專利名稱：富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇及其栽培方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雞腿菇及其栽培方法和用途。
背景技術(shù)：
糖尿病是目前中老年人的常見病和多發(fā)病，由糖尿病引起的并 發(fā)癥嚴(yán)重危及人們的生命健康?，F(xiàn)有西藥類降糖藥物作用效果好，靴 點(diǎn)清楚，但長(zhǎng)期服用易引起副作用。而中藥毒副作用小，且來(lái)源廣泛， 成本較低，是用于治療糖尿病的一個(gè)主要藥物來(lái)源。
桑葉是?？浦参锷orus alba葉子的干燥物。桑葉作為中藥，早 已在民間廣泛應(yīng)用。自古以來(lái)中醫(yī)就用桑葉來(lái)治療消渴證(相當(dāng)于現(xiàn)代 醫(yī)學(xué)的糖尿病)。《木草綱日》記載:桑葉"汁煎代茗，能止消渴"。近代 醫(yī)家也常將桑葉配伍于中藥復(fù)方中應(yīng)用于臨床，收效甚好。現(xiàn)代藥理研 究證明桑葉具有抑制血糖上升之功效，可預(yù)防和治療糖尿病。近年來(lái)， 各國(guó)研究人員對(duì)桑葉的組成、功能和作用機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)地研究，結(jié)果 發(fā)現(xiàn)桑葉中含有豐富的氨基酸、纖維素、維生素、礦物質(zhì)以及多種生理 活性物質(zhì)，具有降血糖、降血壓、降血脂、延緩衰老等多種保健功效。 1996年，陳福君等用桑葉總多糖(TPM)對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠進(jìn)行腹腔 汁射給藥，結(jié)果表明TPM有顯著的降血糖作用。但TPM的結(jié)構(gòu)尚不清楚， 有待進(jìn)一步研究。2002年，陳金顯等曾經(jīng)對(duì)一種以桑葉為主要原料的保健品功效成分進(jìn)行研究，結(jié)果表明桑葉多糖和生物堿均能明顯降低四氧
嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖，并有明顯預(yù)防小鼠血糖升高的作用。2005 年，吳志平等對(duì)桑樹不同藥用部位的降血糖效果進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)桑葉、 桑白皮、桑枝、桑皮這四中中藥材都有明顯的降血糖作用。盡管桑葉具 有這些功效，但是桑葉也存在著見效慢，質(zhì)量不穩(wěn)定等中藥的共同缺點(diǎn)。 克服桑葉缺點(diǎn)提高桑葉療效可采用生物轉(zhuǎn)化的方法。用于生物轉(zhuǎn)化的菌 種有多種，但藥食用真菌轉(zhuǎn)化桑葉具有安全無(wú)毒等特點(diǎn)，更受到科研工 作者的青睞。
雞腿菇(Coprinuscomatus)是藥用真菌的一種，學(xué)名毛頭鬼傘，隸 屬于真菌門(Eu考cota),擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)，層菌綱 (Hymenomycetes)， 傘菌目 (Agaricales )， 鬼傘禾斗(Coprinaceae )， 鬼 傘屬(Coprinus)。雞腿菇肉質(zhì)細(xì)嫩、鮮美可口、營(yíng)養(yǎng)豐富。目前，該品 種已被定為符合聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)要求 的集"天然、營(yíng)養(yǎng)、保健"三種功能為一體的16種珍稀食用菌之一。近 年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)雞腿菇的研究主要集中于它的馴化栽培、營(yíng)養(yǎng)成分分 析、液體培養(yǎng)以及菌絲體內(nèi)多糖及藥效等方面。1984年，英國(guó)阿斯頓 大學(xué)Bailey C.J報(bào)道雞腿菇含有降血糖的有效成分。1993年，黃年來(lái)用 雞腿菇水提物濃縮液飼養(yǎng)小鼠，1.5h有明顯降低血糖濃度的效果。2000 年，王玉萍等利用深層發(fā)酵方法獲得獲得富鉻雞腿菇發(fā)酵液，進(jìn)行急性 毒性試驗(yàn)，并對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)的小鼠糖尿病模型做了降血糖試驗(yàn)。2002 年，韓舂超等研究了雞腿菇發(fā)酵液與釩酸鈉協(xié)同抑制小鼠血糖升高的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可以用于糖尿病病人和糖耐量異常病 人的的血糖控制和治療的富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿燕及其栽培方法和用 途。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是
一種富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇，其特征是通過(guò)下列步驟得到
(1) 將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥粒或棉籽殼培養(yǎng)
基，其培養(yǎng)基水分含量50 80%，培養(yǎng)溫度15 35'C，培養(yǎng)時(shí)0.5 4 月；
(2) 將用于栽培的培養(yǎng)基麥草100 200重量份、廢酵母5 100 重量份、硫酸銨1 20重量份、桑葉粉5 30重量份、石灰2 20 重量份、水130 280重量份混合均勻，堆置發(fā)酵；要求堆高0.5 3 米，寬度0.5 3米，共堆置21天，其中在第7、 13和18天，各翻 堆一次；
(3) 堆置發(fā)酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保 濕培養(yǎng)20 40天，覆土3 10cm，調(diào)節(jié)水分50 80%，得到子實(shí)體；
(4) 子實(shí)體采摘后烘干，得干子實(shí)體。
一種富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇的栽培方法，其特征是包括下列步
驟
(l)將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥?；蛎拮褮づ囵B(yǎng)
基，其培養(yǎng)基水分含量50 80%，培養(yǎng)溫度15 35。C，培養(yǎng)時(shí)0.5 4月；
(2) 將用于栽培的培養(yǎng)基麥草100 200重量份、廢酵母5 100 重量份、硫酸銨1 20重量份、桑葉粉5 30重量份、石灰2 20 重量份、水130 280重量份混合均勻，堆置發(fā)酵；要求堆高0.5~3 米，寬度0.5 3米，共堆置21天，其中在第7、 13和18天，各翻 堆一次；
(3) 堆置發(fā)酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保 濕培養(yǎng)20 40天，覆土3 10cm，調(diào)節(jié)水分50 80%，得到子實(shí)體；
(4) 子實(shí)體采摘后烘干，得干子實(shí)體。
一種富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿燕在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。 本發(fā)明得到的雞腿菇具有多種藥物功能，可用于糖尿病病人和糖 耐量異常病人的的血糖控制和治療，也可用于提高正常人群的肌體免疫 功能制備預(yù)防和/或治療糖尿病患者、糖耐量異?；颊呒疤悄虿〔l(fā) 癥的藥物或功能性食品，特別是其具有降低糖尿病人血糖功效，使其 成為降低血糖提供理想藥物或保健食品。
功能的檢測(cè)方法為選取空腹血糖水平在3.5 6.3mmol/L范圍的 正常雄性昆明小鼠，正常小鼠在禁食24小時(shí)后，給予腹腔注射四氧嘧 啶180mg/Kg體重，96小時(shí)后禁食，尾部靜脈取血測(cè)血糖值，并選用血 糖值在10mmol/L以上者再按血糖水平隨即分成1個(gè)正常組，1個(gè)陽(yáng)性對(duì) 照組和4個(gè)樣品組(每組10只，分別以桑葉、雞腿菇、雞腿菇與桑葉 的混合組和富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇，按體重500mg/kg體重的拌入基礎(chǔ)飼料給藥，其中正常組和陽(yáng)性對(duì)照組給以基礎(chǔ)飼料)，每天自由取食飲 水，連續(xù)給藥7天后，禁食4小時(shí)，眼眶靜脈取血測(cè)定血糖值，比較了 桑葉、雞腿菇和雞腿菇與桑葉的物理混合組和富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇的 降血糖作用。
上述試驗(yàn)給藥7d后，富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇與對(duì)照組相比，治 療組血糖均極顯著降低(p<0.01),可見雞腿菇轉(zhuǎn)化桑葉7 d即能顯 著降低高血糖小鼠血糖。
本發(fā)明經(jīng)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用本發(fā)明的生物轉(zhuǎn)化的方法，通過(guò)雞腿 菇菌絲和桑葉相互作用，生產(chǎn)的富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇經(jīng)口服途徑給 予高血糖小鼠其降低血糖和果糖胺功能與未轉(zhuǎn)化的雞腿菇，純的桑葉 以及純雞腿菇和桑葉的混合相比顯著增強(qiáng)，因此證實(shí)了富集轉(zhuǎn)化桑葉 的雞腿菇具有用于制備具有更強(qiáng)降血糖功能的保健食品和/或藥品的 用途。應(yīng)用本發(fā)明的富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇，可以大規(guī)模或工業(yè)化生 產(chǎn)雞腿菇子實(shí)體。由于該藥物組合物中所含的雞腿菇轉(zhuǎn)化桑葉發(fā)酵液 來(lái)源于天然菌種的發(fā)酵，因此沒(méi)有任何毒副作用，從而為糖尿病患者 提供了理想的藥物，并為雞腿燕的應(yīng)用開創(chuàng)了廣闊的前景。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1雞腿菇菌種的組織分離 取河北野生雞腿燕新鮮未開傘的子實(shí)體，削去菌柄基部和菌柄外
表皮，用75%乙醇進(jìn)行子實(shí)體表面消毒后，移入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射20min。將解剖刀在酒精燈火焰上灼燒后放人無(wú)菌水中降溫， 確保解剖刀溫度不會(huì)損傷子實(shí)體組織。將子實(shí)體一分為二，在菌柄內(nèi) (柄中)、菌柄與菌蓋交界處(交界)、菌蓋和菌褶處切割表皮內(nèi)組織， 黃豆大小的小塊，切割時(shí)不能切透子實(shí)體表面組織。用無(wú)菌鑷子接人 試管斜面培養(yǎng)基(即為PDA培養(yǎng)基)，每種組織各接IO支，25 28°C 暗培養(yǎng)，每天定時(shí)觀測(cè)菌絲生長(zhǎng)污染情況，當(dāng)長(zhǎng)至4-10天時(shí)，用PDA 培養(yǎng)基試管斜面轉(zhuǎn)接。
實(shí)施例2富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇子實(shí)體的制備
1、 在新配制的土豆培養(yǎng)基(諸葛健，王正祥，工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn) 技術(shù)手冊(cè)，1994: P 367)中接入實(shí)施例l得到的雞腿菇菌種，培養(yǎng) 溫度2(TC，待菌絲體長(zhǎng)滿斜面后，將斜面菌種接入裝有含水量為50 %麩皮培養(yǎng)基的種子瓶中，于2(TC培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)120天；
2、 麥草300Kg，廢酵母15Kg，硫酸銨3Kg，桑葉粉15Kg，石 灰6Kg，水3卯Kg混合均勻堆成高度為0.8米，寬度1米，長(zhǎng)度4 米的草堆發(fā)酵，最高溫度6(TC，發(fā)酵21天，其中在第7、 13、 18天 各翻堆一次。21天后；料鋪成長(zhǎng)度為10米寬度1米厚度0. 10米的 發(fā)酵床，將步驟l培養(yǎng)的菌種采用撒播法播入其中，室溫發(fā)菌20天 后，覆厚度為0.05米的土，調(diào)節(jié)土含水量50%，使其出菇，80。C烘 干。共收集干菇24.5kg。
轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇黃褐色呈花斑狀，見圖片，多糖含量25%， 多酚類化合物含量2.5%，黃酮類化合物含量3.4%。實(shí)施例3富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇子實(shí)體的制備
1、 在新配制的土豆培養(yǎng)基(諸葛健，王正祥，工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)
技術(shù)手冊(cè)，1994: P 367)中接入實(shí)施例l得到的雞腿菇菌種，培養(yǎng) 溫度25'C，待菌絲體長(zhǎng)滿斜面后，將斜面菌種接入裝有含水量為65 0/^麩皮培養(yǎng)基的種子瓶中，于27。C培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)90天；
2、 麥草300Kg，廢酵母120Kg，硫酸銨15Kg，桑葉粉30Kg， 石灰15Kg，水600Kg混合均勻堆成高度為1.5米，寬度1.5米，長(zhǎng) 度6米的草堆發(fā)酵，最高溫度7(TC，發(fā)酵21天，其中在第7、 13、 18天各翻堆一次。21天后；料鋪成長(zhǎng)度為20米寬度1. 5米厚度0. 20 米的發(fā)酵床，將步驟1培養(yǎng)的菌種采用穴播法播入其中，室溫發(fā)菌 25天后，覆厚度為O. IO米的土，調(diào)節(jié)土含水量60%，使其出菇，80 。C烘干。共收集干菇45kg。
轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇黃褐色呈花斑狀，見圖片，多糖含量19%, 多酚類化合物含量5.3%，黃酮類化合物含量8.1%。
實(shí)施例4富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿燕子實(shí)體的制備
1、 在新配制的土豆培養(yǎng)基(諸葛健，王正祥，工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn) 技術(shù)手冊(cè)，1994: P 367)中接入實(shí)施例l得到的雞腿菇菌種，培養(yǎng) 溫度25"C，待菌絲體長(zhǎng)滿斜面后，將斜面菌種接入裝有含水量為65 %麩皮培養(yǎng)基的種子瓶中，于33'C培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)45天；
2、 麥草200Kg，廢酵母100Kg，硫酸銨25Kg，桑葉粉40Kg， 石灰30Kg，水560Kg混合均勻堆成高度為3.0米，寬度2.8米，長(zhǎng)度3.0米的草堆發(fā)酵，最高溫度75"C，發(fā)酵21天，其中在第7、 13、 18天各翻堆一次。21天后；料鋪成長(zhǎng)度為15米、寬度1. 2米、厚度 0.30米的發(fā)酵床，將步驟1培養(yǎng)的菌種采用穴播法播入其中，室溫 發(fā)菌40天后，覆厚度為0.07米的土，調(diào)節(jié)土含水量80%，使其出 菇，8(TC烘干。共收集干菇30kg。
轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇黃褐色呈花斑狀，見圖片，多糖含量13%， 多酚類化合物含量7.1%，黃酮類化合物含量12.8%。
實(shí)施例5、富集轉(zhuǎn)化桑葉雞腿菇子實(shí)體降低四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿 病小鼠血糖試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小白鼠，雄性，體重為21 26g，由中科院上海 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。糖尿病小鼠模型制備正常小鼠在禁食24小時(shí)后， 給予腹腔注射四氧嘧啶180mg/Kg體重，96小時(shí)后禁食，尾部靜脈取血 測(cè)血糖值，并選用血糖值在1Ommol/L以上者再按血糖水平隨即分成1 個(gè)正常組，l個(gè)陽(yáng)性未處理組，4個(gè)樣品組(每組10只，分別以桑葉、 純雞腿菇、純雞腿菇和桑葉混合物、富集轉(zhuǎn)化桑葉的子實(shí)體粉末按每天 500mg/Kg體重拌入飼料，其中正常組給以等量的生理鹽水)，連續(xù)灌胃 給藥7天后，禁食4小時(shí)，眼眶靜脈取血測(cè)定血糖值，結(jié)果給藥富集轉(zhuǎn) 化桑葉的雞腿菇小鼠血糖值不僅低于糖尿病未處理小鼠血糖值，而且顯 著低于分別給藥桑葉、純雞腿菇和雞腿恭和桑葉的混合小鼠血糖值。驗(yàn) 證比較轉(zhuǎn)化后的雞腿菇的降血糖作用。
不同劑量桑葉轉(zhuǎn)化雞腿菇子實(shí)體對(duì)四氧嘧啶高血糖小鼠調(diào)節(jié)血糖作用的比較(ramol/L)
血糖值
實(shí)驗(yàn)分組---
給藥前給藥后
正常組6. 12±0. 216. 67±0. 23
糖尿病未處理22. 14±1.8324. 65±2. 18
桑葉22. 25±1.9617. 88±2. 34*-
純雞腿菇22. 37±1. 7418. 25±2. 67*"
純雞腿菇與桑葉混合組22. 18±1.9717. 53±2. 86*"
實(shí)施例一22. 07±1. 8814. 36±2. 64*
富集轉(zhuǎn)化桑 實(shí)施例二 葉的雞腿燕22. 32±1.6913. 54±2. 77*
實(shí)施例三22. 19±1.9813. 79±2. 86*
注*:與糖尿病未處理組相比，P<0.05;、與富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞 腿菇比較，p<0.05。
實(shí)施例6、富集轉(zhuǎn)化桑葉雞腿菇粗提物制備。
雞腿菇子實(shí)體10g加200mL水，80 9(TC提取5小時(shí)，離心， 收集清夜，殘?jiān)儆?00mL水提取2次，水提液合并，真空濃縮得到 雞腿菇粗提物?；蛘撸u腿菇子實(shí)體10g，用600mL有機(jī)溶劑(乙醇、 丙酮、乙酸乙酯、氯仿中任意一種)提取3次，合并有機(jī)溶劑相，真 空濃縮得到雞腿菇粗提物。試驗(yàn)證明用水或有機(jī)溶劑得到雞腿菇粗提 物具有血糖調(diào)節(jié)功能。
權(quán)利要求
1、一種富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇，其特征是通過(guò)下列步驟得到(1)將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥?；蛎拮褮づ囵B(yǎng)基，其培養(yǎng)基水分含量50～80％，培養(yǎng)溫度15～35℃，培養(yǎng)時(shí)0.5～4月；(2)將用于栽培的培養(yǎng)基麥草100～200重量份、廢酵母5～100重量份、硫酸銨1～20重量份、桑葉粉5～30重量份、石灰2～20重量份、水130～280重量份混合均勻，堆置發(fā)酵；要求堆高0.5～3米，寬度0.5～3米，共堆置21天，其中在第7、13和18天，各翻堆一次；(3)堆置發(fā)酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保濕培養(yǎng)20～40天，覆土3～10cm，調(diào)節(jié)水分50～80％，得到子實(shí)體；(4)子實(shí)體采摘后烘干，得干子實(shí)體。
2、 一種富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇的栽培方法，其特征是包括下 列步驟 .a)將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥?；蛎拮褮づ囵B(yǎng)基，其培養(yǎng)基水分含量50 80%，培養(yǎng)溫度15 35"C，培養(yǎng)時(shí)0.5 4 月；(2)將用于栽培的培養(yǎng)基麥草100 200重量份、廢酵母5 100 重量份、硫酸銨1 20重量份、桑葉粉5 30重量份、石灰2 20 重量份、水130 280重量份混合均勻，堆置發(fā)酵；要求堆高0.5~3 米，寬度0.5 3米，共堆置21天，其中在第7、 13和18天，各翻堆一次；(3) 堆置發(fā)酵后將步驟(1)的菌種采用撒播或穴播接入，保溫保 濕培養(yǎng)20 40天，覆土3 10cm，調(diào)節(jié)水分50 80%，得到子實(shí)體；(4) 子實(shí)體采摘后烘干，得干子實(shí)體。
3、 一種富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種富集轉(zhuǎn)化桑葉的雞腿菇及其生產(chǎn)方法和用途，通過(guò)將雞腿菇試管斜面菌種接入新配制的麩皮、麥?；蛎拮褮づ囵B(yǎng)基培養(yǎng)、將用于栽培的培養(yǎng)基堆置發(fā)酵、堆置發(fā)酵后將菌種采用撒播或穴播接入，保溫保濕培養(yǎng)得到子實(shí)體。得的雞腿菇子實(shí)體可制成具有調(diào)節(jié)血糖作用的藥物或保健食品。本發(fā)明得到的雞腿菇具有多種藥物功能，可用于糖尿病病人和糖耐量異常病人的的血糖控制和治療，也可用于提高正常人群的肌體免疫功能制備預(yù)防和/或治療糖尿病患者、糖耐量異?；颊呒疤悄虿〔l(fā)癥的藥物或功能性食品，特別是其具有降低糖尿病人血糖功效，使其成為降低血糖提供理想藥物或保健食品。
文檔編號(hào)A23L1/212GK101611854SQ20091018235
公開日2009年12月30日 申請(qǐng)日期2009年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月10日
發(fā)明者張志才, 鄭惠華, 陸漢萍, 惠 陳 申請(qǐng)人:江蘇安惠生物科技有限公司;江蘇大學(xué)