可抑制iPS細(xì)胞的腫瘤化的分化誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的在于提供一種抑制iPS細(xì)胞的腫瘤化，使之分化誘導(dǎo)為目標(biāo)分化細(xì)胞的技術(shù)。通過使用他汀和分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞，能夠使之分化為腫瘤化被抑制了的分化細(xì)胞。
【專利說明】可抑制i PS細(xì)胞的腫瘤化的分化誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及在抑制iPS細(xì)胞的腫瘤化的情況下使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]人的iPS細(xì)胞已被建立(例如，參見非專利文獻(xiàn)I以及專利文獻(xiàn)I)，人們期待其向再生醫(yī)療的應(yīng)用。iPS細(xì)胞是指也被稱為人工多功能性干細(xì)胞或者誘導(dǎo)多功能性干細(xì)胞的、獲得了分化多能性的細(xì)胞，通過向體細(xì)胞(例如，成纖維細(xì)胞等)導(dǎo)入編碼賦予分化多能性的多種類的轉(zhuǎn)錄因子，例如，Oct家族(0ct3/4)、Sox家族(Sox2、Soxl、Sox3、Soxl5以及 Soxl7 等)、Klf 家族(Klf4、Klf2 等)、Myc 家族(c_Myc、N-Myc、L-Myc 等)、Nanog、LIN28等的基因，獲得分化多能性的細(xì)胞。
[0003]具有分化多能性的細(xì)胞除了 iPS細(xì)胞以外，眾所周知還有ES細(xì)胞，然而ES細(xì)胞因其起源為胚胎而具有生命倫理的問題，在以再生醫(yī)療作為目的的使用中存在問題。另一方面，由于iPS細(xì)胞可從採(cǎi)取比較容易的皮膚、血液建立，能夠避免這樣的問題。并且，由于能從需要治療的患者自身組織獲得iPS細(xì)胞，而無(wú)免疫排斥的問題，期待使再生醫(yī)療大步前進(jìn)。
[0004]近年，在牙科、整形外科的領(lǐng)域中，進(jìn)行了使iPS細(xì)胞分化誘導(dǎo)獲得成骨細(xì)胞，利用于牙槽骨、軟骨的再生的嘗試。例如，在牙科領(lǐng)域，由于失去了牙的患者下顎消瘦，因此有大量牙科種植治療、義齒治療變得困難的情況。在這種情況下，通過將成骨細(xì)胞移植至下顎的骨缺損部位，使牙槽骨再生，從而使進(jìn)行種植埋入等成為可能。從患者本人的體細(xì)胞建立iPS細(xì)胞、并將其分化誘導(dǎo)而得到的成骨細(xì)胞也沒有必要擔(dān)心免疫排斥。并且，已經(jīng)由本
【發(fā)明者】們確認(rèn)到若利用口腔內(nèi)上皮細(xì)胞、口腔內(nèi)成纖維細(xì)胞，則iPS細(xì)胞的建立効率非常高(例如，參考專利文獻(xiàn)2)。
但是，iPS細(xì)胞正由于其多功能性，在移植后腫瘤化的情況成為重大問題。為了解決該課題，現(xiàn)在提出了以下方法:以iPS細(xì)胞的腫瘤形成標(biāo)記為指標(biāo)分選腫瘤形成細(xì)胞而除去的方法(例如，參考非專利文獻(xiàn)2)，通過在試驗(yàn)管內(nèi)使用FACS等對(duì)定向?yàn)槟繕?biāo)組織的iPS細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞分選，選擇目標(biāo)細(xì)胞，將其用于移植的方法。然而，這些技術(shù)中存在難于確保細(xì)胞數(shù)量、伴有污染的危險(xiǎn)性這些缺點(diǎn)。
[0006]這樣，雖然人們非常期待iPS細(xì)胞向再生醫(yī)療的應(yīng)用，但由于存在上述那樣的問題而現(xiàn)在并未被實(shí)用化。即，為了 iPS細(xì)胞的臨床應(yīng)用，人們非常期望解決腫瘤化抑制這一課題。
[0007]另一方面，HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀)介由膽固醇合成抑制作用而作為高脂血癥治療藥被廣泛在臨床中使用。近年，確認(rèn)了他汀對(duì)于各種細(xì)胞的分化、增殖具有多種多樣的藥理作用。但是，本領(lǐng)域并不知曉將iPS細(xì)胞在他汀的存在下進(jìn)行培養(yǎng)則腫瘤化被抑制。
先行技術(shù)文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)
[0008]非專利文獻(xiàn)1:Takahashi K., et al.(2007)."Induct1nof Pluripotent StemCells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors' Cel1131:861-872.非專利文獻(xiàn) 2: Tang C et al, An antibody against SSEA_5glycan on human pluripotentstem cells enables removal of teratoma-forming cells.Nat B1technol.2011 ；29(9):829-34.專利文獻(xiàn)
[0009]專利文獻(xiàn)l:W02007/069666 專利文獻(xiàn) 2:W02011/024550

【發(fā)明內(nèi)容】

發(fā)明所要解決的課題
[0010]本發(fā)明的目的在于提供一種在抑制iPS細(xì)胞的腫瘤化的情況下使iPS細(xì)胞分化誘導(dǎo)為目標(biāo)分化細(xì)胞的技術(shù)。
用于解決課題的手段
[0011]本
【發(fā)明者】為了解決上述課題進(jìn)行了銳意地研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過在他汀的存在下培養(yǎng)iPS細(xì)胞，能夠抑制iPS細(xì)胞的腫瘤化。進(jìn)而，本
【發(fā)明者】確認(rèn)了通過使用他汀和分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化誘導(dǎo)為分化細(xì)胞，從而獲得了腫瘤化被抑制的分化細(xì)胞。本發(fā)明是基于這樣的見解，進(jìn)而不斷研究 的結(jié)果而完成的。即，本發(fā)明提供下述形態(tài)的方法、腫瘤化抑制劑、培養(yǎng)基、腫瘤化被抑制了的iPS細(xì)胞、組織再生方法等。
[0012]項(xiàng)1.一種iPS細(xì)胞的分化誘導(dǎo)方法，所述方法為抑制腫瘤化、同時(shí)分化誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的方法，所述方法包括以下工序:
使用他汀、以及使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的工序。
項(xiàng)2.根據(jù)項(xiàng)I所述的分化誘導(dǎo)方法，其中，所述他汀為下述通式(A)所示的化合物: 通式㈧:
[化I]
【權(quán)利要求】
1.一種iPS細(xì)胞的分化誘導(dǎo)方法，所述方法為抑制腫瘤化、同時(shí)分化誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的方法，所述方法包括以下工序: 使用他汀、以及使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的工序。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中，所述他汀為下述通式(A)所示的化合物: 通式㈧: [化I]
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 所述他汀為選自由辛伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀以及瑞舒伐他汀組成的組中的至少I種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 通過在含有所述他汀和所述分化誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)iPS細(xì)胞，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中，通過在以含有所述他汀的培養(yǎng)基培養(yǎng)iPS細(xì)胞后，再以含有所述分化誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 所述他汀的濃度為0.01~10 μ M。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 所述iPS細(xì)胞源自口腔粘膜的上皮細(xì)胞或口腔粘膜的成纖維細(xì)胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分化誘導(dǎo)方法，其中， 使用他汀、以及使iPS細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞。
9.一種含有腫瘤化被抑制了的分化細(xì)胞的細(xì)胞制劑的制備方法，所述方法包括以下工序: 使用他汀、以及使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的工序，以及 使用在前述工序中得到的分化細(xì)胞，制備細(xì)胞制劑的工序。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的細(xì)胞制劑的制備方法，其中， 所述分化細(xì)胞為成骨細(xì)胞。
11.一種培養(yǎng)基，其用于從iPS細(xì)胞獲得腫瘤化被抑制了的分化細(xì)胞，所述培養(yǎng)基含有: 他汀，以及 使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的分化誘導(dǎo)劑。
12.他汀在培養(yǎng)基的制造中的用途，所述培養(yǎng)基為用于從iPS細(xì)胞獲得腫瘤化被抑制了的分化細(xì)胞的培養(yǎng)基。
13.一種腫瘤化抑制方法，所述方法為在使iPS細(xì)胞分化為分化細(xì)胞時(shí)抑制腫瘤化的方法，所述方法包含以下工序: 使用他汀、以及使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的工序。
14.一種iPS細(xì)胞的腫瘤化抑制方法，所述方法為抑制iPS細(xì)胞的腫瘤化的方法，所述方法包括以下工序: 在他汀的存在下培養(yǎng)iPS細(xì)胞的工序。
15.—種iPS細(xì)胞的腫瘤化抑制劑，其含有他汀作為有効成分。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的腫瘤化抑制劑，其中， 所述抑制劑在使iPS細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞時(shí)使用。
17.他汀在iPS細(xì)胞的腫瘤化抑制劑的制造中的用途。
18.一種腫瘤化被抑制了的iPS細(xì)胞，所述細(xì)胞通過將iPS細(xì)胞在他汀的存在下進(jìn)行培養(yǎng)而獲得。
19.一種他汀，其用于抑制iPS細(xì)胞的腫瘤化。
20.一種細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑，其以他汀作為有効成分， 用于在分化誘導(dǎo)iPS細(xì)胞時(shí)，對(duì)于具有未分化的性質(zhì)的iPS細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
21.一種骨再生劑，其包含成骨細(xì)胞，所述成骨細(xì)胞為通過在他汀、以及向成骨細(xì)胞分化誘導(dǎo)的分化誘導(dǎo)劑的存在下培養(yǎng)iPS細(xì)胞而獲得的成骨細(xì)胞。
22.—種組織再生方法，其包括下述工序: (i)使用他汀、以及使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的分化誘導(dǎo)劑，使iPS細(xì)胞分化為目標(biāo)分化細(xì)胞的工序， (?)使用在前述工序中得到的分化細(xì)胞，制備細(xì)胞制劑的工序，以及 (iii)將前述工序(ii )中得到的細(xì)胞制劑向需要組織再生的患者給藥的工序。
【文檔編號(hào)】C12N5/10GK104039954SQ201280063680
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月27日
【發(fā)明者】江草宏 申請(qǐng)人:國(guó)立大學(xué)法人大阪大學(xué)