專(zhuān)利名稱(chēng)：一種全成分群同時(shí)測(cè)算方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于多成分分析和免疫技術(shù)結(jié)合領(lǐng)域，屬于化學(xué)、生物醫(yī)藥、中醫(yī)藥學(xué)的交叉學(xué)科，涉及一種全成分群同時(shí)測(cè)算方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)已報(bào)道的檢測(cè)方法主要是用于單成分檢測(cè)，很少有同時(shí)檢測(cè)多成分的方法和產(chǎn)品出現(xiàn)，而對(duì)于同時(shí)檢測(cè)全成分群的產(chǎn)品則更少。隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化和系統(tǒng)生物學(xué)的代謝組學(xué)研究的興起，解決中藥多成分群與系統(tǒng)生物學(xué)的代謝成分群等全成分群的同步測(cè)定問(wèn)題已迫在眉睫。近幾年來(lái)，一些研究人員試圖采用指紋圖譜技術(shù)解決這一問(wèn)題，但緣于色譜柱的分離能力、色譜峰的重現(xiàn)性及通用檢測(cè)器的原因，很難實(shí)現(xiàn)中藥及代謝組全成分群檢測(cè)。縱觀成分的檢測(cè)方法可分化學(xué)方法與儀器方法，化學(xué)方法多用于無(wú)機(jī)化合物的分析，而有機(jī)化合物多采用儀器分析。目前常用的檢測(cè)方法有氣相色譜法、高效液相色譜法、色譜/ 質(zhì)聯(lián)用分析法、毛細(xì)管電泳法、薄層色譜法、熒光分析法、標(biāo)記免疫分析法(酶聯(lián)免疫方法、 放射免疫技術(shù)測(cè)定法和化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定法)等。氣相色譜法適用于有揮發(fā)性的物質(zhì)的分析；高效液相色譜法多用于有紫外吸收的成分分析，對(duì)于沒(méi)有紫外吸收的化合物可采用折光示差、蒸發(fā)光散射等檢測(cè)分析，但靈敏度低，對(duì)于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)可采用熒光檢測(cè)測(cè)分析，但產(chǎn)生熒光的物質(zhì)較少，因此高效液相到目前為止還沒(méi)有適用所有成分的通用檢測(cè)器；色譜/質(zhì)聯(lián)儀采用離子峰進(jìn)行分析，靈敏度高、特異性強(qiáng)，但對(duì)于同分異構(gòu)型化合物也不適用，對(duì)于有機(jī)大分子化合物的含量測(cè)定也存在困難。總之，這些儀器分析方法的局限是集分離與測(cè)定于一身，只有當(dāng)樣品成分被分離后才能檢測(cè)，同時(shí)所有的檢測(cè)器只能檢測(cè)特定的化學(xué)成分群，而不能進(jìn)行全成分群分析，當(dāng)遇到象中藥、中藥復(fù)方及代謝組這樣復(fù)雜的有機(jī)成分群體系(分子量從幾十到上萬(wàn)，成分群結(jié)構(gòu)從簡(jiǎn)單的氨基酸到復(fù)雜的三萜皂苷類(lèi))檢測(cè)時(shí)，因色譜柱或檢測(cè)器的限制，不能將全成分完全分離或檢測(cè)到是必然的。因此建立起一種“法于自然”的仿生全成分群檢測(cè)技術(shù)是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化、解決代謝組學(xué)與中藥質(zhì)量控制時(shí)全成分群測(cè)定國(guó)際性難題的客觀需要。眾所周知，機(jī)體對(duì)中藥成分群或代謝組成分群的快速“辨識(shí)”卻不按化學(xué)分析原理，而是將其當(dāng)作“外源性”物質(zhì)經(jīng)免疫應(yīng)答識(shí)別，蛋白質(zhì)與多糖等大分子具有免疫原性，而中藥或代謝組的成分多為小分子，一般不具備免疫原性，但可將小分子成分群作為半抗原， 通過(guò)與載體偶合成抗原，以抗原決定簇遞呈而被辨識(shí)。分子量小的可以作為半抗原識(shí)別，分子量大可以作為全抗原識(shí)別，因此免疫識(shí)別可囊括自然界與人工合成所有的有機(jī)物分子類(lèi)群，自然是中藥與代謝組成分群絕好的檢測(cè)方法。免疫標(biāo)記技術(shù)是指用熒光素、酶、放射性同位素、化學(xué)發(fā)光物、膠體金或電子致密物質(zhì)等標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)測(cè)定的技術(shù)，其中酶聯(lián)免疫技術(shù)應(yīng)用最廣。目前免疫標(biāo)記技術(shù)及產(chǎn)品多針對(duì)具有免疫原性的蛋白質(zhì)、多糖設(shè)計(jì)，主要用于病理或生理狀態(tài)的細(xì)胞因子測(cè)定，少用于象中藥或代謝組研究中所遇的成分群的測(cè)定，盡管已有專(zhuān)利申請(qǐng)與文獻(xiàn)報(bào)道中藥成分群的質(zhì)量控制可采用特異性的抗體抗原反應(yīng)，但目前僅有芍藥苷等10余種小分子成分建立了酶聯(lián)免疫測(cè)定(也有其它的標(biāo)記免疫測(cè)定)，多按單成分測(cè)定模式成分分析，沒(méi)有適合全成分群的同步芯片標(biāo)記測(cè)定技術(shù)及相關(guān)芯片產(chǎn)品的面世。主要原因有五，一是傳統(tǒng)成分測(cè)定多注重單成分的精確測(cè)定，少關(guān)注多成分的同步測(cè)定，測(cè)定方法多受單成分測(cè)定模式的影響，另者也沒(méi)有學(xué)科研究的需要。近年來(lái)，隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化與代謝組學(xué)研究的需要，全成分群的快速同步測(cè)定已是學(xué)科發(fā)展亟需解決的關(guān)鍵問(wèn)題，引起了國(guó)內(nèi)外廣泛的關(guān)注與重視，已成為中藥、生物醫(yī)藥、分析化學(xué)領(lǐng)域的國(guó)際難題；二是有大量高、精、尖測(cè)定的現(xiàn)代儀器，對(duì)單成分的測(cè)定研究細(xì)致深入，但對(duì)多成分的測(cè)定問(wèn)題研究卻不夠深入，其缺點(diǎn)還沒(méi)有引起足夠的認(rèn)識(shí)和重視，多認(rèn)為憑借現(xiàn)代化的儀器可以解決小分子多成分群的測(cè)定難題，因此，近年來(lái)推動(dòng)了指紋圖譜測(cè)定多成分技術(shù)的興起，但緣于指紋圖譜測(cè)定技術(shù)具有與現(xiàn)代儀器分析一樣的弱點(diǎn)亦在大多數(shù)情況下，要先分離才能分析，故極大地制約了對(duì)多成分群體系的同步快速分析；三是目前還沒(méi)有能滿足全成分群檢測(cè)所需的通用檢測(cè)器；四是對(duì)于大分子化合物目前有采用標(biāo)記免疫芯片技術(shù)的報(bào)道，但所針對(duì)的物質(zhì)數(shù)目不大，相互間一般不考慮交叉反應(yīng)的干擾，而大多數(shù)小分子有機(jī)化合物本身沒(méi)有免疫原性，要與載體結(jié)合才能有免疫原性，盡管目前有單個(gè)小分子酶聯(lián)免疫測(cè)定方法的報(bào)道，也有利用特異性的抗體抗原反應(yīng)來(lái)進(jìn)行中藥成分群的質(zhì)量控制的專(zhuān)利申請(qǐng)，但要建立適合中藥與代謝組全成分群成千上萬(wàn)大樣測(cè)定方法，不得不解決成分間的交叉反應(yīng)；五是由于抗原與抗體的結(jié)合專(zhuān)屬性決定抗原表位的決定簇，而中藥及代謝物成分往往又同母核群生，難免存在相似的抗原決定簇，因此當(dāng)芯片中的特異抗體與成千上萬(wàn)成分反應(yīng)時(shí)非常有可能發(fā)生交叉反應(yīng)，如萊克多巴胺抗體對(duì)多巴酚丁胺有8. 3 %交叉反應(yīng)，鏈霉素抗體對(duì)雙氫鏈霉素的交叉反應(yīng)率達(dá)90. 6%，青霉素過(guò)敏病人與頭孢菌素有17. 38%交叉過(guò)敏反應(yīng)。 因此，怎樣處理交叉反應(yīng)是實(shí)現(xiàn)全成分群測(cè)定的最為關(guān)鍵的技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種全成分群同時(shí)測(cè)算方法。全成分群同時(shí)測(cè)算方法操作方便，重要的是能滿足含各種多分子群的大批樣本的同時(shí)測(cè)定需求，特別適合具有復(fù)雜組分的混合物的分析和測(cè)定，如中草藥、藥物代謝產(chǎn)物、生物代謝物組、作物、食品、農(nóng)藥、化工產(chǎn)品等等。針對(duì)大樣本抗體與成分間的交叉反應(yīng)有二種解決思路，第一種思路為傳統(tǒng)的觀點(diǎn)，亦追求抗原表位的決定簇的特異性，盡量地消除交叉反應(yīng)。對(duì)于具有免疫原性的大分子物質(zhì)，因不易出現(xiàn)表位決定簇完全相同，可直接注入到動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體，其抗體抗原反應(yīng)特異性強(qiáng)，在做成芯片時(shí)可以不考慮抗體與成分間的交叉反應(yīng)，目前很多生物試劑盒就是據(jù)此原理設(shè)計(jì)制而成；但對(duì)于中藥及代謝組學(xué)中的小分子有機(jī)物，沒(méi)有免疫原性， 只能作為半抗原，與載體(蛋白質(zhì)或高分子物)結(jié)合成抗原，注射到動(dòng)物體內(nèi)，才能產(chǎn)生所需特異性抗體，因此，抗體與小分子之間半抗原方間的作用程度處決于各小分子之間的相似程度以及與載體蛋白質(zhì)的合成方法，隨著半抗原成分間相似程度的增加，其交叉反應(yīng)表現(xiàn)得越強(qiáng)，大量文獻(xiàn)也報(bào)道了各成分標(biāo)記免疫競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)時(shí)所產(chǎn)生的交叉反應(yīng)，因此要完全消滅成分間的交叉反應(yīng)既不符合自然規(guī)律，也不現(xiàn)實(shí)與可能，故只按傳統(tǒng)的消除交叉反應(yīng)的思路來(lái)進(jìn)行大樣本特異性抗原抗體測(cè)定會(huì)變得棘手，為此，我們只能另辟蹊徑，采用第二思路，亦在盡可能消除交叉反應(yīng)的情況下，不畏懼、不特異回避交叉反應(yīng)，而是掌握并充
5分利用交叉反應(yīng)信息來(lái)全面分析所納入成分，先獲得各抗體與半抗原成分之間的交叉反應(yīng)率，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的精確度需要，先確定交叉反應(yīng)率界值，對(duì)于大于界值的交叉成分可組成特異性與非特異性交叉成分濃度對(duì)數(shù)或濃度線性方程組來(lái)測(cè)算獲得其濃度，從而實(shí)現(xiàn)全成分群抗體與抗原特異性與非特異性標(biāo)記免疫反應(yīng)分析的結(jié)合，建立起以芯片的形式進(jìn)行快速、 高通量的定性定量分析，解決目前中藥及代謝組學(xué)全成分群同步測(cè)定的國(guó)際性難題。本發(fā)明先將各成分群分離、鑒定，確定該成分的歸屬；然后對(duì)有免疫原性的大分子直接注入動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，沒(méi)有免疫原性的小分子與大分子載體直接反應(yīng)或化學(xué)合成為全抗原，在合成時(shí)盡可能地增強(qiáng)抗體與各成分半抗原間的特異性反應(yīng)，消除成分間的交叉反應(yīng)。直接或以合成抗原注入動(dòng)物體內(nèi)，產(chǎn)生抗體，分離抗體；再標(biāo)記抗體或抗原；包被未標(biāo)的抗體或抗原，制成多成分群的免疫芯片。通過(guò)抗體和抗原的競(jìng)爭(zhēng)性的免疫標(biāo)記反應(yīng)獲得全成分群的線性回歸方程與交叉反應(yīng)信息，再根據(jù)實(shí)驗(yàn)精確度的需要，將成分群分成需考慮交叉反應(yīng)與不需考慮交叉反應(yīng)兩類(lèi)，前者可直接依據(jù)芯片包埋抗原或抗體點(diǎn)陣的信號(hào)有、無(wú)、強(qiáng)、弱直接由線性回歸方程讀出含量，后者需建立對(duì)數(shù)濃度、濃度多元線性方程組， 求解計(jì)算獲得各成分群的含量，從而實(shí)現(xiàn)中藥、代謝組學(xué)乃至化學(xué)合成與半合成全成分群的定性定量分析，達(dá)到多把鑰匙同時(shí)開(kāi)多把鎖的鑰鎖，相互關(guān)聯(lián)匹配分析的檢測(cè)分析目的。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案一種全成分群同時(shí)測(cè)算方法，包括以下步驟(1)根據(jù)成分的免疫原性與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)于具有免疫原性的大分子化合物直接作為抗原；將沒(méi)有免疫原性的小分子采用直接或化學(xué)合成的方法與大分子載體制備成抗原；(2)上述抗原分別或混合注射到動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，并分離出抗體；(3)對(duì)上述抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記；(4)將未標(biāo)記的抗體或抗原按實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠幸?guī)律地包被成芯片板；(5)獲取交叉反應(yīng)矩陣R、斜率矩陣B、同一抗體截距和的列向量A、濃度對(duì)數(shù)或濃度列向量C和總疊加抑制率列向量I :取與待測(cè)成分相應(yīng)的免疫芯片板，采用固相吸附標(biāo)記免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定芯片板點(diǎn)陣對(duì)各成分標(biāo)準(zhǔn)品液的特異與非特異性線性關(guān)系；依交叉反應(yīng)公式計(jì)算成分間的交叉反應(yīng)率，獲得抗體與成分特異與非特異反應(yīng)兩兩交叉反應(yīng)率矩陣R，根據(jù)實(shí)驗(yàn)精度確定交叉反應(yīng)率界值，根據(jù)界值確定需考慮與不考慮交叉反應(yīng)成分類(lèi)別，考慮交叉反應(yīng)成分，需建立各抗體與成分間相互交叉作用的斜率矩陣B、 同一抗體截距和的列向量A及濃度對(duì)數(shù)或濃度列向量C ；取與待測(cè)成分相應(yīng)的免疫芯片板，采用固相吸附標(biāo)記免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定芯片點(diǎn)陣對(duì)待測(cè)樣品液的總抑制率，再轉(zhuǎn)換成總疊加抑制率列向量I ；(6)對(duì)于不考慮交叉反應(yīng)的成分，直接依線性方程讀出該成分的含量；需考慮交叉反應(yīng)的成分，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品液的總疊加抑制率建立成分對(duì)數(shù)濃度的多元線性方程BC = I-A，求解獲得成分的含量；從而獲得所有成分的含量。所述的載體為蛋白質(zhì)或其它具免疫原性的非蛋白質(zhì)高分子化合物；所述的抗原所產(chǎn)生的抗體為IgA、IgD、IgG、IgE和IgM中的一種或多種；所述的抗原或抗體的標(biāo)記方法為熒光標(biāo)記法、酶標(biāo)記或放射性核素標(biāo)記、膠體金及化學(xué)發(fā)光標(biāo)記法；
所述的有規(guī)律包被為按化學(xué)類(lèi)型、中文編碼、英文編碼、藥材所含成分類(lèi)群、功效、 功能團(tuán)、生物物種、同類(lèi)化合物或同一組分代謝產(chǎn)物針對(duì)不同檢測(cè)目標(biāo)要求而編排成各種芯片點(diǎn)陣，包被未標(biāo)記的抗原或抗體。斜率矩陣為B j)，i為包被的抗體或抗原，j為競(jìng)爭(zhēng)的成分，i與j的交叉作用超過(guò)了實(shí)驗(yàn)精度界限，b^·為B矩陣中的任一元素，亦任一抗體對(duì)任一成分作用線性方程的斜率；同一抗體截矩和的向量為
權(quán)利要求
1.一種全成分群同時(shí)測(cè)算方法，其特征在于，包括以下步驟(1)根據(jù)成分的免疫原性與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)于具有免疫原性的大分子化合物直接作為抗原；將沒(méi)有免疫原性的小分子采用直接或化學(xué)合成的方法與大分子載體制備成抗原；(2)上述抗原分別或混合注射到動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，并分離出抗體；(3)對(duì)上述抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記；(4)將未標(biāo)記的抗體或抗原按實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠幸?guī)律地包被成芯片板；(5)獲取交叉反應(yīng)矩陣R、斜率矩陣B、同一抗體截距和的列向量A、濃度對(duì)數(shù)或濃度列向量C和總疊加抑制率列向量I :取與待測(cè)成分相應(yīng)的免疫芯片板，采用固相吸附標(biāo)記免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定芯片板點(diǎn)陣對(duì)各成分標(biāo)準(zhǔn)品液的特異與非特異性線性關(guān)系；依交叉反應(yīng)公式計(jì)算成分間的交叉反應(yīng)率，獲得抗體與成分特異與非特異反應(yīng)兩兩交叉反應(yīng)率矩陣R，根據(jù)實(shí)驗(yàn)精度確定交叉反應(yīng)率界值，根據(jù)界值確定需考慮與不考慮交叉反應(yīng)成分類(lèi)別，考慮交叉反應(yīng)成分，需建立各抗體與成分間相互交叉作用的斜率矩陣B、同一抗體截距和的列向量A及濃度對(duì)數(shù)或濃度列向量C ；取與待測(cè)成分相應(yīng)的免疫芯片板，采用固相吸附標(biāo)記免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定芯片點(diǎn)陣對(duì)待測(cè)樣品液的總抑制率，再轉(zhuǎn)換成總疊加抑制率列向量I ；(6)對(duì)于不考慮交叉反應(yīng)的成分，直接依線性方程讀出該成分的含量；需考慮交叉反應(yīng)的成分，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品液的總疊加抑制率建立成分對(duì)數(shù)濃度的多元線性方程BC =I-A，求解獲得成分的含量；從而獲得所有成分的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全成分群同時(shí)測(cè)算方法，其特征在于，所述的載體為蛋白質(zhì)或其它具免疫原性的非蛋白質(zhì)高分子化合物；所述的抗原所產(chǎn)生的抗體為IgA、IgD、IgG、IgE和IgM中的一種或多種；所述的抗原或抗體的標(biāo)記方法為熒光標(biāo)記法、酶標(biāo)記或放射性核素標(biāo)記、膠體金及化學(xué)發(fā)光標(biāo)記法；所述的有規(guī)律包被為按化學(xué)類(lèi)型、中文編碼、英文編碼、藥材所含成分類(lèi)群、功效、功能團(tuán)、生物物種、同類(lèi)化合物或同一組分代謝產(chǎn)物針對(duì)不同檢測(cè)目標(biāo)要求而編排成各種芯片點(diǎn)陣，包被未標(biāo)記的抗原或抗體。斜率矩陣為B ，i為包被的抗體或抗原，j為競(jìng)爭(zhēng)的成分，i與j的交叉作用超過(guò)了實(shí)驗(yàn)精度界限，b^·為B矩陣中的任一元素，亦任一抗體對(duì)任一成分作用線性方程的斜率；η同一抗體截矩和的向量為A ( >' η為需考慮交叉反應(yīng)成分的數(shù)目，\ j表示截矩；=1矩陣的任一元素，即任一抗體對(duì)任一成分作用線性方程的斜率。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全成分群同時(shí)測(cè)算方法，其特征在于，獲得斜率矩陣B、同一抗體截距和的列向量A以及濃度對(duì)數(shù)列向量C的具體過(guò)程為取與待測(cè)成分?jǐn)?shù)目5 6倍的芯片板，在包被有多種抗原或抗體的芯片板每個(gè)微孔內(nèi)分別兩兩交叉加入1 4數(shù)量級(jí)梯度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每一塊板只加呈梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品液中的一個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品液，5 6塊板完成一個(gè)成分對(duì)特異性抗原抗體交叉影響反應(yīng)的線性考察實(shí)驗(yàn)；標(biāo)準(zhǔn)品液加完后再在每個(gè)微孔內(nèi)分別對(duì)應(yīng)加入標(biāo)記多克隆抗體或標(biāo)記抗原反應(yīng)， 洗滌后，加入底物顯色測(cè)定或直接測(cè)定熒光、放射性強(qiáng)度、發(fā)光強(qiáng)度；先計(jì)算抑制率，再建立各成分標(biāo)準(zhǔn)品液對(duì)抗原抗體反應(yīng)抑制率的線性方程；計(jì)算出IC5tl，再按特異性反應(yīng)的IC5tl除以非特異性的IC5tl計(jì)算交叉率，獲得交叉信息，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的精密度確定交叉反應(yīng)率的界值， 取大于交叉反應(yīng)率界值的成分組成交叉率矩陣R P，根所交叉率矩陣R組成對(duì)應(yīng)的斜率矩陣B(bq)與同一抗體截矩和向量
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全成分群同時(shí)測(cè)算方法，其特征在于，獲得總疊加抑制率列向量I的具體過(guò)程為取包被有多種抗體或抗原的芯片板，每個(gè)微孔內(nèi)加入待測(cè)樣品溶液，在每個(gè)微孔內(nèi)加入標(biāo)記的抗原或標(biāo)記抗體，反應(yīng)，洗滌后，加入底物顯色測(cè)定或直接測(cè)定熒光、放射性強(qiáng)度、 發(fā)光強(qiáng)度，讀出樣品液對(duì)抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)吸收值，采用DzDtl計(jì)算抑制率時(shí)，則應(yīng)乘上100， 再加上(η-1) X 100構(gòu)成總疊加抑制率列向量I ；采用(Dtl-D)/Dtl計(jì)算抑制率時(shí)，則乘上100 即可；D為樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的吸收值，D0為不加樣品或標(biāo)準(zhǔn)品液的吸收值。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全成分群同時(shí)測(cè)算方法，其特征在于，免疫抗原的合成方法為對(duì)于具免疫原性的大分子可直接作抗原，各種類(lèi)型小分子成分能與蛋白質(zhì)反應(yīng)的可直接合成全抗原；不能與蛋白質(zhì)直接反應(yīng)的通過(guò)下列化學(xué)反應(yīng)合成全抗原(1)對(duì)于含氨基基團(tuán)的半抗原成分，采用重氮化法或戊二醛法或多元酸酐法或二異氰酸酯法或偶氮苯甲酸法或亞胺酸酯法合成全抗原；(2)對(duì)于含糖基的半抗原成分，采用過(guò)碘酸鹽氧化為醛基，然后與蛋白分子中的氨基形成khiff氏堿法合成全抗原；(3)對(duì)于含羧基基團(tuán)的半抗原成分，采用混合酸酐法或碳二亞胺法或活潑酯法合成全抗原；(4)含酮基基團(tuán)半抗原成分，可采用0-羧甲基羥胺法或者對(duì)胼基苯甲酸法或者 Mannich反應(yīng)法合成全抗原；(5)含羧酸甲酯衍生物的半抗原成分，采用疊氮化法，羧酸甲酯衍生物經(jīng)胼解、亞硝化， 轉(zhuǎn)變?yōu)榀B氯化物，再與載體蛋白上的氨基反應(yīng)合成全抗原；(6)對(duì)于含羥基基團(tuán)半抗原成分，采用氯乙酸鈉法或三氯三嗪試劑法合成全抗原；(7)含氨基、羥基、巰基的半抗原，可采用鹵代硝基苯法或苯醌法合成全抗原； 合成所使用的載體蛋白有丙種球蛋白、人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)、兔血清白蛋白(RSA)、牛甲狀腺球蛋白(TG)、血藍(lán)蛋白(Hemocyanin)以及人、牛和雞Y-球蛋白、卵黃蛋白，或者是人工合成的多聚賴(lài)氨酸、多聚谷氨酸、多聚混合氨基酸；或者采用聚乙烯吡咯酮、羧甲基纖維素、聚甲基丙酸酯微粒、乳膠和炭末。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種全成分群同時(shí)測(cè)算方法(1)根據(jù)成分的免疫原性與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)制備抗原；(2)上述抗原分別或混合注射到動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，并分離出抗體；(3)對(duì)上述抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記；(4)將未標(biāo)記的抗體或抗原有規(guī)律地包被成芯片板；(5)獲取抗體與成分間的交叉反應(yīng)信息，根據(jù)實(shí)驗(yàn)精度要求構(gòu)建斜率矩陣B、同一抗體截距和的列向量A、濃度對(duì)數(shù)或濃度列向量C和總疊加抑制率列向量I；(6)對(duì)于不考慮交叉反應(yīng)成分，直接依線性方程讀出含量；需考慮交叉反應(yīng)成分，根據(jù)BC＝I-A求解獲得成分含量；從而獲得全成分群含量。本測(cè)算方法操作方便，能滿足含各種成分群大批量樣本的同時(shí)測(cè)定需求，特別適合復(fù)雜組分群的分析和測(cè)定。
文檔編號(hào)G01N33/53GK102353767SQ20111018941
公開(kāi)日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月7日
發(fā)明者賀琪珺, 賀福元, 鄧凱文 申請(qǐng)人:賀福元