專利名稱：一種胎兒7號(hào)染色體異常疾病的篩查試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種試劑盒，特別涉及一種胎兒7號(hào)染色體異常疾病的篩查試劑盒。
背景技術(shù)：
人類的7號(hào)染色體是23對(duì)染色體的其中之一，正常狀況下每個(gè)細(xì)胞擁有兩條，此染色體含有約1000到1400個(gè)基因，占細(xì)胞內(nèi)所有DNA的5%到5.5%。7號(hào)染色體的異常，如臂間倒位，可產(chǎn)生不平衡的配子，進(jìn)而導(dǎo)致Turner綜合征。Turner綜合征患者在出生的頭2 3年生長速度正常，以后就低于正常女性，在青春發(fā)育期，正常女性有一個(gè)生長加速，而Turner綜合征患者仍生長低下，正常女性大約15 16歲身高基本停止生長，而Turner綜合征緩慢生長至18歲左右。Turner綜合征成人平均身高僅139.1cm，生長早期應(yīng)用基因重組人生長激素，可以提高其終身高。因此，在懷孕早期進(jìn)行檢測，確定胎兒的7號(hào)染色體是否異常對(duì)胎兒出生后的及時(shí)治療具有極為重要指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種胎兒7號(hào)染色體異常疾病的篩查試劑盒，以及檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑在制備胎兒7號(hào)染色體異常疾病篩查試劑中的用途。本發(fā)明胎兒7號(hào)染色體異常疾病的篩查試劑盒，它包括檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑。其中，所述試劑為ELISA檢測用試劑。所述ELISA檢測用試劑為ELISA直接法、ELISA間接法、ELISA雙抗體夾心法或者ELISA競爭法檢測用試劑。所述ELISA雙抗體夾心法檢測用試劑包括抗人PLGF抗體、人PLGF標(biāo)準(zhǔn)品、ELISA檢測用酶和ELISA檢測用底物。優(yōu)選地，所述抗人PLGF抗體包括抗人PLGF單克隆抗體和生物素標(biāo)記的抗人PLGF多克隆抗體；所述ELISA檢測用酶是辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素；所述ELISA檢測用底物為TMB。本發(fā)明還提供了檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑在制備胎兒7號(hào)染色體異常疾病篩查試劑中的用途。其中，所述檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑為ELISA檢測用試劑。所述ELISA檢測用試劑為ELISA直接法、ELISA間接法、ELISA雙抗體夾心法或者ELISA競爭法檢測用試劑。所述ELISA雙抗體夾心法檢測用試劑包括抗人PLGF抗體、人PLGF標(biāo)準(zhǔn)品、ELISA檢測用酶和ELISA檢測用底物。優(yōu)選地，所述抗人PLGF抗體包括抗人PLGF單克隆抗體和生物素標(biāo)記的抗人PLGF多克隆抗體；所述ELISA檢測用酶是辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素；所述ELISA檢測用底物為TMB。本發(fā)明篩查試劑盒和方法可以有效篩查胎兒的7號(hào)染色體是否異常，并且操作簡單，僅需對(duì)孕婦進(jìn)行血液或尿液檢查，患者依從性高，具有良好的應(yīng)用前景。以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1樣本采集1、采集對(duì)象:2011年10月-2012年4月在四川大學(xué)華西第二醫(yī)院門診及成都中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院門診就診的孕早期孕婦共35例。2、早期妊娠診斷標(biāo)準(zhǔn):參考全國高等醫(yī)學(xué)院校教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版記載的方法(包括①停經(jīng)史；@HCG陽性；③確診為宮內(nèi)妊娠(B型超聲見到宮腔內(nèi)有妊娠囊)。3、納入標(biāo)準(zhǔn):①符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；②孕周:5周-13+6周；③知情同意，志愿受試。4、排除標(biāo)準(zhǔn):有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等并發(fā)癥，或其他原發(fā)性疾病及精神病患者。5、脫落標(biāo)準(zhǔn):①納入后發(fā)現(xiàn)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)或伴有排除標(biāo)準(zhǔn)的病例予以剔除
因其他原因失訪的病例患者自行退出；④納入后發(fā)現(xiàn)無法從受試者處獲得真實(shí)、全面的臨床資料。6、樣本人口特征:納入孕婦年齡范圍21歲-43歲，平均年齡31.96±6.1歲。7、胎兒7號(hào)染色異常檢測方法:羊水穿刺后G顯帶分析。檢測結(jié)果:34例正常，I例為7號(hào)染色體臂間倒位。8、樣本采集(I)血液樣本:采用含有EDTA的試管采集孕婦靜脈血(空腹)4ml,經(jīng)4°C低溫離心(4000rpm, IOmin)后將其上清液，編號(hào)保存于_80°C冰箱冷凍待測。(2)尿液樣本:留取受試者中段尿6ml，經(jīng)4°C低溫離心(4000rpm, IOmin)后將其上清液，編號(hào)保存于_80°C冰箱冷凍待測。實(shí)施例2PLGF水平的檢測方法1、主要儀器(I)酶標(biāo)儀:Molecular Devices 公司，Spectra Max5(2)冷凍離心機(jī):BECKMAN 公司，AllegraTMMR(3)_2CTC冰箱:Electrolux 公司(4)超低溫冰箱:Thermo 公司，SK501(5)電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，DRP-91622、實(shí)驗(yàn)試劑及材料(I) Capture Antibody:鼠抗人 PLGF 單克隆抗體 Human PLGFAntibody (Monoclonal Mouse IgGl),購自 R&D 公司，MAB264 ;
(2) Detection Antibody:生物素標(biāo)記的羊抗人PLGF多克隆抗體HumanPLGFBiotinylated Antibody (Ployclonal Goat IgG)，購自 R&D 公司，BAF264 ;(3)PLGF 標(biāo)準(zhǔn)品:重組人 PLGF Recombinant Human PLGF,購自 R&D 公司，264-PG-10 ；(4)辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素Streptavidin-horseradish peroxidase:R&D 公司，DY998 ；(5)TMB:Sigma 公司，T0440-1L ;(6) PBS:自配，ρΗ7.4，137mM NaCl, 2.7mM KCl, 8.1mM Na2HPO4,
1.5mMKH2P04, pH7.2-7.4, 0.2 μ m filtered ；(7) Tween-20:上海生工；

(8)包被緩沖液:自配，ρΗ9.6、50mM 碳酸鹽緩沖液，Na2CO3L 59g，NaHC032.93g，加蒸餾水至IL ；(9)洗滌液:自配，PBS-T (PBS，含 0.02%Tween-20)(10)終止液:自配，2MH2S04 ；(11)脫脂奶粉:伊利集團(tuán)；(12)牛血清白蛋白(BSA):羅氏公司；(13)胎牛血清(FBS):GIBC0 公司；(14)可拆式 96 孔 ELISA 板:C0STAR 公司。3、實(shí)驗(yàn)方法(I)將所測樣本放在室溫下復(fù)蘇后，再進(jìn)行檢測；(2)包被 Capture Antibody, 4 μ g/ml, 100 μ 1/well, 4°C放置過夜(約 16_20h);(3)3%BSA溶液、3%FBS溶液或?yàn)?%脫脂奶粉溶液封閉，100 μ 1/well，37 °C孵育2h ；(4)PBS-T洗板三次；分別加入8個(gè)不同濃度PLGF標(biāo)準(zhǔn)品(濃度分別為2000pg/ml、1000pg/ml、500pg/ml、250pg/ml、125pg/ml、62.5pg/ml、31.25pg/ml、15.625pg/ml)及待測樣品，100μ 1/well，均設(shè)置兩個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置兩個(gè)空白孔，37°C孵育2h ；(5)PBS_T 洗板三次;分別加入 Detection Antibody, I μ g/ml, 100 μ 1/well, 37°C孵育2h ；(6) PBS-T 洗板三次；加入 streptavidin-horseradish peroxidase, 1:200,100μ 1/well，室溫，Ih ；(7) 85-1'洗板三次；加入了]\^，10(^1/^11，避光于371:孵育 IOmin ;(8)直接加終止液，50 μ 1/well ；450nm處檢測OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待檢樣品的PLGF水平。實(shí)施例3PLGF水平與胎兒7號(hào)染色體異常的相關(guān)性按照實(shí)施例2的方法分別檢測實(shí)施例1采集的血液和尿液樣本，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表I 2所示:表I胎兒7號(hào)染色體異常與血清PLGF水平的相關(guān)性
權(quán)利要求
1.一種胎兒7號(hào)染色體異常疾病的篩查試劑盒，其特征在于:它包括檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩查試劑盒，其特征在于:所述試劑為ELISA檢測用試劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩查試劑盒，其特征在于:所述ELISA檢測用試劑為ELISA直接法、ELISA間接法、ELISA雙抗體夾心法或者ELISA競爭法檢測用試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的篩查試劑盒，其特征在于:所述ELISA雙抗體夾心法檢測用試劑包括抗人PLGF抗體、人PLGF標(biāo)準(zhǔn)品、ELISA檢測用酶和ELISA檢測用底物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的篩查試劑盒，其特征在于:所述抗人PLGF抗體包括抗人PLGF單克隆抗體和生物素標(biāo)記的抗人PLGF多克隆抗體；所述ELISA檢測用酶是辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素；所述ELISA檢測用底物為TMB。
6.檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑在制備胎兒7號(hào)染色體異常篩查試劑中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于:所述檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑為ELISA檢測用試劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于:所述ELISA檢測用試劑為ELISA直接法、ELISA間接法、ELISA雙抗體夾心法或者ELISA競爭法檢測用試劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于:所述ELISA雙抗體夾心法檢測用試劑包括抗人PLGF抗體、人PLGF標(biāo)準(zhǔn)品、ELISA檢測用酶和ELISA檢測用底物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于:所述抗人PLGF抗體包括抗人PLGF單克隆抗體和生物素標(biāo)記的抗人PLGF多克隆抗體；所述ELISA檢測用酶是辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素；所述ELISA檢測用底物為TMB。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種胎兒7號(hào)染色體異常疾病的篩查試劑盒，它包括檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑。本發(fā)明還公開了檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑在制備胎兒7號(hào)染色體異常篩查試劑中的用途。本發(fā)明試劑盒可以對(duì)胎兒的7號(hào)染色體是否異常進(jìn)行評(píng)估，臨床應(yīng)用前景良好。
文檔編號(hào)G01N33/577GK103207274SQ20131015670
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月28日
發(fā)明者陸華, 高小平, 劉小章 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)