用于聯(lián)合檢測(cè)心肌肌鈣蛋白i-肌紅蛋白-肌酸激酶同工酶的試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種用于定量檢測(cè)心肌肌鈣蛋白1-肌紅蛋白-肌酸激酶同工酶的三項(xiàng)聯(lián)檢的層析試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]心肌肌媽蛋白I (Cardiac Troponin I，簡(jiǎn)稱cTnl)是心肌細(xì)胞死亡的特異及敏感的標(biāo)志物，其可在心肌損傷時(shí)進(jìn)入血液中，而未發(fā)現(xiàn)在健康的或者受損傷的骨骼肌或者其他組織中表達(dá)。目前，心肌肌鈣蛋白I作為心肌細(xì)胞死亡的標(biāo)記物已經(jīng)在臨床診斷中廣泛應(yīng)用，如:對(duì)心肌損傷的診斷、AMI后溶栓治療的指示、對(duì)圍術(shù)期心肌梗死的診斷、對(duì)心肌炎的診斷以及與骨骼肌損傷的鑒別診斷等。
[0003]肌紅蛋白(Myoglobin，簡(jiǎn)稱Myo)作為心肌損傷的標(biāo)記物，肌紅蛋白作為已經(jīng)被應(yīng)用了三十多年。由于肌紅蛋白大量存在于骨骼肌組織中，即使輕度的骨骼肌損傷都能導(dǎo)致血液中肌紅蛋白濃度的顯著升高。因此，肌紅蛋白與cTnl—起被用于臨床實(shí)踐中以提高急性心肌梗死診斷的特異性。
[0004]肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase_MB，簡(jiǎn)稱CK-MB)是臨床診斷急性心肌梗死常用的酶學(xué)指標(biāo)，并利用其增高的時(shí)間與梯度觀察患者的病情變化、治療效果及愈后。一般情況下，肌酸激酶同工酶在急性心肌梗死發(fā)病后4-8小時(shí)內(nèi)增高，24小時(shí)達(dá)到峰值，2-3天后恢復(fù)正常。肌酸激酶同工酶作為常用的心肌損傷標(biāo)志物在臨床檢測(cè)中廣泛應(yīng)用。
[0005]臨床診斷常用的檢測(cè)方法包括:酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、膠乳增強(qiáng)免疫比濁法、膠體金免疫層析法、熒光免疫層析法等。酶聯(lián)免疫法及化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)靈敏度高，但其耗時(shí)過長(zhǎng)。膠乳增強(qiáng)免疫比濁法雖可實(shí)現(xiàn)高通量篩選，但由于方法學(xué)本身的限制，其檢測(cè)靈敏度較低。膠體金免疫層析法操作簡(jiǎn)單，但只能實(shí)現(xiàn)半定量。熒光免疫層析法雖本身具有高靈敏度，但是其易受到高濃度的共存雜質(zhì)產(chǎn)生的背景熒光的影響，因此在臨床檢測(cè)中實(shí)際的靈敏度會(huì)大打折扣。
[0006]量子點(diǎn)尺寸介于幾個(gè)nm至幾十nm之間。它通常是由無機(jī)核以及包覆在核表面的有機(jī)分子所構(gòu)成。對(duì)于量子點(diǎn)來說，當(dāng)其尺寸達(dá)到一定的臨界值時(shí)，材料的行為將呈現(xiàn)出量子特性，材料的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)也將會(huì)發(fā)生從宏觀到微觀的改變。量子點(diǎn)的發(fā)光原理在于，當(dāng)量子點(diǎn)的尺寸小到一定值時(shí)，由于受到量子尺寸效應(yīng)的影響，原來連續(xù)的能級(jí)結(jié)構(gòu)變成類似原子的不連續(xù)結(jié)構(gòu)。當(dāng)光照射到量子點(diǎn)上時(shí)，量子點(diǎn)吸收光子，價(jià)帶上的電子吸收能量后受到激發(fā)，躍迀至導(dǎo)帶，而在價(jià)帶上則會(huì)產(chǎn)生與被激發(fā)電子對(duì)應(yīng)的空穴，躍迀到導(dǎo)帶上的電子可以再以輻射躍迀的方式重新回到價(jià)帶，與價(jià)帶上的空穴復(fù)合并發(fā)射出光子。
[0007]量子點(diǎn)獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
[0008]1、通過改變量子點(diǎn)的尺寸和組成可以實(shí)現(xiàn)對(duì)量子點(diǎn)發(fā)射光譜的調(diào)控，從而得到多種不同發(fā)光顏色的量子點(diǎn)，并可以使量子點(diǎn)的熒光發(fā)射光譜覆蓋整個(gè)可見光區(qū)。以CdSe/ZnS量子點(diǎn)為例，隨著其尺寸的增大(從2nm增大到7nm)，量子點(diǎn)的發(fā)光顏色可以從藍(lán)光(433nm)到紅光(610nm)甚至近紅外光(655nm)，覆蓋了整個(gè)可見光范圍。
[0009]2、寬的激發(fā)光譜:同一個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)的光可以激發(fā)不同大小的量子點(diǎn)，不同尺寸的量子點(diǎn)發(fā)射出的熒光不同，有利于在同步檢測(cè)中的應(yīng)用。而同一激發(fā)光源卻難以同時(shí)激發(fā)多種有機(jī)染料。
[0010]3、大的Stokes位移(可達(dá)幾百nm)以及窄且對(duì)稱的發(fā)射光譜，這一特性使在使用量子點(diǎn)時(shí)可以有效地避免光譜重疊。
[0011]4、量子點(diǎn)具有良好的光穩(wěn)定性，其熒光可以保持很長(zhǎng)時(shí)間而不會(huì)發(fā)生褪色；而有機(jī)染料易發(fā)生光漂白，其自身的熒光容易隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸褪色。
[0012]稀土熒光材料是指鑭系元素(元素周期表中原子序數(shù)從57-71號(hào)的15種元素)加上同屬III B族中原子序數(shù)21的鈧Sc、39的釔Y，一共17種元素。當(dāng)這些元素的離子受到光激發(fā)時(shí)，離子吸收的能量可使4f電子從能量較低的能級(jí)激發(fā)躍迀至能量較高的能級(jí)，而當(dāng)4f電子從較高能級(jí)以輻射弛豫的方式躍迀回到較低能級(jí)時(shí)，由于各種鑭系元素離子的4f電子能級(jí)不同，所以不同鑭系元素離子的發(fā)光波長(zhǎng)也不相同(兩個(gè)能級(jí)間的能量差越大，發(fā)射的波長(zhǎng)越短)。由于鑭系元素離子具有豐富的4f能級(jí)和躍迀特性，從而產(chǎn)生大量的吸收光譜信息和熒光光譜信息。稀土熒光材料具有吸收能力強(qiáng)、轉(zhuǎn)換率高、可發(fā)射寬范圍的光譜，且物理性能穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。
[0013]基于量子點(diǎn)開發(fā)的試紙條具備了很高的檢測(cè)靈敏度，特別是適用于低濃度水平(如pg/ml-ng/ml)待檢物含量的準(zhǔn)確測(cè)定，但是其檢測(cè)的線性范圍不夠?qū)挘谙嗤囊惶讬z測(cè)體系范圍內(nèi)，無法實(shí)現(xiàn)高值樣品的準(zhǔn)確定量。因此，單獨(dú)使用量子點(diǎn)時(shí)，無法兼顧到低端的檢測(cè)靈敏度以及寬線性范圍。而通過聯(lián)合應(yīng)用其他與量子點(diǎn)具有相似的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的熒光元素或者熒光材料，將有望獲得更寬的線性范圍，并且可以實(shí)現(xiàn)在同一套熒光檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行熒光信號(hào)結(jié)果的讀取，也更有利于在臨床的推廣及應(yīng)用。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0014]摶術(shù)問題
[0015]心肌肌鈣蛋白1-肌紅蛋白-肌酸激酶同工酶三項(xiàng)聯(lián)檢對(duì)于急性心肌梗死的判斷具有重要的臨床意義，因此亟待需要開發(fā)出一種定量檢測(cè)心肌肌鈣蛋白1-肌紅蛋白-肌酸激酶同工酶，且能夠滿足高靈敏度和寬線性范圍要求的三項(xiàng)聯(lián)檢試紙條。
_6] 技術(shù)方案
[0017]本實(shí)用新型提供了一種用于聯(lián)合檢測(cè)心肌肌鈣蛋白1-肌紅蛋白-肌酸激酶同工酶的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括依次搭接粘貼的以下部件:
[0018]I)用于接受來自全血、血漿或血清樣品的樣品墊；
[0019]2)同時(shí)包被有由量子點(diǎn)和稀土熒光材料分別單獨(dú)標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I的第一抗體以及由生物素標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I的第二抗體的抗體結(jié)合墊I，其中所述第一抗體和第二抗體分別特異性識(shí)別心肌肌鈣蛋白I的不同表位；
[0020]3)同時(shí)包被有由量子點(diǎn)和稀土熒光材料分別單獨(dú)標(biāo)記的抗肌紅蛋白的第一抗體的抗體結(jié)合墊II;
[0021]4)同時(shí)包被有由量子點(diǎn)和稀土熒光材料分別單獨(dú)標(biāo)記的抗肌酸激酶同工酶的第一抗體的抗體結(jié)合墊III;
[0022]5)同時(shí)包被有相間隔的三條檢測(cè)線和一條質(zhì)控線的包被墊，其中所述三條檢測(cè)線依次固定有親和素、識(shí)別肌紅蛋白不同表位的抗肌紅蛋白的第二抗體及識(shí)別肌酸激酶同工酶不同表位的抗肌酸激酶同工酶的第二抗體，所述質(zhì)控線固定有抗鼠IgG的抗體；和
[0023]6)用于提供檢測(cè)所需的毛細(xì)作用力的吸水紙。
[0024]在一個(gè)實(shí)施方式中，所述試紙條進(jìn)一步包括底板，其中所述底板上粘貼有依次搭接的樣品墊、抗體結(jié)合墊1、抗體結(jié)合墊I1、抗體結(jié)合墊II1、包被墊和吸水紙。
[0025]在一個(gè)實(shí)施方式中，所述量子點(diǎn)為微球形式且具有2nm-30nm的粒徑范圍，且所述量子點(diǎn)選自以下組中:CdTe、CdSe, PbSe, InP和GaN。
[0026]在一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗體結(jié)合墊1、II和/或III上進(jìn)一步包被有微球，其中所述微球負(fù)載有所述稀土熒光材料和相應(yīng)的抗體。
[0027]在一個(gè)實(shí)施方式中，所述微球的粒徑大小為50nm-400nm。
[0028]在一個(gè)實(shí)施方式中，所述微球的粒徑大小為100nm-300nm。
[0029]在一個(gè)實(shí)施方式中，所述微球的粒徑大小為10nm或300nm。
[0030]在一個(gè)實(shí)施方式中，所述試紙條的寬度在0.2cm至0.5cm之間。
[0031]有益效果
[0032]本實(shí)用新型的三項(xiàng)聯(lián)檢試紙條兼顧了心肌肌鈣蛋白1-肌紅蛋白-肌酸激酶同工酶中低值靈敏度和檢測(cè)的線性范圍的要求。而且，該試劑條制備方法簡(jiǎn)單，可以實(shí)現(xiàn)批量生產(chǎn)，具備廣闊的市場(chǎng)前景。
【附圖說明】
[0033]圖1是本實(shí)用新型的試紙條的側(cè)視示意圖；和
[0034]圖2是本實(shí)用新型的試紙條的俯視示意圖。
[0035]附圖標(biāo)記表示為:
[0036]1-底板、2-樣品墊、3-抗體結(jié)合墊1、4-抗體結(jié)合墊11、5_抗體結(jié)合墊111、6_包被墊、7-吸水紙、8-量子點(diǎn)標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I的第一抗體、9-量子點(diǎn)標(biāo)記的抗肌紅蛋白的第一抗體、10-量子點(diǎn)標(biāo)記的抗肌酸激酶同工酶的第一抗體、11-檢測(cè)線(心肌肌鈣蛋白1)、12_檢測(cè)線(肌紅蛋白)、13_檢測(cè)線(肌酸激酶同工酶)和14-質(zhì)控線。
【具體實(shí)施方式】
[0037]以下將參照在附圖中說明并描述于以下的說明書中的實(shí)施方案。應(yīng)理解由此不意圖限制本實(shí)用新型的范圍。
[0038]圖1為一種定量檢測(cè)心肌肌鈣蛋白1-肌紅蛋白-肌酸激酶同工酶的三項(xiàng)聯(lián)檢試紙條的側(cè)視示意圖。
[0039]如圖1所示，本實(shí)用新型的三項(xiàng)聯(lián)檢熒光層析試紙條包括底板I和在底板I上順序搭接粘結(jié)的樣品墊2、抗體結(jié)合墊I 3、抗體結(jié)合墊II 4、抗體結(jié)合墊III 5、