專利名稱：產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌的選擇性顯色培養(yǎng)基。
技術(shù)背景-
產(chǎn)氣莢膜梭菌廣泛分布于自然界以及人和動(dòng)物的腸道中，并能引起人和動(dòng)物 的多種疾病，臨床上最常見(jiàn)的是由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的氣性壞疽和食物中毒。氣 性壞疽為病原菌侵入傷口引起的嚴(yán)重急性感染，以組織壞死、水腫、脹氣、全身 中毒為特征，好發(fā)于下肢，死亡率高達(dá)40%-100%。本病常為兩種以上細(xì)菌參與 的混合感染，其中60%-80%為產(chǎn)氣莢膜梭菌引起。因此，早期快速地從標(biāo)本中 分離培養(yǎng)出本菌，對(duì)于疾病的珍斷和治療顯得極為重要。產(chǎn)氣莢膜梭菌為革蘭氏 陽(yáng)性粗大桿菌，厭氧但要求不高，在有少量有氧的環(huán)境中也能生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求不 高，生長(zhǎng)繁殖迅速。傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定方法，是將標(biāo)本接種于血瓊脂平板和卵黃瓊 脂平板上，在37'C條件下培養(yǎng)18-24小時(shí)，挑選可疑菌落再繼續(xù)接種鑒別培養(yǎng) 基繼續(xù)培養(yǎng)，或在庖肉培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)8-IO小時(shí)后，轉(zhuǎn)種血瓊脂平板和卵黃瓊 脂平板。傳統(tǒng)方法耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，和產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)特性相似的其它細(xì)菌也會(huì)生 長(zhǎng)，使鑒別'診斷缺乏特異性，做出初步鑒定診斷往往需要24小時(shí)以上。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于以上現(xiàn)狀，本發(fā)明提供一種產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基，解決了上 述傳統(tǒng)培養(yǎng)鑒定方法存在的培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，缺乏't會(huì)斷特異性的問(wèn)題。 本發(fā)明的技術(shù)方案是通過(guò)如下內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的
一種產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于配置1000ml培養(yǎng)基的 成分為酪蛋白酶水解物12.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-12.0g，亞硫酸鈉0.20g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.20g，檸檬酸鐵0.20g-0.80g'胰蘇 寧4-12單位，瓊脂粉10.0g-18.0g，加蒸餾水至lOOOml。
所述配置1000ml培養(yǎng)基的成分為酪蛋白酶水解物12.0g-14.0g，酵母浸粉 10.0g-12.0g，亞硫酸鈉0.20g-0.40g，多粘菌素B 0.010g-0.015g，磺胺嘧啶 0.05g-0.10g，檸檬酸鐵(J.60g-0.80g,胰蘇寧4-6單位，瓊脂粉16.0g-18.0g，加蒸 餾水至1000ml 。
所述配置lOOOml培養(yǎng)基的成分為酪蛋白酶水解物14.0g-16.0g，酵母浸粉 8.0g-10.0g，亞硫酸鈉0.40g-0.60g，多粘菌素B 0.008g-0.010g,磺胺嘧啶 0.10g-0.15g，檸檬酸鐵0.40g-0.60g，胰蘇寧6-10單位，瓊脂粉12.0g-16.0g，加 蒸餾水至1000ml 。
所述配置lOOOml培養(yǎng)基的成分為酪蛋白酶水解物16.0g-20.0g，酵母浸粉 6.0g-8.0g，亞硫酸鈉0.60g-0.80g,多粘菌素B 0.005g-0.008g ，磺胺嘧啶 CU5g-0.20g，檸檬酸鐵0.20g-0.40g，胰蘇寧10-12單位，瓊脂粉10.0g-12.0g，加 蒸餾水至1000ml 。
所述蒸餾水為雙蒸水。
所述培養(yǎng)基通過(guò)高壓蒸汽滅菌，其壓力值為103.4kPa。 所述培養(yǎng)基最終PH值在25。C條件下為7.0土0.2。
配置過(guò)程在3 5-37'C的溫度條件下，先加入適量雙蒸水至容器中，再將酪 蛋白酶水解物、酵母浸粉、亞硫酸鈉、多粘菌素B、磺胺嘧啶、檸檬酸鐵、胰蘇 寧、瓊脂粉加入雙蒸水中充分溶解后,用容量瓶定容至1000ml，通過(guò)往溶液中 添加酸性(HCL)或者堿性物質(zhì)(NaOH)使其在25'C下最終PH值為7.0±0.2， 最后通過(guò)103.4kPa(1.05kg/cm"的高壓蒸汽滅菌，分裝時(shí)需要在超凈工作臺(tái)，且 分裝于無(wú)菌平皿。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)培養(yǎng)時(shí)間較傳統(tǒng)方法明顯縮短，具有相同培養(yǎng)特性的其它細(xì)菌 受到抑制均不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)了快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌的效果。
具體實(shí)施例方式
在35-37X:條件下，先加入適量雙蒸水至容器中，再將酪蛋白酶水解物、酵母浸粉、亞硫酸鈉、多粘菌素B、磺胺嘧啶、檸檬酸鐵、胰蘇寧、瓊脂粉加入雙 蒸水中充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，通過(guò)往溶液中添加酸性或者堿性 物質(zhì)使其在25。C下最終PH值為7.0±0.2，最后通過(guò)103.4kPa(1.05kg/cm、的高壓 蒸汽滅菌，分裝時(shí)需要在超凈工作臺(tái)，且分裝于無(wú)菌平皿。
酪蛋白酶水解物，酵母浸粉，提供細(xì)菌生長(zhǎng)所需的氮源、碳源和生長(zhǎng)因子; 瓊脂粉是培養(yǎng)基的，形劑；多粘菌素B，磺胺嘧啶抑制其它雜菌生長(zhǎng)；胰蘇寧為 生長(zhǎng)促進(jìn)因子；檸檬酸鐵和亞硫酸鈉為顯色指示劑，亞硫酸鈉還可抑制其它革蘭 氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)。
用此培養(yǎng)基在35-37'C培養(yǎng)8-12小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)良好，菌落顯黑色， 其他還原亞硫酸鹽的革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣 莢膜梭菌。
實(shí)施例1
提供一種培養(yǎng)基，用于快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌。主要成分為酪蛋白 酶水解物12.0g，酵母浸粉12.0g，亞硫酸鈉0.20g，多粘菌素B0.015g，磺胺嘧 啶0.05g，檸檬酸鐵0.80g，胰蘇寧4單位，瓊脂粉18.0g。精確稱量以上成分， 用雙蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cm、的條件 下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，分裝于無(wú)菌平皿備用，最終PH (25°C)值為6.8。用此培 養(yǎng)基在35'C條件下培養(yǎng)8小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)良好，菌落顯黑色，其他還 原亞硫酸鹽的革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭 菌。
實(shí)施例2
提供一種培養(yǎng)基，用于快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌。主要成分為酪蛋白
酶水解物20.0g，酵母浸粉6.0g，亞硫酸鈉0.80g，多粘菌素B 0.005g，磺胺嘧 啶0:20g，檸檬酸鐵0.20g,胰蘇寧12單位，瓊脂粉10.0g。精確稱量以上成分， 用雙蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cn )的條件 下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，分裝于無(wú)菌平皿備用，最終PH (25")值為7.2。用此培養(yǎng)基在37C條件下培養(yǎng)12小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)良好，菌落顯黑色，其他還 原亞硫酸鹽的革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭
菌o ,
實(shí)施例3 '
提供一種培養(yǎng)基，用于快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌。主要成分為酪蛋白
酶水解物14.0g，酵母浸粉10.0g，亞硫酸鈉0.40g，多粘菌素B 0.0lg，磺胺嘧 啶0.10g,檸檬酸鐵0.60g，胰蘇寧6單位，瓊脂粉16.0g。精確稱量以上成分， 用雙蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cm"的條件 下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，分裝于無(wú)菌平皿備用，最終PH (25°C)值為7.0。用此培 養(yǎng)基在36'C條件下培養(yǎng)10小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)良好，菌落顯黑色，其他還 原亞硫酸鹽的革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭 菌。
實(shí)施例4
提供一種培養(yǎng)基，用于快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌。主要成分為酪蛋白
酶水解物16.0g，酵母浸粉8.0g，亞硫酸鈉0.60g，多粘菌素B 0.008g，磺胺嘧 啶0.10g，檸檬酸鐵0.40g，胰蘇寧10單位，瓊脂粉12.0g。精確稱量以上成分， 用雙蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cn )的條件 下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，分裝于無(wú)菌平皿備用，最終PH (25°C)值為6.9。用此培 養(yǎng)基在36'C條件下培養(yǎng)9小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)良好，菌落顯黑色，其他還 原亞硫酸鹽的革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭 菌。
實(shí)施例5
提供一種培養(yǎng)基，用于快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌。主要成分為酪蛋白
酶水解物18.0g,酵母浸粉10.0g，亞硫酸鈉0.60g，多粘菌素B0.012g,磺胺嘧 啶0.15g，檸檬酸鐵0.60g，胰蘇寧10單位，瓊脂粉16.0g。精確稱量以上成分， 用雙蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cm、的條件下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，分裝于無(wú)菌平皿備用，最終PH (25°C)值為7.1。用此培 養(yǎng)基在37'C條件下培養(yǎng)11小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)良好，菌落顯黑色，其他還 原亞硫酸鹽的革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭 菌。
權(quán)利要求
1、一種產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于配置1000ml培養(yǎng)基的成分為酪蛋白酶水解物12.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-12.0g，亞硫酸鈉0.20g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.20g，檸檬酸鐵0.20g-0.80g，胰蘇寧4-12單位，瓊脂粉10.0g-18.0g，加蒸餾水至1000ml。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于 配置lOOOml培養(yǎng)基的成分為酪蛋白酶水解物12.0g-14.0g，酵母浸粉10.0g-12.0g， 亞硫酸鈉0.20g-0.40g，多粘菌素B 0.010g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.10g，檸檬 酸鐵0.60g-0.80g,胰蘇寧4-6單位，瓊脂粉16.0g-18.0g，加蒸餾水至lOOOml。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于 配置lOOOml培養(yǎng)基的成分為酪蛋白酶水解物14.0g-16.0g，酵母浸粉8.0g-10.0g， 亞硫酸鈉0.40g-0.60g，多粘菌素B 0.008g-0.010g，磺胺嘧啶0.10g-0.15g，檸檬 酸鐵0.40g-0.60g，胰蘇寧6-10單位，瓊脂粉12.0g-16.0g，加蒸餾水至lOOOml。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于 配置lOOOml培養(yǎng)基的成分為酪蛋白酶水解物16.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-8.0g， 亞硫酸鈉0.60g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.008g，磺胺嘧啶0.15g-0.20g，檸檬 酸鐵0.20g-0.40g，胰蘇寧10-12單位，瓊脂粉10.0g-12,0g，加蒸餾水至lOOOmI。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基， 其特征在于所述蒸餾水為雙蒸水。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基， 其特征在于所述培養(yǎng)基通過(guò)高壓蒸汽滅菌，其壓力值為103.4kPa。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的產(chǎn)氣莢膜梭菌選擇性顯色培養(yǎng)基， 其特征在于所述培養(yǎng)基最終PH值在25'C條件下為7.0±0.2。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌的選擇性顯色培養(yǎng)基，本發(fā)明其特征在于配置1000ml培養(yǎng)基需要酪蛋白酶水解物12.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-12.0g，亞硫酸鈉0.20g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.20g，檸檬酸鐵0.20g-0.80g，胰蘇寧4-12單位，瓊脂粉10.0g-18.0g，最后加蒸餾水至1000ml；本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于培養(yǎng)時(shí)間較傳統(tǒng)方法明顯縮短，具有相同培養(yǎng)特性的其它細(xì)菌受到抑制均不生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)了快速培養(yǎng)和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌的效果。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101659980SQ20091016778
公開(kāi)日2010年3月3日 申請(qǐng)日期2009年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月28日
發(fā)明者軍 王 申請(qǐng)人:成都瑞琦科技實(shí)業(yè)有限責(zé)任公司