲，苯并二氮卓類和二肽(Hobbs等.PNAS USA 906909(1993))，類似的小化合物庫的有機(jī)合成(Chen編)J.Amer.Chem.Soc.1162661(1994)，少氨基甲酸鹽(Cho等.，Science2611303(1993))，和/或肽基膦酸酯(Campbell等J.Org.Chem.59658(1994))以及小有機(jī)分子庫(見如苯并二氮卓類(Baum C&EN，Jan 18，頁33(1993))，噻唑烷二酮和metathiazanones(美國(guó)專利第5,549,974號(hào))，四氫化吡咯(美國(guó)專利第5,525,735號(hào)和第5,519,134號(hào))，苯并二氮卓類(美國(guó)專利第5,288,514號(hào))等等。
配制組合庫的設(shè)備是商業(yè)上應(yīng)用的(見，如357MPS，390MPS，Advanced ChemTech，Louisville KY，Symphony，Rainin，Wobum，MA，433A Applied Bio-systems，F(xiàn)oster City，CA，9050 Plus，Millipore，Bedford，MA)。
許多熟知的自動(dòng)系統(tǒng)也已經(jīng)被用來發(fā)展液相化學(xué)。這些系統(tǒng)包括自動(dòng)工作站，就象Takeda化工有限公司生產(chǎn)的自動(dòng)合成設(shè)備一樣(Osaka，日本)以及許多使用自動(dòng)手臂的自動(dòng)系統(tǒng)(Zymate II，Zymate公司，Hopkinton，Mass；Orca，Hewlettpackard，Palo Alto，CA)，它模仿化學(xué)家進(jìn)行的人工合成操作。以上任何一種設(shè)備都適合這項(xiàng)發(fā)明的應(yīng)用。對(duì)這些設(shè)備進(jìn)行修改的性質(zhì)和執(zhí)行對(duì)于相關(guān)文章中的技術(shù)人員都是顯而易見的，這樣他們就能按照這里討論的來操作。另外，許多組合庫它們本身自己是商業(yè)應(yīng)用的(見例如ComGenex，Princeton，N.J.，Asinex，Moscow，Ru，Tripos，Inc.St.Louis，MO，ChemStar，Ltd.，Moscow，RU，3D Pharmaceuticals，Exton，PA，Martek Biosciences，Columbia，MD等)。
化學(xué)庫的高生產(chǎn)量測(cè)定這里描述的化合物測(cè)定必須服從高生產(chǎn)量的篩選。因此優(yōu)選的測(cè)定發(fā)現(xiàn)了通過實(shí)驗(yàn)化合物轉(zhuǎn)錄的激活(例如mRNA產(chǎn)物的激活)，通過實(shí)驗(yàn)化合物蛋白質(zhì)表達(dá)的激活，或通過實(shí)驗(yàn)化合物和基因產(chǎn)物的結(jié)合；或如下面描述的對(duì)脂肪酸調(diào)節(jié)的影響。
對(duì)于存在、不存在或特定蛋白質(zhì)產(chǎn)物的定量的高產(chǎn)量測(cè)定或結(jié)合測(cè)定對(duì)于文中那些技術(shù)員來說是熟知的。因此，例如美國(guó)專利第5,559,410號(hào)揭示了蛋白質(zhì)高產(chǎn)量的篩選方法，美國(guó)專利第5,576,220號(hào)和5,541,061號(hào)揭示了配體/抗體結(jié)合的高產(chǎn)量的篩選方法。
另外，高產(chǎn)量篩選系統(tǒng)是商業(yè)應(yīng)用的(見例如Zymark Corp.，HopkintonMA；Air技術(shù)公司，Mentor，OH；Beckman Instruments，Inc.Fullerton，CA；Pre-cisionSystems，Inc.，Natick，MA等)。這些系統(tǒng)典型的自動(dòng)執(zhí)行整個(gè)步驟包括所有的樣本和試劑的移液，液體的調(diào)配，一定時(shí)間的溫浴和在適合測(cè)定的檢定器微盤讀數(shù)。這些結(jié)構(gòu)系統(tǒng)提供了高產(chǎn)量和快速啟動(dòng)，還有高度的靈活性和專用化。這項(xiàng)系統(tǒng)的制造者為各種高生產(chǎn)量提供了詳細(xì)的規(guī)定。這樣，例如Zymark公司提供了描述發(fā)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、配體結(jié)合等篩選系統(tǒng)的技術(shù)公告。
測(cè)定化合物是否影響食物攝入、體重、體脂、食欲、覓食行為或調(diào)節(jié)脂肪酸氧化本發(fā)明的化合物，可以給予動(dòng)物來測(cè)定它們是否影響食物攝入和體重、體脂、食欲、覓食行為或調(diào)節(jié)脂肪酸氧化。
動(dòng)物可以是，例如肥胖或正常的幾內(nèi)亞豬、大鼠、小鼠或兔子。合適的大鼠包括例如Zucker大鼠。合適的大鼠包括，例如平常的大鼠，ALS/LtJ，C3.SW-H-2b/SnJ，(NON/LtJxNZO/HlJ)Fl，NZO/HlJ，ALR/LtJ，NON/LtJ，KK.Cg-AALR/LtJ，NON/LtJ，KK.Cg-Ay/J，B6.HRS(BKS)-Cpefat/+，B6.12P2-Gcktm/Efr，B6.V-Lepob，BKS.Cg-m+/+Leprdb和C57BL/6J食物引起的肥胖。
施用合適量的候選化合物可通過文中所知的任何方法，例如口服或直腸，胃腸外例如腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、真皮下、鼻腔內(nèi)或肌肉內(nèi)。優(yōu)選的給藥方法可是腹膜內(nèi)或口服。如文中所知的那樣，合適有效量的候選化合物可經(jīng)驗(yàn)性的測(cè)定。合適有效量就是在一段時(shí)間能使動(dòng)物的體脂或體重減少或食物消耗減少的足夠量。候選化合物可以根據(jù)減少體脂和體重的需要來給藥，例如每小時(shí)、每6，8，12或18小時(shí)，每天或每周。
適合口服給藥的配方包括(a)溶液，如有效劑量的懸浮在稀釋液中的候選化合物，如水、鹽水或PEG400；(b)膠囊、香囊或片劑，各自都包含規(guī)定量的活性成分，如液體、固體、顆?；蛎髂z；(c)合適液體中的懸浮液；和(d)合適的乳劑。片劑形式包含一種或多種乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、磷酸鈣、谷物淀粉、土豆淀粉、微結(jié)晶纖維素、明膠、膠狀二氧化硅、云母、硬脂酸鎂、硬脂酸和其他賦形劑、色素、填充劑、結(jié)合劑、稀釋劑、緩沖試劑、潤(rùn)濕劑、防腐劑、調(diào)味劑、染料、分解劑以及藥學(xué)上相容的載體。菱形形式包含調(diào)味劑中的活性成分，例如蔗糖，正如糖錠包含惰性堿基中的活性成分，例如明膠和丙三醇或蔗糖和阿拉伯樹膠乳劑、凝膠及類似的，除了文中所知的活性成分和載體。
注射溶液和懸浮液可從前面描述過的那種無菌粉末、顆粒及片劑來配制。適合胃腸外給藥的配方，包括例如水或非水的，等滲無菌注射液，它包含可使配方和受試者血等滲的抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑及溶質(zhì)，以及水和非水無菌懸浮液，它包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。
動(dòng)物的的給藥劑量足夠經(jīng)過一段時(shí)間使得體重、體脂和/或脂肪酸氧化發(fā)生變化。這樣的劑量可根據(jù)運(yùn)用的特定候選化合物的功效及動(dòng)物的狀況來決定，同樣也考慮動(dòng)物體重或表面部分。劑量的大小也由伴隨著施用候選化合物而產(chǎn)生的副作用的存在、性質(zhì)和程度來決定；還有取決于候選化合物的LD50；以及候選化合物在各種濃度時(shí)的副作用。通常，劑量在0.1-50mg/kg，優(yōu)選的是1-25mg/kg，最優(yōu)選的是1-20mg/kg體重。劑量反應(yīng)關(guān)系的測(cè)定對(duì)于文中的一個(gè)普通技術(shù)員來說是熟知的。
體脂的減少體重的減少可以特征性的通過直接測(cè)定體脂的變化或體重丟失來決定。動(dòng)物的體脂和體重在施用候選化合物前、中、后測(cè)定。體脂的變化通過任何文中的方法測(cè)定，例如，用測(cè)徑器、生物電阻抗、流體靜力稱重或雙x-線吸收譜來測(cè)量脂肪褶。優(yōu)先的動(dòng)物表現(xiàn)出至少2％、5％、10％或15％體重的減少。體重的減少在候選化合物施用前測(cè)定，并在治療期間和以后，隔一定的時(shí)間測(cè)量。優(yōu)選的，體重每5天測(cè)量一次，更優(yōu)選的每4天測(cè)量一次，更優(yōu)選的每3天測(cè)量一次，更優(yōu)選的每2天測(cè)量一次，更優(yōu)選的每1天測(cè)量一次。
脂肪酸代謝的變化脂肪酸代謝的變化可以通過，例如，觀察主要脂肪燃燒組織細(xì)胞中的脂肪酸氧化來測(cè)定，這些組織如肝(Beynen等Diabetes 28828(1979))，肌肉(ChiassonLab.Anat of Rat(1980))，心臟(Flink等J.Biol.Chem.2679917(1992))和脂細(xì)胞(Rodbell J.Biol.Chem.239375(1964))，細(xì)胞可以來自初級(jí)培養(yǎng)物或細(xì)胞索。細(xì)胞可以通過文中所知的方法來配制為初級(jí)培養(yǎng)物，包括例如酶消化和解剖。合適的細(xì)胞索對(duì)于那些文中的人說是知道。合適的肝細(xì)胞索包括，例如Fao，MH1C1，H-4-II-E，H4TG，H-4-II-E-C3，McA-RH7777，McA-RH8994，N1-S1 Fudr，N1-S1，ARL-6，Hepa1-6，Hepa-1c1c7，BpRcl，tao BpRcl，NCTC克隆1469，PLC/PRF/5，Hep 3B2.1-7[Hep 3B]，Hep G2[HepG2]，SK-HEP-1，WCH-17。合適的骨肌肉細(xì)胞索，例如是L6，L8，C8，NOR-10，BLO-11，BC3H1，G-7，G-8，C2C12，P19，Sol8，SJRH30[RMS 13]，QM7。合適的心臟細(xì)胞索是H9c2(2-1)，P19，CCD-32Lu，CCD-32Sk，Girardi，F(xiàn)BHE。合適的脂細(xì)胞索是NCTC克隆929[Strain L的衍生物；L-929；L細(xì)胞]，NCTC2071，L-M，L-M(TK-)[LMTK-；LM(tk-)]，A9(APRT和HPRT StrainL的陰性衍生物)，NCTC克隆2472，NCTC克隆2555，3T3-L1，J26，J27-Neo，J27-B7，MTKP97-12 pMp97b[TKMp97-12]，L-NGC-5HT2，Ltk-11，L-α-1b，L-α-2A，L-α-2C，B82。
脂肪酸氧化率可以通過14C油酸氧化成酮體(Guzman和GeelenBiochem.J.287487(1982))和/或14C油酸氧化成CO2(Fruebis PNAS982005(2001))；Blazquez等J.Neurochem711597(1998))來測(cè)定。可以通過使用合適的標(biāo)記前體或分光光度測(cè)定(Serradeil-Le Gal FEBS Lett475150(2000))來獲得脂肪酸或丙三醇的釋放來測(cè)定lypolysis。為了分析14C油酸氧化成酮體，新鮮獨(dú)立的細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞索可以用油酸保溫一段合適的時(shí)間，如30、60、90、120或180分鐘。可以測(cè)量14C在保溫媒介中放射量來測(cè)定它們的油酸氧化率。油酸氧化可以表達(dá)為在x分鐘/g細(xì)胞中產(chǎn)生的油酸納摩爾數(shù)。為了分析lypolysis/丙三醇的釋放，可以洗滌新鮮獨(dú)立的細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞索，然后將它們保溫一段合適的時(shí)間。釋放入保溫媒介的丙三醇的量可以提供lypolysis的系數(shù)。
實(shí)施例下面的實(shí)施例是用來闡述而不是限制的。那些技術(shù)員會(huì)逐漸認(rèn)識(shí)到許多不重要的參數(shù)可以被變換或修改而產(chǎn)生相似的結(jié)果。
實(shí)施例1合成脂肪酸乙醇胺化合物、同系物和類似物。
從乙醇胺和相應(yīng)的脂肪?；渲浦舅嵋掖及返姆椒ㄊ窍鄬?duì)簡(jiǎn)單的并為文中的一個(gè)普通技術(shù)員所知。例如，可以通過將脂肪酸或氯化脂肪酸和乙醇胺反應(yīng)合成脂肪酸乙醇胺，如Abadjj等所描述的那樣(Abadjj，V.，Lin，S.Y.Taha，G.，Griffin，G.，Stevenson，L.A.Pertwee，R.G.& Makriyannis，A.J.Med.Chem.37，1889-1893(1994))。脂肪酸可以用與Serdarevich和Carroll相似的步驟來配制(Serdarevich，B.& Carroll，K.K.J.Lipid Res.7，277-284(1966))。放射標(biāo)記的脂肪酸乙醇胺可以通過?；?Nu-Check Prep，Elysian，MN)和[3H]乙醇胺(10-30Ci/mmol；American Radiolabeled Chemicals.St.Louis)反應(yīng)來配制，正如Desarnaud，F(xiàn).，Cadas，H.&Piomelli，D.(1995)J.Biol.Chem.270，6030-6035所描述的。化合物可以通過閃光柱色譜法或HPLC來提純。化合物的同一性，可以通過使用NMR和/或氣體色譜-質(zhì)譜法和薄層色譜法來建立。
原始試劑和材料可以從Avanti Polar Lipids，Cayman Chemicals(Ann Arbor，MI)，Nu-Check Prep，Research Biochemicals或Sigma購買。簡(jiǎn)要的說，根據(jù)Giuffrida，A.等(見Lipid Second Messenger(Laycock，S.G.和Rubin，R.P.Eds.113-133頁，CRC Press LLC，Boca Raton，F(xiàn)lorida)中的Giuffrida，A和Piomelli，D.)和Devane等(Devane W.，Hanus，L.等Science 258，1946-1949(1992))，未標(biāo)記或標(biāo)記的脂肪?；掖及房梢酝ㄟ^相應(yīng)的脂肪酰氯和未標(biāo)記或標(biāo)記的乙醇胺反應(yīng)合成。脂肪酸氯可以溶解在二氯甲烷(10mg/ml)中并和乙醇胺在0.4℃條件下反應(yīng)15分鐘。加入純凈水后反應(yīng)停止。在積極的攪拌后，物相才可以被分離。丟棄上層的水相物質(zhì)。用水清洗有機(jī)相物質(zhì)兩次。這些清洗去除了未反應(yīng)的乙醇胺。這個(gè)方法提供了脂肪?；掖及返牧炕渲?。在氮?dú)饬飨聦⒁掖及窛饪s干燥，并在有機(jī)溶劑如濃度為20mM的二氯甲烷中重組。所得的脂肪?；掖及啡芤嚎稍?20℃條件下存儲(chǔ)直到需要使用的時(shí)候。
脂肪酸羧酸基，主要和次要的氨基以及主要的乙醇胺對(duì)于文中的一普通技術(shù)員來說是熟知的。脂肪酸乙醇胺在乙醇胺位置有許多的取代基，因此能用許多方法配制，但最優(yōu)選的是用相應(yīng)的取代乙醇胺和脂肪酸部分來開始配制。這樣的取代乙醇胺會(huì)包括烷基氨基乙醇酯和酰基氨基乙醇酯，還有次級(jí)烷基乙醇胺?；蛘?，特定的脂肪酸乙醇胺可以在相應(yīng)的脂肪酸乙醇胺中加入合適的取代基來合成。
實(shí)施例2篩選活體中脂肪酸乙醇胺和本發(fā)明其他化合物的方法動(dòng)物.使用雄性Wistar大鼠(200-350g)。程序必須符合NIH規(guī)定，它在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理和使用指導(dǎo)以及歐共體指導(dǎo)性86/609/EEC管理動(dòng)物研究中詳述。
化學(xué)物質(zhì).FAEs和[2H4]FAEs在實(shí)驗(yàn)室合成(Giuffrida等，”Lipid SecondMessengers”(Laychock，S.G.&Rubin，R.P.編)113-133(CRC Press LLC，Boca Raton，F(xiàn)L，1998))；1，2-二油基-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油基從Avanti PolarLipids(Alabaster，AL)購買；SR141716A由RBI(Natick，MA)提供，它是NIMH(N01MH30003)化學(xué)合成項(xiàng)目的一部分；SR144528是Sanofi Recherche的慷慨的贈(zèng)品；其他所有的藥物都來自于Tocris(Ballwin，MO)或Sigma(Saint Louis，MO)。FAE溶解在二甲亞砜(DMSO)中，以70％的DMSO無菌鹽溶液(急性治療)或5％的Tween80/5％的丙烯乙二醇無菌鹽溶液(慢性治療)(1mg/kg)來給藥。辣椒素以10％的Tween80/10％乙醇/80％鹽溶液給藥；SR141716A，SR144528，CCK-8和CP-93129在5％的Tween80/5％的丙烯乙二醇鹽溶液中(1mg/kg)。
酶測(cè)定.在所有的生化實(shí)驗(yàn)中，大鼠在各種長(zhǎng)時(shí)間的禁食后，被殺死，組織在1400和1600h之間被收集。微粒體部分根據(jù)上面描述的配制(Desarnaud等，J.Biol.Chem.，2706030-6035(1995))。使用1，2-[14C]棕櫚酸-sn-甘油磷酸膽堿作為底物(108mCi/mmol，Amersham，Piscataway，NJ)(Cadas等H.，J.Neurosci.，171226-1242(1997))進(jìn)行NAT測(cè)定。FAAH根據(jù)(Desarnaud等，J.Biol.Chem.，2706030-6035(1995))進(jìn)行測(cè)定，除了[3H]anandamide(花生四烯基-[1-3H]乙醇胺)；60Ci/mmol；ARC，St.Louis，MO)包括在底物之內(nèi)，放射活性在經(jīng)氯仿提取后的水相中進(jìn)行測(cè)定。
HPLC/MS分析.血漿是采用由心臟穿刺而得到的血來配制(Giuffrida等.，Anal.Biochem.，28087-93(2000))CSF使用一27G1/2的針(Precisionglide，美國(guó))采自大池。用甲醇/氯仿將FAEs和NAPE從組織中提取，并使用柱色譜柱將它們分離(Giuffrida等.，“Lipid Second Messengers”(Laychock，S.G.&Rubin，R.P.編)113-133(CRC Press LLC，Boca Raton，F(xiàn)L，1998))。FAEs通過HPLC/MS定量，應(yīng)用同位素稀釋液方法(Giuffrida等.，Anal.Biochem.，28087-93(2000))。單獨(dú)的NAPE種通過HPLC/MS確認(rèn)和定量，應(yīng)用一種外部的標(biāo)準(zhǔn)方法(Calignano等.，Nature，40896-101(2000))。
血液化學(xué).血漿β-羥基丁酸和丙三醇應(yīng)用商業(yè)工具來測(cè)定(Sigma，St，Louis，MO)。血漿催乳素、腎上腺酮和黃體激素通過放射免疫測(cè)定來定量(Navarro等，J.Neuroreport.，8491-496(1997))。
喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn).急性實(shí)驗(yàn).測(cè)定24-h禁食的大鼠食物攝入量(Navarro等，J.Neurochem.，671982-1991(1996))，在給予食物前15分鐘給藥。亞急性實(shí)驗(yàn)。Ad libitum喂養(yǎng)的大鼠接受賦形劑注射3天。在第4天，將動(dòng)物分為相同的兩組，連續(xù)7天每天給它們注射賦形劑或OEA(1900h時(shí)5mg/kg)，同時(shí)測(cè)體重、食物攝入和水的攝入。
有條件的味道的轉(zhuǎn)變.大鼠禁水24-h，然后習(xí)慣于在30分鐘實(shí)驗(yàn)期間從分級(jí)瓶中飲水，這樣持續(xù)4天。在第5天，用0.1％的糖精溶液替代水，30分鐘后給動(dòng)物注射賦形劑，OEA(20mg/kg)或氯化鋰(0.4M，7.5ml/mg)。在接下來的兩天中，經(jīng)過30分鐘的實(shí)驗(yàn)時(shí)間記錄水的消耗量。然后給與動(dòng)物水、糖精和再測(cè)得飲用量。
對(duì)于食物的動(dòng)作反應(yīng).訓(xùn)練大鼠根據(jù)一設(shè)定的比實(shí)施例1(FR1)補(bǔ)充時(shí)間表按杠桿來飲食，然而在每天每只大鼠限制20g食物(Rodriguez de Fonseca等.，ActaPharmacol.Sin.，201109-1114(1999))。一旦獲得穩(wěn)定的反應(yīng)，訓(xùn)練動(dòng)物獲得FR5，休息2分鐘食物補(bǔ)充，并保持它們能有限的獲得食物。當(dāng)獲得的一穩(wěn)定的基準(zhǔn)時(shí)，用這些動(dòng)物來測(cè)試在杠桿給食15分鐘前施用的賦形劑或OEA(1，5或20mg/kg)的效果。測(cè)試時(shí)間是60分鐘。
其他行為的測(cè)定。在施用賦形劑或OEA(20mg/kg)后，如所描述的那樣實(shí)施舉重和迷宮實(shí)驗(yàn)(elevated plus maze test)(Navarro等，J.Neuroreport.，8491-496(1997))。在開放領(lǐng)域的水平活性(Beltramo等.，Neurosci.，203401-3407(2000))和在熱盤實(shí)驗(yàn)中(55℃)的疼痛界限(Beltramo等.，Scinece，2771094-1097(1997))于注射賦形劑或OEA(20mg/kg)15分鐘后測(cè)定。使用一數(shù)字測(cè)溫計(jì)來測(cè)定直腸溫度(Martin-Calderon等.，Eur.J.Pharmacol.，34477-86(1998))。
原位雜交.通常將大鼠處理和進(jìn)行注射5天。在第6天，施用賦形劑或藥物OEA(10mg/kg)或油酸(10mg/kg)。60分鐘后在麻醉下通過斷頭將大鼠殺掉。使用來c-fos3 5的S標(biāo)記的cRNA探針(Guthrie等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，903329-3333(1993))和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)(Lauterborn等，Brain Res.Mol.BrainRes.，1759-69(1993))進(jìn)行原位雜交分析。通過每只大鼠的至少3個(gè)組織部分來測(cè)定平均雜交密度。使用變化的一種分析(ANOVA)，接著用Tukey-Kramer后面的測(cè)定成對(duì)的對(duì)照物來評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
數(shù)據(jù)分析.結(jié)果表達(dá)為平均值±n個(gè)不同實(shí)驗(yàn)的s.e.m。使用(ANOVA)，接著用Student-Newman-Keuls后面的實(shí)驗(yàn)，除非另外表示，來評(píng)價(jià)各組間的差異的顯著性。
實(shí)施例3饑餓對(duì)于大鼠OEA和其他FAE水平的影響在某一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療的方法，其中個(gè)人是需要減少體重和/或體脂，并在禁食前和/或期間測(cè)試OEA水平的。在禁食前或?qū)τ诮撤磻?yīng)后OEA水平低的個(gè)人特別是本治療的目標(biāo)。
當(dāng)定期的通過高效液態(tài)色譜法(HPLC)和電噴質(zhì)譜法(MS)測(cè)定心臟血液中FAE水平時(shí)，大鼠被禁食。在禁食的頭12小時(shí)，血漿OEA保持在基準(zhǔn)水平，在18-24小時(shí)顯著上升，在30小時(shí)時(shí)又回降到正常(圖1a)。在禁水(圖1b)或應(yīng)用抑制劑如制動(dòng)劑和脂多糖(LPS)給藥后[pmol/ml；10.3±0.8；在15分鐘制動(dòng)后的60分鐘，8.4±1.6；注射LPS后的60分鐘(1mg/kg)，7.0±0.7；n＝6-9]沒發(fā)現(xiàn)這樣的效應(yīng)。血漿PEA的濃度不明顯受任何這些治療的影響(數(shù)據(jù)未顯示)，然而當(dāng)食物去除后，anandamide迅速下降，保持在低于整個(gè)實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間的基準(zhǔn)水平(圖1d)。在制動(dòng)后，(以pmol/ml；控制，3.6±0.4；制動(dòng)，1.1±0.5；n＝7-8；P＜0.01)，LPS治療(控制，2.0±0.5；LPS，0.2±0.2；n＝6；P＜0.01)以及不明顯的禁水(圖1e)，anandamide水平也下降。這些結(jié)果表明，循環(huán)OEA的水平在禁食期間瞬間的提高。這一反應(yīng)是有選擇性的對(duì)于OEA來說的，anandamide和其他FAEs不出現(xiàn)，并且同時(shí)發(fā)生血中甘油和β-羥基丁酸(表1)的上升，這表明能量的代謝從以碳水化合物為主要燃料轉(zhuǎn)變?yōu)橐灾舅釣橹饕剂?Cahill，G.F.，Clin.Endocrinol.Metab.，5397-415(1976))。
表1. 禁食大鼠體內(nèi)血漿β-羥基丁酸(β-HBA)水平β-HBA 甘油自由喂養(yǎng) 1.2±0.4 4.6±0.9禁食2小時(shí)1.2±0.2 5.3±0.6禁食4小時(shí)0.8±0.1 9.1±1.8禁食8小時(shí)1.3±0.2 6.3±0.4禁食12小時(shí) 4.6±0.8* 7.6±1.0*禁食18小時(shí) 6.8±0.4* 8.4±0.4*禁食24小時(shí) 9.1±1.2* 8.4±0.3*濃度是以mg/dl單位 每一組*P＜0.05，n＝3腦脊液中OEA的水平不明顯的受禁食的影響(圖1c)，意味著血漿OEA是猛升是在CNS之外產(chǎn)生的。為了測(cè)試這個(gè)假設(shè)，研究禁食對(duì)于大鼠各種組織中OEA代謝的影響。動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生和降解OEA和其他FAEs的生化途徑被認(rèn)為包括三個(gè)主要的酶促應(yīng)步驟。鈣離子激活的NAT活性，將脂肪酸基從供體磷脂的sn-1部位轉(zhuǎn)移到磷脂酰乙醇胺的主氨基部位，這樣產(chǎn)生NAPE2(Schmid等，Chem.Phys.Lipids，80133-142(1996)；Piomelli等，Neurobiol.Dis.，5462-473(1998))，它最終會(huì)被細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)分解為脂肪酸和乙醇胺(Schmid等，J.Biol.Chem.，26014145-14149(1985)；Cravatt等.，Nature，38483-87(1996))。禁食(18h)伴隨發(fā)生白色脂肪組織中的NAT活性的顯著增加(圖2a)，但腦、胃和腎中的不增加(圖2b，d，數(shù)據(jù)沒顯示)。在肝臟、腸和骨骼肌中，NAT的活性由于禁食而降低(圖2c，d，數(shù)據(jù)沒顯示)。這些酶促的變化伴隨著相應(yīng)的NAPE組織內(nèi)容物的變化。大鼠組織中出現(xiàn)許多分子種類的NAPE，包括OEA前體堿-1-palmitoenyl-2-花生四烯酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(NAPE1；圖3a)和堿-1-棕櫚酰-2-花生四烯基酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(NAPE2；圖3a)；以及PEA前體堿-1-棕櫚酰-2-花生四烯基酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-棕櫚酸基(沒顯示)。和NAT活性測(cè)定一致，禁食增加了脂肪中的NAPE含量，減少了肝臟中含量(圖3b，c)。
由于NAPE的生物合成和FAE形成是緊密結(jié)合的過程(Cadas等，H.，J.Neurosci.，171226-1242(1997))，人們就期望禁食會(huì)提高脂肪中OEA和其他FAEs的水平，但其他組織不是。相應(yīng)的，饑餓的大鼠要比自由喂養(yǎng)大鼠的脂肪中包含更多的OEA和PEA(圖3d，數(shù)據(jù)沒顯示)，然而，在大腦、胃和腸中沒見到這種不同(數(shù)據(jù)沒顯示)。和我們所期待的相反，然而，禁食大鼠肝臟中含有的OEA和PEA也比自由喂養(yǎng)大鼠的要高(圖3d數(shù)據(jù)沒顯示)。這個(gè)不一致也許是由于FAE在肝臟中積聚造成的，這和這個(gè)器官在FAE重?cái)z取和代謝中推測(cè)的作用是一致的(Bauchur等，J.Biol.Chem.，2401019-1024(1965)；Schmid等J.Biol.Chem.，26014145-14149(1985))。
由酶FAAH催化水解為脂肪酸和乙醇胺是FAE降解過程中的一關(guān)鍵步驟(Bauchur等，J.Biol.Chem.，2401019-1024(1965)；Schmid等J.Biol.Chem.，26014145-14149(1985)；Cravatt等.，Nature，38483-87(1996)；Desarnaud等，J.Biol.Chem.，2706030-6035(1995))。禁食大大的降低了脂細(xì)胞膜中FAAH的活性，但對(duì)于大腦、肝、胃、腸、腎和骨骼肌中的FAAH活性沒影響(圖2a-e沒顯示數(shù)據(jù))。因此，禁食以兩種互相促進(jìn)方法提高了白脂肪中OEA和其他FAEs的水平，這兩種方法在機(jī)制上和脂解期間發(fā)生的其他反應(yīng)不一樣NAT活性的激活會(huì)導(dǎo)致NAPE和FAEs生物合成的增加，然而抑制FAAH的活性會(huì)延長(zhǎng)新合成FAEs的生存時(shí)間。雖然許多組織對(duì)于血流中正常水平的OEA有作用，但是在脂肪中觀察到的動(dòng)態(tài)生化改變強(qiáng)調(diào)了這個(gè)組織在饑餓期間產(chǎn)生OEA的關(guān)鍵作用。
實(shí)施例4.OEA和其他FAEs對(duì)食物攝入的抑制可以應(yīng)用24小時(shí)禁食來評(píng)價(jià)系統(tǒng)性的施用OEA對(duì)大鼠食物攝入的影響。在這個(gè)系統(tǒng)中，OEA導(dǎo)致了一種劑量-和時(shí)間-依賴的食物攝入的抑制(圖4a，b)。為了闡述這個(gè)反應(yīng)的選擇性，測(cè)定各種各樣的OEA類似物他們產(chǎn)生hypophagia能力。
Anandamide和油酸沒有效果。
棕櫚酰乙醇胺有活性但明顯弱于OEA。
反油酰乙醇胺(一種不尋常OEA類似物)和OEA的能力相似(圖4a)。
這些結(jié)果表明，OEA以一種結(jié)構(gòu)選擇的方式來減少飲食，并且其他脂肪酸乙醇胺似的化合物也可以根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用而辨認(rèn)。
實(shí)施例5.大麻酯受體激動(dòng)劑的專一性O(shè)EA hypophagia的必需分子和那些參與Anandamide及其已知的大麻酯目標(biāo)反應(yīng)的分子不同(Khanolkar等，Life Sci.，65607-616(1999))。大麻酯受體激動(dòng)劑不影響活體中的OEA hypophagia，并且在活體中OEA不替代大麻酯結(jié)合到大鼠的細(xì)胞膜上。因此，雖然它和Anandamide有結(jié)構(gòu)和生物基因上的關(guān)系，但OEA不依靠?jī)?nèi)源的大麻酯體系來產(chǎn)生厭食癥。
實(shí)施例6.持續(xù)的體重減少在一些實(shí)施方案中，現(xiàn)在的發(fā)明所述的化合物在延長(zhǎng)對(duì)哺乳動(dòng)物給藥的基礎(chǔ)上提供了持續(xù)的體脂或體重的減少。在急性給藥后許多藥物抑制飲食時(shí)，但治療延長(zhǎng)而失效時(shí)，這種作用是有利的(Blundell，J.，Trends Pharmacol.Sci.，12147-157(1991))。
OEA亞急性的施用于大鼠。每天注射OEA(5mg/kg)，持續(xù)7天產(chǎn)生逐漸的食物攝入較小但明顯的下降，伴隨著的是體重增加的明顯的抑制(圖5b，c)。OEA不影響水的攝入(圖5d)。OEA對(duì)于體重的影響僅僅部分的解釋為它適度的減少了食物消耗，表明其他因素，如能量消耗的刺激或能量累積的抑制也對(duì)這個(gè)效應(yīng)有作用。
實(shí)施例7.FAEs有外周的作用位點(diǎn)在本發(fā)明的的一個(gè)方面，它提供了有外周作用位點(diǎn)的化合物。如有利于減少中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用的位點(diǎn)。
雖然外周給藥是有用的，但OEA在直接注射入腦室后就沒效果(表2)，表明這種化合物起作用的主要位點(diǎn)是在CNS外面。進(jìn)一步闡述，對(duì)成年的大鼠在施用神經(jīng)毒劑、辣椒素后，它們迷走神經(jīng)中的感覺纖維和其他外周神經(jīng)都被化學(xué)性的破壞了(Kaneko等，Am.J.Physiol.，275G1056-G1062(1998))。辣椒素處理過的大鼠，不會(huì)對(duì)外周施用的膽囊收縮素-8(CCK-8)有反應(yīng)(圖6a，c)，比控制的組飲更多的水(圖6b，d)，丟失了角膜的化學(xué)感應(yīng)反射(數(shù)據(jù)沒有顯示)，表明神經(jīng)毒素毀掉了傳入的感覺神經(jīng)(MacLean，D.B.，Regul.Pept.，11321-333(1985)；Ritter等，Am.J.Physiol.，248R501-R504(1985)；Curtis等，Am.J.Physiol.，272R704-R709(1997))。接受治療的動(dòng)物也不會(huì)對(duì)OEA反應(yīng)(10mg/kg)，但通常能對(duì)化合物CP-93129有反應(yīng)，它的目標(biāo)是CNS中的5-HT1B受體(圖6a，c)(Lee等，Psychopharmacology，136304-307(1998))。這些發(fā)現(xiàn)支持OEA通過作用于外周位點(diǎn)而產(chǎn)生hypophagia并且這個(gè)作用是需要感覺纖維的假說。
表2. 腦室內(nèi)的pranamide對(duì)于食物攝入的影響60分鐘120分鐘 240分鐘賦形劑 5.8±0.6 8.0±0.5 9.5±0.5prana 0.4μg 4.8±0.4 6.6±0.4 8.4±0.4prana 2μg 4.9±0.4 6.6±0.6 8.7±0.5prana10μg 5.9±0.2 8.1±0.4 9.6±0.7在給予食物前15分鐘對(duì)24小時(shí)禁食的大鼠施用pranamide/OEA(prana，μg/動(dòng)物)或賦形劑(DMSO，5μl)每組n＝12
本發(fā)明的化合物應(yīng)用外周感覺輸入來抑制食欲。和食欲抑制相關(guān)的外周感覺輸入和許多CNS結(jié)構(gòu)相聯(lián)系，包括腦干中的孤束核(NST)和在視丘下部的弓形室旁核(PVN)(Schwarts等，Nature，404661-671(2000))。為了弄清在OEA引起的hypophagia中參與的大腦通路，在系統(tǒng)性施用OEA、油酸或賦形劑后通過原位雜交來描繪活性控制基因c-fos(Curran等，Oncogene，279-84(1987))的mRNA水平。和控制組相比較，OEA(10mg/kg)引起PVN、視上核(圖7a)和NST(圖7c)中c-fosmRNA水平高度局限性的增加。這種提高對(duì)于這些區(qū)域來說是有特異性的，在這種情況下，c-fos在大腦其他區(qū)域的表達(dá)受OEA治療影響不明顯(圖7b，d)。發(fā)現(xiàn)OEA促進(jìn)了c-fosmRNA在NST(它傳輸迷走神經(jīng)感覺到CNS)和PVN(中樞能量信號(hào)合成的主要位點(diǎn))中的表達(dá)(Schwartz等，Nature，404661-671(2000))，這和這種脂作為厭食癥的外周遞質(zhì)而有的生理作用是相一致的。
OEA通過引起一種非特異的行為抑制狀態(tài)來減少飲食是可能的。如過這是事實(shí)，那OEA一定引起特定味道的轉(zhuǎn)變，這可以由許多毒性物質(zhì)(Green等，Science，173749-751(1971))包括氯化鋰(圖4c)，在大鼠中逐漸引起。然而，最大劑量的OEA(20mg/kg)在這項(xiàng)測(cè)定中效果很小(圖4c)，表明化合物沒有被轉(zhuǎn)化。許多另外的觀察值都支持OEA的行為特性。OEA不改變水的攝入、體溫、痛閾(圖4d-f)或視丘下部-垂體-腎上腺(HPA)軸的活性(表3)。而且，OEA不產(chǎn)生焦慮癥(圖4g)以及它雖然抑制運(yùn)動(dòng)和對(duì)于食物的動(dòng)作反應(yīng)，但它產(chǎn)生這樣作用的劑量要比那些產(chǎn)生hypophagia的要高得多(圖4h-i)。這種藥學(xué)特點(diǎn)使得OEA和其他的食欲抑制劑不同，如安非他明和胰高血糖素樣的肽1(它們的作用都經(jīng)常包括厭食、活動(dòng)過度、焦慮和HPA軸的激活)，還有如內(nèi)源大麻酯anandamide(它刺激了半飽動(dòng)物的食物攝入，提高了痛閾、降低了體溫和HPA軸的活性)(Pertwee，R.G.，Exp.Opin.Invest.Drugs，91553-1571(2000))。
表3.OEA對(duì)血漿荷爾蒙水平的影響B(tài)PRLLH賦形劑212±24 10.8±2.7 5.3±0.9prana20 280±61 8.2±3.2 6.2±1.5在表3中，血漿腎上腺酮(B)、催乳素(PRL)和黃體生成素(LH)的水平是通過血漿樣品的放射免疫測(cè)定來測(cè)定的，這種血漿樣品是在注射賦形劑或pranamide(prana mg/kg)60分鐘后收集的，并單位為ng/ml，n＝6-9/組。
OEA在生理相關(guān)劑量時(shí)引起hypophagia。在施用最大有效劑量(5mg/kg)一半1小時(shí)后，循環(huán)中OEA的水平(16.1±2.6pmol/ml)明顯高于基準(zhǔn)水平(10.1±1.1；P＜0.05，斯氏t檢驗(yàn)；n＝5)，但低于那些在禁食18小時(shí)動(dòng)物中水平(圖1a)。因此，在禁食期間血中達(dá)到的OEA水平足夠產(chǎn)生明顯的行為反應(yīng)。
實(shí)施例8. 辨認(rèn)本發(fā)明減少體脂的化合物以下的實(shí)施例闡明了使用OEA作為正對(duì)照時(shí)如何來辨認(rèn)食欲抑制劑。特別討論了OEA的合成，體脂減少和脂肪酸氧化的測(cè)定。
OEA的合成油酰氯從Nu-Check Prep(Elysian，MN)購買或按照標(biāo)準(zhǔn)步驟配制。油酰氯溶解在二氯甲烷中(10mg/ml)，在4℃條件下讓它和五種乙醇胺的等價(jià)物反應(yīng)15分鐘。加入純水終止反應(yīng)。在積極攪拌和分離各相后，丟棄上層水相物質(zhì)并用水將有機(jī)相物質(zhì)洗滌兩次來去除沒反應(yīng)的乙醇胺。所得OEA在N2氣中濃縮干燥，重組為20mM的氯化形式，存儲(chǔ)在-20℃下直到使用。
測(cè)定候選化合物引起的體脂的減少化合物減少體脂的能力可用許多方法來評(píng)價(jià)。例如，通過腹膜內(nèi)注射來給予大鼠合適劑量的OEA和/或候選化合物。OEA和候選化合物可在70％的DMSO的無菌鹽溶液，5％的Tween 80/5％的丙烯乙二醇無菌鹽溶液，或10％的Tween 80/10％乙醇/80％鹽溶液。5mg/kg的OEA可以作為正對(duì)照。施用的候選化合物的量可在1-25mg/kg變化。將典型的1，2，5，10，15和20mg/kg劑量的每種候選化合物施用于不同組別的大鼠來測(cè)定哪一劑量是最佳的。在動(dòng)物主食之前30分鐘進(jìn)行注射，持續(xù)7-14天。
測(cè)定候選化合物對(duì)于總體重的影響可以通過使用皮膚褶測(cè)徑器直接測(cè)量體脂。大鼠背上、腹部、胸部、前后腿的皮膚可以用測(cè)徑器夾緊，在施用OEA和/或候選化合物前以及施用期間和施用后每48小時(shí)進(jìn)行測(cè)量。至少兩個(gè)夾緊部位的測(cè)得值不同反應(yīng)出大鼠總體脂的變化。
測(cè)定由候選化合物引起的脂肪酸氧化也可以測(cè)定化合物對(duì)于脂肪酸氧化的影響。候選化合物對(duì)脂肪酸代謝的影響可以通過測(cè)定肝細(xì)胞原始培養(yǎng)物中的脂肪酸氧化來測(cè)定?？梢詰?yīng)用肝細(xì)胞來測(cè)定油酸氧化成酮體和二氧化碳的率。這樣的細(xì)胞可以通過酶消化從成年大鼠肝臟中分離出來，由Beynen等在Disbetes28828(1979)中描述。細(xì)胞典型的用懸浮液培養(yǎng)，在Krebs-Henseleit’s碳酸氫鹽介質(zhì)中保溫，這種介質(zhì)由牛血清和葡萄糖組成，由Guzman&Geelen，Biochem.J.287487(1992)描述。可以測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞的蛋白質(zhì)濃度并將細(xì)胞接種在2ml的介質(zhì)中，這樣反應(yīng)混合物中就出現(xiàn)4-6mg蛋白質(zhì)/ml。在37℃條件下細(xì)胞和[14C]-油酸(Amershamy)起保溫10分鐘，10μmOEA存在或不存在，用200μl 2M高氯酸和從氯仿/甲醇/水(5∶1∶1，體積∶體積∶體積)提取的酸溶性的產(chǎn)物來終止反應(yīng)。水相物質(zhì)被去除，洗滌兩次以上。用Lowry測(cè)定法來測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。油酸轉(zhuǎn)化為酮體的率可以表達(dá)為每小時(shí)每mg蛋白質(zhì)氧化的油酸的nmol數(shù)，并可以應(yīng)用液態(tài)閃爍粒計(jì)數(shù)來測(cè)定。相應(yīng)的，OEA增加了21+-6％油酸的氧化(n＝4，p＜0.01和斯氏t檢驗(yàn)的對(duì)照保溫)。
實(shí)施例9.OEA對(duì)于脂肪酸代謝的影響油酰乙醇胺(OEA)降低體重，不僅僅通過抑制食欲，還通過可能性的提高體脂的代謝。調(diào)查了OEA對(duì)于主要體脂燃燒組織(比目魚肌、肝臟、培養(yǎng)的心肌細(xì)胞和星形細(xì)胞)中脂肪酸氧化。OEA明顯的激發(fā)了在原始肝細(xì)胞培養(yǎng)物、骨骼肌(比目魚肌)和心臟細(xì)胞中的脂肪酸氧化，然而，它對(duì)腦起源的星形細(xì)胞培養(yǎng)物無效。另外，OEA引起了主要白色脂肪組織細(xì)胞中存儲(chǔ)的甘油三脂的動(dòng)員。表4詳述了方法和OEA對(duì)這些細(xì)胞中脂肪酸氧化的影響。結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系實(shí)驗(yàn)提供了一個(gè)事實(shí)，那就是OEA對(duì)于骨骼肌脂肪酸氧化的影響是特異的(圖8)。因此，OEA的效應(yīng)被抗水解的同系物甲基-OEA所模仿，僅部分的被棕櫚酰乙醇胺(PEA)模仿，但花生四烯酸乙醇胺(AEA)或油酸(OA)卻不是的。簡(jiǎn)要的說，這些結(jié)果表明OEA增加了脂類的氧化和動(dòng)員，OEA的效應(yīng)局限在外周部位。
表4
應(yīng)用的參考Beynen AC等，Disbetes 28828-835(1979)；Blazquez C等，J.Neurochem 711597-1606(1998)；Chiasson RB“白鼠的實(shí)驗(yàn)室解剖”WBC，Dubu-Que，Iowa(1980)；Funk IL等，J.Biol.Chem2679917-9924(1992)；FruebisJ等，ProcNatl Acad Sci USA 982005-2010(2001)；Guzman M等，BiochemJ287487-492(1992)；McCarthy KD等，J Cell Biol 85890-902(1980)；RodbellM J.Biol.Chem239375-380(1964)；Rodbell M Ann NY Acad Sci 131302-314(1965)；Serradeil-Le Gal C等，F(xiàn)EBS Left 475150-156(2000)；Wu W等J.Biol.Chem27540133-40119(2000)。
實(shí)施例10.腸道中內(nèi)源OEA的作用考查了進(jìn)食對(duì)于腸道OEA生物合成的影響。高質(zhì)的液相色譜法/質(zhì)譜分析揭示了自由喂養(yǎng)的大鼠的小腸組織包含了相當(dāng)數(shù)量的OEA(354±86pmmol/g，n＝3)。腸道OEA是水平在禁食后顯著下降，但在重新進(jìn)食后又回到了基準(zhǔn)水平。相比之下，胃中沒有發(fā)現(xiàn)這種變化(pmol/g；對(duì)照210±20，饑餓，238±84饑餓/重新進(jìn)食，239±60，n＝3)。腸道OEA水平的變化伴隨著NAT活性平行的平行改變，這參與了OEA的形成，但催化OEA水解的脂肪酸酰胺水解酶的活性沒有改變。這些發(fā)現(xiàn)表明，饑餓和進(jìn)食相反的調(diào)節(jié)小腸中OEA的生物合成。和腹內(nèi)OEA的來源一樣，發(fā)現(xiàn)饑餓大鼠血漿中的OEA水平在門靜脈時(shí)要比在腔靜脈高(pmol/ml，門靜脈，14.6±1.8；腔靜脈，10.3±2.8；n＝5)?，F(xiàn)在，其他腹腔組織對(duì)于OEA的形成的作用是不能排除的。這些結(jié)果建議許多介入應(yīng)用OEA系統(tǒng)來喂養(yǎng)。根據(jù)這個(gè)模型，進(jìn)食會(huì)激活NAT活性來提高小腸中也可能其他腹腔組織中OEA的生物合成。新產(chǎn)生OEA會(huì)激活局部的感覺纖維，而它作為反饋會(huì)通過介入大腦結(jié)構(gòu)如NST和PVN來抑制進(jìn)食。
我們的結(jié)果揭示了OEA在進(jìn)食的外周調(diào)節(jié)中的未預(yù)料到的作用，并提供了一種開發(fā)新藥的框架，用它們來治療減少體重和體脂，來預(yù)防體重或體脂的增加，來抑制食欲或減少覓食行為或食物的攝入，來治療飲食的失調(diào)、超重或肥胖。這些藥物不僅僅包括OEA類似物和同系物，也包括那些如上面所述的通過作用于OEA形成和水解系統(tǒng)和酶來控制OEA水平的藥物。
這一詳述中所引用的所有出版物和專利申請(qǐng)，這里引入作為參考，到和現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)不矛盾的程度，好象明確的和單獨(dú)的表明每個(gè)單獨(dú)的出版物或?qū)＠暾?qǐng)是引入作參考的。
雖然先前為了清楚的理解，用闡述和實(shí)施例來詳細(xì)的描述了這項(xiàng)發(fā)明，但是在這項(xiàng)發(fā)明的指導(dǎo)之下，對(duì)于它特定的變化和修改不會(huì)離開附加的權(quán)利要求的主旨和范圍，這一點(diǎn)對(duì)于文中那些普通的技術(shù)員來說是顯而易見的。
權(quán)利要求
1.一種減少哺乳動(dòng)物食物攝入的方法，其特征在于，所述方法包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用脂肪酸鏈烷醇酰胺，其中，所述施用是以減少所述哺乳動(dòng)物食物攝入的有效劑量進(jìn)行的。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸鏈烷醇酰胺是油酰乙醇胺。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸鏈烷醇酰胺包括通過酰胺鍵共價(jià)連接到乙醇胺部分的脂肪酸部分。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸部分是單不飽和或多不飽和的。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述給藥是通過透皮貼進(jìn)行的。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述脂肪酸部分是油酸。
7.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸部分含有12-20個(gè)碳原子。
8.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸選自反油酸、棕櫚油酸、棕櫚酸、亞油酸、α-亞麻酸和γ-亞麻酸。
9.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述乙醇胺部分的羥基被低級(jí)(C1-C3)烷基所取代而形成相應(yīng)的酯。
10.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述乙醇胺部分的羥基和低級(jí)(C2-C6)烷基羧酸的羧基結(jié)合而形成相應(yīng)的酯。
11.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸乙醇胺進(jìn)一步包含和脂肪酸乙醇胺的氮原子共價(jià)結(jié)合的低級(jí)(C1-C3)烷基。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述哺乳動(dòng)物是人。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸鏈烷醇酰胺是棕櫚酰乙醇胺。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸鏈烷醇酰胺不激活大麻酯CB2或大麻酯CB1受體。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述所述脂肪酸鏈烷醇酰胺和一種藥學(xué)上可接受的載體通過口服、直腸、局部或非胃腸途徑給藥。
16.一種減少或控制哺乳動(dòng)物體脂或體重的方法，其特征在于，所述方法包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用可有效減少體脂或體重劑量的具有結(jié)構(gòu)式 的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，n是0-5，a和b的和可為0-4；Z成分選自-C(O)N(R0)-；-(R0)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR0和S；其中R0和R2獨(dú)立選自未取代或未取代的烷基、氫、C1-C6的烷基和低級(jí)(C1-C6)?；?，其中，其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四個(gè)氫原子被甲基或雙鍵取代，碳c和d之間的鍵可以是不飽和或飽和的。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述化合物的式為 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，n是0-4，a和b的和為1-3；其中R1和R2獨(dú)立選自取氫、C1-C6烷基、低級(jí)(C1-C6)?；?，其中，其脂肪酸部分和鏈烷醇胺部分最多有四個(gè)氫原子被甲基或雙鍵取代，碳c和d之間的鍵可以是不飽和或飽和的。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，R1和R2獨(dú)立選自取氫、C1-C3烷基和低級(jí)(C1-C3)?；?。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，a＝1，b＝1。
20.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，n＝1。
21.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，R1和R2都是H。
22.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，碳c和d之間的鍵是雙鍵。
23.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述化合物是油酰乙醇胺。
24.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述化合物是棕櫚酰乙醇胺。
25.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述給藥途徑是胃腸外、口服、經(jīng)皮、直腸或鼻腔內(nèi)。
26.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述哺乳動(dòng)物是人。
27.如權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述所述化合物為下式之一 其中，n是1-5，a和b的和是0-4；R2選自氫、C1-C6烷基和低級(jí)(C1-C6)酰基；且其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四個(gè)氫原子可被甲基或雙鍵取代。
28.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物含有藥學(xué)上可接受的賦形劑和式 的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，n是0-5，a和b的和為0-4；Z成分選自-C(O)N(R0)-；-(R0)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR0和S，其中R0和R2獨(dú)立選自未取代或未取代的烷基、氫、C1-C6烷基和低級(jí)(C1-C6)酰基，其中，其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四個(gè)氫原子被甲基或雙鍵取代，碳c和d之間的鍵可以是不飽和或飽和的。
29.如權(quán)利要求28所述的組合物，其中，所述化合物式為 或該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，其中，n是1-3，a和b的和為1-3；其中R1和R2獨(dú)立選自取氫C1-C6烷基和低級(jí)(C1-C6)?；?，其中，其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四個(gè)氫原子被甲基或雙鍵取代，碳c和d之間的鍵可以是不飽和或飽和的。
30.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，所述組合物是單位劑量的形式，所述單位劑量包含有效減少或控制體重的量的化合物。
31.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，所述劑量大約是10-1000mg。
32.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，所述劑量大約是1-100mg。
33.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，所述劑量大約是100-500mg。
34.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，所述化合物是棕櫚酰乙醇胺。
35.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，所述組合物是局部、口服、胃腸道外給藥的組合物。
36.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，R1和R2獨(dú)立選自取氫、C1-C3烷基和低級(jí)(C1-C3)酰基。
37.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，a＝1，b＝1，n＝1。
38.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，所述化合物是油酰乙醇胺。
39.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中，R1和R2都是H。
40.如權(quán)利要求30所述的組合物，其中，碳c和d之間的鍵是雙鍵。
41.如權(quán)利要求30所述的組合物，其中，所述化合物是棕櫚酰乙醇胺。
42.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的賦形劑和式 的化合物，其中，a和b的和為0-4，上式脂肪酸部分最多有四個(gè)氫原子也可被甲基或雙鍵取代，碳c和d之間的鍵可以是不飽和或飽和的。R代表選自直鏈或支鏈烷基胺、環(huán)烷基胺、呋喃、四氫呋喃、吡咯、吡咯烷和嘧啶的基團(tuán)；其中，所述化合物以減少食物攝入的有效劑量來對(duì)哺乳動(dòng)物給藥。
43.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物含有藥學(xué)上可接受的賦形劑和有效量的脂肪酸鏈烷醇酰胺，以在對(duì)哺乳動(dòng)物給藥后減少體重
44.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中，所述脂肪酸部分是油酸。
45.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中，所述脂肪酸部分有12-20個(gè)原子。
46.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中，所述脂肪酸部分選自反油酸、棕櫚油酸、棕櫚酸、亞油酸、α-亞麻酸和γ-亞麻酸。
47.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中，所述鏈烷醇酰胺的鏈烷醇胺是乙醇胺。
48.如權(quán)利要求46所述的組合物，其中，所述組合物是帶有腸衣的口服制劑。
全文摘要
提供了降低體重，調(diào)節(jié)身體脂類代謝，以及減少哺乳動(dòng)物食物攝入的方法、藥物組合物和化合物。本發(fā)明的化合物包括脂肪酸乙醇胺化合物，以及它的同系物和類似物，它們的原型都是內(nèi)源脂肪酸乙醇胺和油酰乙醇胺。
文檔編號(hào)A61K31/08GK1523982SQ02809341
公開日2004年8月25日 申請(qǐng)日期2002年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月27日
發(fā)明者D·皮諾梅里, F·R·德馮賽卡, D 皮諾梅里, 德馮賽卡 申請(qǐng)人:加利福尼亞大學(xué)董事會(huì)