專利名稱：快速檢測肌鈣蛋白i的膠體金試紙及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及臨床免疫學(xué)檢測領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測肌鈣蛋白I膠體金試紙條及其制備方法。
背景技術(shù)：
心肌梗死是全球范圍內(nèi)致死和致殘的主要疾病之一。全球每年有1700萬人死于心血管疾病，其中一半以上死于急性心肌梗死(AMI)。在中國，冠心病患者超過2千萬人，而每年有超過100萬人被急性心肌梗死奪去生命。因此，快速識別出早期急性心肌梗死患者并及時治療是提高其存活率的關(guān)鍵。對于無典型胸痛和心電圖改變的AMI患者，檢測血清 心肌標(biāo)志物是診斷AMI的必要依據(jù)。以往世界衛(wèi)生組織(WHO)定義的心梗標(biāo)準(zhǔn)包括缺血癥狀、心電圖(ECG)異常改變和血清心肌酶學(xué)變化。然而隨著敏感性和特異性更高的生化標(biāo)志物一肌鈣蛋白(cTn)的發(fā)現(xiàn)以及更精確的無創(chuàng)影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得檢測到更小的心梗病灶成為可能。診斷心肌梗死的重要一條就是如何快速準(zhǔn)確檢測體內(nèi)心臟生化標(biāo)志物的水平。選擇特異性的心肌梗死生化標(biāo)志物和選擇特異性高靈敏度的方法檢測心肌梗死生化標(biāo)志物水平(免疫診斷試劑盒)是快速診斷急性心肌梗死首先需要解決的問題。因此，各種以心肌梗死心臟標(biāo)志物為檢測對象的免疫診斷試劑盒和生物芯片逐漸應(yīng)用于臨床并得到廣泛發(fā)展。心肌肌鈣蛋白(cTn)靈敏度高、特異性強、發(fā)病后持續(xù)時間長，幾乎完全具有心肌組織特異性并具有高度敏感性，因此是評價心肌壞死的首選標(biāo)志物。即使心肌組織發(fā)生微小區(qū)域的壞死也能檢查到cTn的升高。cTn的升高對于診斷急性心肌梗死至關(guān)重要。目前cTn主要用于心肌缺血損傷的臨床診斷、危險性估計和預(yù)后判斷，此外還可用于MI后臨床溶栓治療效果判定；心肌缺血損傷面積的估計、臨床診斷心肌炎、心肌創(chuàng)傷(心臟手術(shù))、圍手術(shù)期心臟并發(fā)癥、嚴(yán)重膿毒血癥或膿毒血癥導(dǎo)致的左心衰竭、充血性心功能不全，以及某些治療藥物的臨床療效觀察等。因此，如何快速、特異性、高靈敏度的檢測體內(nèi)肌鈣蛋白的水平對于心肌梗死患者的診斷和治療具有重要的意義，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景和市場潛力。目前肌鈣蛋白檢測主要采用金標(biāo)免疫法、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)等方法。金標(biāo)免疫法由于標(biāo)本用量少，簡便快速，適合于急性心肌梗死(AMI)的床旁檢測，不受時間、地點限制，24h全方位為患者服務(wù)，在臨床廣泛應(yīng)用，但是膠體金試紙條檢測靈敏度低，一般情況最低檢出限為Ing/mL。大量臨床試驗和循證醫(yī)學(xué)證據(jù)表明，心肌肌鈣蛋白作為心肌梗死的標(biāo)志物具有非常高的靈敏度和特異性，在正常人體中用現(xiàn)有的檢測方法幾乎檢測不出肌鈣蛋白的含量，至少其在正常人體的含量低于O. lng。臨床廣泛應(yīng)用的金標(biāo)免疫法作為心肌梗死檢測的重要手段，其靈敏度的局限性制約了進(jìn)一步的更廣泛應(yīng)用。因此，提高膠體金檢測靈敏度作為快速診斷的一個重要方向受到越來越多的重視。如將生物素-親和素放大系統(tǒng)、膠體金與熒光結(jié)合等技術(shù)應(yīng)用于膠體金試紙的檢測，以實現(xiàn)更精確的檢測。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測肌鈣蛋白I膠體金試紙條及其制備方法。本發(fā)明提供的快速檢測肌鈣蛋白I膠體金試紙條，其包括包被膜、噴涂有膠體金標(biāo)記的抗心肌肌I丐蛋白I單克隆抗體的膠體金墊I、噴涂有膠體金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體的膠體金墊2、樣品墊、吸水墊和底板，所述的包被膜涂覆有抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體檢測線和兔抗鼠抗體質(zhì)控線。其中，所述的膠體金墊I噴涂有IOnm IOOnm的膠體金標(biāo)記的抗心肌肌I丐蛋白I單克隆抗體。所述的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的量為I 50 μ g。
其中，所述的膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體為膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I的單克隆抗體或多克隆抗體。更進(jìn)一步，所述的膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體用BSA或PEG封閉。其中，所述的膠體金墊2噴涂有20nm IOOnm膠體金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體。所述的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體的量為I 50 μ g。其中，所述的包被膜為硝酸纖維素膜；所述的膠體金墊I、膠體金墊2和樣品墊為聚酯膜或玻璃纖維素膜。本發(fā)明所述的試紙條，在普通膠體金試紙的基礎(chǔ)上增加抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體膠體金墊，測試時，將標(biāo)本滴入試紙條的樣品墊上，如是陽性標(biāo)本，則標(biāo)本中的心肌肌鈣蛋白I與預(yù)先包被在聚酯膜上的金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體結(jié)合，結(jié)合物在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析，隨后會被固定在膜上測試線(T)的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體結(jié)合捕獲，從而在測試線(T)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。同時金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體或金標(biāo)記的抗PEG單克隆抗體在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析，在測試線(T)區(qū)與之前固定在該區(qū)的金標(biāo)記抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體結(jié)合，對測試線(T)進(jìn)行進(jìn)一步的顯色放大。具體金標(biāo)墊2選用金標(biāo)記抗BSA單克隆抗體還是金標(biāo)記的抗PEG單克隆抗體,根據(jù)制備膠體金標(biāo)記抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體時是選用BSA封閉還是PEG封閉而決定。本發(fā)明所述的試紙條的制備方法，包括如下步驟I)制備膠體金墊I :將BSA或PEG封閉的膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體溶液噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，烘干備用；2)制備膠體金墊2 :將膠體金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體溶液或抗PEG溶液噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，烘干備用；3)制備包被膜將抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體稀釋液和兔抗鼠抗體稀釋液噴涂于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，烘干備用；4)將樣品墊用樣品墊溶液處理后烘干備用；5)底板上依次相互交錯2mm地粘上包被膜、金標(biāo)墊I、金標(biāo)墊2、樣品墊和吸水墊，然后在上面覆蓋透明塑料密封膜得到試紙。具體的，本發(fā)明所述的試紙條的制備方法，包括如下具體步驟膠體金標(biāo)記抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體金標(biāo)墊I的制備用碳酸鉀調(diào)節(jié)膠體金溶液(膠體金溶液顆粒粒徑IOnm IOOnm)的pH值至7. O 8. O，加入抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體，室溫攪拌10 60min后，加入終濃度O. 01 % I %的PEG20000溶液或者O. I % 5%的BSA溶液終止，冷凍離心后，用洗液(洗液為含O. 01% 5% PEG20000 的 O. 01 O. 5M 硼酸鹽緩沖液(ρΗ5· O ρΗ6· 5)，或 O. 01% 1%PEG20000的O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液(ρΗ7. O 8. O))清洗后再次離心，加入復(fù)溶液后(復(fù)溶液為O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液，ρΗ6. 5 8. 0，含O. 01 3% BSA,O. 01 I %PEG20000、I 8%蔗糖，使用Biodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以I 5 μ L/cm的速度噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，于25 40°C烘干8 24小時。加入干燥劑封存?zhèn)溆茫唤饦?biāo)記抗BSA單克隆抗體/抗PEG單克隆抗體金標(biāo)墊2的制備用碳酸鉀調(diào)節(jié)膠體金溶液(膠體金溶液顆粒粒徑IOnm IOOnm)的pH值,加入I 50 μ g抗BSA單克隆抗體或者I 50 μ g抗PEG單克隆抗體，室溫攪拌10 60min后，加入終濃度O. 01% 1%的PEG20000溶液或者O. I % 5%的BSA溶液終止，冷凍離心后，用洗液為含O. 01% 5% PEG20000的O. 01 O. 5M硼酸鹽(ρΗ5· O ρΗ6· 5)，或O. 01% I % PEG20000的O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液(ρΗ7· O 8. O))清洗后再次離心，加入復(fù)溶 液(復(fù)溶液為O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液，ρΗ6. 5 8. 0，含O. I 5% BSA,O. 01 1%PEG20000、I 8%蔗糖)后，使用Biodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以I 5 μ L/cm的速度噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，于25 40°C烘干8 24小時。加入干燥劑封存?zhèn)溆?；包被膜的制備使用包被緩沖液分別將抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體以及兔抗鼠抗體稀釋到
O.5 2. Omg/mL濃度，使用Biodot三維噴點平臺分別將兩者以O(shè). 5 I. Ocm的間隔噴涂于硝酸纖維素膜上，于25 40°C烘干8 24小時。加入干燥劑封存?zhèn)溆?；樣品墊的處理將樣品墊放入樣品墊處理溶液(O. Ol O. 5M Tris緩沖液，磷酸鹽緩沖液或檸檬酸緩沖液，其中含O. Ol I %表面活性劑S9，0. I 5% BSA)，中浸泡I 3小時后取出于25 40°C烘干8 24小時；試紙條的組裝在透明塑料底板上依次相互交錯2mm地粘上包被膜、金標(biāo)墊I、金標(biāo)墊2、樣品墊和吸水墊，然后在上面覆蓋透明塑料密封膜得到試紙，根據(jù)要求寬度切割即得到新型膠體金檢測試紙。與現(xiàn)有快速診斷膠體金試紙條相比較，本發(fā)明具有以下優(yōu)點通過對試紙條的改進(jìn)，首次將抗BSA單克隆抗體技術(shù)和抗PEG技術(shù)引入心肌肌鈣蛋白I的檢測中，大大提高了心肌肌鈣蛋白I的檢測靈敏度，擴(kuò)大了現(xiàn)有膠體金快速診斷試紙條的臨床應(yīng)用。雙重金標(biāo)墊的復(fù)合應(yīng)用，在同一檢測項目中利用兩次金標(biāo)抗體的顯色，進(jìn)一步放大金標(biāo)顯色效果，更便于臨床檢驗醫(yī)師的觀察和判斷。


圖I :A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖。其中，I :樣品墊；
2 :膠體金墊I ;3 :膠體金墊2 ；4 :包被膜，包被T :涂覆抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體測試線；(涂覆兔抗鼠抗體質(zhì)控線；5 :吸水墊；6 :反應(yīng)支持物。圖2 :檢測結(jié)果示意圖。其中，從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽性；C 一條線顯色為陰性；T、C兩條線均未顯色為無效。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實施例I心肌肌鈣蛋白I膠體金試紙及其制備方法(參見圖I)心肌肌I丐蛋白I抗體制備選用商品化的cTnl抗體(Hytest公司，cat 4T2), IOmMPBS，pH7.2，4°C 透析過夜。包被膜(硝酸纖維素膜2. 5cmX O. 6cm)的制備包被緩沖液的配制10mM pH7. 2的磷酸鹽緩沖液，O. 22 μ m微孔濾膜過濾除菌后
置于4°C保存?zhèn)溆?。用包被緩沖液將抗心肌肌鈣蛋白I抗體和兔抗鼠抗體分別稀釋到O. 5mg/mL和
0.7mg/mL，使用Biodot三維噴點平臺以I. 5 μ L/cm的量將兩者以I. 5cm的間隔均勻噴印于3. 5cm寬度的硝酸纖維素膜上，于25 40°C烘干8小時，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩＝饦?biāo)記抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體金標(biāo)墊I的制備用碳酸鉀調(diào)節(jié)顆粒粒徑20nm的膠體金溶液的pH值為7. 2，加入抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體，室溫攪拌30min后，加入終濃度O. 8 %的BSA溶液終止，冷凍離心后，用洗液清洗后再次離心，加入復(fù)溶液后，4°C保存?zhèn)溆?。使用Biodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以
1.8 μ L/cm的速度噴灑于聚酯膜(O. 8cmX0. 6cm)上，于25 40°C烘干8小時。加入干燥劑封存?zhèn)溆?；金?biāo)記抗BSA單克隆抗體金標(biāo)墊2的制備用碳酸鉀調(diào)節(jié)顆粒粒徑IOOnm的膠體金溶液的pH值為7. O,加入抗BSA單克隆抗體，室溫攪拌40min后，加入終濃度O. 09%的PEG20000溶液終止，冷凍離心后，用洗液清洗后再次離心，加入復(fù)溶液后，4°C保存?zhèn)溆?。使用Biodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以I. 8 μ L/cm的速度噴灑于聚酯膜(O. 8cmX O. 6cm)上，于25 40°C烘干8小時。加入干燥劑封存?zhèn)溆茫粯悠穳|(聚酯膜2. 7cmX0. 6cm)的處理將樣品墊放入樣品墊處理溶液(O. IM Tris緩沖液含O. 05%表面活性劑S9 (購自杭州隆基生物技術(shù)有限公司，下同)，1% BSA)中浸泡I小時后取出于25 40°C烘干8小時；試紙條的組裝及切割(下列所有操作必須在濕度小于38%，溫度18 26°C的房間內(nèi)進(jìn)行)
按照要求手工將包被膜、吸水墊(2. 8cmX0. 6cm)、金標(biāo)墊2、金標(biāo)墊I和樣品墊裝于PVC底板上，組裝成試紙板。使用Biodot CM4000型切條刀將組裝好的試紙板切成6mm寬的成品試紙條,然后在上面覆蓋透明塑料密封膜得到試紙。實施例2心肌肌鈣蛋白I膠體金試紙及其制備方法(參見圖I)包被膜(硝酸纖維素膜2. 5cmX0. 6cm)的制備包被緩沖液的配制10mM pH7. 2的磷酸鹽緩沖液，O. 22 μ m微孔濾膜過濾除菌后
置于4°C保存?zhèn)溆?。用包被緩沖液將實施例I制備的抗心肌肌鈣蛋白I抗體和兔抗鼠抗體(購自Abeam)分別稀釋到I. Omg/mL和I. 5mg/mL,使用Biodot三維噴點平臺以I. 5 μ L/cm的量將兩者以Icm的間隔均勻噴印于3. 5cm寬度的硝酸纖維素膜上，于37°C烘干8小時，加入干燥劑封存?zhèn)溆?。金?biāo)記抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體金標(biāo)墊I的制備用碳酸鉀調(diào)節(jié)顆粒粒徑IOOnm的膠體金溶液的pH值為7. 5，加入抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體，室溫攪拌30min后，加入終濃度O. 05%的PEG20000溶液終止，冷凍離心后，用洗液清洗后再次離心，加入復(fù)溶液后，4°C保存?zhèn)溆?。使用Biodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以I. 8 μ L/cm的速度噴灑于玻璃纖維素膜(O. 8cmX0. 6cm)上，于25 40°C烘干8小時。加入干燥劑封存?zhèn)溆茫唤饦?biāo)記抗BSA單克隆抗體金標(biāo)墊2的制備用碳酸鉀調(diào)節(jié)顆粒粒徑40nm的膠體金溶液的pH值為8. O,加入抗PEG單克隆抗 體，室溫攪拌40min后，加入終濃度I %的PEG20000溶液終止，冷凍離心后，用洗液清洗后再次離心，加入復(fù)溶液后，4°C保存?zhèn)溆谩Ｊ褂肂iodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以I. 8 μ L/cm的速度噴灑于玻璃纖維素膜(O. 8cmX0. 6cm)上，于37°C烘干8小時。加入干燥劑封存?zhèn)溆?；樣品墊(玻璃纖維素膜2. 7cmX0. 6cm)的處理將樣品墊放入樣品墊處理溶液(O. IM Tris緩沖液含O. 05%表面活性劑S9，1%BSA)中浸泡I小時后取出于25 40°C烘干8小時；試紙條的組裝及切割(下列所有操作必須在濕度小于38%，溫度18 26°C的房間內(nèi)進(jìn)行)按照要求手工將包被膜、吸水墊(2. 8cmX0. 6cm)、金標(biāo)墊2、金標(biāo)墊I和樣品墊裝于PVC底板上，組裝成試紙板。使用Biodot CM4000型切條刀將組裝好的試紙板切成6mm寬的成品試紙條，然后在上面覆蓋透明塑料密封膜得到試紙。實施例3本發(fā)明試紙條靈敏度測試隨機(jī)抽取按照上述實施例I或2制作的新型肌鈣蛋白I膠體金試紙25條，普通市售的肌鈣蛋白I膠體金試紙條25條作為對照組(在底板上依次相互交錯地粘貼包被膜、噴涂有膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體的膠體金墊、樣品墊和吸水墊)。將心肌肌鈣蛋白I三元復(fù)合物(SRM2921，購自Hytest公司)溶解于無肌鈣蛋白I血清中(購自Hytest公司)，并使用該血清稀釋到5ng/mL, lng/mL,0. 5ng/mL,0. Ing/mL,每個樣品濃度測試5條。表I所示為通過肉眼判讀結(jié)果。從結(jié)果中可以看出，當(dāng)血清中肌鈣蛋白I含量低于O. 5ng/mL，普通膠體金試紙條未能檢測，及時含量為O. 5ng/ml也只有40%的檢出率。而新型肌鈣蛋白I膠體金試紙條即使血清中肌鈣蛋白I濃度為O. Ing/mL，仍能準(zhǔn)確判斷，而且檢出率為100%。這一實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的膠體金試紙條大大提高了現(xiàn)有膠體金試紙條的靈敏度，具有重要的臨床應(yīng)用價值。表I本發(fā)明試紙條的靈敏度檢測
權(quán)利要求
1.一種快速檢測心肌肌鈣蛋白I膠體金試紙條，其包括包被膜、噴涂有膠體金標(biāo)記的抗心肌肌I丐蛋白I單克隆抗體的膠體金墊I、噴涂有膠體金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體的膠體金墊2、樣品墊、吸水墊和底板，所述的包被膜涂覆有抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體檢測線和兔抗鼠抗體質(zhì)控線。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試紙條，其特征在于，所述的膠體金墊I噴涂有粒徑為IOnm IOOnm的膠體金標(biāo)記的抗心肌肌I丐蛋白I單克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條，其特征在于，所述的膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體用BSA或PEG封閉。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試紙條，其特征在于，所述的膠體金墊2噴涂有粒徑為20nm IOOnm的膠體金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求I 4任一項所述的試紙條，其特征在于，所述的包被膜為硝酸纖維素膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求I 4任一項所述的試紙條，其特征在于，所述的膠體金墊I、膠體金墊2和樣品墊為聚酯膜或玻璃纖維素膜。
7.權(quán)利要求I 6任一項所述的試紙條的制備方法，包括如下步驟 1)制備膠體金墊I:將BSA或PEG封閉的膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I抗體溶液噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，烘干備用； 2)制備膠體金墊2:將膠體金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體溶液或抗PEG溶液噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，烘干備用； 3)制備包被膜將抗心肌肌鈣蛋白I抗體稀釋液和兔抗鼠抗體稀釋液噴涂于硝酸纖維素膜上，烘干備用； 4)將樣品墊用樣品墊溶液處理后烘干備用； 5)底板上依次相互交錯地粘上制備的樣品墊、金標(biāo)墊I、金標(biāo)墊2、包被膜、和吸水墊，然后在上面覆蓋透明塑料密封膜得到試紙。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，膠體金標(biāo)墊I的制備方法為用碳酸鉀調(diào)節(jié)顆粒粒徑IOnm IOOnm膠體金溶液的pH值至7. O 8. O,加入I 50 μ g抗心肌肌隹丐蛋白I單克隆抗體，室溫攪拌10 6011^11后，加入終濃度0.01% 1%的PEG20000溶液或者O. I % 5%的BSA溶液終止，冷凍離心后，用pH5. O ρΗ6· 5，含O. 01% 5% PEG20000的O. 01 O. 5Μ硼酸鹽緩沖液或ρΗ7. O 8. 0，含O. 01 % I % PEG20000的O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液清洗后再次離心，加入ρΗ6· 5 8. O，含O. 01 3% BSA，O. 01 I % PEG20000、I 8%蔗糖的O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液復(fù)溶后，使用Biodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以I 5 μ L/cm的速度噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，于25 40°C烘干8 24小時。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，膠體金墊2的制備方法是用碳酸鉀調(diào)節(jié)顆粒粒徑IOnm IOOnm膠體金溶液的pH值至7. O 8. O,加入I 50 μ g抗BSA單克隆抗體或者I 50 μ g抗PEG單克隆抗體，室溫攪拌10 60min后，加入終濃度O. 01 % I %的PEG20000溶液或者O. I % 5 %的BSA溶液終止，冷凍離心后，用pH5. O pH6. 5，含O. 01% 5% PEG20000的O. 01 O. 5M硼酸鹽緩沖液或ρΗ7· O 8. 0，含O. 01 % I %PEG20000的O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液清洗后再次離心，加入ρΗ6. 5 8. 0，含O. 01 3%BSA, O. 01 1% PEG20000U 8%蔗糖的O. 01 O. 5Μ磷酸鹽緩沖液復(fù)溶后，使用Biodot三維噴點平臺將復(fù)溶液以I 5 μ L/cm的速度噴灑于聚酯膜或玻璃纖維素膜上，于25 40°C烘干8 24小時。
10.權(quán)利要求I 6任一項所述的試紙條在檢測肌鈣蛋白I中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及臨床免疫學(xué)檢測領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測肌鈣蛋白I膠體金試紙條及其制備方法。本發(fā)明提供的試紙條，其為在底板上依次相互交錯地粘貼包被膜、噴涂有膠體金標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I抗體的膠體金墊1、噴涂有膠體金標(biāo)記的抗BSA單克隆抗體或抗PEG單克隆抗體的膠體金墊2、樣品墊和吸水墊，所述的包被膜涂覆有抗心肌肌鈣蛋白I抗體檢測線和兔抗鼠抗體質(zhì)控線。通過對試紙條的改進(jìn)，首次將抗PEG技術(shù)和抗BSA單克隆抗體技術(shù)引入心肌肌鈣蛋白I的檢測中，大大提高了心肌肌鈣蛋白I的檢測靈敏度，擴(kuò)大了現(xiàn)有膠體金快速診斷試紙條的臨床應(yīng)用。
文檔編號G01N33/532GK102841208SQ20111017461
公開日2012年12月26日 申請日期2011年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月24日
發(fā)明者余占江, 胡光宇, 王長青, 張芳 申請人:北京樂普醫(yī)療科技有限責(zé)任公司