專利名稱：一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢驗微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
微生物培養(yǎng)是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術(shù)，而選擇培養(yǎng)基是用來促進或抑制一定類型的生物體(如細胞或細菌等)而設(shè)計的培養(yǎng)基，利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。念珠菌是真菌中最常見的條件致病菌，又稱假絲酵母，它常寄生于人的皮膚、口腔、陰道和腸粘膜等處，當機體免疫機能低下或正常寄居部位的微生態(tài)環(huán)境失調(diào)，容易引起念珠菌病。目前念珠菌的臨床檢驗手段主要是革蘭染色法，但有20%的念珠菌革蘭染色法無法陽性檢出。而且如需確定分辨念珠菌的種類，就需要培養(yǎng)，并就其菌落形態(tài)特征進行鑒別。但是目前臨床所用的真菌類選擇培養(yǎng)基主要用于尿、 痰、血液、膽汁、腹水等臨床標本的念珠菌分離，如馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基，對于糞便標本中的念珠菌分離率低，其原因多在于糞便中的大腸桿菌等在目前的真菌培養(yǎng)基上比念珠菌生長更快，很快覆蓋了培養(yǎng)基，念珠菌無法生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能夠用于糞便標本的， 對念珠菌分離率高的選擇培養(yǎng)基。本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基， 其特征在，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有
麥芽浸粉3 10g ；
牛心粉10 20g ；
硫酸鎂I. 2^2g ；
瓊脂15 20g ；
硫酸慶大霉素O. 005^0. 02g ；
苯胺蘭O. I O. 4g ；
四水檸檬酸鈣O. OfO. 2g ；
蒸餾水加至1000ml。優(yōu)化方案中，每IOOOml培養(yǎng)基還含有蒜硫胺素O. 05、. 5g。優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有甘氨膽酸O. θΓθ. lg。優(yōu)化方案中，每IOOOml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的紅門蘭水提液20(T300ml。一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)取紅門蘭加水煮沸O.5^1小時，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得紅門蘭水提液；
(2)取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于步驟I所得紅門蘭水提液中，混勻，蒸餾水定容，121°C，15min滅菌后分裝。其中所述的麥芽浸粉、牛心粉提供碳氮源和能量；硫酸鎂為緩沖劑，且可以破壞標本中殘留的抗真菌菌素；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；硫酸慶大霉素抑制雜菌生長，提高了念珠菌的分離率；苯胺蘭為指示劑；四水檸檬酸鈣為緩沖劑和激活劑；蒜硫胺素為營養(yǎng)強化劑，可以促進葡萄糖攝取；甘氨膽酸抑制革蘭氏陽性菌生長；紅門蘭為蘭科植物蒙古紅門蘭的全草，全草含糖類90%，蛋白質(zhì)2. 5%，脂肪O. 4%，糖類中的80%為粘液質(zhì)及淀粉，20%的游離糖和粗纖維；在粘液質(zhì)中分得半乳糖，果糖，甘露糖，木糖及半乳糖醛酸；游離糖中有棉子糖，麥芽糖，蔗糖，葡萄糖及木糖；蛋白質(zhì)中富含賴氨酸、纈氨酸及棕櫚酸在內(nèi)的15種脂肪酸，其水提液是良好的營養(yǎng)強化劑，并且有抑制腸道桿菌生長的作用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、念珠菌分離率高的特點。
具體實施例方式以下結(jié)合實際情況，對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細說明。實施例1，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉3g ;牛心粉20g ;硫酸鎂I. 2g ;瓊脂15g ;硫酸慶大霉素O. 02g ;苯胺蘭O. Ig ;四水檸檬酸鈣O. 2g ;蒸餾水加至 1000ml。制備方法取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素溶于蒸懼水中，混勻，蒸懼水定容至1000ml, 121 °C, 15min滅菌后分裝。實施例2，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉IOg ;牛心粉IOg ;硫酸鎂2g ;瓊脂20g ;硫酸慶大霉素O. 005g ;苯胺蘭O. 4g ;四水檸檬酸鈣O. Olg ;蒸餾水加至 1000ml。制備方法取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素溶于蒸懼水中，混勻，蒸懼水定容至1000ml, 121 °C, 15min滅菌后分裝。實施例3，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉3g ;牛心粉20g ;硫酸鎂 I. 2g ;瓊脂15g ;硫酸慶大霉素O. 02g ;苯胺蘭O. Ig ;四水檸檬酸鈣O. 2g，蒜硫胺素O. 05g, 甘氨膽酸O. Ig ;蒸餾水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至 1000ml, 121 °C，15min 滅菌后分裝。實施例4，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉IOg ;牛心粉IOg ;硫酸鎂 2g ;瓊脂20g ;硫酸慶大霉素O. 005g ;苯胺蘭O. 4g ;四水檸檬酸鈣O. Olg，蒜硫胺素O. 5g， 甘氨膽酸O. Olg ;蒸餾水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至 1000ml, 121 °C，15min 滅菌后分裝。實施例5，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉6g ;牛心粉15g ;硫酸鎂 I. 5g ;瓊脂18g ;硫酸慶大霉素O. Olg ;苯胺蘭O. 3g ;四水檸檬酸鈣O. lg，蒜硫胺素O. 3g， 甘氨膽酸O. 05g ;蒸餾水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至 1000ml, 121 °C，15min 滅菌后分裝。實施例6，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉3g ;牛心粉20g ;硫酸鎂 I. 2g ;瓊脂15g ;硫酸慶大霉素O. 02g ;苯胺蘭O. Ig ;四水檸檬酸鈣O. 2g，蒜硫胺素O. 05g，甘氨膽酸O. lg，濃度200g/L的紅門蘭水提液200ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法(I)取 40g紅門蘭加水煮沸O. 5小時，過濾，取濾液，根據(jù)濾液體積，采取濃縮或者加水調(diào)整體積到濃度為200g/L，得紅門蘭水提液200ml ；(2)取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于步驟I所得紅門蘭水提液中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，121 °C，15min滅菌后分裝。實施例7，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉IOg ;牛心粉IOg ;硫酸鎂 2g ;瓊脂20g ;硫酸慶大霉素O. 005g ;苯胺蘭O. 4g ;四水檸檬酸鈣O. Olg，蒜硫胺素O. 5g， 甘氨膽酸O. Olg，濃度200g/L的紅門蘭水提液300ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法(1) 取60g紅門蘭加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得紅門蘭水提液 300ml ; (2)取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于步驟I所得紅門蘭水提液中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，12rC,15min 滅菌后分裝。實施例8，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉6g ;牛心粉15g ;硫酸鎂 I. 5g ;瓊脂18g ;硫酸慶大霉素O. Olg ;苯胺蘭O. 3g ;四水檸檬酸鈣O. lg，蒜硫胺素O. 3g，甘氨膽酸O. 05g，濃度200g/L的紅門蘭水提液250ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法(I)取 50g紅門蘭加水煮沸O. 8小時，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得紅門蘭水提液 300ml ; (2)取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于步驟I所得紅門蘭水提液中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，12rC,15min 滅菌后分裝。本發(fā)明所得念珠菌選擇培養(yǎng)基用于糞便標本具有檢出可靠、念珠菌分離率高的特點，為臨床資料充分證明，有關(guān)資料如下。I對象與方法。I. I培養(yǎng)基制備共設(shè)4組，分別為實施例8方案組、實施例5方案組、實施例2方案組和對照組，對照組為馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基。1.2培養(yǎng)方法采集門診或住院腹瀉患者新鮮糞便，懸浮于5ml O. 9%生理鹽水， 用接種環(huán)分區(qū)劃線于分離平板，37°C培養(yǎng)24h，挑取細小菌落進行菌屬鑒定。I. 3統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS 13. O進行統(tǒng)計分析，P〈 O. 05表示有顯著性意義。2結(jié)果在969份糞便標本，分離并鑒定為念珠菌的，實施例8方案組為167株， 實施例5方案組為158株，實施例2方案組為155株，對照組PDA培養(yǎng)基為124株，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，本發(fā)明各實施例組與對照組比較具有明顯差異(實施例8方案組P=O. 006 ;實施例 5方案組P=O. 029 ;實施例2方案組P=O. 045)。結(jié)果表明，本發(fā)明實施例念珠菌分離率明顯高現(xiàn)有的常用于真菌培養(yǎng)的PDA培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉3 10g ；牛心粉10 20g ；硫酸鎂I. 2^2g ；瓊脂15 20g ；硫酸慶大霉素O. 005^0. 02g ；苯胺蘭O. I O. 4g ；四水檸檬酸鈣O. 0Γ0. 2g ；蒸餾水加至1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基，其特征在于每 IOOOml培養(yǎng)基還含有蒜硫胺素O. 05、. 5g。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基，其特征在于每 IOOOml培養(yǎng)基還含有甘氨膽酸O. 0Γ0. lg。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基，其特征在于每 IOOOml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的紅門蘭水提液20(T300ml。
5.一種制備權(quán)利要求4中所述用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于包括以下步驟(1)取紅門蘭加水煮沸O.5^1小時，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得紅門蘭水提液；(2)取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于步驟I所得紅門蘭水提液中，混勻，蒸餾水定容，121°C，15min滅菌后分裝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于糞便標本的念珠菌選擇培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉3~10g；牛心粉10~20g；硫酸鎂1.2~2g；瓊脂15~20g；硫酸慶大霉素0.005~0.02g；苯胺蘭0.1~0.4g；四水檸檬酸鈣0.01~0.2g；蒸餾水加至1000ml。上述藥物制備方法為取麥芽浸粉、牛心粉、硫酸鎂、瓊脂、苯胺蘭、四水檸檬酸鈣、硫酸慶大霉素、蒜硫胺素、甘氨膽酸溶于紅門蘭水煮液中，混勻，定容，滅菌后分裝。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、念珠菌分離率高的特點。
文檔編號C12Q1/04GK102605037SQ20121005648
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月6日
發(fā)明者劉艷, 張偉, 許青 申請人:劉艷