uc002mev.3及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒、應用、檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物工程心肌梗死相關(guān)基因技術(shù)領(lǐng)域，是一種lncRNA uc002mev.3及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒、應用、檢測方法，該長鏈非編碼RNA uc002mev.3，核酸序列如SEQ ID No：1所示。本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3能夠為急性心肌梗死的早期診斷和及預后監(jiān)測提供新的血液生物標志物和治療靶點，進一步豐富了急性心肌梗死發(fā)病機制的研究。
【專利說明】
uc002mev. 3及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒、應用、檢測 方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程心肌梗死相關(guān)基因技術(shù)領(lǐng)域，是一種UC〇02meV. 3及其體外檢 測的試劑、制劑或試劑盒、應用、檢測方法即IncRNA uc002mev. 3及其體外檢測的試劑、制劑 或試劑盒、應用、檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)是一種嚴重威脅人類健康的 心血管疾病，其發(fā)病率及死亡率近年來一直處于顯著的上升趨勢，嚴重威脅人們的生命及 生活質(zhì)量。我國每年新發(fā)至少50萬，現(xiàn)患至少200萬。急性心肌梗死(AMI)是由于持續(xù)的嚴重 缺血導致的心肌組織急性壞死，早期診斷可以提高心肌梗死患者的生存率并能夠改善長期 預后。目前肌鈣蛋白I(cTnl)是在臨床廣泛使用的診斷急性心肌梗死的生物學標志物，但血 漿cTnl濃度可能在某些心臟和非心臟疾病，如嚴重的心力衰竭、心房顫動、慢性腎臟病、嚴 重敗血癥和感染性休克等情況下出現(xiàn)假性升高現(xiàn)象。因此，尋找能夠早期診斷AMI并有較高 敏感性及特異性的新的生物標志物顯得尤為必要。
[0003] 長鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs，IncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200nt的 RNA分子，一般不編碼蛋白，由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄并經(jīng)可變剪切形成，轉(zhuǎn)錄水平低于蛋白質(zhì)編 碼基因，曾一度被認為是基因組轉(zhuǎn)錄的"噪音"。已證實，IncRNA在表觀遺傳學、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和 轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多種層面調(diào)控基因表達，在多種生物學進程中發(fā)揮重要作用，包括脂肪代謝、 動脈粥樣硬化形成、胚胎發(fā)育及腫瘤的發(fā)生等，其表達或功能異常與人類心血管疾病的發(fā) 生和發(fā)展密切相關(guān)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明提供了一種IncRNA uc002mev. 3及其體外檢測的試劑、制劑或試劑盒、應 用、檢測方法，本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3能夠為急性心肌梗死的早期診斷 和及預后監(jiān)測提供新的血液生物標志物和治療靶點，進一步豐富了急性心肌梗死發(fā)病機制 的研究。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過以下措施來實現(xiàn)的：一種長鏈非編碼RNA uc002mev.3,該基因的核酸序列如SEQ ID No:l所示。
[0006] 下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之一的進一步優(yōu)化或/和改進：
[0007] 上述該急性心肌梗死相關(guān)基因為長鏈非編碼RNA UC〇02meV.3的全長。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過以下措施來實現(xiàn)的：一種體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑，包括用于擴增長鏈非編碼RNA uc002mev.3的特異性引物對，特異性引 物對包括上游引物和下游引物，上游引物的序列如SEQ ID N〇:2所示，下游引物的序列如 SEQIDNo:3**。
[0009]本發(fā)明的技術(shù)方案之三是通過以下措施來實現(xiàn)的：一種體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑盒，包括用于擴增長鏈非編碼RNA uc002mev.3的特異性引物對、標準DNA 模板和PCR反應液，特異性引物對包括上游引物和下游引物，上游引物的序列如SEQ ID No: 2所示，下游引物的序列如SEQ ID N〇:3所示。
[0010] 下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之三的進一步優(yōu)化或/和改進：
[0011] 上述PCR反應液為熒光定量PCR反應液。
[0012] 上述熒光定量PCR反應液包括脫氧核糖核苷三磷酸、鎂離子、Taq酶和熒光染料。 [0013]本發(fā)明的技術(shù)方案之四是通過以下措施來實現(xiàn)的：一種體外檢測長鏈非編碼RNA UC〇02meV. 3的試劑作為制備體外檢測急性心肌梗死相關(guān)基因的制劑或試劑盒中的應用。 [0014]本發(fā)明的技術(shù)方案之五是通過以下措施來實現(xiàn)的：一種檢測長鏈非編碼RNA uc002mev. 3的方法，其特征在于按下述步驟進行:第一步，提取血液總RNA;第二步，將第一 步得到的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cRNA;第三步，以cRNA為模板進行擴增。
[0015] 本發(fā)明的技術(shù)方案之六是通過以下措施來實現(xiàn)的：一種長鏈非編碼RNA UC〇02meV. 3在制備用于檢測急性心肌梗死的試劑盒或用作檢測急性心肌梗死藥物的新靶 點的應用。
[0016] 本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNA UC〇02meV.3能夠為急性心肌梗死的早期診斷和及 預后監(jiān)測提供新的血液生物標志物和治療靶點，進一步豐富了急性心肌梗死發(fā)病機制的研 究，同時，本發(fā)明所述的體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev. 3的試劑以及本發(fā)明所述的體 外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑盒能夠用于本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3的表達水平的檢測，通過本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3的表達水平 的檢測結(jié)果獲知急性心肌梗死的篩查結(jié)果，為急性心肌梗死的診斷和治療提供了新方向。
【附圖說明】
[0017] 附圖1為本發(fā)明中長鏈非編碼RNA表達譜芯片檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3在 健康對照組與急性心肌梗死組中的檢測信號值。
[0018] 附圖2為本發(fā)明中針對長鏈非編碼RNA uc002mev.3的序列設(shè)計的一對特異性引物 PCR擴增后行瓊脂糖凝膠電泳測試引物的效果。
[0019] 圖3為本發(fā)明中qRT-PCR檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3在健康對照組與急性心 肌梗死組中的相對表達量。
【具體實施方式】
[0020] 本發(fā)明不受下述實施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實際情況來確定具體 的實施方式。
[0021] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步描述：
[0022] 實施例1:一種長鏈非編碼RNA uc002mev.3,該基因的核酸序列如SEQ ID No:l所 示。本實施例所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3(lncRNA uc002mev.3)的轉(zhuǎn)錄區(qū)域位于19 號染色體，起始位置為6，436，431-6，459，781，全長23，35 lbp。本實施例所述的長鏈非編碼 RNA UC〇02meV.3能夠為急性心肌梗死的早期診斷和及預后監(jiān)測提供新的血液生物標志物 和治療靶點，進一步豐富了急性心肌梗死發(fā)病機制的研究。
[0023] 實施例2:作為上述實施例的優(yōu)化，該急性心肌梗死相關(guān)基因為長鏈非編碼RNA uc002mev. 3 的全長。
[0024] 實施例3: -種體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev. 3的試劑，包括用于擴增長鏈非 編碼RNA UC〇02meV.3的特異性引物對，特異性引物對包括上游引物和下游引物，上游引物 的序列如SEQ ID No:2所示，下游引物的序列如SEQ ID No:3所示。結(jié)合本實施例的體外檢 測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑以及現(xiàn)有公知技術(shù)中的DNA模板以及PCR反應液可以 獲得本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3的表達水平，通過本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3 的表達水平可以進行急性心肌梗死的篩查。本實施例所述的特異性引物對適用于SYBR Green、Taqman探針、分子信標、雙雜交探針、復合探針的檢測。
[0025] 實施例4:一種體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑盒，包括用于擴增長鏈 非編碼RNA uc002mev.3的特異性引物對、標準DNA模板和PCR反應液，特異性引物對包括上 游引物和下游引物，上游引物的序列如SEQ ID N〇:2所示，下游引物的序列如SEQ ID N〇:3 所示。本實施例所述的體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑盒可以獲得本發(fā)明所述 的IncRNA uc002mev.3的表達水平，通過本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3的表達水平可以 進行急性心肌梗死的篩查。
[0026] 實施例5:作為實施例4的優(yōu)化，PCR反應液為熒光定量PCR反應液。熒光定量PCR反 應液為現(xiàn)有公知技術(shù)。
[0027]實施例6:作為實施例4和實施例5的優(yōu)化，熒光定量PCR反應液包括dNTP(脫氧核糖 核苷三磷酸）、鎂離子、Taq酶和熒光染料。本實施例所述的體外檢測長鏈非編碼RNA UC〇02me V. 3的試劑盒適合于目前市售的所有類型熒光定量基因擴增儀，具有靈敏度高和特 異性好的特點，具有良好的應用前景。
[0028] 實施例7:-種體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑作為制備體外檢測急 性心肌梗死相關(guān)基因的制劑或試劑盒中的應用。
[0029]實施例8:-種檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的方法，其特征在于按下述步驟進 行:第一步，提取血液總RNA;第二步，將第一步得到的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cRNA;第三步，以cRNA 為模板進行擴增。
[0030] 實施例9:一種長鏈非編碼RNA uc002mev. 3在制備用于檢測急性心肌梗死的試劑 盒或用作檢測急性心肌梗死藥物的新靶點的應用。
[0031 ]實施例10:急性心肌梗死患者與健康人的血液中的IncRNA芯片的表達分析：
[0032] 一 ·材料
[0033] 血液樣本來自于急性心肌梗死患者與健康人的血液樣本，分別為急性心肌梗死組 與健康對照組，血液樣本各3個。
[0034] 二·方法
[0035] 1.急性心肌梗死患者與健康人的血液樣本的總RNA的提取:按照博奧生物技術(shù)有 限公司提供的"用于基因芯片分析的血液樣品的準備步驟"提取急性心肌梗死患者與健康 人的血液樣本的總RNA，具體實驗材料包括:淋巴細胞分離液(天津TBD生物技術(shù)發(fā)展中心）、 滅菌生理鹽水(普通0.9%生理鹽水滅菌即可）、1'1^2〇1試劑（1]1￥；[1：1'08611公司）。
[0036] 2.晶芯#lnCRNA+mRNA表達譜芯片檢測以待檢測樣品（急性心肌梗死患者與健康人 的血液樣本)的總RNA為起始，進行體外擴增和熒光標記，標記過程采用晶生物芯片通用 標記試劑盒。主要包括如下步驟：
[0037] (1)反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA:以Total RNA(總RNA)起始，含有T7啟動子序列的 T701igo(dT)Primer和Τ7-隨機引物，既可以結(jié)合帶poly(A)的mRNA，也可以結(jié)合除rRNA以外 其它不帶p〇ly(A)的RNA，使用第一鏈Enzyme Mix合成第一鏈cDNA;
[0038] (2)合成第二鏈DNA:用第二鏈Enzyme Mix將DNA-RNA雜合體中的RNA鏈轉(zhuǎn)化為第二 鏈cDNA，合成雙鏈DNA;
[0039] (3)體外轉(zhuǎn)錄合成cRNA:以第二鏈cDNA為模板，利用T7Enzyme Mix合成cRNA;
[0040] (4)cRNA純化:使用RNA純化柱純化cRNA，除去反應中的鹽、酶等試劑，并對cRNA進 行定量、質(zhì)控；
[0041 ] (5)反轉(zhuǎn)錄：以cRNA為模板，Random Primer為引物，CbcScript Π 酶進行反轉(zhuǎn)錄，純 化回收反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA并定量；
[0042] ( 6 )標記：以反轉(zhuǎn)錄的cDNA產(chǎn)物為模板，Random Primer為引物，用K1 enow Fragment酶合成cDNA互補鏈并摻入帶有熒光基團的dNTP(Cy3-dCTP、Cy5-dCTP)，純化并定 量標記產(chǎn)物，帶有熒光基團DNA即可用于芯片雜交；
[0043] (7)芯片雜交及清洗：取lyL cDNA溶于雜交液，45°C雜交過夜，取出芯片在博奧 SIide Washer8芯片洗干儀進行清洗，清洗程序如下:洗液1:0.2% SDS，2 X SSC，42°C 120S清 洗2遍，洗液II:0.2%SDS，2 X SSC，42°C80S清洗3遍，清洗程序完成后，離心甩干，待掃描； [0044] (8)芯片掃描，數(shù)據(jù)分析，差異基因篩選:使用Agilent芯片掃描儀(G2565CA)對清 洗后的芯片進行掃描，得到雜交圖片，使用Agilent Feature Extraction!；vlO.7)軟件對雜 交圖片進行分析并提取數(shù)據(jù)，然后使用Agilent GeneSpring軟件對數(shù)據(jù)進行歸一化和差異 分析，并用GeneSpring GX軟件進行差異基因篩選。本發(fā)明中長鏈非編碼RNA表達譜芯片檢 測長鏈非編碼RNA UC〇02meV.3在健康對照組與急性心肌梗死組中的檢測信號值如圖1所 不。
[0045]三、結(jié)果
[0046] 通過圖1可以看出，有多條表達上調(diào)和表達下調(diào)的IncRNAs，其中，相對于健康人的 血液中的本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3的表達水平而言，本發(fā)明所述的IncRNA UC〇02meV.3顯示出在急性心肌梗死患者的血液中的表達顯著下調(diào)，其Fc值為健康人的Fc值 的3.328倍，鑒于其可能在急性心肌梗死患者中存在特異性表達，本發(fā)明通過實施例11采用 與實施例10相同的血液樣本進行指標的重復驗證。
[0047] 實施例11 :qRT_PCR重復驗證本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3在急性心肌梗死患 者和健康人的血液中的差異表達：
[0048] 一、實驗材料
[0049] 選取與實施例10相同的血液樣本，對本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3的表達差 異進彳TqRT-PCR驗證。
[0050] 二、實驗方法和結(jié)果
[0051 ] 1.引物特異性鑒定
[0052] (1)特異性引物的設(shè)計:從UCSC數(shù)據(jù)庫提取本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev. 3相關(guān) 的轉(zhuǎn)錄本序列，并用根據(jù)轉(zhuǎn)錄本的序列通過NCBI的引物設(shè)計工具(Primer BLAST)設(shè)計引 物，設(shè)計后的引物序列如下：
[0053] 上游引物：如SEQ ID No:2所示，
[0054] 下游引物：如SEQ ID No:3所示；
[0055] (2)將急性心肌梗死患者與健康人的血液按照ABI公司的Trizol試劑(貨號15596-026)所需試劑及步驟提取總RNA，再用7300real time PCR system核酸定量儀(Applied Biosystems AB)定量所提取的的純度和濃度，采用北京天根生化科技公司FastQuant cDNA 第一鏈合成試劑盒(貨號KR106)對提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA按 下述步驟進行：
[0056] 第一步，將模板RNA(總RNA)在冰上解凍；5XgDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10 XFast RT Buffer和RNase-Free ddH20在室溫（15-25°C)解凍，解凍后迅速置于冰上，使用 前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體；
[0057] 第二步，打開二級結(jié)構(gòu)，反應體系及條件如表1所示，將表1中的基因組DNA的去除 體系配制混合液，徹底混勻，簡短離心，并置于42°C的溫度下孵育3min，然后置于冰上放置；
[0058] 第三步，反轉(zhuǎn)錄反應，反應體系及條件如表2所示，將反轉(zhuǎn)錄反應中的RT Enzyme Mix和FQ-RT Primer Mix加到gDNA去除步驟的反應液中，充分混勻，42°C的溫度下孵育 15min，95°C的溫度下孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA;
[0059] (3)擴增本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3:米用ABI公司的Power SYBR Green PCR Master Mix熒光定量試劑盒(貨號4367659)，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進行熒光定量PCR 擴增，熒光定量PCR體系如表3所示，焚光定量PCR程序:第一步95°C 10分鐘;第2步，95°C 15S， 60 °C 1分鐘；第三步，95 °C 15S，60 °C 1分鐘，95 °C 15S，共40個循環(huán)。將擴增后的本發(fā)明所述的 IncRNA uc002mev. 3進行電泳檢測(0120000Marker (北京康為世紀生物科技有限公司，貨號 CW0632))，本發(fā)明中針對長鏈非編碼RNA uc002mev.3的序列設(shè)計的一對特異性引物PCR擴 增后行瓊脂糖凝膠電泳測試引物的效果如圖2所示。
[0060] 通過圖2可以看出，擴增片段大小與預期相同，本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev. 3 的擴增產(chǎn)物只有一個條帶，說明本實施例采用的設(shè)計引物對與本發(fā)明所述的特異性引物對 相符，上游引物的核酸序列見序列表SEQ ID N〇:2,下游引物的核酸序列見序列表SEQ ID No ： 3〇
[0061] 2.標準DNA模板的制備
[0062] 根據(jù)本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3堿基序列（其核酸序列如序列表SEQ ID No: 1所示），委托上海生工合成。
[0063]取樣2ul合成產(chǎn)物，連接到Puc-T TA克隆載體(北京康為世紀生物科技有限公司， 貨號CW0801)，隨后轉(zhuǎn)化到DH5a感受態(tài)細胞中，通過序列為SEQIDNo:2和SEQIDNo:3的特 異性引物篩選陽性克隆，提取質(zhì)粒DNA，質(zhì)粒DNA用7300real time PCR system核酸定量儀 定量，并做1 〇倍系列稀釋作為標準曲線（標準DNA模板濃度范圍在102拷貝/ul至106拷貝/ ul) 〇
[0064] 3.敏感性實驗
[0065] 將標準DNA模板質(zhì)粒按比例稀釋為102拷貝/ul、103拷貝/ul、104拷貝/ul、105拷 貝/ul、106拷貝/ul，進行熒光定量PCR檢測靈敏度，最低檢出濃度為102拷貝/ul。
[0066] 4.合成cRNA模板
[0067] 取上述急性心肌梗死和健康人的總RNA各3個，采用北京天根生化科技公司 FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒(貨號KR 106)對提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，總RNA反 轉(zhuǎn)錄合成cDNA按下述步驟進行：第一步，將模板RNA在冰上解凍；5 X gDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10XFast RT Buffer、RNase-Free ddH20在室溫（15°C至25°C)解凍，解凍后迅 速置于冰上，使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體;第二 步，打開二級結(jié)構(gòu)，反應體系及條件如表4所示，將表4中的基因組DNA的去除體系配制混合 液，徹底混勻，簡短離心，并置于42°C下孵育3min，然后置于冰上放置；
[0068]第三步，反轉(zhuǎn)錄反應，反應體系及條件如表5所示，將反轉(zhuǎn)錄反應中的RT Enzyme Mix和FQ-RT Primer Mix，加到gDNA去除步驟的反應液中，充分混勻。42°C，孵育15min。95 。(：，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA;
[0069] 5.熒光定量PCR檢測本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3
[0070] 米用ABI公司的Power SYBR Green PCR Master Mix焚光定量試劑盒（貨號 4367659)，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進行熒光定量PCR擴增；熒光定量PCR體系如表6所示，熒 光定量PCR程序:第一步，95 °C 10分鐘;第二步，95 °C 15S，60 °C 1分鐘;第三步，95 °C 15S，60 °C 1 分鐘，95°C 15S，共40個循環(huán)。qRT-PCR檢測長鏈非編碼RNA uc002mev. 3在健康對照組與急性 心肌梗死組中的相對表達量如圖3所示。
[0071] 根據(jù)qRT-PCR的相對定量公式(表達水平比率），分別計算出本發(fā)明所述的 IncRNA uc002mev. 3在急性心肌梗死患者(AMI)和健康人(Contral)中的表達水平，計算結(jié) 果顯示，急性心肌梗死患者(AMI)與健康人(Contral)的本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev. 3 表達水平進行比較，2-^。*值分別為0.3663、0.2073、0.3306，其平均值為0.3014，計算結(jié)果 說明，本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev.3在急性心肌梗死患者的血液中普遍低表達，這與實 施例10所述的IncRNA芯片表達分析結(jié)果中的本發(fā)明所述的IncRNA uc002mev. 3下調(diào)3.328 倍的結(jié)果相一致。通過圖3可以看出，P<0.5,說明結(jié)果具有統(tǒng)計學意義。由此說明本發(fā)明所 述的IncRNA uc002meV.3可以作為急性心肌梗死診斷的新的血液生物標志物，便于急性心 肌梗死的篩查。
[0072]綜上所述，本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNA UC〇02meV.3能夠為急性心肌梗死的早期 診斷和及預后監(jiān)測提供新的血液生物標志物和治療靶點，進一步豐富了急性心肌梗死發(fā)病 機制的研究，同時，本發(fā)明所述的體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑以及本發(fā)明 所述的體外檢測長鏈非編碼RNA UC〇02meV.3的試劑盒能夠用于本發(fā)明所述的長鏈非編碼 RNA uc002mev.3的表達水平的檢測，通過本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3的表達 水平的檢測結(jié)果獲知急性心肌梗死的篩查結(jié)果，為急性心肌梗死的診斷和治療提供了新方 向。
[0073] 以上技術(shù)特征構(gòu)成了本發(fā)明的實施例，其具有較強的適應性和實施效果，可根據(jù) 實際需要增減非必要的技術(shù)特征，來滿足不同情況的需求。
[0074] 表 1
[0075]
[0076] 表 2
【主權(quán)項】
1. 一種長鏈非編碼RNAuc002meV.3，其特征在于該基因的核酸序列如SEQIDNo:l所 不。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的長鏈非編碼RNA uc002mev. 3，其特征在于該急性心肌梗死相 關(guān)基因為長鏈非編碼RNA uc002mev.3的全長。3. -種體外檢測根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3的試劑，其特征 在于包括用于擴增長鏈非編碼RNA UC〇02meV.3的特異性引物對，特異性引物對包括上游引 物和下游引物，上游引物的序列如SEQ ID N〇:2所示，下游引物的序列如SEQ ID N〇:3所示。4. 一種有根據(jù)權(quán)利要求3所述的體外檢測長鏈非編碼RNA UC〇02meV. 3的試劑的試劑 盒，其特征在于包括用于擴增長鏈非編碼RNA uc002mev.3的特異性引物對、標準DNA模板和 PCR反應液，特異性引物對包括上游引物和下游引物，上游引物的序列如SEQ ID No: 2所示， 下游引物的序列如SEQ ID No:3所不。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev. 3的試劑盒，其特征在于 PCR反應液為熒光定量PCR反應液。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的體外檢測長鏈非編碼RNA uc002meV.3的試劑盒，其特征在于 熒光定量PCR反應液包括脫氧核糖核苷三磷酸、鎂離子、Taq酶和熒光染料。7. -種根據(jù)權(quán)利要求3所述的體外檢測長鏈非編碼RNA uc002mev. 3的試劑作為制備體 外檢測急性心肌梗死相關(guān)基因的制劑或試劑盒中的應用。8. -種檢測根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的長鏈非編碼RNA uc002mev.3的方法，其特征在于 按下述步驟進行:第一步，提取血液總RNA;第二步，將第一步得到的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cRNA;第 三步，以cRNA為模板進行擴增。9. 一種根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的長鏈非編碼RNA uc002mev. 3在制備用于檢測急性心 肌梗死的試劑盒或用作檢測急性心肌梗死藥物的新靶點的應用。
【文檔編號】C12Q1/68GK106086020SQ201610306214
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月10日
【發(fā)明人】楊毅寧, 翟慧, 馬依彤, 李曉梅, 劉芬, 陳邦黨, 謝翔, 王雪梅, 陳清杰
【申請人】新疆醫(yī)科大學第附屬醫(yī)院, 新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院