專利名稱：致病性構(gòu)象異構(gòu)體的分析的制作方法
致病性構(gòu)象異構(gòu)體的分析相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2008年4月30日提交的美國臨時專利申請61/049，396的優(yōu)先權(quán)，通 過引用將該申請的內(nèi)容納入本文。
背景技術(shù)：
蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病(protein conformational disease)包括各種臨床上不相關(guān)的 疾病，例如傳染性海綿狀腦病、阿爾茨海默病、ALS和糖尿病，這些疾病因正常蛋白質(zhì)構(gòu)象異 常轉(zhuǎn)換成致病性構(gòu)象異構(gòu)體所致。這種轉(zhuǎn)換進而造成伴有后續(xù)組織沉積的致病性構(gòu)象異構(gòu) 體的自身締合并且假設(shè)可導(dǎo)致周圍組織損傷。這些疾病在臨床表現(xiàn)上也驚人相似，通常經(jīng) 歷時間長度不同的潛伏期后從診斷快速發(fā)展為死亡。在活體對象和由活體對象獲取的樣品中檢測構(gòu)象疾病蛋白的致病性構(gòu)象異構(gòu)體 已證明是困難的。目前證實活體患者中存在致病性構(gòu)象異構(gòu)體的技術(shù)粗略且具有侵入性。 例如，組織病理學(xué)檢查要求對患者存在風(fēng)險的活組織檢查。組織病理學(xué)固有地存在取樣誤 差，因為病損和淀粉樣沉積可能由于進行活組織檢查區(qū)域的不同而被忽略。因此，在對象死 亡之前對這些病癥進行確定診斷和治標(biāo)療法仍然是一個巨大的尚未實現(xiàn)的挑戰(zhàn)。淀粉樣-β蛋白(Α β )聚集體主要是A β 1-40 (Α β 40)和1-42 (Α β 42)，這些聚集 體排他性地與阿爾茨海默病(AD)有關(guān)，被視作該疾病的黃金標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記物。然而，AD唯一的 確定性檢驗是在死后對腦樣品進行Aβ斑塊的免疫組織化學(xué)染色。目前，尚沒有FDA批準(zhǔn) 的AD死前診斷試驗。血漿或CSF樣品可用于死前試驗。一些死前AD試驗聚集于腦脊液 (CSF)，試圖對可溶性A β 42進行定量。然而，這種生物標(biāo)記物僅僅用作AD的間接測量。可以特異性地檢測直接來自CSF或其他體液如血漿中的聚集的A β的試驗將具有 巨大的優(yōu)勢。聚集的Αβ的早期檢測能實現(xiàn)對阿爾茨海默病更快且更有效的診斷以及可能 療法的評價。能夠檢測其他構(gòu)象疾病蛋白的致病性構(gòu)象異構(gòu)體的試驗也是需要的，因為它們也 能實現(xiàn)對這些構(gòu)象疾病更快和更有效的診斷以及可能療法的評價。優(yōu)選實施方式的簡要描述本發(fā)明部分地涉及致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑(PCSB試劑)，該試劑優(yōu)先 與致病性朊病毒蛋白和其他非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體發(fā)生相互作用。在一些實施方式 中，PCSB 試劑源自朊病毒蛋白片段，例如 ft~P19-30(SEQ ID NO :242)、PrP23_30 (SEQ ID NO: 243),PrPlOO-Ill(SEQ ID NO :244),PrPlOl-IlO(SEQ ID NO :245)、PrP154_165(SEQ ID NO: 246)和(SEQ ID NO :247)。在其它實施方式中，致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑的氨基酸序列為SEQ ID NO :242, SEQ ID NO :243, SEQ ID NO :244, SEQ ID NO 245, SEQ ID NO 246 和 SEQ ID NO :247。在其它實施方式中，PCSB試劑是朊病毒蛋白片段的擬肽類似物。在一些實施方式
中，所述擬肽類似物具有以下結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成復(fù)合物的 條件下相接觸；和通過其與所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的 話所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu)先與致病性 朊病毒蛋白相互作用。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體是與淀粉 樣蛋白疾病相關(guān)的構(gòu)象異構(gòu)體。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述淀粉樣蛋白疾病選自系統(tǒng)性淀粉樣 變、tau病變和共核蛋白病。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體是與選自 下組的疾病相關(guān)的構(gòu)象異構(gòu)體阿爾茨海默病、ALS、免疫球蛋白相關(guān)疾病、血清淀粉樣蛋白 A相關(guān)疾病和II型糖尿病。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體是阿爾茨 海默病構(gòu)象異構(gòu)體。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體是淀粉樣蛋 白-β (Αβ)蛋白。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體是tau蛋白。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源 自選自下組的化合物PrP19_3。(SEQ ID NO 242),PrP23^30 (SEQ ID NO 243),PrP100_m (SEQ ID NO 244), PrP101_110 (SEQ ID NO 245), PrP154_165 (SEQ ID NO 246) ,PrP226_237 (SEQ ID NO :247)， SEQ ID NO 14, SEQ ID NO :50，SEQ ID NO :68，
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品選自器官、全血、血液成分、血液 組分、血漿、血小板、血清、腦脊液(CSF)、腦組織、神經(jīng)系統(tǒng)組織、肌肉組織、骨髓、尿、眼淚、 非神經(jīng)系統(tǒng)組織、活檢或尸檢。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品包括血漿或腦脊液。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述朊病毒蛋白片段選自以下肽 PrP19_30 (SEQ ID NO 242) ,PrP23_30 (SEQ ID NO :243)，PrP100_m (SEQ ID NO :244)，PrP101_110(SEQ ID NO :245)，PrP154_165 (SEQ ID NO :246), PrP226_237 (SEQ ID NO :247)，SEQ ID NO: 14，SEQ ID NO 50 禾口 SEQ ID NO :68。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，朊病毒蛋白片段選自PrP19_3C1(SEQID NO 242), PrP23_30 (SEQ ID NO :243), PrP100_m (SEQ ID NO :244), PrP101_110 (SEQ ID NO :245)，SEQ ID NO :14, SEQ ID NO :50 和 SEQ ID NO :68。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑包 含選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO :242, SEQ ID NO :243，SEQ ID NO :244，SEQ ID NO 245，SEQ ID NO :246，SEQ ID NO :247，SEQ ID NO :14，SEQ ID NO 50 和 SEQ ID NO :68。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑包 含選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO :242, SEQ ID NO :243，SEQ ID NO :244，SEQ ID NO 245，SEQ ID NO :14，SEQ ID NO 50 和 SEQ ID NO :68。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑包 括選自下組的擬肽試劑(a)SEQID NO :229，230，231，232，233，234，235，236，237，238，239，240 或 241 ；(b)SEQID NO :229，230，232，233，237，238，239 或 240 ；(c)SEQID NO :230，237，238，239 或 240 ；(d)SEQID NO 240 ；(e)
16.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑在 生理學(xué)pH下具有至少正3的凈電荷。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述試劑在生理學(xué)pH下具有至少正4的 凈電荷。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑經(jīng) 可檢測標(biāo)記。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述試劑用生物素進行可檢測標(biāo)記。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述試劑連接于固相支持體。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述固相支持體選自硝基纖維素、聚苯 乙烯膠乳、聚氟乙烯、重氮化紙、尼龍膜、活化珠和磁敏性珠。
22.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成復(fù)合物的 條件下相接觸；使所述復(fù)合物與構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑在適合結(jié)合的條件下相接觸；和 通過其與所述構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的話所 述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu)先與致病性 朊病毒蛋白相互作用。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述方法還包括在形成所述復(fù)合物之后 去除未結(jié)合的樣品材料。
24.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑是標(biāo) 記抗體。
25.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體是Αβ蛋 白，所述構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑是抗-Αβ抗體。
26.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成第一復(fù)合 物的條件下相接觸；去除未結(jié)合的樣品材料；使所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體從所述第一復(fù)合物解離下來，從而形成解離的非朊 病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體；使所述解離的非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體與第一構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑在允 許結(jié)合以形成第二復(fù)合物的條件下相接觸；和通過檢測所述第二復(fù)合物的形成來檢測樣品中如果有的話所述非朊病毒致病性構(gòu)象 異構(gòu)體的存在；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu)先與致病性 朊病毒蛋白相互作用。
27.如權(quán)利要求沈所述的方法，其特征在于，利用可檢測標(biāo)記的第二構(gòu)象疾病蛋白特 異性結(jié)合試劑來檢測第二復(fù)合物的形成。
28.如權(quán)利要求沈所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性試劑偶聯(lián) 于固相支持體。
29.如權(quán)利要求沈所述的方法，其特征在于，所述第一構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑 偶聯(lián)于固相支持體。
30.如權(quán)利要求沈所述的方法，其特征在于，通過使所述第一復(fù)合物暴露于硫氰酸胍 而使所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體從所述第一復(fù)合物解離。
31.如權(quán)利要求沈所述的方法，其特征在于，通過使所述復(fù)合物暴露于高PH或低pH而 使所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體從所述第一復(fù)合物解離。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述方法還包括在解離之后中和高pH或 低PH的步驟。
33.如權(quán)利要求沈所述的方法，其特征在于，所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體是Αβ蛋 白，所述構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑是抗-Αβ抗體。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，通過使所述復(fù)合物暴露于高pH條件而使 所述Aβ蛋白從所述第一復(fù)合物解離。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，所述高pH條件是約80°C下約0.IN的 NaOH0
36.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與第一致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性 結(jié)合試劑在能使所述第一試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成 第一復(fù)合物的條件下相接觸；使所述疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與第二致病性構(gòu)象異構(gòu)體特 異性結(jié)合試劑在能使所述第二試劑與所述第一復(fù)合物中的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu) 體結(jié)合的條件下相接觸，其中所述第二試劑包含可檢測的標(biāo)記；和通過其與所述第二試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的話所述非朊病毒致病性構(gòu) 象異構(gòu)體；其中，所述第一和第二致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu) 先與致病性朊病毒蛋白相互作用。
37.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟(a)使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成復(fù)合物的條 件下相接觸；(b)去除未結(jié)合的樣品材料；(C)使所述復(fù)合物與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑在能使所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體 特異性結(jié)合試劑與所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合的條件下相接觸，其中所述致病性 構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑包含可檢測的標(biāo)記；和通過其與所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的 話所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu)先與致病性 朊病毒蛋白相互作用。
38.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟提供包含致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑的固相支持體；合并所述固相支持體與可檢測標(biāo)記的配體，其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑對所述可檢測標(biāo)記的配體的結(jié)合親和力比所述試劑對所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu) 體的結(jié)合親和力弱；在能使所述樣品中可能存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合所述試劑并置換 所述配體的條件下合并樣品與所述固相支持體；和檢測所述試劑與所述樣品中的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體之間形成的復(fù)合物； 其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu)先與致病性 朊病毒蛋白相互作用。
39.一種用于區(qū)分非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體和非朊病毒非致病性構(gòu)象異構(gòu)體的方 法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成復(fù)合物的 條件下相接觸；和通過所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體與所述試劑的結(jié)合來區(qū)分所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu) 體和所述非朊病毒非致病性構(gòu)象異構(gòu)體；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu)先與致病性 朊病毒蛋白相互作用。
40.一種診斷非朊病毒構(gòu)象疾病的方法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成復(fù)合物的 條件下相接觸；和通過其與所述試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的話所述非朊病毒致病性構(gòu)象異 構(gòu)體；如果檢測到所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體則診斷為構(gòu)象疾??； 其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑源自朊病毒蛋白片段并且優(yōu)先與致病性 朊病毒蛋白相互作用。
41.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成復(fù)合物的 條件下相接觸；和通過其與所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的 話所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑包括具有SEQ ID NO =229,230,231,232, 233，234，235，236，237，238，239，240 或 241 的擬肽區(qū)域。
42.一種用于檢測非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下步驟使疑似含有所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合 試劑在能使所述試劑與如果存在的所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成復(fù)合物的 條件下相接觸；和通過其與所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的 話所述非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑選自
43. 一種用于檢測致病性阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，所述方法包括以下 步驟使疑似含有所述致病性阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性 結(jié)合試劑在能使所述試劑與如果存在的所述致病性阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體結(jié)合以形成 復(fù)合物的條件下相接觸；使所述復(fù)合物與構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑在適合結(jié)合的條件下相接觸；和 通過其與所述構(gòu)象疾病蛋白質(zhì)特異性結(jié)合試劑的結(jié)合來檢測所述樣品中如果有的話 所述致病性阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體的存在；其中，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑是
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述致病性阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體是 Αβ蛋白，所述構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑是抗_Αβ抗體。
45.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述致病性阿爾茨海默病構(gòu)象異構(gòu)體是tau蛋白，所述構(gòu)象疾病蛋白特異性結(jié)合試劑是抗-tau抗體。
46.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性試劑偶聯(lián) 于磁珠。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于檢測樣品中非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的存在的方法，該方法包括使疑似含有非朊病毒致病性構(gòu)象異構(gòu)體的樣品與致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑在能使所述試劑結(jié)合致病性構(gòu)象異構(gòu)體(如果存在的話)的情況下相接觸；和根據(jù)其與試劑的結(jié)合檢測樣品中的致病性構(gòu)象異構(gòu)體(如果有的話)；其中，致病性構(gòu)象異構(gòu)體特異性結(jié)合試劑通常源自朊病毒蛋白片段并優(yōu)先與致病性朊病毒蛋白相互作用。本發(fā)明還提供了用于診斷構(gòu)象疾病的方法。
文檔編號G01N33/53GK102083450SQ200980115911
公開日2011年6月1日 申請日期2009年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月30日
發(fā)明者A·劉, A·楊, D·佩列茲, M·(C·)高, P·吳, X·王 申請人:諾華有限公司