專利名稱:滇北球花報春的組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng),具體地說,涉及滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
背景技術(shù):
滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)為報春花科報春花屬植物,是一種非常美麗的園林觀賞花卉。滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)是多年生草本花卉,整個植株呈蓮座狀,根狀莖發(fā)達(dá),向上生5到多個葉叢,以播種繁殖為主,一般于春季播種后,經(jīng)過營養(yǎng)生長于次年2月底始花,生長較慢,且繁殖系數(shù)低。除播種繁殖外,報春花屬無性繁殖,可用的方法有分株(葉叢)繁殖,組織培養(yǎng)繁殖,少數(shù)多年生種類可采用扦插繁殖,然而分株繁殖的方法遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)需求。
組織培養(yǎng)是快速繁殖優(yōu)良植物品種的一條重要途徑,報春花屬已有不少種進(jìn)行了組織培養(yǎng)的相關(guān)報道,但是滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養(yǎng)卻沒有相關(guān)研究與報道,因此需要研究滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養(yǎng),并形成一套專門的快繁技術(shù)體系。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法,提高滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù)、生根率及移栽成活率,并結(jié)合其它相關(guān)的技術(shù)措施,使滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的種苗生產(chǎn)、種質(zhì)保存等能夠得到較好的的保障。
為了實現(xiàn)本發(fā)明目的,本發(fā)明的一種滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)組培方法包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)與試管苗移栽。
所述的外植體為滇北球花報春的腋芽。
所述不定芽誘導(dǎo)和繼代的培養(yǎng)基為MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/lNAA,pH為5.8~5.9。其光照條件為自然散射光2500~3000Lux加人工輔助光1500~2000Lux。Lux(勒克司)為照度的單位。
所述生根培養(yǎng)基為MS或MS+0.2mg/l NAA,優(yōu)選為MS+0.2mg/lNAA,pH為5.8~5.9。
其光照條件為自然散射光2500~3000Lux加人工輔助光2500~3000Lux。
經(jīng)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)2~3周后,煉苗3~4天移栽至溫室細(xì)草炭土中培養(yǎng)。
外植體采用0.1%升汞溶液消毒4~5min。
組培苗適宜的培養(yǎng)溫度為20~23℃之間,超過25℃組培苗變黃甚至逐漸死亡。
組培苗的移栽適宜溫度為18~25℃之間,過高或過低都不利于試管苗的成活。
具體地組培快繁方法為選滇北球花報春的腋芽為外植體,經(jīng)水沖洗干凈,采用0.1%升汞溶液消毒4~5min,在無菌條件下經(jīng)蒸餾水反復(fù)清洗,接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中,pH為5.8,光照條件為自然散射光2500~3000Lux加人工輔助光1500~2000Lux;之后移至相同培養(yǎng)基增殖,繼代2~3次,生根培養(yǎng)基為MS+0.2mg/l NAA,pH為5.8,光照條件為自然散射光3000Lux以內(nèi)加人工輔助光2500~3000Lux;溫度保持在20~23℃之間;生根培養(yǎng)2~3周,煉苗3~4天后,移至細(xì)草炭土中培養(yǎng),保持濕度高于80%,每天噴水2~3次。2周后逐步揭去覆蓋膜正常培養(yǎng)。
一般來說以腋芽為外植體,對植株的破壞性比較大,但對于一些比較珍貴,且急需擴繁的材料,以腋芽為外植體進(jìn)行擴繁,可以在短時間內(nèi)獲得大量的再生植株;通過腋芽再生的滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)試管苗生長健壯,對后期的生長觀察發(fā)現(xiàn),基本能保持其優(yōu)良種性不變。組培快繁的試管苗,在生長過程中,不易受到病蟲害的侵染,但為了進(jìn)一步防止病蟲害的產(chǎn)生,宜在生長季內(nèi)噴施多菌靈、氧化樂果等3~4次為佳;試管苗移栽時的溫度應(yīng)控制在18~25℃之間,過高或過低都不利于試管苗的成活,夏季不宜進(jìn)行試管苗的移栽。
本發(fā)明的組培快繁方法繁育滇北球花報春(Primula denticulatassp.sino-denticulata),2個月內(nèi)增殖系數(shù)達(dá)到3~4,生根率達(dá)95%以上,移栽成活率幾乎為100%,極大地提高了滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù),縮短成苗周期,又可降低成本,為今后大面積園林應(yīng)用和工廠化育苗提供了非常有效的方法;同時,以腋芽為外植體進(jìn)行增殖和快繁,能夠保持滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的種性不變,為新品種培育中出現(xiàn)的較為珍貴稀有變種的保存提供了保障。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法的優(yōu)點在于1.建立了一種滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法,相比傳統(tǒng)的報春花屬植物育苗繁殖方法,如播種繁殖和分株繁殖,極大地提高了滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù),為科研研究和生產(chǎn)栽培提供了技術(shù)支持;2.通過組培快繁得到的幼苗,生長強健,葉色濃綠,一致性強,成苗容易,適應(yīng)性較強,病蟲害少,易于管理;3.利用組培快繁方法繁育滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata),解除了季節(jié)與氣候的限制,從而縮短了育苗周期,增加了繁殖量;4.利用組培快繁方法繁育滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata),可以保持優(yōu)良種或品種的特性不變,從而為新品種選育研究中變異保存提供了有效的方法。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明,但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1以滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)葉片為外植體探究不定芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基選用長勢良好的幼苗葉片作為外植體探究不定芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基配方。取滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的幼嫩葉片自來水沖洗5~6h,于水中滴一滴清潔劑震蕩15min,用軟毛刷輕輕刷去表面雜質(zhì),自來水反復(fù)沖洗干凈;表面消毒70%酒精消毒15~20s,無菌水沖洗4~5次,0.1%升汞溶液消毒4~5min,再用無菌水沖洗4~5次。然后將消毒過的葉片切成1cm2的小塊(帶部分葉脈)接種在叢生芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,每瓶接種5~6塊,每種培養(yǎng)基接10瓶,暗培養(yǎng)。其中,6-BA的濃度梯度0.5mg/l、1.0mg/l和2.0mg/l;NAA的濃度梯度0.05mg/l、0.1mg/l和0.5mg/l,培養(yǎng)基pH為5.8,采用兩因素完全隨機試驗設(shè)計。
不同6-BA和NAA濃度影響滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)葉片的分化。接種4~5天后,葉片開始腫脹皺縮,15天左右切口處變肥變厚,40天后,有培養(yǎng)基種葉片開始產(chǎn)生愈傷并有少量不定芽的產(chǎn)生。不定芽分化的最佳濃度是6-BA 2.0mg/l和NAA0.1mg/l,此培養(yǎng)基上滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)誘導(dǎo)率達(dá)到45.1%,并且部分分化成芽。
實施例2以滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)腋芽為外植體進(jìn)行初培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)選取生長健壯的植株上的腋芽,自來水沖洗5~6h,消毒滅菌過程同葉片,接種在MS+6-BA 2.0mg/l+NAA 0.1mg/l叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,每瓶接種2~3個;光照條件為自然散射光3000Lux加上人工輔助光源1800±200Lux,光照時間14h。
當(dāng)腋芽接種在分化培養(yǎng)基上,不斷抽出新葉,10天開始,抽出新葉的葉柄粗壯,基部變紅,逐漸形成淺綠色愈傷組織,2周后開始有不定芽的分化;接種40天后,在腋芽新抽出的葉柄和葉片上,分化出大量的不定芽。
統(tǒng)計結(jié)果顯示在MS+6-BA 2mg/l+NAA 0.1mg/l的培養(yǎng)基上接種2個月后,平均每個腋芽能分化出不定芽的數(shù)目是40~50個,顯著多于葉片誘導(dǎo)的不定芽的數(shù)量。同時,溫度對于不定芽的誘導(dǎo)和組培苗的生長起到非常關(guān)鍵的作用,在20~23℃之間,組培苗葉色濃綠,生長健壯;超過25℃,組培苗變黃并逐漸死亡。在這樣的培養(yǎng)條件下,試管苗2個月的增值系數(shù)達(dá)到3~4,極大地提高了滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù)。
實施例3滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)組培苗的生根培養(yǎng)當(dāng)不定芽在分化培養(yǎng)基上長出2~3片葉子時,將其從愈傷組織上切除,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基,配方MS、MS+NAA(0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l)中,pH為5.8;光照條件為自然散射光3000Lux加上人工輔助光源2500Lux,光照時間14h。
從生根所需要的時間來看,在培養(yǎng)基MS和MS+0.2mg/l NAA中生根所需時間最短,為8~10天,但在MS+0.2mg/l NAA中,組培苗生根量和長勢明顯好于MS基本培養(yǎng)基,組培苗平均高度可達(dá)4.8cm,生根率為95%以上。
實施例4滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)組培苗的移栽生根培養(yǎng)兩周以后,待組培苗平均每株生根4~5條,根長達(dá)到1cm時,即可開始為移栽作準(zhǔn)備。煉苗是試管苗移栽前的過渡,可以幫助試管苗逐步適應(yīng)外界環(huán)境,使試管苗更健壯,葉色更加深綠,從而提高成活率。滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)試管苗煉苗3~4天后,移栽至溫室細(xì)草炭土中,草炭土提前鋪滿穴盤,清水浸透;試管苗移栽后保持濕度80%以上,覆薄膜并每天噴水2~3次,2周以后即可逐步進(jìn)行正常管理,移栽成活率幾乎為100%。
雖然,上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述,但在本發(fā)明基礎(chǔ)上,可以對之作一些修改或改進(jìn),這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此,在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn),均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種滇北球花報春的組培快繁方法,包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)與試管苗移栽,其特征在于,所述的外植體為滇北球花報春的腋芽,所述不定芽誘導(dǎo)和繼代的培養(yǎng)基為MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA,pH為5.8~5.9,所述生根培養(yǎng)基為MS或MS+0.2mg/l NAA,pH為5.8~5.9。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組培快繁方法,其特征在于,所述不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)時,光照條件為自然散射光2500~3000Lux加人工輔助光1500~2000Lux。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組培快繁方法,其特征在于,所述生根培養(yǎng)基為MS+0.2mg/l NAA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項所述的組培快繁方法,其特征在于,所述生根培養(yǎng)時,光照條件為自然散射光2500~3000Lux加人工輔助光2500~3000Lux。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4任意一項所述的組培快繁方法,其特征在于,所述組培苗的培養(yǎng)溫度為20~23℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任意一項所述的組培快繁方法,其特征在于,所述組培苗的移栽溫度為18~25℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~6任意一項所述的組培快繁方法,其特征在于,所述外植體采用0.1%的升汞溶液消毒4~5min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1~7任意一項所述的組培快繁方法,其特征在于,所述的組培苗經(jīng)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)2~3周后,煉苗3~4天移栽至溫室細(xì)草炭土中培養(yǎng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1~8任意一項所述的組培快繁方法,其特征在于,選滇北球花報春的腋芽為外植體,經(jīng)水沖洗干凈,采用0.1%的升汞溶液消毒4~5min,在無菌條件下經(jīng)蒸餾水反復(fù)清洗,接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中,pH為5.8,光照條件為自然散射光2500~3000Lux加人工輔助光1500~2000Lux;之后移至相同培養(yǎng)基增殖,繼代2~3次,生根培養(yǎng)基為MS+0.2mg/l NAA,pH為5.8,光照條件為自然散射光2500~3000 Lux加人工輔助光2500~3000Lux;溫度保持在20~23℃之間;生根培養(yǎng)2~3周,煉苗3~4天后,移至細(xì)草炭土中培養(yǎng),保持濕度高于80%,每天噴水2~3次。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種滇北球花報春的組培快繁方法,包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)與試管苗移栽。本發(fā)明的滇北球花報春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)組培快繁方法,一個腋芽可誘導(dǎo)產(chǎn)生40~50個左右的新芽,經(jīng)過繼代30~40天左右增殖系數(shù)為3~4,生根率可達(dá)到95%以上,移栽成活率幾乎為100%,實現(xiàn)了通過快繁技術(shù)對優(yōu)良滇北球花報春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)單株的保存,同時大大提高了滇北球花報春的育苗生產(chǎn)能力,縮短成苗時間又可降低成本,為報春花的大面積推廣應(yīng)用提供了技術(shù)支持。
文檔編號A01G7/06GK101015280SQ20071006405
公開日2007年8月15日 申請日期2007年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月16日
發(fā)明者張啟翔, 李翠娟, 潘會堂, 梁樹樂, 程堂仁, 孫明 申請人:北京林業(yè)大學(xué)