一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 阪崎腸桿菌是腸桿菌科的一種有周生鞭毛、能運(yùn)動(dòng)、無芽孢、兼性厭氧的革蘭陰性 桿菌，以前被稱為黃色陰溝腸桿菌，1980年更名為阪崎腸桿菌。該菌是人和動(dòng)物腸道中的 一種正常寄生菌，但是在一定條件下會致病。1961年，兩位英國醫(yī)生Urmenyi和Franklin 首次報(bào)道了兩例由阪崎腸桿菌引起的新生兒腦膜炎，隨后丹麥、美國、荷蘭、希臘、冰島、比 利時(shí)等國家相繼報(bào)道了新生兒阪崎腸桿菌感染事件。新生兒感染該菌可能導(dǎo)致腦膜炎、壞 死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥等疾病，并可引起嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥甚至死亡，感染致死率 高達(dá)20%~50%，即使治愈，也容易造成神經(jīng)系統(tǒng)性后遺癥。該菌偶爾還可引起成人局部 感染、菌血癥以及骨髓炎等。阪崎腸桿菌已經(jīng)被國際食品微生物標(biāo)準(zhǔn)委員會（ICMSF)稱為 是嚴(yán)重危害特定人群、威脅生命或?qū)е侣詫?shí)質(zhì)性后遺癥的細(xì)菌。目前有關(guān)阪崎腸桿菌的 污染來源尚不清楚。Leclercq等2002年從某些食品樣本(例如奶酪、香料、碎牛肉等）中， Hamilton等2003年從廄螫蠅中均分離出了該菌，但從已經(jīng)報(bào)道的諸多新生兒感染病例報(bào) 告中基本可以確定嬰兒配方奶粉是新生兒感染的主要途徑。
[0003]顯色培養(yǎng)基（Chromogenic/Fluorogenic Culture Media)是一類利用微生物自身 代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)顯色的原理來檢測微生物的新型培養(yǎng)基。這些相應(yīng)的顯 色底物是由產(chǎn)色基因和微生物部分可代謝物質(zhì)組成，在特異性酶作用下，游離出產(chǎn)色基因 顯示一定顏色，直接觀察菌落顏色即可對菌種作出鑒定。它是一種新型分離培養(yǎng)基，利用顯 色培養(yǎng)基進(jìn)行微生物的篩選分離，其反應(yīng)的靈敏度和特異性大大優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)基。
[0004] 傳統(tǒng)的阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基中的顯色劑為4-硝基苯酚-a-D-吡喃葡萄糖苷。 硝基苯酸-a-D-R比喃匍萄糖苷廣生的4_硝基苯酸在瓊脂中很容易擴(kuò)散影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 觀察，因而存在一定的局限性。此外，在TSA上加入4-甲基傘形花內(nèi)酮-a-D葡萄糖苷酸(a-MUG)可鑒別阪崎腸桿菌疑似菌落，但其只能在紫外線照射條件下才能區(qū)分，且紫外線 對人體有害。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng) 基的技術(shù)方案。
[0006] 所述的一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于由以下組分構(gòu)成：蛋白 胨10-20g/L、酵母粉5-7g/L、氯化鈉5-8 g/L、檸檬酸鐵銨0. 5-1. 5 g/L、硫代硫酸 鈉0. 5-1. 5g/L、脫氧膽酸鈉0. 5-1. 52g/L、5-溴-6-氯-3-吲哚-a-D-吡喃葡萄糖 0? 01-0. 25g/L、瓊脂13-20g/L，pH 6. 8±0. 2。
[0007] 所述的一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于由以下組分構(gòu)成：蛋白胨 12-18g/L、酵母粉5-7g/L、氯化鈉6-7g/L、檸檬酸鐵銨0. 8-1. 2 g/L、硫代硫酸鈉0. 8-1. 2g/ L、脫氧膽酸鈉0. 8-1. 3g/L、5-溴-6-氯-3-吲哚-a-D-吡喃葡萄糖0. 015-0. 2g/L、瓊脂14-18g/L〇
[0008] 所述的一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于由以下組分構(gòu)成：蛋白胨20g/ L、酵母粉6g/L、氯化鈉5g/L、檸檬酸鐵銨lg/L、硫代硫酸鈉lg/L、脫氧膽酸鈉lg/L、 5_溴-6-氯-3-吲哚-a-D-吡喃葡萄糖0?lg/L、瓊脂15g/L。
[0009] 本發(fā)明的積極效果：本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，操作方便；實(shí)驗(yàn)結(jié)果便于觀察，分 析；提高檢測效率和準(zhǔn)確率；與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比，其成本更低，利于推廣應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 以下結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0011] 實(shí)施例1 1、制備阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基配方為：蛋白胨20. 0g、酵母粉6. 0g、氯 化鈉5.0g、檸檬酸鐵銨l.Og、硫代硫酸鈉l.Og、脫氧膽酸鈉1.0g、5-溴-6-氯-3-吲 噪-a-D-P比喃葡萄糖0?lg、瓊脂15g、pH6. 8±0. 2、蒸餾水1000ml。
[0012] 稱取6. 0g該顯色培養(yǎng)基，加入150ml蒸餾水，加熱煮沸完全溶解，121°C高壓滅菌 15min，冷至50°C左右時(shí)，傾入無菌平皿，備用。
[0013] 2、接種：將活化后的阪崎腸桿菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、變形 桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、蠟樣芽孢桿菌分別涂布于上述顯色培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24h。
[0014] 3、結(jié)果：
實(shí)施例2 1、制備阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基配方為：蛋白胨l〇g、酵母粉5g、氯化鈉5g、檸 檬酸鐵銨〇. 5g、硫代硫酸鈉0. 5g、脫氧膽酸鈉0. 5g、5-溴-6-氯-3-吲哚-a -D-吡喃葡萄 糖O.Olg、瓊脂13g、pH 6.8±0.2、蒸餾水1000ml。
[0015] 稱取6. 0g該顯色培養(yǎng)基，加入150ml蒸餾水，加熱煮沸完全溶解，121°C高壓滅菌 15min，冷至50°C左右時(shí)，傾入無菌平皿，備用。
[0016] 2、接種：將活化后的阪崎腸桿菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、變形 桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、蠟樣芽孢桿菌分別涂布于上述顯色培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24h。
[0017] 3、結(jié)果：
實(shí)施例3 1、制備阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基配方為：蛋白胨20g、酵母粉7g、氯化鈉8 g、檸檬酸鐵銨1. 5 g、硫代硫酸鈉1. 5g、脫氧膽酸鈉1. 52g、5-溴-6-氯-3-吲哚-a -D-吡喃 葡萄糖〇? 25g、瓊脂20g、pH6.8±0. 2、蒸餾水 1000ml。
[0018] 稱取6. 0g該顯色培養(yǎng)基，加入150ml蒸餾水，加熱煮沸完全溶解，121°C高壓滅菌 15min，冷至50°C左右時(shí)，傾入無菌平皿，備用。
[0019] 2、接種：將活化后的阪崎腸桿菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、變形 桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、蠟樣芽孢桿菌分別涂布于上述顯色培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24h。
[0020] 3、結(jié)果：
實(shí)施例4 1、所述的阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方為：蛋白胨20. 0g、酵母粉6.0g、氯 化鈉5. 0g、檸檬酸鐵銨1. 0g、硫代硫酸鈉1. 0g、脫氧膽酸鈉1. 0g、5-溴-6-氯-3-吲 噪-a-D-P比喃葡萄糖0?lg、瓊脂15g、pH6. 8±0. 2、蒸餾水1000ml。
[0021] 稱取6. 0g該顯色培養(yǎng)基，加入150ml蒸餾水，加熱煮沸完全溶解，121°C高壓滅菌 15min，冷至50°C左右時(shí)，傾入無菌平皿，備用。
[0022] 2、接種：用接種環(huán)挑取阪崎腸桿菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、變 形桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、蠟樣芽孢桿菌的單菌落于緩沖蛋白胨水（BPW)培養(yǎng)基混合活化。 將混合培養(yǎng)液稀釋10 4倍，再取l〇〇ul涂布于上述顯色培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24h。
[0023] 3、結(jié)果：培養(yǎng)基中長出紫紅色和灰黑色單菌落，紫紅色單菌落鑒定為阪崎腸桿菌 菌落。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于由以下組分構(gòu)成：蛋白胨10-20g/L、酵母 粉5-7g/L、氯化鈉5-8 g/L、檸檬酸鐵銨0. 5-1. 5 g/L、硫代硫酸鈉0. 5-1. 5g/L、脫氧膽酸鈉 0? 5-1. 52g/L、5-溴-6-氯-3-吲哚- a -D-吡喃葡萄糖0? 01-0. 25g/L、瓊脂13-20g/L，pH 6. 8±0. 2。2. 如權(quán)利要求1所述的一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于由以下組分構(gòu)成： 蛋白胨12-18g/L、酵母粉5-7g/L、氯化鈉6-7g/L、檸檬酸鐵銨0. 8-1. 2 g/L、硫代硫酸鈉 0? 8-1. 2g/L、脫氧膽酸鈉0? 8-1. 3g/L、5-溴-6-氯-3-吲哚-a -D-吡喃葡萄糖0? 015-0. 2g/ L、瓊脂14-18g/L。3.如權(quán)利要求1所述的一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于由以下組分構(gòu)成：蛋 白胨20g/L、酵母粉6g/L、氯化鈉5g/L、檸檬酸鐵銨lg/L、硫代硫酸鈉lg/L、脫氧膽酸鈉Ig/ L、5-溴-6-氯-3-吲哚- a -D-吡喃葡萄糖0? lg/L、瓊脂15g/L。
【專利摘要】一種阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。該培養(yǎng)基由以下組分構(gòu)成：蛋白胨10-20g/L、酵母粉5-7g/L、氯化鈉5-8g/L、檸檬酸鐵銨0.5-1.5g/L、硫代硫酸鈉0.5-1.5g/L、脫氧膽酸鈉0.5-1.52g/L、5-溴-6-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡萄糖0.01-0.25g/L、瓊脂13-20g/L，pH？6.8±0.2。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，操作方便；實(shí)驗(yàn)結(jié)果便于觀察，分析；提高檢測效率和準(zhǔn)確率；與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比，其成本更低，利于推廣應(yīng)用。
【IPC分類】C12N1/20
【公開號】CN105062934
【申請?zhí)枴緾N201510580890
【發(fā)明人】劉士旺, 樓堅(jiān), 斯丹丹, 施麗潔, 周亞琴, 尹學(xué)輝, 方文姬, 林學(xué)海, 吳元鋒, 黃 俊
【申請人】浙江科技學(xué)院
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年9月14日