專利名稱：用于核酸遞送系統(tǒng)的可釋放聚合脂質(zhì)的制作方法
用于核酸遞送系統(tǒng)的可釋放聚合脂質(zhì)引用的相關(guān)申請本申請要求了 2008年12月17日提交的美國臨時專利申請Nos. 61/115，371和 61/115，379的優(yōu)先權(quán)，它們的內(nèi)容引入本文作為參考。
背景技術(shù)：
使用核酸的治療已被提議用于治療多種疾病。這種提議的核酸治療之一是反義治療，其中治療基因可選擇性地調(diào)控與疾病相關(guān)基因的表達并能使與治療疾病的其他治療途徑相關(guān)的副作用最小化。然而由于與這種治療核酸的遞送和穩(wěn)定性相關(guān)的難題，使用核酸的治療至今仍受限制。已提出過幾種基因遞送系統(tǒng)來克服上述難題以有效地將治療基因?qū)肽繕藚^(qū)域，例如在體外或體內(nèi)的癌細胞或其他細胞或組織。因此，本文提供了所需要的用于治療目的的遞送核酸的新遞送系統(tǒng)和方法。發(fā)明概述本發(fā)明提供了含有酸可變性鏈接基的可釋放聚合脂質(zhì)以及含有其的用于核酸遞送的納米微粒組合物。聚核酸例如寡核苷酸被包封在納米微粒復(fù)合物之內(nèi)，該納米微粒復(fù)合物含有本文所述的可釋放聚合脂質(zhì)、陽離子脂質(zhì)和致融脂質(zhì)的混合物。根據(jù)本發(fā)明的這個方面，用于遞送核酸(即寡核苷酸)的可釋放聚合脂質(zhì)具有式 ⑴R——(L1)a——M——(L2)b——Q其中R是非抗原性聚合物；L1^2獨立地選自雙功能鏈接基；M是酸可變性鏈接基；Q是取代或非取代飽和或非飽和的含C4-30的基部；(a)是零或正整數(shù)；和(b)是零或正整數(shù)，其中目標基團任選地與非抗原性聚合物連接。本發(fā)明也提供了用于核酸遞送的納米微粒組合物。根據(jù)本發(fā)明，用于遞送核酸 (即寡核苷酸)的納米微粒組合物包括⑴陽離子脂質(zhì)；(ii)致融脂質(zhì)；和(iii)式(I)的化合物。本發(fā)明的另一方面，提供了在體內(nèi)或體外將核酸(優(yōu)選寡核苷酸)遞送至細胞或組織的方法。通過本文所述方法導(dǎo)入的寡核苷酸可調(diào)控目標基因的表達。在更多方面，本發(fā)明提供了抑制目標基因表達的方法，即哺乳動物優(yōu)選人的癌基因和與炎癥疾病相關(guān)的基因。該方法包括將細胞例如癌細胞或組織與由本文所述的納米微粒組合物制備的納米微粒接觸。包封在納米微粒之內(nèi)的寡核苷酸被釋放并介導(dǎo)要治療細胞或組織中的mRNA或蛋白的下調(diào)。納米微粒的治療實現(xiàn)了目標基因表達的調(diào)控和疾病治療伴隨相關(guān)的其他益處，例如抑制癌細胞的生長。這種治療可作為單獨治療或作為與一種或多種可用和/或被認可的治療聯(lián)合治療的一部分而執(zhí)行。更多方面包括制備式(I)化合物以及含有其的納米微粒的方法。本文所述的可釋放聚合脂質(zhì)包括酸可變性鏈接基。當(dāng)含有生物活性基部的納米微粒達到目標位點如酸PH的胞內(nèi)或胞外環(huán)境，可釋放聚合脂質(zhì)開始降解，裂解納米微粒，并在目標位點上或之內(nèi)釋放治療劑。通過采用含縮酮或縮醛的基部或含亞胺的基部，納米微粒可在中性或弱堿性條件下保持穩(wěn)定。但是，在通常的低PH目標位點，例如癌細胞，縮酮和縮醛基部會降解，從而釋放包封的治療劑如寡核苷酸。當(dāng)納米微粒進入細胞并到達酸性細胞隔室例如內(nèi)涵體時，含有可釋放聚合脂質(zhì)的納米微粒幫助解離和釋放包封在其中的核酸。不受任何理論的限制，這種特征部分歸功于酸可變性鏈接基?？s酮或亞胺鏈接基是酸可變性的，在酸性環(huán)境例如內(nèi)涵體中會水解。這些鏈接基促使了納米微粒和內(nèi)涵體的裂解，從而實現(xiàn)核酸的胞內(nèi)釋放。本發(fā)明的一個優(yōu)勢是含有本發(fā)明所述可釋放聚合脂質(zhì)的納米微粒組合物提供了在體外遞送核酸，以及在體內(nèi)給予核酸的方式。這種遞送技術(shù)實現(xiàn)了在體內(nèi)治療劑寡核苷酸的穩(wěn)定性，轉(zhuǎn)染效率，和生物利用度的增強。可釋放聚合脂質(zhì)擴展了納米微粒的循環(huán)并防止了納米微粒過早地從體內(nèi)排泄。該聚合脂質(zhì)也降低了免疫原性。本文所述可釋放聚合脂質(zhì)在生物流體中穩(wěn)定了納米微粒復(fù)合物和其中的核酸。不受任何理論的限制，據(jù)信，納米微粒復(fù)合物增強了被包封的核酸的穩(wěn)定性，并為核酸屏蔽了至少部分核酸酶，從而保護包封核酸在如血液或組織存在下免受降解。本文所述納米微粒也有利地提供了如更高的轉(zhuǎn)染效率。本文所述納米微粒實現(xiàn)了在體外和體內(nèi)沒有轉(zhuǎn)染劑輔助下細胞的轉(zhuǎn)染。納米微粒是安全的因為它們沒有與現(xiàn)有已知的需要轉(zhuǎn)染劑的納米微粒相同的毒性作用。納米微粒的高轉(zhuǎn)染效率也提供了將治療劑核酸遞送至細胞的胞質(zhì)和核的改善方式。本文所述納米微粒也有利地提供了在納米微粒制備中的穩(wěn)定性和靈活性。納米微?？稍趯挿秶腜H內(nèi)制備，例如約2-約12。本文所述的納米微粒也可在期望生理pH例如約7. 2-約7. 6下用于臨床。本文所述的納米遞送系統(tǒng)也實現(xiàn)了足夠量的治療劑寡核苷酸選擇性地用于期望的目標區(qū)域，例如經(jīng)EPR(增強的穿透和保持)作用的癌細胞。因而納米微粒組合物改善了在癌細胞或組織中特定mRNA下調(diào)。另一優(yōu)勢是被本文所述可釋放聚合脂質(zhì)實現(xiàn)了制備均勻大小的納米微粒。含有本文所述可釋放聚合脂質(zhì)的納米微粒復(fù)合物在緩沖條件下是穩(wěn)定的。另一優(yōu)勢是本文所述的納米微粒實現(xiàn)了生物活性分子的遞送，例如一種或多種不同目標寡核苷酸的小分子化學(xué)治療劑，從而在疾病治療中實現(xiàn)協(xié)調(diào)作用。在以下描述中將顯現(xiàn)出其他和更多優(yōu)勢。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“殘基”應(yīng)理解為表示化合物在經(jīng)過與其他化合物的置換反應(yīng)之后仍保留的部分，如聚乙二醇等。
為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“烷基”是指飽和脂族烴，包括直鏈，支鏈，和環(huán)狀烷基。術(shù)語“烷基”也包括烷硫基烷基，烷氧基烷基，環(huán)烷基烷基，雜環(huán)烷基，和C^6烷?；榛?。優(yōu)選地，烷基具有1-12個碳。更優(yōu)選地，它是約1-7個碳，還更優(yōu)選約1-4個碳的低級烷基。 烷基可以是取代或非取代的。當(dāng)被取代時，取代基團優(yōu)選包括鹵素，氧，疊氮，硝基，氰基，烷基，烷氧基，烷硫基，烷硫基烷基，烷氧基烷基，烷氨基，三商素甲基，羥基，巰基，羥基，氰基， 烷矽基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，雜環(huán)烷基，雜芳基，烯基，炔基，C1^6烴?；?，芳基，和氨基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“取代”是指功能基團或化合物內(nèi)所含的一個或多個原子被下組中的基部之一添加或替代商素，氧，疊氮，硝基，氰基，烷基，烷氧基，烷硫基，烷硫基烷基，烷氧基烷基，烷氨基，三商素甲基，羥基，巰基，羥基，氰基，烷矽基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，雜環(huán)烷基，雜芳基，烯基，炔基，C1^6烷?；榛蓟?，和氨基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“烯基”是指含有至少一個碳碳雙鍵的基團，包括直鏈，支鏈，和環(huán)狀基團。優(yōu)選地，烯基具有2-12個碳。更優(yōu)選地，它是約2-7個碳，還更優(yōu)選約2-4 個碳的低級烯基。烯基可以是取代或非取代的。當(dāng)被取代時，取代基團優(yōu)選包括鹵素，氧，疊
氮，硝基，氰基，烷基，烷氧基，烷硫基，烷硫基烷基，烷氧基烷基，烷氨基，三商素甲基，羥基， 巰基，羥基，氰基，烷矽基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，雜環(huán)烷基，雜芳基，烯基，炔基，CV6烴?；?， 芳基，和氨基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“炔基”是指含有至少一個碳碳三鍵的基團，包括直鏈，支鏈，和環(huán)狀基團。優(yōu)選地，炔基具有2-12個碳。更優(yōu)選地，它是約2-7個碳，還更優(yōu)選約2-4 個碳的低級炔基。炔基可以是取代或非取代的。當(dāng)被取代時，取代基團優(yōu)選包括鹵素，氧，疊氮，硝基，氰基，烷基，烷氧基，烷硫基，烷硫基烷基，烷氧基烷基，烷氨基，三商素甲基，羥基， 巰基，羥基，氰基，烷矽基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，雜環(huán)烷基，雜芳基，烯基，炔基，CV6烴?；?， 芳基，和氨基?！叭不钡氖纠ū不?，丙炔，和3-己炔。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“芳基”是指含有至少一個芳族環(huán)的芳族烴環(huán)體系。芳族環(huán)可任選地與其他芳族烴環(huán)或非芳族烴環(huán)融合或附著在其上。芳基的示例包括例如苯基， 萘基，1，2，3，4_四氫化萘和聯(lián)苯。芳基的優(yōu)選示例包括苯基和萘基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“環(huán)烷基”是指C3_8環(huán)狀烴。環(huán)烷基的示例包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基和環(huán)辛基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“環(huán)烯基”是指含有至少一個碳碳雙鍵的C3_8環(huán)狀烴。環(huán)烯基的示例包括環(huán)戊烯基，環(huán)戊二烯基，環(huán)己烯基，1，3-環(huán)己二烯基，環(huán)庚烯基，環(huán)庚三烯基和環(huán)辛烯基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“環(huán)烷基烷基”是指被C3_8環(huán)烷基取代的烷基。環(huán)烷基烷基的示例包括環(huán)丙基甲基和環(huán)戊基乙基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“烷氧基”是指通過氧橋附著在母分子基部上的指定數(shù)量碳原子的烷基。烷氧基的示例包括例如甲氧基，乙氧基，丙氧基和異丙氧基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“烷芳基”是指被烷基取代的芳基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“烷氧基烷基”是指被烷氧基取代的烷基。 為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“烷硫基烷基，，是指烷基-S-烷基硫醚，例如甲基硫代甲基或甲基硫代乙基。
為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“氨基”是指本領(lǐng)域已知的通過用有機基團替代一個或多個氫殘基由氨衍生的含氮基團。例如，術(shù)語“酰胺基”和“烷氨基”是指分別具有?；屯榛〈奶囟∟取代有機基團。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“烷?；笔侵副煌榛〈奶减；?。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“鹵素”或“鹵”是指氟，氯，溴和碘。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“雜環(huán)烷基”是指含有至少一個選自氮，氧，和硫的雜原子的非芳族環(huán)體系。雜環(huán)烷基環(huán)可任選地與其他雜環(huán)烷基環(huán)和/或非芳族烴環(huán)融合或附著在其上。優(yōu)選的雜環(huán)烷基具有3-7個環(huán)原子。雜環(huán)烷基的示例包括例如哌嗪，嗎啉，哌啶，四氫呋喃，吡咯烷，和吡唑。優(yōu)選的雜環(huán)烷基包括哌啶基，哌啶基，嗎啉基，和吡咯烷基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“雜芳基”是指含有至少一個選自氮，氧和硫的雜原子的芳族環(huán)體系。雜芳基可與一個或多個雜芳環(huán)，芳族或非芳族烴環(huán)或雜環(huán)烷基環(huán)融合或附著在其上。雜芳基的示例包括例如吡啶，呋喃，噻吩，5，6，7，8-四氫異喹啉和嘧啶。雜芳基的優(yōu)選示例包括噻吩基，苯并噻吩基，吡啶基，喹啉基，吡嗪基，嘧啶基，咪唑基，苯并咪唑基， 呋喃基，噻唑基，苯并噻唑，異惡唑基，惡二唑基，異噻唑基，苯并異噻唑基，三唑基，三唑基， 吡咯基，吲哚基，吡唑基和苯并吡唑基。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“雜原子”是指氮，氧和硫。在一些實施方式中，取代烷基包括羧烷基，氨烷基，二烷氨基，羥烷基和巰烷基；取代烯基包括羧烯基，氨烯基，二烯氨基，羥烯基和巰烯基；取代炔基包括羧炔基，氨炔基，二炔氨基，羥炔基和巰炔基；取代環(huán)烷基包括基部例如4-氯環(huán)己基；芳基包括基部例如萘基； 取代芳基包括基部例如3-溴苯基；芳烷基包括基部例如甲苯基；雜烷基包括基部例如乙基噻吩；取代雜芳基包括基部例如3-甲氧基噻吩；烷氧基包括基部例如甲氧基；和苯氧基包括基部例如3-硝基苯氧基。鹵素應(yīng)該理解為包括氟，氯，碘和溴。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“正整數(shù)”應(yīng)該理解為包括等于或大于1的整數(shù)，并處于普通技術(shù)人員理解的合理范圍之內(nèi)。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“連接”應(yīng)該理解為包括一個基團與另一個的共價(優(yōu)選)或非共價附著，即化學(xué)反應(yīng)的結(jié)果。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“有效量”和“足夠量”應(yīng)該表示實現(xiàn)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的期望效果或治療效果的量。使用本文所述納米微粒組合物形成的術(shù)語“納米微?！焙?或“納米微粒復(fù)合物” 是指脂質(zhì)基的納米復(fù)合物。納米微粒含有包封在陽離子脂質(zhì)，致融脂質(zhì)和PEG脂質(zhì)混合物中的核酸例如寡核苷酸?？蛇x地，可形成無核酸的納米微粒。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“治療劑寡核苷酸”是指用作藥物或診斷劑的寡核苷酸。為了本發(fā)明的目的，“基因表達的調(diào)控”應(yīng)該理解為廣義地包括任何類型基因優(yōu)選與癌癥和炎癥相關(guān)基因相對于未用本文所述納米微粒治療所觀察到的基因表達的下調(diào)或上調(diào)，無論給予途徑與否。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“抑制目標基因的表達”應(yīng)該理解為表示mRNA的表達或翻譯的蛋白量相對于未用本文所述納米微粒治療所觀察的降低或衰減。這種抑制的適宜試驗包括例如使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)檢查蛋白或mRNA水平例如點印染，northern 印染，原位雜交，ELISA，免疫沉淀，酶功能，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的表型試驗。治療條件可通過例如細胞優(yōu)選癌細胞或組織中mRNA水平降低所證實。廣義而言，應(yīng)該認為當(dāng)獲得期望反應(yīng)時即視為發(fā)生了成功的抑制或治療。例如成功抑制或治療可通過獲得如10%或更高(即20^,30^,40% )的腫瘤生長抑制相關(guān)基因的下調(diào)來確定?？蛇x地，相對于未用本文所述納米微粒治療所觀察的，成功的治療可通過獲得癌細胞或組織中癌基因mRNA水平包括本領(lǐng)域技術(shù)人員預(yù)期的其他臨床標記降低至少 20%或優(yōu)選30%，更優(yōu)選40%或更高(級50%或80%)來確定。而且，在說明中使用單數(shù)術(shù)語并不表示僅限于此。因而，例如提及含有寡核苷酸， 膽固醇類似物，陽離子脂質(zhì)，致融脂質(zhì)，式(I)的可釋放聚合脂質(zhì)，PEG脂質(zhì)等的組合物是指一個或多個分子的寡核苷酸，膽固醇類似物，陽離子脂質(zhì)，致融脂質(zhì)，式(I)的可釋放聚合脂質(zhì)，PEG脂質(zhì)等。也預(yù)期了寡核苷酸可以是相同或不同類型的基因。也應(yīng)理解本發(fā)明不限于本文公開的特定結(jié)構(gòu)，工藝步驟，及物質(zhì)，這些結(jié)構(gòu)，工藝步驟和物質(zhì)都可有所改變。也應(yīng)理解本文所采用的術(shù)語僅用于描述特定實施方式的目的，而不會對其造成限制，因為本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其同義物所限定。附圖簡要說明


圖1圖示了制備化合物3的反應(yīng)流程，如實施例6-8所述的。圖2圖示了制備化合物10的反應(yīng)流程，如實施例9-14所述的。圖3圖示了制備化合物17的反應(yīng)流程，如實施例15-21所述的。圖4圖示了制備化合物22的反應(yīng)流程，如實施例2246所述的。圖5圖示了制備化合物沈的反應(yīng)流程，如實施例27- 所述的。圖6圖示了制備化合物30的反應(yīng)流程，如實施例四-30所述的。圖7圖示了制備化合物32的反應(yīng)流程，如實施例31-32所述的。圖8圖示了制備化合物38的反應(yīng)流程，如實施例33-37所述的。圖9圖示了制備化合物44的反應(yīng)流程，如實施例38-43所述的。
圖10圖示了制備化合物46的反應(yīng)流程，如實施例44-45所述的。
圖11圖示了制備化合物52的反應(yīng)流程，如實施例46-50所述的。
圖12描述了 pH7. 4納米微粒大小的變化，如實施例52所述的。每個制劑中Oh是左柱；池是中柱；和1 是右柱。
圖13A描述了 pH6. 5和5. 5納米微粒大小的變化，如實施例53所述的。
圖1 描述了 pH 5. 5緩沖液中納米微粒的穩(wěn)定性，是納米微粒大小的函數(shù)。
圖14描述了小鼠血漿中納米微粒的穩(wěn)定性，如實施例M所述的。
圖15描述了證實熒光核酸的細胞攝入和胞質(zhì)定位的細胞光顯微圖像，如實施例陽所述的。
圖16描述了可釋放聚合脂質(zhì)量的增加對于目標基因表達調(diào)控的影響，如實施例 56所述的。從左到右，每個實驗組(NP4，NP5，NP6，NP7)內(nèi)的柱分別標記為600nM，300nM， 150nM，75nM ；在最右邊，單柱是UTC。
圖17描述了在15PC3細胞中用包封在本文所述納米微粒內(nèi)的siRNA敲除 BCLanRNA，如實施例57所述的。柱標記如下空白NP 左柱是200η，右柱是IOOnM ；2% rPEG 從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM ；0090]5% rPEG 從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM ；
0091] 8% rPEG 從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM ；
0092] 混雜的從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM ；
0093]模仿的，如所指示的；
0094] UTC，如所指示的；和
0095]Bcl2_Tfx 從左到右200nM，25nM，IOnM, IOOnMc
0096]
圖18描述了在A549細胞中用包封在本文所述納米微粒內(nèi)的SiRNA敲除BCL2 mRNA，如實施例58所述的。柱標記如下
0097]UT :A549 ；
0098]NP-I 從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM, 12. 5nM
0099]NP-2 從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM, 12. 5nM
0100]NP-3 從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM, 12. 5nM
0101]NP-SCR 從左到右200nM，IOOnM, 50nM, 25nM, 12. 5nM ；禾口
0102]Bcl2 siRNA T :從左到右12. 5ηΜ，4ηΜ，0· 8ηΜ，0· 16ηΜ，0· 03nM，A549T。
0103]
圖19描述了在DU149細胞中用含有LNA的寡核苷酸敲除ErbB3 mRNA，如實施例 59所述的。柱標記如下
0104]A 從左到右1000nM，500nM，250nM，125nM, 62nM, OnM
0105]B 從左到右1000nM，500nM，250nM，125nM, 62nM, OnM
0106]C 從左到右1000nM，500nM，250nM，125nM, 62nM, OnM
0107]D 從左到右1000nM，500nM，250nM，125nM, 62nM, OnM ；和
0108]E 從左到右1000nM，500nM，250nM
0109]F :從左到右125mM，62nM，0nM。
0110]發(fā)明的詳細描述
0111]A.概述
0112]1.式(I)的可釋放聚合脂質(zhì)
0113]本發(fā)明的一個方面，提供了式(I)的可釋放聚合脂質(zhì)
0114]
權(quán)利要求
1.一種化合物，其具有式(I)
2.如權(quán)利要求1的化合物，其中M是含有縮酮或縮醛的基部或含有亞胺的基部。
3.如權(quán)利要求1的化合物，其中M是-CR3R4-O-CR1R2-O-CR5R6-,其中R1^獨立地選自下組氫，CV6烷基，C2_6烯基，c2_6炔基，C3_19支鏈烷基，C3_8環(huán)烷基，CV6 取代烷基，c2-6取代烯基，c2-6取代炔基，C3_8取代環(huán)烷基，芳基，取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，C1^6雜烷基，取代Ch6雜烷基，C1^6烷氧基，芳氧基，C1^6雜烷氧基，雜芳氧基，c2_6烷?；?， 芳?；?，c2-6烷氧?；?，芳氧?；琧2-6烷酰氧基，芳酰氧基，c2-6取代烷?；?，取代芳?；?，C2-6 取代烷酰氧基，取代芳氧?；腿〈减Ｑ趸?；和R3-6獨立地選自下組氫，氨基，取代氨基，疊氮，羧基，氰基，商素，羥基，硝基，矽醚，磺?；瑤€基，CV6烷巰基，芳巰基，取代芳巰基，取代CV6烷硫基，CV6烷基，C2_6烯基，c2-6炔基， c3_19支鏈烷基，c3_8環(huán)烷基，Ch6取代烷基，c2_6取代烯基，c2_6取代炔基，C3_8取代環(huán)烷基，芳基，取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，C1^6雜烷基，取代CV6雜烷基，CV6烷氧基，芳氧基，C1^6雜烷氧基，雜芳氧基，c2-6烷?；?，芳?；瑏?6烷氧?；?，芳氧?；琧2-6烷酰氧基，芳酰氧基， c2_6取代烷?；?，取代芳?；琧2_6取代烷酰氧基，取代芳氧?；腿〈减Ｑ趸?。
4.如權(quán)利要求3的化合物，其中R1和&獨立地選自下組氫，C1^6烷基，C3_8支鏈烷基， C3_8環(huán)烷基，C1^6取代烷基，c3_8取代環(huán)烷基，芳基，取代芳基和芳烷基。
5.如權(quán)利要求1的化合物，其中M是-N= CR10-或-CRltl = N-，其中Rltl是氫，C^6烷基， c3_8支鏈烷基，c3_8環(huán)烷基，CV6取代烷基，c3_8取代環(huán)烷基，芳基和取代芳基。
6.如權(quán)利要求1的化合物，其中R是聚亞烷氧化物。
7.如權(quán)利要求1的化合物，其中R是聚乙二醇。
8.如權(quán)利要求1的化合物，其中Q具有式(Ia)結(jié)構(gòu) (Ia)
9.如權(quán)利要求8的化合物，其具有式(II)
10.如權(quán)利要求8的化合物，其具有式(IIa)
11.如權(quán)利要求8的化合物，其具有式(IIb)或(II’ b)
12.如權(quán)利要求8的化合物，其中Qh獨立地包括選自下組的基團C12-22烷基， C12-22烯基，C12-22烷氧基，月桂酰(C12)，肉豆蔻酰(C14)，棕櫚酰(C16)，硬脂酰(C18)， 油酰(C18)，和瓢兒菜酰(C2》；飽和或非飽和C12烷氧基，C14烷氧基，C16烷氧基，C18烷氧基，C20烷氧基，和C22烷氧基；和飽和或非飽和C12烷基，C14烷基，C16烷基，C18烷基， C20烷基和C22烷基。
13.如權(quán)利要求8的化合物，其中L11,L12和L13獨立地選自9。權(quán)利要求6的化合物， 其中L11, L12和L13獨立地選自下組-(CR31IUtll-;和 -Y26 (CR31R32) ql-， 其中Y26 是0，NR33，或 S ；R31_32獨立地選自下組氫，羥基，Cp6烷基，C3_12支鏈烷基，C3_8環(huán)烷基，Cp6取代烷基， C3_8取代環(huán)烷基，C1^6雜烷基，取代Cp6雜烷基，CV6烷氧基，苯氧基和CV6雜烷氧基；I^3選自以下氫，CV6烷基，C3_12支鏈烷基，C3_8環(huán)烷基，C1^6取代烷基，C3_8取代環(huán)烷基， (V6雜烷基，取代CV6雜烷基，Ch6烷氧基，苯氧基和Ch6雜烷氧基；和 (ql)是零或正整數(shù)。
14.如權(quán)利要求8的化合物，其中L11,L12和L13獨立地選自下組-CH2-，- (CH2) 2_，- (CH 2) 3_，- (CH2) 4_，- (CH2) 5_，- (CH2) 6_，-O (CH2) 2_，-O (CH2)「，-O (CH2) 4_，-O (CH2) 5_，-O (CH2) 6_，和 CH(OH)-。
15.如權(quán)利要求1的化合物，其中L1選自下組 -(CR21R22)tl-[C( = Y16)]a3-,-(CR21R22) tlY17~ (CR23R24) t2~ (Yis) a2- [C ( — Yi6) ] a3-' _ (CR2iR22CR23R24Y17) u_ [C ( — Yi6)]a3_， ~~ (CR21R22CR23R24Y17) tl (CR25R2θ) t4~ (Yl8) a2~ [C ( — Yi6) ] a3-'~~ [ (CR21R22CR23R24) t2Yl7] t3 (CR25R26) t4~ (Yl8) a2~ ^C ( — Y16) ] a3~' ~~ (CR21R22) tl~ [ (CR23R24)七2了17] t3 (CR25R26) t4~ (Yl8) a2~ ^C ( — Y16) ] a3~'
16.如權(quán)利要求1的化合物，其中L1選自下組-ch2- (ch2) 2_，- (ch2) 3", - (ch2) 4_，- (ch2) 5_，- (ch2) 6_，-nh (ch2)--ch(nh2)ch2-,-(ch2) 4-c( = 0)-，- (ch2) 5-c( = 0)-，- (ch2) 6-c( = 0)-，-nh(ch2)--ch2ch2o-ch2o-c ( = 0)-， -(ch2ch2o) 2-ch20-c ( = 0)-， -(ch2ch2o) 3-ch20-c ( = 0)-， -(ch2ch2o) 2-c ( = 0)-， -ch2ch2o-ch2ch2nh-c ( = 0)-， -(ch2ch2o) 2-ch2ch2nh-c ( = 0)-，-ch2-o-ch2ch2o-ch2ch2nh-c ( = 0)-，-ch2-o- (ch2ch2o) 2-ch2ch2nh-c ( = 0)-， -ch2-o-ch2ch2o-ch2c ( = 0)-， -ch2-o- (ch2ch2o) 2-ch2c ( = 0)-， -(ch2) 4-c ( = 0)nh-，- (ch2) 5-c ( = 0)nh-， -(ch2) 6-c( = 0)nh-， -ch2ch2o-ch2o-c ( = 0) -nh-, -(ch2ch2o) 2-ch20-c ( = 0) -nh-, -(ch2ch2o) 3-ch20-c ( = 0) -nh-, -(ch2ch2o) 2-c ( = 0) -nh-,
17. 是獨立的 0，NR，29，或 S ；R’ 21_27獨立地選自下組氫，羥基，氨基，Cp6烷基，C3_12支鏈烷基，C3_8環(huán)烷基，Ch6取代烷基，c3_8取代環(huán)烷基，芳基，取代芳基，芳烷基，C1^6雜烷基，取代CV6雜烷基，C1^6烷氧基，苯氧基和Cp6雜烷氧基；R’ 28_29獨立地選自下組氧，CV6烷基，C3_12支鏈烷基，C3_8環(huán)烷基，Ch6取代烷基，c3_8取代環(huán)烷基，芳基，取代芳基，芳烷基，Ch6雜烷基，取代Ch6雜烷基，CV6烷氧基，苯氧基和CV6 雜烷氧基；(t，1)，(t，2)，(t，3)和(t，4)是獨立的零或正整數(shù)；和(a，2)和(a，3)是獨立的零或1。
18.如權(quán)利要求1的化合物，其中L2選自下組
19.如權(quán)利要求8的化合物，其中Q選自下組:
20.如權(quán)利要求8的化合物，其中Q選自下組
21.如權(quán)利要求1的化合物，其中目標基團附著在R基團上，而化合物1具有下式 A——R——(L1)a——M——(L2)b——Q，其A是目標基團。
22.如權(quán)利要求21的化合物，其中目標基團是細胞表面目標基團。
23.如權(quán)利要求21的化合物，其中目標基團選自下組RGD肽，葉酸鹽，茴香酰胺，血管內(nèi)皮細胞生長因子，F(xiàn)GF2，生長激素抑制劑和生長激素抑制劑同類物，鐵傳遞蛋白，促黑細胞激素，ApoE和ApoE肽，馮·威利布蘭德因子(von Willebrand' s Factor)和馮·威禾Ij 布蘭德因子肽，腺病毒纖維蛋白和腺病毒纖維蛋白肽，PDl和PDl肽，EGF和EGF肽。
24.如權(quán)利要求8的化合物，其具有式(IIIa)(
25.如權(quán)利要求8的化合物，其具有式(IIIb)或(III’ b)
26.如權(quán)利要求1的化合物，其選自下組
27.如權(quán)利要求1的化合物，其選自下組
28.納米微粒組合物，其含有如權(quán)利要求1的式(I)化合物。
29.如權(quán)利要求觀的納米微粒組合物，其中式(I)化合物選自下組
30.
31.
32.如權(quán)利要求觀的納米微粒組合物，其中致融脂質(zhì)選自下組DOPE，DOGP,P0PC, DSPC，EPC，及其組合。
33.如權(quán)利要求觀的納米微粒組合物，其進一步含有膽固醇。
34.如權(quán)利要求觀的納米微粒組合物，其中陽離子脂質(zhì)具有的摩爾比是納米微粒組合物中總脂質(zhì)的約10% -約99. 9%范圍。
35.如權(quán)利要求34的納米微粒組合物，其中陽離子脂質(zhì)具有的摩爾比是納米微粒組合物中總脂質(zhì)的約15% -約25%范圍。
36.如權(quán)利要求33的納米微粒組合物，其中陽離子脂質(zhì)，非膽固醇基致融脂質(zhì)，式(I)化合物，和膽固醇的摩爾比是納米微粒組合物中總脂質(zhì)的約 15-25% 20-78% 0-50% 2-10%。
37.如權(quán)利要求33的納米微粒組合物，其選自下組陽離子脂質(zhì)，二酰磷脂酰乙醇胺，式⑴的化合物，和膽固醇的混合物；陽離子脂質(zhì)，二酰磷脂酰膽堿，式(I)的化合物，和膽固醇的混合物；陽離子脂質(zhì)，二酰磷脂酰乙醇胺，二酰磷脂酰膽堿，式(I)的化合物，和膽固醇的混合物；和陽離子脂質(zhì)，二酰磷脂酰乙醇胺，式(I)的化合物，與神經(jīng)酰胺偶聯(lián)的PEG(PEG-Cer)， 和膽固醇的混合物。
38.如權(quán)利要求36的納米微粒組合物，其中所包括的陽離子脂質(zhì)，DOPE，膽固醇，和式 (I)化合物的摩爾比是納米微粒組合物中總脂質(zhì)的約18% 52% 20% 10%，而其中陽離子脂質(zhì)是
39.納米微粒，其含有包封在如權(quán)利要求觀的納米微粒組合物之內(nèi)的核酸。
40.如權(quán)利要求39的納米微粒，其中核酸是單鏈或雙鏈寡核苷酸。
41.如權(quán)利要求39的納米微粒，其中核酸選自下組脫氧核苷酸，核糖核苷酸，鎖核酸 (LNA)，短干擾RNA (siRNA)，微RNA (miRNA)，適配體，肽骨架核酸(PNA)，磷酰二胺嗎啉代寡核苷酸(PMO)，三環(huán)-DNA，雙鏈寡核苷酸(誘騙0DN)，催化RNA序列(RNAi)，適配體，鏡像異構(gòu)體，CpG低聚體及其組合。
42.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中寡核苷酸是反義寡核苷酸。
43.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中寡核苷酸具有磷酸二酯鍵，硫代磷酸酯連接及其組合。
44.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中寡核苷酸包括LNA。
45.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中寡核苷酸具有約8-約50個核苷酸。
46.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中寡核苷酸抑制了致癌基因，促血管生成途徑基因， 促細胞增殖途徑基因，病毒感染原基因，和促炎癥途徑基因的表達。
47.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中寡核苷酸選自下組反義bcl-2寡核苷酸，反義 HIF-I α寡核苷酸，反義存活素寡核苷酸，反義ErbB3寡核苷酸，反義PIK3CA寡核苷酸，反義 HSP27寡核苷酸，反義雄激素受體寡核苷酸，反義Gli2寡核苷酸，和反義β -連環(huán)蛋白寡核苷酸。
48.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中寡核苷酸含有以下所列的八個或更多連續(xù)核苷酸SEQ ID NO :1, SEQ ID NOs 2 and 3，SEQ ID NO :3，SEQ ID NO :4，SEQ ID NO :5, SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7, SEQ ID NO -J, SEQ ID NO :8，SEQ ID NO -.9, SEQ ID NO 10，SEQ ID NO :11, SEQ ID NO :12, SEQ ID NO :13, SEQ ID NO :14, SEQ ID NO :15, SEQ ID N0:16，和SEQ ID NO : 17，每個核酸都是天然存在的或修飾的核酸。
49.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中核酸和陽離子脂質(zhì)的電荷比是約1 20-約 20 1。
50.如權(quán)利要求40的納米微粒，其中納米微粒具有約50-約150nm的大小。
51.一種治療哺乳動物疾病的方法，其包括將權(quán)利要求39的納米微粒給藥至有需要的哺乳動物。
52.一種將寡核苷酸導(dǎo)入細胞的方法，其包括使細胞與權(quán)利要求39的納米微粒接觸。
53.一種抑制人細胞或組織中基因表達的方法，其包括使人細胞或組織與權(quán)利要求38 的納米微粒接觸。
54.如權(quán)利要求53的方法，其中細胞或組織是癌細胞或組織。
55.一種下調(diào)哺乳動物基因表達的方法，其包括將有效量的權(quán)利要求39的納米微粒給藥至有需要的哺乳動物。
56.一種抑制癌細胞生長或增殖的方法，其包括使癌細胞與權(quán)利要求39的納米微粒接觸。
57.如權(quán)利要求55的方法，還包括給藥抗癌劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及與可釋放脂質(zhì)偶聯(lián)的聚合物和用于遞送核酸含有其的納米微粒組合物和使用其調(diào)控基因表達的方法。尤其是，本發(fā)明涉及含有酸可變性鏈接基的可釋放聚合脂質(zhì)，該鏈接基是基于含有縮酮或縮醛的鏈接基或含有亞胺的鏈接基。
文檔編號A01N43/04GK102231950SQ200980145890
公開日2011年11月2日 申請日期2009年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月17日
發(fā)明者烏德春, 史連軍, 彥魏麗, 趙洪 申請人:安龍制藥公司