一種用高效液相色譜法測定恩替卡韋片中全反式異構體的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用液相色譜法分離測定恩替卡韋及其全反式異構體的方法,該方法以多糖涂敷型色譜柱,以異丙醇-無水乙醇-三氟乙酸溶液為流動相,異丙醇-無水乙醇-三氟乙酸體積比為500∶500∶1,可以定量測定恩替卡韋的全反式異構體含量,從而有效控制藥品質(zhì)量。
【專利說明】一種用高效液相色譜法測定恩替卡韋片中全反式異構體的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及恩替卡韋片的檢測【技術領域】，特別涉及一種用高效液相色譜法測定恩替卡韋片中全反式異構體的方法。
【背景技術】
[0002]慢性乙肝病毒感染一直是全球范圍醫(yī)學的難題，開發(fā)抗乙肝病毒藥物也一直是個醫(yī)學熱點。恩替卡韋化學名為2-氨基-9_[(1S，3R, 4S)-4-羥基-3-羥甲基_2_亞甲基環(huán)戊基]-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮一水合物，是為鳥嘌呤核苷類似物，對乙型肝炎病毒多聚酶具有抑制作用。恩替卡韋片適用于病毒復制活躍、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)持續(xù)升高或肝臟組織學顯示活動性病變的慢性成人乙型肝炎患者的治療。
[0003]恩替卡韋有3個手性中心，可能產(chǎn)生多個光學異構體雜質(zhì)，全反式異構體在有關物質(zhì)檢查條件下不能檢出。
[0004]本發(fā)明采用手性色譜柱對恩替卡韋與全反式異構體進行分離，并對檢測方法進行優(yōu)化，從而建立了更有效的檢測恩替卡韋片中全反式異構體的檢測方法。關于本研究優(yōu)化建立的恩替卡韋片中全反式異構體分離方法未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術問題在于針對現(xiàn)有恩替卡韋片檢測方法所存在的諸多技術問題而提供一種用高效液相色譜法測定恩替卡韋片中全反式異構體的方法。
[0006]本發(fā)明所要解決的技術問題可以通過以下技術方案來實現(xiàn):
[0007]—種用高效液相色譜法測定恩替卡韋片中全反式異構體的方法，包括如下步驟:
[0008]( I)系統(tǒng)適用性溶液制備步驟
[0009]稱取恩替卡韋全反式異構體3.0mg,置50mL棕色量瓶中，加無水乙醇40mL,超聲使溶解，放冷，無水乙醇稀釋至刻度，搖勻作為恩替卡韋全反式異構體儲備液；
[0010](2)系統(tǒng)適用性溶液制備步驟
[0011]稱取恩替卡韋標準品約6.0mg，置50mL棕色量瓶中，加無水乙醇約40mL，超聲使溶解，放冷，精密量取步驟(I)制備的恩替卡韋全反式異構體儲備液1.0mL加入，加無水乙醇稀釋至刻度，混勻，作為系統(tǒng)適用性溶液；
[0012](3)供試品溶液制備步驟
[0013]將恩替卡韋片研成細粉，精密稱取細粉適量，將細粉完全轉(zhuǎn)移至量瓶中，加無水乙醇使溶解并定容，濾過，取續(xù)濾液制成每ImL約含恩替卡韋0.15mg的溶液,搖勻,濾過,作為供試品溶液；
[0014](4)對照品溶液制備步驟
[0015]將步驟(I)制備的供試品溶液離心，從離心后的供試品溶液上清液中精密量取
1.0mL到IOOmL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得質(zhì)量百分比濃度為1.0%的對照品溶液；
[0016](5)流動相制備步驟
[0017]將無水乙醇500ml和500ml異丙醇，加入Iml三氟乙酸，混勻，超聲30分鐘，即得；
[0018](6)色譜系統(tǒng)建立步驟
[0019]色譜柱:多糖涂敷型色譜柱250*4.6mm，柱溫:30°C，檢測器:紫外檢測器，250nm，流速:1.0ml/min,進樣體積:20 μ 1；
[0020](7)洗脫步驟
[0021]等度洗脫
[0022](8)分析過程步驟
[0023]照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄V D)測定；
[0024]精密量取系統(tǒng)適用性溶液20 μ 1注入液相色譜儀中，出峰前后順序為異構體和恩替卡韋，異構體和主峰的分離度應不小于2.0 ；
[0025]精密量取對照品溶液20 μ 1注入符合系統(tǒng)適用性要求的液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的20%。再精密量取20 μ 1的空白溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖；
[0026](9)計算步驟
[0027]依據(jù)步驟(8)記錄的色譜圖，用主成分自身對照法計算恩替卡韋片中全反式異構體，即得；具體計算公式如下:
[0028]%impurity A = Aspl/ Astd
[0029]注:Aspl=樣品溶液中異構體峰面積；Astd=l%自身對照溶液主峰峰面積。
[0030]本發(fā)明可以定量測定恩替卡韋的全反式異構體含量，從而有效控制藥品質(zhì)量。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1為恩替卡韋的全反式異構體結構圖。
【具體實施方式】
[0032]通過下面給出的本發(fā)明的具體實施的方式可以進一步清楚地了解本發(fā)明，但它們不是對本發(fā)明的限定。
[0033]一種用高效液相色譜法測定恩替卡韋片中全反式異構體的方法，包括如下步驟:
[0034]( I)系統(tǒng)適用性溶液制備步驟
[0035]稱取恩替卡韋全反式異構體3.0mg,置50mL棕色量瓶中，加無水乙醇40mL,超聲使溶解，放冷，無水乙醇稀釋至刻度，搖勻作為恩替卡韋全反式異構體儲備液；
[0036](2)系統(tǒng)適用性溶液制備步驟
[0037]稱取恩替卡韋標準品約6.0mg,置50mL棕色量瓶中，加無水乙醇約40mL，超聲使溶解，放冷，精密量取步驟(1)制備的恩替卡韋全反式異構體儲備液1.0mL加入，加無水乙醇稀釋至刻度，混勻，作為系統(tǒng)適用性溶液；
[0038](3)供試品溶液制備步驟
[0039]將恩替卡韋片研成細粉，精密稱取細粉適量，將細粉完全轉(zhuǎn)移至量瓶中，加無水乙醇使溶解并定容，濾過，取續(xù)濾液制成每ImL約含恩替卡韋0.15mg的溶液,搖勻,濾過,作為供試品溶液；
[0040]( 4 )對照品溶液制備步驟
[0041]將步驟(1)制備的供試品溶液離心，從離心后的供試品溶液上清液中精密量取
1.0mL到IOOmL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得質(zhì)量百分比濃度為1.0%的對照品溶液；
[0042](5)流動相制備步驟
[0043]將無水乙醇500ml和500ml異丙醇,加入Iml三氟乙酸,混勻,超聲30分鐘，即得；
[0044](6 )色譜系統(tǒng)建立步驟
[0045]色譜柱:多糖涂敷型色譜柱250*4.6mm，柱溫:30°C，檢測器:紫外檢測器，250nm，流速:1.0ml/min,進樣體積:20 μ I ；
[0046](7)洗脫步驟
[0047]等度洗脫
[0048](8)分析過程步驟
[0049]照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄V D)測定；
[0050]精密量取系統(tǒng)適用性溶液20 μ I注入液相色譜儀中，出峰前后順序為異構體和恩替卡韋，異構體和主峰的分離度應不小于2.0 ；
[0051]精密量取對照品溶液20μ I注入符合系統(tǒng)適用性要求的液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的20%。再精密量取20 μ I的空白溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖；
[0052](9)計算步驟
[0053]依據(jù)步驟(8)記錄的色譜圖，用主成分自身對照法計算恩替卡韋片中全反式異構體，即得；具體計算公式如下:
[0054]
【權利要求】
1.一種用高效液相色譜法測定恩替卡韋片中全反式異構體的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)系統(tǒng)適用性溶液制備步驟 稱取恩替卡韋全反式異構體3.0mg,置50mL棕色量瓶中，加無水乙醇40mL,超聲使溶解，放冷，無水乙醇稀釋至刻度，搖勻作為恩替卡韋全反式異構體儲備液； (2)系統(tǒng)適用性溶液制備步驟 稱取恩替卡韋標準品約6.0mg，置50mL棕色量瓶中，加無水乙醇約40mL，超聲使溶解，放冷，精密量取步驟(1)制備的恩替卡韋全反式異構體儲備液1.0mL加入，加無水乙醇稀釋至刻度，混勻，作為系統(tǒng)適用性溶液； (3)供試品溶液制備步驟 將恩替卡韋片研成細粉，精密稱取細粉適量，將細粉完全轉(zhuǎn)移至量瓶中，加無水乙醇使溶解并定容，濾過，取續(xù)濾液制成每ImL約含恩替卡韋0.15mg的溶液,搖勻,濾過,作為供試品溶液； (4)對照品溶液制備步驟 將步驟(1)制備的供試品溶液離心，從離心后的供試品溶液上清液中精密量取1.0mL到IOOmL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得質(zhì)量百分比濃度為1.0%的對照品溶液； (5)流動相制備步驟 將無水乙醇500ml和500ml異丙醇,加入Iml三氟乙酸,混勻,超聲30分鐘，即得； (6)色譜系統(tǒng)建立步驟 色譜柱:多糖涂敷型色譜柱250*4.6mm，柱溫:30°C，檢測器:紫外檢測器，250nm，流速:1.0ml/min,進樣體積:20 μ I ； (7)洗脫步驟 等度洗脫 (8)分析過程步驟 照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄V D)測定； 精密量取系統(tǒng)適用性溶液20 μ I注入液相色譜儀中，出峰前后順序為異構體和恩替卡韋，異構體和主峰的分離度應不小于2.0 ； 精密量取對照品溶液20 μ I注入符合系統(tǒng)適用性要求的液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的20%。再精密量取20 μ I的空白溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖； (9)計算步驟 依據(jù)步驟(8)記錄的色譜圖，用主成分自身對照法計算恩替卡韋片中全反式異構體，SP得；具體計算公式如下:
【文檔編號】G01N30/88GK103675185SQ201310666403
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月10日 優(yōu)先權日:2013年12月10日
【發(fā)明者】葉湘武, 付愛玲, 邱永鋒, 楊帥兵 申請人:上海景峰制藥股份有限公司