專利名稱：植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)驅(qū)蚊草的技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過細(xì)胞工程技術(shù)快速繁殖香草植物驅(qū)蚊草的方法，具體講是以植物細(xì)胞工程技術(shù)為手段，通過在一定培養(yǎng)基上離體培養(yǎng)驅(qū)蚊草鮮嫩葉片等幼嫩組織作為外植體，通過愈傷組織誘導(dǎo)、分化、繼代、生根等環(huán)節(jié)，獲得大量再生驅(qū)蚊草苗的方法。本發(fā)明屬于生物農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
驅(qū)蚊草(Cymbopogon citrates)是澳大利亞植物學(xué)家迪克經(jīng)十多年通過生物工程技術(shù)，改變天竺葵植物的染色體結(jié)構(gòu)，從而獲得具有新的遺傳結(jié)構(gòu)的芳香類天竺屬多年生觀葉植物。該植物兼具澳洲天竺葵獨(dú)特的釋放功能和另一類植物中內(nèi)含的香茅醛物質(zhì)，它生長所散發(fā)的香茅醛氣體不僅芳香益人，還具有凈化室內(nèi)空氣、消除有害氣體等功效，而且是蚊蟲的克星，尤其在炎熱的夏季，溫度越高，散發(fā)的香味越濃，驅(qū)蚊效果就越好。驅(qū)蚊草香味還具有治療疾病和預(yù)防保健的功能，能增強(qiáng)人的免疫力和體力，有效地預(yù)防疾病。另外，驅(qū)蚊草散發(fā)檸檬香味，吸收二氧化碳，釋放氧氣，改善空氣質(zhì)量，讓人生活在香氛里，卻悄悄驅(qū)蚊，且不費(fèi)一分錢！不論是家庭、酒店、辦公室、賓館、養(yǎng)殖場地等。必然受到人們普遍歡迎！蚊子是為人類的天敵，驅(qū)之不盡，滅之不絕，是傳染疾病的罪魁禍?zhǔn)?，可傳染肝炎，瘧疾，流感等多種疾病，實(shí)屬一大蟲害。幾千年來，人們想盡各種辦法滅蚊驅(qū)蚊，從傳統(tǒng)的燃燒艾蒿到現(xiàn)代的蚊香、滅蚊劑、滅蚊燈、紗窗等，均不能有效地驅(qū)蚊、滅蚊，而且蚊香、滅蚊劑等滅蚊藥品均對人體有一定的毒副作用，容易導(dǎo)致呼吸道感染等多種疾病，少年兒童尤其不宜使用。紗窗一是不能有效的阻止蚊子入侵(尤其是幼蚊)，二是蚊子在室內(nèi)可快速地繁殖，人們常常被少量蚊子弄得徹夜難眠苦不堪言，有兒童的家庭更是對蚊子深感痛絕、束手無策?？梢姡扔辛己玫尿?qū)蚊效果，又對人體無害的驅(qū)蚊香市場前景多么廣闊。
驅(qū)蚊草一般是用無性繁殖方法繁殖，因?yàn)樗_花不育，不能結(jié)實(shí)。用植物非試管快繁技術(shù)只取驅(qū)蚊草的一葉一芽或一枝作為離體材料，插后約1個(gè)月生根，一年可繁殖5-8代。但是驅(qū)蚊草是改變了天竺葵植物的染色體結(jié)構(gòu)從而獲得的具有新的遺傳結(jié)構(gòu)的芳香類天竺屬多年生觀葉植物，長期采用扦插方式繁殖，品種易退化。運(yùn)用細(xì)胞工程手段，通過植物組織培養(yǎng)方法快速繁殖驅(qū)蚊草，固定品種優(yōu)勢，保持品種特異性，實(shí)踐證明是可行的。利用驅(qū)蚊草在合適的培養(yǎng)基上進(jìn)行離體繁殖，可加快品種繁殖速度，擴(kuò)大種源生產(chǎn)，保持優(yōu)良品種的性狀，用較小空間，較少個(gè)體和較少時(shí)間可獲得大量再生無毒苗?？傊参镌嚬芸旆奔夹g(shù)打破了傳統(tǒng)育苗的季節(jié)限制；打破國外進(jìn)口種子的一次性限制的壟斷，它投資省、見效快、利潤高、簡單易操作、育苗速度快。這種繁殖方式為驅(qū)蚊草的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展開拓了一條有效途徑，其社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益是巨大的。
我們經(jīng)過一年多的時(shí)間，系統(tǒng)地研究了植物組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用到驅(qū)蚊草苗生產(chǎn)的理論、工藝及可行性，包括材料選擇、外植體誘導(dǎo)、高頻再生和定植等過程，完成了實(shí)驗(yàn)室研究，使下一步產(chǎn)業(yè)化更具有實(shí)際意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種提高植物組織培養(yǎng)驅(qū)蚊草苗生產(chǎn)率，使其達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平。本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)經(jīng)一年多研究，根據(jù)植物葉片再生原理，以葉片為外植體，建立高頻穩(wěn)定再生體系。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，采用以下技術(shù)方案A外植體的選擇消毒選用驅(qū)蚊草鮮嫩葉片等幼嫩組織作為外植體，用自來水沖洗干凈，在無菌操作臺上用法75％酒精消毒30秒，再用1～5％的次氯酸鈉消毒10～15分鐘，最后用無菌水沖洗4～6次備用。
B外植體接種將消毒后備用的外植體切成1平方厘米大小，接種在MS+6-BA0.5mg/L+2，4-D1.5mg/L+NAA1.0mg/L愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，接種瓶內(nèi)每瓶平放3～5片，葉面向上，在培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)，保持溫度24±2℃，20天后，葉片傷口發(fā)生愈傷組織。
C驅(qū)蚊草組培苗的分化當(dāng)愈傷組織達(dá)到要求數(shù)量后，轉(zhuǎn)接到MS+KT1.0～2.0mg/L+NAA0.05mg/L的上，25天后可得到大量分化的組培苗。
D驅(qū)蚊草組培苗的繼代將長至2～3厘米高苗的轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，愈傷組織繼續(xù)接種在新配制的分化培養(yǎng)基上，15～20天轉(zhuǎn)接一代，以保持高速度遞增。
E生根培養(yǎng)以1/2MS+NAA0.5mg/L為培養(yǎng)基，對組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。
F驅(qū)蚊草再生植株生根培養(yǎng)后可進(jìn)行煉苗，煉苗以椰糠∶泥炭土∶珍珠巖＝2∶1.5∶1.0為基質(zhì)。
本發(fā)明提出的驅(qū)蚊草植株組織培養(yǎng)技術(shù)，利用驅(qū)蚊草鮮嫩葉片等幼嫩組織為外植體，使得外植體取材容易，數(shù)量大，并且操作簡單，本培養(yǎng)技術(shù)可形成小植株，成活率高，可批量生產(chǎn)。
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步詳述，我們利用驅(qū)蚊草葉片作為外植體，這是因?yàn)橄颈容^容易，數(shù)量大，相對莖尖取材容易。選用驅(qū)蚊草鮮嫩葉片等幼嫩組織作為外植體，用自來水沖洗干凈，在無菌操作臺上用75％的酒精消毒30秒，再用1～5％的次氯酸鈉消毒10～15分鐘，最后用無菌水沖洗4～6次備用。將消毒后備用的外植體切成1厘米大小，接種在MS+6BA0.5mg/L+2，4D1.5mg/L+NAA1.0mg/L愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，接種瓶內(nèi)每瓶平放3-5片，葉面向上，在培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)，保持溫度24±2℃，約20天后，葉片傷口發(fā)生愈傷組織。當(dāng)愈傷組織達(dá)到要求大小后，轉(zhuǎn)接到MS+KT1.0～2.0mg/L+NAA0.05mg/L的上，約25天后，分化出苗。然后轉(zhuǎn)接到新配制的分化培養(yǎng)基上，約20天后，分化出大量的組培苗。一般15～20天轉(zhuǎn)接一代，以保持高速度遞增。將高達(dá)3厘米左右的苗轉(zhuǎn)入1/2MS+NAA0.5mg/L生根培養(yǎng)基上，對組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)后10～15天可進(jìn)行煉苗，基質(zhì)以排水性、通透性為第一考慮，其次是考慮盆土輕便衛(wèi)生，方便攜帶和擺放。故以椰糠∶泥炭土∶珍珠巖＝2∶1.5∶1.0配方為介質(zhì)，起到物美價(jià)廉，攜帶、擺放都方便的效果。
實(shí)施例一剪取驅(qū)蚊草嫩葉20片，先用自來水沖洗干凈，然后用無菌水浸泡10分鐘，送入接種室放在超凈工作臺備用。
將洗凈的葉片放入無菌瓶，用75％酒精消毒30秒，再用5％的次氯酸鈉浸泡并不斷振蕩，注意葉片不能浮出次氯酸鈉表面，15分鐘后，將次氯酸鈉倒出，并即時(shí)倒入無菌水，振蕩約2分鐘倒出無菌水，同時(shí)倒入新的無菌水，如此循環(huán)5次。
將經(jīng)過消毒的葉片取出，放入經(jīng)過消毒的濾紙吸干葉片表面水珠，然后用消毒過的鑷子、刀子將葉片切成1厘米的正方形小塊，一共接種98瓶，進(jìn)行暗培養(yǎng)。1周后觀察污染情況，細(xì)菌污染3瓶，霉菌污染5瓶，污染率為8.16％，90瓶繼續(xù)暗培養(yǎng)。20天檢查愈傷組織發(fā)生情況，結(jié)果90瓶都產(chǎn)生了愈傷組織，愈傷組織發(fā)生率為100％。愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，25天分化出苗，再轉(zhuǎn)入到新配制的分化培養(yǎng)基上，20天左右分化出大量再生植株。將2～3高的苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上，10天后全部生根，并開始煉苗，形成工廠化生產(chǎn)。
實(shí)施例二剪取驅(qū)蚊草嫩葉20片，先用自來水沖洗干凈，送入接種室放在超凈工作臺備用。
將洗凈的葉片放入無菌瓶，用75％酒精消毒30秒，再用0.1％升汞浸泡并不斷振蕩，注意葉片不能浮出升汞表面，10分鐘后，將升汞溶液倒出，并即時(shí)倒入無菌水，振蕩約2分鐘倒出無菌水，同時(shí)倒入新的無菌水，如此循環(huán)5次。
將經(jīng)過消毒的葉片取出，放入經(jīng)過消毒的濾紙吸干葉片表面水珠，然后用消毒過的鑷子、刀子將葉片切成1厘米的正方形小塊，一共接種95瓶，進(jìn)行暗培養(yǎng)。1周后觀察污染情況，細(xì)菌污染8瓶，霉菌污染10瓶，污染率為在18.94％，77瓶繼續(xù)暗培養(yǎng)。30天檢查愈傷組織發(fā)生情況，結(jié)果部分外植體變褐死亡，50瓶產(chǎn)生愈傷組織，愈傷組織發(fā)生率為64.9％。愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，30天分化出苗。再轉(zhuǎn)入到新配制的分化培養(yǎng)基上，20天分化出大量再生植株。將2～3高的苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上，10天后全部生根，并可形成規(guī)?；缟a(chǎn)。
權(quán)利要求
一種香草植物驅(qū)蚊草的離體組織培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于該方法包括在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行葉片等外植體培養(yǎng)，并在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行分化、繼代和生根培養(yǎng)，獲得驅(qū)蚊草的再生植株。所述驅(qū)蚊草離體組織培養(yǎng)技術(shù)是按以下步驟和方法進(jìn)行A外植體的選擇消毒選用驅(qū)蚊草鮮嫩葉片等幼嫩組織作為外植體，用自來水沖洗干凈，在無菌操作臺上用75％酒精消毒30秒，再用1～5％的次氯酸鈉消毒10～15分鐘，最后用無菌水沖洗4～6次備用。B外植體接種將消毒后備用的外植體切成1平方厘米大小，接種在MS+6-BA 0.5mg/L+2，4-D1.5mg/L+NAA 1.0mg/L愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，接種瓶內(nèi)每瓶平放3～5片，葉面向上，在培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)，保持溫度24±2℃，20天后，葉片傷口發(fā)生愈傷組織。C驅(qū)蚊草組培苗的分化當(dāng)愈傷組織達(dá)到要求數(shù)量后，轉(zhuǎn)接到MS+KT 1.0～2.0mg/L+NAA0.05mg/L的上，25天后可得到大量分化的組培苗。D驅(qū)蚊草組培苗的繼代將長至2～3厘米高苗的轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，愈傷組織繼續(xù)接種在新配制的分化培養(yǎng)基上，15～20天轉(zhuǎn)接一代，以保持高速度遞增。E生根培養(yǎng)以1/2 MS+NAA0.5mg/L為培養(yǎng)基，對組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)。F驅(qū)蚊草再生植株生根培養(yǎng)后可進(jìn)行煉苗，煉苗以椰糠∶泥炭土∶珍珠巖＝2∶1.5∶1.0為基質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種采用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)驅(qū)蚊草苗的方法。該方法是在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)驅(qū)蚊草鮮嫩葉片等幼嫩組織，先接種在MS+6－BA0.5mg/L+2，4－D 1.5mg/L+NAA 1.0mg/L培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)100％；然后轉(zhuǎn)移至MS+KT 1.0～2.0mg/L+NAA 0.05mg/L分化培養(yǎng)基上，20天可分化出苗；將高達(dá)2～3厘米的苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，10天左右生根，生根率達(dá)100％。本發(fā)明方法具有穩(wěn)定好、操作簡便、繁殖速度快、生產(chǎn)成本低、達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A01H4/00GK1739340SQ200410046690
公開日2006年3月1日 申請日期2004年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月24日
發(fā)明者易自力, 黃麗芳, 蔣建雄, 蔡能 申請人:易自力, 黃麗芳, 蔡能