專利名稱：一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
鷹嘴豆(Cicer arietinum.L)是世界上栽培面積較大的食用豆類作物之一，主要分布于世界40多個(gè)國家。在我國，主要種植于新疆、甘肅等省區(qū)。鷹嘴豆是豆科，鷹嘴豆屬植物，起源于亞洲西部和近東地區(qū)，全球栽培面積超過千萬公頃，大多分布在印度、巴基斯坦和土耳其等干旱或半干旱地區(qū)，是世界第三大豆科作物。鷹嘴豆也是我國維吾爾族人民喜愛的一種副食品，在新疆已有2500年的歷史，種植面積在30萬畝左右。由于鷹嘴豆具有較高的營養(yǎng)價(jià)值、豐產(chǎn)耐旱、直立抗倒伏、較耐高溫和生物固氮等特點(diǎn)，上述優(yōu)良性狀已引起鷹嘴豆商業(yè)生產(chǎn)者和研究者的重視。目前，國內(nèi)對(duì)鷹嘴豆的研究還處于起步階段，且國內(nèi)關(guān)于鷹嘴豆遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究尚未見報(bào)道，同時(shí)我們具有地理和資源優(yōu)勢，對(duì)鷹嘴豆有強(qiáng)大的市場需求，有條件開展對(duì)鷹嘴豆遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究工作，并為今后的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。這一研究對(duì)以后鷹嘴豆轉(zhuǎn)基因研究，遺傳育種的研究，離體組織培養(yǎng)等研究提供技術(shù)支持和理論依據(jù)；為鷹嘴豆經(jīng)濟(jì)效益的提高和鷹嘴豆產(chǎn)量及品質(zhì)的提高有一定的推動(dòng)作用，對(duì)鷹嘴豆遺傳育種的推廣和發(fā)展有積極作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種利用鷹嘴豆成熟種子萌發(fā)形成帶腋芽的小段為外植體快速繁殖鷹嘴豆的新方法，這一研究對(duì)今后鷹嘴豆轉(zhuǎn)基因，遺傳育種等研究提供技術(shù)支持和理論依據(jù)；為鷹嘴豆經(jīng)濟(jì)效益的提高和鷹嘴豆產(chǎn)量及品質(zhì)的提高有一定的推動(dòng)作用。

本發(fā)明實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，該方法按以下步驟進(jìn)行:配制基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基；選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子進(jìn)行消毒處理后萌發(fā)；待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)；將初代幼芽接種于增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)為繼代幼芽；將繼代幼芽接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。進(jìn)一步，組培培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基，組分與各組分在每升中所含重量為:I)基本培養(yǎng)基:MS 或 1/2MS 培養(yǎng)基，其中 Gelzan2g/L，MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ；2)種子萌發(fā)培養(yǎng)基:1/2MS ；3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+2，4-D0.5mg/L+6_BA3mg/L ；4)增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；5)生根培養(yǎng)基:1/2MS (IOg 蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L。
進(jìn)一步，鷹嘴豆種子消毒處理與萌發(fā)方法為:選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子，I %次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺(tái)中，0.1%升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于1/2MS培養(yǎng)基中，26±2°C，16/8光暗交替培養(yǎng)。進(jìn)一步，誘導(dǎo)培養(yǎng)方法為:待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)；26±2°C溫度下，16/8光暗交替培養(yǎng),經(jīng)20天左右培養(yǎng)至外植體誘導(dǎo)萌發(fā)出初代幼芽。進(jìn)一步，增殖培養(yǎng)方法為:將初代幼芽接種于增殖培養(yǎng)基上，在同上條件下經(jīng)15-20天培養(yǎng)至分化形成2-5倍、芽長3-5厘米的繼代幼芽。進(jìn)一步，生根培養(yǎng):將繼代幼芽接種到生根培養(yǎng)基中，在相同條件下經(jīng)30-40天培養(yǎng)至幼苗基部長出8-15條毛細(xì)根系，再經(jīng)20-30天培養(yǎng)至根長7-10厘米。本發(fā)明提供的利用鷹嘴豆成熟種子萌發(fā)形成帶腋芽的小段為外植體快速繁殖鷹嘴豆的新方法，這一研究對(duì)今后鷹嘴豆轉(zhuǎn)基因，遺傳育種等研究提供技術(shù)支持和理論依據(jù)；為鷹嘴豆經(jīng)濟(jì)效益的提高和鷹嘴豆產(chǎn)量及品質(zhì)的提高有一定的推動(dòng)作用。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。本發(fā)明提供了一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，該方法按以下步驟進(jìn)行:(一 )組培培養(yǎng)基的配制:包括基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基的組分與各組分在每升中所含重量為:I)基本培養(yǎng)基:MS 或 1/2MS 培養(yǎng)基，其中 Gelzan2g/L，MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ；2)種子萌發(fā)培養(yǎng)基:1/2MS ；3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+2，4-D0.5mg/L+6_BA3mg/L ；4)增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；5)生根培養(yǎng)基:1/2MS (IOg 蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；( 二 )鷹嘴豆種子的滅菌與萌發(fā):選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子，I %次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺(tái)中，0.1 %升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于1/2MS培養(yǎng)基中，26±2°C，16/8光暗交替培養(yǎng)；(三)誘導(dǎo)培養(yǎng):待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。26±2°C溫度下，16/8光暗交替培養(yǎng)，經(jīng)20天左右培養(yǎng)至外植體誘導(dǎo)萌發(fā)出初代幼芽；(四)增殖培養(yǎng):將初代幼芽接種于增殖培養(yǎng)基上，在同上條件下經(jīng)15-20天培養(yǎng)至分化形成2-5倍、芽長3-5厘米的繼代幼芽；(五)生根培養(yǎng):將繼代幼芽接種到 生根培養(yǎng)基中，在相同條件下經(jīng)30-40天培養(yǎng)至幼苗基部長出8-15條毛細(xì)根系，再經(jīng)20-30天培養(yǎng)至根長7-10厘米；以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[實(shí)例一]鷹嘴豆種子萌發(fā)與外植體制備(一)為了比較不同培養(yǎng)基對(duì)鷹嘴豆種子萌發(fā)效果的影響，制備了 MS、l/2MS、BjP 1/2B5培養(yǎng)基。選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子，I %次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺(tái)中，0.1%升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于以上各培養(yǎng)基中，26±2°C, 16/8光暗交替培養(yǎng),篩選最適培養(yǎng)基。[實(shí)例二]鷹嘴豆種子萌發(fā)與外植體制備(二 )濃硫酸處理15分鐘，流水沖洗30分鐘，75%酒精清洗I分鐘，無菌水清洗5_6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺(tái)中，0.1 %升汞浸泡I分鐘，接種于MS、1/2MS、BJP 1/2B5培養(yǎng)基中。[實(shí)例三]誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選將帶腋芽的莖段分別接種于以下培養(yǎng)基上，篩選最適于誘導(dǎo)鷹嘴豆出芽培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，該方法按以下步驟進(jìn)行: 配制基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基； 選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子進(jìn)行消毒處理后萌發(fā)； 待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)； 將初代幼芽接種于增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)為繼代幼芽； 將繼代幼芽接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，組培培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基，組分與各組分在每升中所含重量為: 1)基本培養(yǎng)基:MS或 1/2MS 培養(yǎng)基，其中 Gelzan2g/L, MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ； 2)種子萌發(fā)培養(yǎng)基:1/2MS； 3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+2，4-D0.5mg/L+6-BA3mg/L ； 4)增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L； 5)生根培養(yǎng)基:l/2MS(10g蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L。
3.如權(quán)利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，鷹嘴豆種子的滅菌與萌發(fā)方法為: 選取大小均一皺粒鷹嘴豆 種子，1%次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺(tái)中，0.1%升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于1/2MS培養(yǎng)基中，26±2°C，16/8光暗交替培養(yǎng)。
4.如權(quán)利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，誘導(dǎo)培養(yǎng)方法為: 待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)；26±2°C溫度下，16/8光暗交替培養(yǎng)，經(jīng)20天左右培養(yǎng)至外植體誘導(dǎo)萌發(fā)出初代幼芽。
5.如權(quán)利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，增殖培養(yǎng)方法為: 將初代幼芽接種于增殖培養(yǎng)基上，在同上條件下經(jīng)15-20天培養(yǎng)至分化形成2-5倍、芽長3-5厘米的繼代幼芽。
6.如權(quán)利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，生根培養(yǎng): 將繼代幼芽接種到生根培養(yǎng)基中，在相同條件下經(jīng)30-40天培養(yǎng)至幼苗基部長出8-15條毛細(xì)根系，再經(jīng)20-30天培養(yǎng)至根長7-10厘米。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，首先配制基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基；選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子進(jìn)行消毒處理后萌發(fā)；待鷹嘴豆幼苗長至10cm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)；將初代幼芽接種于增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)為繼代幼芽；將繼代幼芽接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。本發(fā)明提供的利用鷹嘴豆成熟種子萌發(fā)形成帶腋芽的小段為外植體快速繁殖鷹嘴豆的新方法，這一研究對(duì)今后鷹嘴豆轉(zhuǎn)基因，遺傳育種等研究提供技術(shù)支持和理論依據(jù)；為鷹嘴豆經(jīng)濟(jì)效益的提高和鷹嘴豆產(chǎn)量及品質(zhì)的提高有一定的推動(dòng)作用。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103168684SQ201210596360
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2012年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月18日
發(fā)明者張樺, 高新, 蘇豫梅, 任燕萍, 付國勇 申請(qǐng)人:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)