專利名稱：：用于診斷目的的選擇性測定降鈣素原1-116的方法、以及實施該方法的抗體和試劑盒的制作方法用于診斷目的的選擇性測定降鈣素原1-116的方法、以及實施該方法的抗體和試劑盒本發(fā)明涉及醫(yī)學診斷領域，具體而言，本發(fā)明涉及通過免疫診斷方法來測定生物學流體中的生物學標記物。更準確地說，本發(fā)明涉及用于診斷目的的肽降鈣素原(procalcitonin)的測定，其是至今不可獲得的選擇性測量的數(shù)值，針對完整降鈣素原1-116進行測定，并且特別地用地更靈敏地早期診斷，監(jiān)測治療情況，以及監(jiān)測系統(tǒng)性或局部感染的進程，特別是細菌感染的和膿毒癥的進程。在本發(fā)明的內(nèi)容中，諸如"診斷"或"用于診斷目的"之類的術語用作用于醫(yī)學測定中的常規(guī)術語，根據(jù)實施所述測定的患者的臨床狀況，所述的醫(yī)學測定引起了不同的問題，并且所述的醫(yī)學測定具體用于診斷和早期診斷，嚴重性的測定以及進展情況的估測(包括對進展情況的伴隨治療的估測，對疾病的未來進展情況的預后，以及患者的危險分層(stratification))。在以下的+兌明書中，即4吏具體關注于經(jīng)改善的、對進展情況和治療的監(jiān)測，但是術語"用于診斷目的"并非限于這種特定的診斷目的。成熟的激素原降鈣素原(PCT)為這樣的肽，該肽由116個氨基酸構(gòu)成，其首先是作為重要的激素降鈣素的前體(甲狀腺降鈣素(thyreocalcitonin))而論述的，并且所述肽的完整的氨基酸序列(SEQIDN0:l)已經(jīng)被人們所知已久，已有其正常的蛋白水解降解的詳細情況，該蛋白水解降解導致釋放成熟的激素降鈣素和其他的短肽，具體包括所謂的降鉀素(降釣素原96-116)和N-末端肽(N-降鈣素原1-57)(其在本文中被特別稱為"PCT部分肽，，)。例如，在本申請人的專利EP0656121Bl或US5，639，617中、以及出版物ASSIC0TM.,GE腿ELD.，CARSINH.，RAYMONDJ.，GUILBAUDJ.，B0H麗C.(1993):HighserumProcalcitoninconcentrationsinpatientswithsepsisandinfection.Lancet341:515-518中更明確說明的那樣，發(fā)生系統(tǒng)性發(fā)炎反應的嚴重的細菌感染、以及某些寄生蟲和真菌的感染誘導循環(huán)系統(tǒng)中PCT的釋放,此時發(fā)現(xiàn)PCT的量極高并且容易測定(例如還可以參見綜述文章(TCONNORE.，VENKATESHB.，LIPMANJ.，MAS應GONYIKAC，HALLJ.(2001):Procalcitoninincriticalillness.CriticalCareandResuscitation3:236-243;WHICHERI.，BIE證NUJ.，M0臓RETG.(2001):Procalcitoninasanacutephasemarker.AnnalsofClinicalBiochemistry38:483-893;BECKERK.L.，NYLENE.S.,WHITEJ.C，MUELLERB.，SNIDERR.H.(2004):Procalcitoninandthecalcitoningenefamilyofpeptidesininflammation,infectionandsepsis:ajourneyfromprocalcitoninbacktoitsprecursors.JournalofClinicalEndocrinologyandMetabolism89:1512-1525)。另一方面，病毒、自身免疫和過敏性疾病都不能導致血液中可測定的PCT的濃度發(fā)生顯著的升高。PCT反映了細菌感染的嚴重程度，并且被用作用于診斷和治療性監(jiān)測細菌起因的膿血癥、嚴重膿血癥和膿血性休克(DANDONAP.，NIXD.，WILSONM.F.，AUADAA.，LOVEJ.，ASSIC0TM.，B0HU0NC.(1994):Procalcitoninincreaseafterendotoxininjectioninnormalsubjects.JournalofClinicalEndocrinologyandMetabolism79:1605-1608;GE腿ELD.，ASSICOTM.，RAYMONDJ.，MOULINF.，F(xiàn)RA腦UALC.,BA畫ALJ.,B0H0UNC.(1996):Procalcitoninasamarkerfortheearlydiagnosisofneonatalinfection.JournalofPaediatrics128:570-573;SNIDERR.H.JR.，NYLENE.S.，BECKERK.L.(1997):Procalcitoninanditscomponentpeptidesinsystemicinflammation:immunochemicalcharacterization.JournalofInvestigativeMedicine45:552—560;WHANGK.T.，STEINWALDP.M.,WHITEJ.C，NYLENE.S.,SNIDERR.H.，S腦NG.，GOLDBERGR.I>.，BECKERLL(1998):Se函calcitoninprecursors'insepsisandsystemicinflammation.JournalofClinicalEndocrinologyandMetabolism83:3296-3301;MUELLERB.，BECKERK.L.，SCHACHINGERH.，RICKENBACHERP.R.，HUBERP.R.，ZI醒ERLIW.，RITZR.(2000):Calcitoninprecursorsarereliablemarkersofsepsisinamedicalintensivecareunit.CriticalCareMedicine28:977-983)。在所述的專利和參考文獻中記錄的普通的技術知識都明確地用于補充本說明書。所述的PCT的測定還可以用于差異診斷目的，這是因為根據(jù)血清和血漿中可測定的PCT的濃度，可以將基于細菌感染的發(fā)炎性疾病與那些非感染性病因的疾病區(qū)分開(還可以參見EP0880702Bl)。這種可行的區(qū)分已經(jīng)證實，對于控制治療中抗生素的使用是非常有價值的，這是因為可以在由于患者未患有細菌感染而導致抗生素是無效的情況下，避免施用抗生素。此外，已經(jīng)進行了一些嘗試來測定在腦脊液(CSF)受到感染的情況下的降鈣素原。在所述文獻中描述的所有情況下，采用了開發(fā)用于膿血癥診斷并具有功能性測定靈敏度(FAS)僅為300ng/1的商業(yè)測定法。所得的測定結(jié)果是矛盾的。但是，如在剛剛公開的專利申請DEIO2005034174.8中、或者在WO2007/009789中所描述的那樣，如果采用更靈敏的測定法(而且這些方法已經(jīng)被使用了一段時間)，則可以得到更顯著的測定結(jié)果。釆用所述的測定法，即使在神經(jīng)退行性疾病的情況下，也可以得到可測量的PCT免疫反應性與疾病嚴重程度之間的、明顯的相關性。即使下文中沒有特意論述CSF中PCT的測定情況，但是該內(nèi)容也明確地在使用根據(jù)本發(fā)明的方法的本發(fā)明的范圍內(nèi)，其中在本文中，所述的根據(jù)本發(fā)明的方法還在診斷的部分領域中有描述。尿中的測定也大體凈皮本發(fā)明所涵蓋。按照上文所述的專利和參考文獻中所述，通過使用了兩種抗體的夾層式免疫測定法來以合適的方式進行PCT的測定，其中所述的兩種抗體與完整的PCT肽的氨基酸序列結(jié)合，這樣經(jīng)完全處理的、釋放出降鈣素的PCT不能被檢測到，而全部未經(jīng)處理的PCT以及可任選的那些更長的PCT部分肽(其在單個分子中仍具有針對在夾層式測定方法中使用的兩個抗體的兩個結(jié)合位點)則被檢測到，該檢測不能區(qū)分任選的、末端經(jīng)修飾的PCT形式。傳統(tǒng)的方法使用了通常與完整的PCT肽的一些節(jié)段相結(jié)合的兩種抗體，其中在形成降4丐素的PCT蛋白水解過程中，所述的節(jié)段位于所形成的PCT部分肽中的不同的PCT部分肽上，或者位于不包含降鉤素序列的PCT部分肽上。在EP1121600Al或EP1408334Al或US6，756，483中說明了這樣的事實，在患有膿血癥的情況下并未在血清或血漿中發(fā)現(xiàn)或者至少并未主要發(fā)現(xiàn)完整的PCT1-116(SEQIDNO:1)，而是發(fā)現(xiàn)了少了2個氨基酸的PCT3-116(SEQIDNO:2)，其中所述的文獻用于補充本發(fā)明的說明書。此外，在本發(fā)明的內(nèi)容中，參考了以下出版物WEGL加觀W，STRUCKJ，F(xiàn)ISCHER-SCHULZC,MORGENTHALERNG，OTTOA,B0HU0NC，BERGMANNA:Isolationandcharacterizationofserumprocalcitoninfrompatientswithsepsis.Peptides2001;22:2099-103。如在所述出版物中說明的那樣，具有降鈣素原免疫反應性的唯一的生物分子(其可在得自膿血癥患者的所研究的樣品中表征)為所提及的降鉀素原3-116(SEQIDNO:2)。在其他著作WRENGERS，KAHNET，BOHUONC，WEGL^HNERW,ANSORGES，REINH0LDD:Amino-terminaltruncationofprocalcitonin，amarkerforsystemicbacterialinfections,bydipeptidylpeptidaseIV(DPIV);FEBSLett2000;466:155-9中，表明所述的降鉤素原3-116可以通過二肽基-氨基肽酶IV(DAPIV;DPIV;CD26;E.C.3.4.14.5的作用從合成方式制備的降鈣素原1-116獲得。所述的出版物均未揭示，在膿血癥和感染情況下表征的降鈣素原3-116是否是直接分泌的，或者是否是由降鈣素1-116(PCT1-116)(其以中間體形式被釋放到循環(huán)系統(tǒng)中)形式的"完整"前體經(jīng)過蛋白水解而依次形成的。所述的出版物僅僅揭示了，在所研究的生物學樣品(全血、血清或血漿)中"完整的降鈣素原"1-116是否以可測定的穩(wěn)定狀態(tài)的濃度形成，或者"完整的降鈣素原"1-116是否明顯有助于在傳統(tǒng)的降鈣素原測定中所得到的測定信號。就血清/血漿中降鈣素原免疫反應性的測定而言，有多種本申請人的商業(yè)測定法，例如化學發(fā)光測定法B.R.A.H.M.SPCTLIA(B.R.A.H.M.SAG),該測定法具有大約300ng/l的FAS，并且適于膿血癥(在這種情況下可以形成極高濃度的PCT)中PCT的測定。就具有更高靈敏度的PCT的測定而言，最近研發(fā)出經(jīng)修改的夾層式免疫測定法，該方法是使用親合純化的多克隆抗體來進行的，并且在MORGENTHALERN.G.，STRUCKJ.,FISCHER-SCHULZC，BERGMANNA.(2002):Sensitiveimmunoluminometricassayforthedetectionofprocalcitonin.ClinicalChemistry48:788-789，andisavailableasB.R.A.H.M.SPCTsensitivLIA(B.R.A.H.M.SAG)中進行了更詳細的描述。該測定法具有為7ng/l的基本更好的功能性測定靈敏度(FAS)。通過這種測定法輔助，可以測定健康人中的平均PCT血清濃度為13.5ng/l(13.598/ml)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其值為〈7至63ng/l，并且97.5%為42.5ng/l。為了使醫(yī)院的醫(yī)師能夠直接在醫(yī)院內(nèi)("及時現(xiàn)場護理(point-of-care)")快速地檢查潛在膿血癥患者的狀態(tài)，利用了用于快速半定量測定患者的人血清或人血漿中的降鈣素原的、免疫層析測定法形式的一步快速測試方法(PCT-Q;B.R.A.H.M.SAktiengesellschaft)。例如，從上文所述的出版物和綜述文章顯而易見的是，目前在化學常規(guī)方法中已經(jīng)確切地建立了主要用于膿血癥的早期診斷的、生物標記物降釣素原的測定方法。這種方法成功的原因在于膿血癥或細菌感染與患者血液或血清/血漿中可測定的PCT的免疫反應性增高之間所存在的可靠的相關性，以及由于膿血癥患者血液中所達到的高濃度而得到的PCT免疫反應性的相對簡單的可測定性(這是由于至少主要在測定過程中所檢測的PCT3-116的高度穩(wěn)定性)。盡管針對上述目的的、目前可用的測定法在PCT免疫反應性的測定方面具有毋庸置疑的優(yōu)點，但是本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，所測定的PCT免疫反應性的高度穩(wěn)定性和高濃度對于某些臨床相關性的診斷問題同樣具有某些缺點分析物(例如諸如PCT3-116之類的肽)的高度穩(wěn)定性或"長壽命"是指這種分析物的測量提供了這樣的大致的信息，即，已經(jīng)喪失的分泌活性會持續(xù)相對長的時間。例如，如果假定在急性病理過程中會或多或少地持續(xù)地生產(chǎn)分析物，則穩(wěn)定的分析物會在生物學樣品中積聚，并且這種分析物之前的生理生產(chǎn)是以累積方式由其可測量的濃度所反映的，但隨著濃度的降低而減少，這種情況在同一時期內(nèi)以其生理學清除速率下發(fā)生(分析物由所述樣品中的消失是由于其轉(zhuǎn)化為不能以分析方法檢測到的降解產(chǎn)物、通過腎臟排泄或者通過本身已知的其他生理學機制)。分析物的壽命越長或者其清除速率越低，則確切的測量時間對分析物的上文所述的"形成"或"分泌"的測定的影響就越小。例如，在這種描述下，在相對長的時間內(nèi)保持恒定的濃度是指形成與清除之間彼此平衡。如果濃度降低，可能表示以"濃度補充，，方式發(fā)揮作用的分析物的分泌減少。然而，血液中分析物的濃度仍可能具有較高的值。但是，如果可測量的濃度值較高，并且清除速率較低，則分析物分泌的變化表明相對大量的分析物本身發(fā)生了相對較小的、無法解釋的變化。此外，如果臨床醫(yī)生由于希望基于分析物分泌的變化而對治療的成功或復發(fā)或再感染得出一些結(jié)論，而恰好關注于分析物分泌中快速形成的變化，則基于"長壽命，，分析物的測量濃度值經(jīng)常難以識別這種快速且明確的變化。因此，就可以快速且可靠地識別降釣素原分泌的變化而言，本發(fā)明人將他們的目標設定為改善降釣素原的測定方法，使得識別治療的成功或者引入所需的治療干預的時間更短，并且可能獲得其他的之前不可得的信息，當醫(yī)師必須首次對患者進行估測時，所述的信息可以對感染/膿血癥已經(jīng)進展的程度立即得到結(jié)論。所述的目標是通過根據(jù)權(quán)利要求1至12所述的方法、以及通過提供這些方法所需的根據(jù)權(quán)利要求13至15所述的新型抗體、以及根據(jù)權(quán)利要求16至22所述的相言給定的測量結(jié)果的討論，本發(fā)明的其他重要的特征對于本領域的技術人員而言是顯而易見的，這些說明和實施例通過引用方式而并入本文。在本發(fā)明人進行思考的初期，假定通過傳統(tǒng)的測定法作為PCT免疫反應性而測定的肽降鈣素原大概是由其相關的具有141個氨基酸的前肽(前降鈣素原；pre-PCT)形成的，其氨基酸序列(SEQIDN0:3)是已知的。如對于許多激素原通常所知的那樣，PCT是由這種更長的前體分子通過刪除信號序列而形成的。雖然尚未通過實驗測定切割位點，但是信號序列通常具有相似的模式，這樣可以通過較高的概率來預測這些切割位點。在pre-PCT的情況下，信號序列應該包含pre-PCT(SEQIDNO:3)的氨基酸1至24。在該信號序列之后為激素原PCT位置1處的氨基末端氨基酸，該氨基酸與pre-PCT(SEQIDNO:3)的氨基酸25相對應。基于這種考慮，最初假定，在膿血癥期間在循環(huán)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的PCT在除去信號序列后116個氨基酸，并且具有氨基酸序列PCTl-116(SEQIDNO:1)。但是，由于僅僅PCT3-116(SEQIDNO:3)能夠在膿血癥患者的樣品中被表征，所以仍保留了對PCT1-116中間體分泌以及這種PCT1-116在循環(huán)系統(tǒng)中可能得到的濃度的疑問。應該再次指出，目前已經(jīng)用于測定降鈣素原免疫反應性的夾層式測定法是通過組合使用兩種抗體來進行的，而這兩種抗體并不能區(qū)分PCT1-116和3-116。因此，已知的測定法當然不能選擇性地檢測所述的不同形式的PCT，因此如果在病理學過程(例如在膿血癥過程中)中發(fā)生相對摩爾量的變化的話，所述的這些方法也不能檢測這種可能的特征性變化。因此，在本申請中，通過傳統(tǒng)的測定法測定的PCT免疫反應性還被稱為"PCT總和"。在這種情況下，本發(fā)明人決定提供一種用于免疫診斷測定降鉤素原的新型方法，通過該方法，僅有那些還具有降鈣素原1-116的頭兩個氨基酸的降釣素原級分被選擇性地測定，并且通過這種新型方法，可以檢查是否可以由此獲得臨床相關的測量結(jié)果，而該結(jié)果在質(zhì)量上要好于之前測定的降鈣素原免疫反應性的結(jié)果。如在以下的實驗部分中更加詳細描述的那樣，本發(fā)明人首先研發(fā)出了多種具有臨床測定所需的結(jié)合性質(zhì)的新型抗體，這樣這些抗體僅僅識別這樣的降鉤素原分子，該降鈣素原分子包含完整的降鈣素原序列，該序列在氨基末端具有降鈣素原1-116的頭兩個氨基酸(Ala-Pro)，或者所述的降鈣素原分子包含至少氨基酸2(Pro)。然后在夾層式測定法中，本發(fā)明人使用了這些新型的抗體，這些抗體可以選擇性地測定在人類患者的生物學樣品中，例如在血清或者特別是血漿中的PCT1-116，而測量值不會受到樣品中PCT3-116(SEQIDNO:2)存在受到影響。換言之，PCT3-116的濃度，以及當然N-末端的至少2個氨基酸被截平的所有其他PCT片段(如果在生物學樣品中存在的話)都不能被用于選擇性地檢測生物學樣品中的PCT1-116的、根據(jù)本發(fā)明的測定法所檢測(共檢測)，并且不能成為測量值的一部分(不會形成明顯的增值)。如下文中本申請的實驗部分所示，采用所述的測定法得到的測量結(jié)果實現(xiàn)了本發(fā)明的愿望，即，針對上文所述的具體的診斷目的，對降鈣素原的診斷測定進行了所需的改善。事實上發(fā)現(xiàn)，顯著的、容易測量的濃度的PCT1-116存在于人血清的新鮮樣品中，特別是存在于患者的新鮮人血漿中。本發(fā)明人所發(fā)現(xiàn)的所述樣品中的PCT1-116的摩爾濃度為通過傳統(tǒng)方法平行測定的PCT免疫反應性的摩爾濃度的大約1/5至1/8("PCT總和")。如果假定，循環(huán)系統(tǒng)中分泌的總的PCT主要是以PCT1-116的形式分泌的，則在假設時間內(nèi)在開始分泌PCT時，PCT1-116的濃度與PCT總和的濃度必需是相等的，這樣對于PCT1-116與PCT總和的比值可以假定為最大假設初始極限為1.0。因此，在所研究的樣品中，如本發(fā)明人所發(fā)現(xiàn)的那樣，范圍為約1/5至1/8的比值已經(jīng)在本質(zhì)上包含了關于樣品歷史的信息，例如在喪失的過程中和/或感染/膿血癥的嚴重程度。由于PCT1-116的穩(wěn)定性較低(由于轉(zhuǎn)化為PCT3-116)，所以與針對更穩(wěn)定的PCT3-116而得到的值相比，針對PCT1-116而建立的所述比值和濃度變化更直接地反映了患者的急性狀態(tài)。因此，選擇性地測定PCT1-116會得到重要的診斷進程。此外，特別當將通過新型方法的輔助、根據(jù)本發(fā)明的、PCT1-116的選擇性測定與傳統(tǒng)的總PCT(PCT總和)免疫反應性的測定結(jié)合起來時，情況更是如此。在需要快速檢測患者急性疾病狀態(tài)的情況下，根據(jù)本發(fā)明的方法具有特別的優(yōu)點。但是在原則上，所述的方法可以用于目前已知的方法已經(jīng)用于測定PCT免疫反應性的所用情況中。只要測定對于具有兩個氨基末端氨基酸(Ala-Pro)的PCT1-116是選擇性的，或者至少對位置2具有氨基酸(Pro)的降鈣素原是選擇性的，則所述的方法可以被認為是本發(fā)明的一部分。所選的具體的測定法形式起到了相對次要的作用，并且主要根據(jù)與測量技術有關的實際觀點來選擇具體的測定法形式。雖然使用了特定抗體(單克隆抗體)的夾層式特定方法由此在本申請的實驗部分中有所描述，并且用于測量，但是本發(fā)明不限于這種具體的方法或者相似種類的方法。而且本發(fā)明包括任何所需的免疫診斷方法，就本發(fā)明的內(nèi)容而言，這些診斷方法可以選擇性地測定PCT1-116,并且測量值不受到同時存在的其他PCT衍生物、特別是PCT3-116的影響。換言之，生物學樣品中PCT3-116的濃度不有助于或改變針對PCT1-116的選擇性測量的值。對于本領域的技術人員顯而易見的是，還可以使用例如竟爭類型的測定法(例如使用與PCT1-116竟爭的、固定的選擇性抗體和經(jīng)標記的/選擇性標記的分析物的類似物；或者使用固定的類似物和經(jīng)標記的選擇性抗體)或者其他測定法形式，例如所謂的比濁度測定法，而不使用所述的夾層式測定法。原則上，可以使用適用于診斷檢測的任何已知的標記物(即，如在加速測試中使用的那樣，可以使用例如放射性同位素、酶、熒光標記、其他化學發(fā)光標記或生物發(fā)光標記、以及可直接目測的顏色記號(例如金原子和染料顆粒)來替代實施例中使用的發(fā)光標記)。進一步明確包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的是將根據(jù)本發(fā)明的方法設計為加速測試，例如以免疫層析測定方法的形式。如果所述的方法被設計為這樣的多相方法(heterogeneousmethod)，其中固定形式的特異性粘結(jié)劑以與固相結(jié)合的形式存在和/或所述的反應產(chǎn)物至少部分固定在固相上，則所述的固相可以為任何所需的合適的固相，例如試管壁、顆粒狀固相(例如懸浮于反應溶液中的磁性顆粒)、或者免疫層析裝置的支承體形式的固相(用于加速測試)。在目前優(yōu)選的實施方案中，以多相夾層式免疫測定法來實施所述的方法，其中將一種抗體固定在經(jīng)涂敷的試管的壁(例如聚苯乙烯；"經(jīng)涂敷的管"；CT)上，或者固定于微孔板(例如聚苯乙烯)上，或者固定于顆粒(例如磁性顆粒)上，而另一種抗體具有殘基，該殘基代表了可直接檢測的標記或者允許與標記進行選擇性連接，并且起到檢測所形成的夾層結(jié)構(gòu)的作用。此外，還可以進行使用合適的固相的延時或隨后的固定。但是，所述的方法不必被設計成其中至少一種特異性粘結(jié)劑以固定形式存在的多相方法。此外，所有反應物和反應產(chǎn)物都可以以懸浮于均相液相中的形式存在，并且可以保留在其中用于測量。在這種情況下，優(yōu)選的是使用部分檢測系統(tǒng)來標記用于測定的兩種抗體，其中所述的檢測系統(tǒng)在兩種抗體被整合成單一的夾層時允許產(chǎn)生信號或觸發(fā)信號。這樣的技術可以具體被設計成熒光放大或熒光消滅檢測方法。特別優(yōu)選的此類方法涉及成對地使用待用的檢測試劑，例如在US-A-4822733，EP-B1-180492或EP-B1-539477中以及其中所引用的現(xiàn)有技術所述。這些方法可以進行這樣的測量，該測量直接在反應混合物中，選擇性地僅檢測在單一的免疫復合物中包含兩種標記成分的反應產(chǎn)物。例如，可以參見品牌TRACE(TimeResolvedAmplifiedCryptateEmission)或KRYPT0R⑧所提供的才支術，該4支術補充了上述申請中所述的教導。進一步假定，根據(jù)本發(fā)明的測定方法還可以作為所謂的多參數(shù)診斷的部分而有利地使用。此外，由此測定的參數(shù)為例如膿血癥和感染參數(shù)，這些參數(shù)可以選自例如抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、蛋白質(zhì)類總降鈣素原(PCT總和)、降釣素原3-116、CA125、CA19-9、S100B、S100A蛋白質(zhì)、LASP-1、可溶性細胞角蛋白片段(具體為CYFRA21、TPS和/或可溶性細胞角蛋白-1片段(sCY1F))、肽類inflammin和CHP、其他肽類激素原(具體例如有pro-ANP、pro-BNP、pro-腎上腺髓質(zhì)素、pro-內(nèi)皮素、pro-抗利尿激素及其可用于診斷的肽片段)、甘氨酸N-?；D(zhuǎn)移酶(GNAT)、氨甲酰磷酸合成酶l(CPSl)和C反應蛋白(CRP)、細胞因子(例如干擾素種類的細胞因子或其合適的片段)。在所述的多參數(shù)測定中，旨在同時測定針對多個參數(shù)的測量結(jié)果，或者平行測定針對多個參數(shù)的測定結(jié)果，并借助于例如計算機程序(其還利用了具有診斷意義的參數(shù)相關性)來對它們進行評價。特別重要的組合測量為PCT1-116與常規(guī)的PCT免疫反應性(PCT總和)的平行選擇性測量，根據(jù)本申請中所得的結(jié)果，所述的測量代表了樣品中總體測量的PCTl-116加上PCT3-116的濃度。關于該測量的優(yōu)點，可以明確地參見以下的實施例?？梢赃M一步將PCT1-116的選擇性測量與PCT3-116的選擇性測量相組合。本發(fā)明人還使用了選擇用于PCT3-116的單克隆抗體來實施了所述的組合測量(結(jié)果未示出)。由于在PCT1-116的蛋白水解降解過程中以恒定方式新形成的PCT3-116的濃度被直接包含在PCT3-116的濃度內(nèi)，從而使得評價對比測量變得更復雜。此外，似乎在PCT3-116的氨基末端可以發(fā)生進一步的蛋白水解降解，其結(jié)果導致所測量的結(jié)果為假陽性。因此，目前，PCT1-116與PCT3-116的選擇性測量的組合測量是不優(yōu)選的。在以下的實施例中，參見附圖，其中圖1示出了如實驗部分中更加詳細描述的，用于選擇性測定PCT1-116的夾層測定法的標準曲線；圖2示出了在釆用了單位為pmol/l的校正曲線之后，傳統(tǒng)的B.R.A.H.M.SPCTLIA的標準曲線；圖3示出了根據(jù)本發(fā)明的測定法得到的PCT1-116的濃度變化(三角形)與通過商業(yè)測定法(B.R.A.H.M.SPCTLIA;正方形)得到的PCT總和的濃度的對比測量，其中在各種情況下，都是基于第0天坐標系中的起始濃度的，并且都是在經(jīng)過重病特別護理的8位經(jīng)過連續(xù)治療的膿血癥患者的EDTA血漿中測定得到的；圖4示出了根據(jù)圖3，樣品中的PCT1-116與PCT總和的摩爾比的測定結(jié)果，并且其變化作為3天期間中時間的函數(shù)。實驗部分I.測定法的形成-肽的合成以及抗體的形成1.1.肽的合成合成以下多種肽來作為用于產(chǎn)生抗體的抗原組分，作為用于親合純化和表位圖語繪制的選擇性結(jié)合伴倡，以及作為潛在的標準品和竟爭者多種部分肽的節(jié)段是由pre-降鈣素原(pre-PCT;SEQIDNO:3)的已知氨基酸序列衍生得到的，對這些節(jié)段加以選擇，并通過標準的方法以化學方式合成為可溶性的肽。將得到的肽純化，并通過質(zhì)鐠和反相HPLC進行質(zhì)量控制，然后以等分的量凍干(JPT，Berlin,Germany)。所合成的多種肽的氨基酸序列如下(其中所述的氨基酸的位置是以pre-PCT為基礎的；氨基酸25對應于SEQIDNO:1中所示的PCT1-116的氨基酸1):PASIOAPFRSALESC25-33(SEQIDNO:4)(+C-末端半胱氨酸)PAD21AAPFRSALESSPADPATLSED24-44(SEQIDNO:5)PAD20APFRSALESSPADPATLSED25-44(SEQIDNO:6)PPD19PFRSALESSPADPATLSED26-44(SEQIDNO:7)PFD18FRSALESSPADPATLSED27-44(SEQIDNO:8)PRD17RSALESSPADPATLSED28-44(SEQIDNO:9)PSD16SALESSPADPATLSED29-44(SEQIDNO:10)PA簡APFRSALESSPADPATLSEDMSS25-44/122-141(SEQIDNO:11)DLERDHRPHVSMPQNAN1.2.對PCT1-116的N-末端具有特異性的抗體的形成、標記和表征1.2.1.單克隆抗體的形成和選擇例如，通過HarlowandLane(HarlowE.，LaneD."Antibodies一ALaboratoryManual",ColdSpringHarborLaboratory,1988,ISBN0-87969-314-2)所述，采用標準的方法來形成單克隆抗體。所述的形成方法以更詳細的方式概括如下通過MBS(m-馬來酰亞胺苯曱酰-N-羥基琥珀酰亞胺酯)，將肽PAS10(SEQIDN0:4;PCT1-116的氨基酸1至10)與栽體蛋白質(zhì)KLH(鑰孔血藍蛋白)綴合(參見"NHS-酯-馬來酰亞胺交聯(lián)劑"的操作說明書，得自PIERCE,Rockford，IL，USA)。使用所得的綴合體免疫Balb/c小鼠。在加強之后，隨后將小鼠的脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合。就來得自骨髓瘤細胞的培養(yǎng)物上清液的抗體的結(jié)合測試而言，將肽PAD20(SEQIDNO:6和PPD19(SEQIDNO:7;PCT1-116的氨基酸2-20)固定于微孔板上。就這一目的而言，將所述的肽以濃度為7lag/ml溶解于20m/M磷酸鈉，pH7.4，50mMNaCl中，并在每孔中吸出150|al。在4。C下溫育20小時。通過抽吸過濾所述的溶液。然后在每個孔中裝滿150ju1的10mM磷酸鈉，2%KarionFP，0.3%牛血清蛋白，pH6.5。在20小時后，通過抽吸過濾所述的溶液。將待測試的150|i1每種培養(yǎng)物上清液吸入到涂敷有PAD20(SEQIDNO:6)或PPD19(SEQIDNO:7)的微孔板的孔中。在22。C下溫育2小時。通過抽吸過濾所得的上清液。使用20mM磷酸鈉，pH7.4，50mMNaCl洗滌2次，并通過標準的方法使用二級抗小鼠抗體-堿性磷酸酶綴合體檢測結(jié)合的抗體(S簡A，Deisenhofen，Germany)。選擇如下細胞培養(yǎng)物來進行分離，所述的細胞培養(yǎng)物分泌與肽PAD20(SEQIDNO:6)的結(jié)合遠不及與肽PPD19(SEQIDNO:7)的結(jié)合的抗體。通過相同的方法篩選通過分離而得到的培養(yǎng)物上清液來作為初始細胞培養(yǎng)物。然后，以更大的規(guī)模培養(yǎng)在所述意義上為陽性的經(jīng)篩選的細胞克隆，并通過親合層析在蛋白質(zhì)G柱上純化所述的抗體，將3種所述的抗體作為用于免疫測定法中選擇性結(jié)合PCT1-116的潛在候選物來進行進一步的研究(所述抗體的內(nèi)部名稱為mAb295/3H12;mAb295/4G9;mAb295/4611)。1.2.2.抗體的制備對于三種所選抗體的表位特異性的表征以及隨后的測定法的形成而言，按照如下方式將所得的單克隆抗體用化學發(fā)光標記來進行標記在100mM辨酸鉀緩沖劑(pH8.0)中將各種抗體的濃度調(diào)節(jié)至1.5mg/ml。將67|i1的抗體溶液與10ji1的MA70吖啶NHS酯(1mg/ml;得自H0ECHSTBehring)混合，并在室溫下溫育15分鐘。然后，加入423ja1的1M甘氨酸，并另外溫育10分鐘。此后，根據(jù)操作說明書，將標記的一批抗體在NAP-5凝膠過濾柱(Pharmacia)上在lml的流動相A(50raM磷酸鉀，100mMNaCl，pH7.4)中再次緩沖，并從低分子量的組分中游離出來。進4亍凝膠過濾HPLC(柱WatersProteinPakSW300),來分開未與抗體結(jié)合的標記的最后的殘基。施加樣品，并將該樣品以流速lml/min用流動相A進行層析。使用流體光度計測定在波長為280nm和368nm下進行測量。吸收的比值368nm/280nm作為抗體標記程度的量度，其峰值為0.10+/-0.01。收集含有單體抗體的級分(保留時間為8-10rain),并將這些級分收集在3ml的100mM磷酸鈉，150mMNaCl,5%牛血清蛋白，0.1%疊氮化鈉，pH7.4中。1.2.2.3種所選單克隆抗體的表位的圖譜繪制就3種所形成的并選擇的單克隆抗體的表位的圖i脊繪制而言，將代表了降鈣素原的N-末端節(jié)段(參見I.I.;表l)的多種肽固定在試管上。按照上文微孔板的涂敷中所述來實施這一過程，不同之處在于吸取300jul的肽溶液，而并非吸取150jLil的肽溶液。將自的種化學發(fā)光標記的單克隆抗體在測定緩沖劑(100mM磷酸鈉，150mMNaCl，0.5%牛血清蛋白，0.1%非特異性小鼠IgG,0.1%疊氮化鈉，pH7.4)中稀釋，這樣得到90萬RLU(相對的光單位)/200p1的最終濃度。將200jj1份的這種溶液吸入到所述肽的試管中，然后在22。C下?lián)u動溫育2小時。然后使用lml份的洗滌溶液(O.l%Tween20)將每個試管洗滌4次，滴下溶液，并在照度計(得自BERTHOLD，LB952T;得自BRAHMSAG的堿性試劑)中測定與所述試管結(jié)合的化學發(fā)光情況。由下表1顯而易見的是，如果由pre-降釣素原(或降鈣素原)衍生的肽在N-末端的位置25處結(jié)束(肽PAD20;SEQIDNO:6)，則所有3種所選抗體(內(nèi)部名稱分別為mAb295/3H12;mAb295/4G9;mAb295/4Gll)都與這種肽良好地反應。如果缺少位置25(肽PPD19;SEQIDNO:7)，則僅可以實現(xiàn)邊緣結(jié)合，這解釋了針對單個的單克隆抗體的非特異性結(jié)合僅為大約2倍，分別低于針對具有位置25的肽PAD20的結(jié)合的199倍(mAb295/3H12),85倍(mAb295/4G9)或102倍(mAb295/4Gll)。因此，所述的抗體是高度特異性的，并且適用于區(qū)分在N-末端具有PCT1-116的位置1和2(pre-PCT的位置25和26)的降鉀素原肽與相對比的在N-末端僅具有1個氨基酸殘基的、被縮短的那些降釣素原肽。表1:表位的圖鐠繪制。測定的結(jié)合值以相對的光單位(RLU)表示。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>1.4.用于PCT1-116的特異性測量的夾層式免疫測定法的形成I.4.1.偶聯(lián)按照以下方式使用單克隆抗體(內(nèi)部名稱QN05)涂敷高度結(jié)合的5ml的聚苯乙烯試管(得自Greiner)，其中所述的單克隆抗體針對降4丐素原的C-末端節(jié)段的表位，而且還用于商業(yè)測定法B.R.A.H.M.SPCTLIA中，其所述的方式為將所述的抗體在50mMtris，lOOmMNaCl，pH7.8中稀釋至濃度為6.6jiig/ml。將300u1所述的溶液吸入到各試管中。將該試管在22。C下溫育20小時。通過抽吸過濾所述的溶液。然后，向各試管中裝滿4.2ml的10mM磷酸鈉，2%KarionFP，0.3%牛血清蛋白，pH6.5。在20小時后，通過抽吸過濾所述的溶液。最后，將所述的試管在真空干燥器中干燥。1.4.2.標記按照1.2.2中所述，單克隆抗體mAb295/3H12是化學發(fā)光標記的，該抗體特異性地識別PCT1-116的N-末端。I.4.3.免疫測定法的過程和評價將在馬的正常血清中系列稀釋的肽PAN40(SEQIDNO:ll)作為標準材料。將根據(jù)獲得肽重量的濃縮物作為由此制備的標準品。按照以下過程來進行夾層式免疫測定法將50p1的標準品或樣品、以及15(^1含有50萬RFU(相對的光單位)的MA7Q標記抗體的測定緩沖劑(IOOmM磷酸鈉，150mMNaCl，0.5%牛血清蛋白，0.1%非特異性小鼠IgG，0.1%疊氮化鈉，pH7.4)吸入到涂敷有抗體的測試試管中。在22。C下?lián)u動溫育3小時。然后使用lml份的洗滌溶液(O.1%Tween20)將每個試管洗滌4次，滴下、溶液，并在照度計(得自BERTHOLD，LB952T;得自BRAHMSAG的堿性試劑)中測量與所述試管結(jié)合的化學發(fā)光情況。使用軟件MulUCalc(SplineFit),從標準曲線上讀取樣品的PCT1-116的濃度。典型的標準曲線如圖1所示。所述的測試具有功能性測定法靈敏度(FAS)為6pmo1/1，其被定義為這樣的濃度，在該濃度下，IO次獨立測試的平均值的變化系數(shù)為20%。在上文所述的抗體295/3H12的表位特異性實驗之后，進行研究以測定由降4丐素原衍生的、并缺少第一個N-末端氨基酸的肽的測定法交聯(lián)反應性濃度為37433pmo1/1的PCT2-116(InVivoGmbH，Hennigsdorf，Germany;jt匕夕卜參見EP1408334)才羊品孝皮測量為206pmo1/1。因此，交聯(lián)反應性僅為O.5%。II.對分析物穩(wěn)定性以及膿血癥患者的人血漿的測量II.1.樣品中的分析物穩(wěn)定性首先，根據(jù)I所述的PCT1-116測定法中的測量性能，來研究得自膿血癥患者樣品中的天然PCT1-116的穩(wěn)定性。就這一目的而言，由IO名膿血癥患者得到EDT血漿和血清樣品，然后立即測定，再根據(jù)上文所述的測定法在22。C下儲存6小時。平均而言，在6h后，血漿的免疫反應性僅降低3.6%，最大的個體降低為7.6%。另一方面，血清的免疫反應性平均降低13.5%，在降低的情況中，可以觀察到相當大的個體差異。特別是在血清中，所觀察到的PCT1-116的個體穩(wěn)定性的差異(其反應了可能的個體差異的酶活性)是指例如為了將PCT1-116的固定起始濃度發(fā)生純粹的降低的情況與PCT1-116的持續(xù)分泌或再次分泌被疊加給所述的濃度降低的情況區(qū)分開，不可以直接將個體患者樣品中PCT1-116的可測量的濃度變化與用于除去循環(huán)系統(tǒng)中的PCT1-116的、廣泛使用的參照值相關聯(lián)。降鈣素原(其通過傳統(tǒng)的B.R.A.H.M.SPCTLIA方法作為PCT免疫反應性或"PCT總和，，表測量)在22。C下儲存6小時后，在血清樣品中是穩(wěn)定的。B.R.A.H.M.SPCTLIA為夾層式免疫測定法，該方法使用了對抗C-末端節(jié)段(抗鉤素原級分)或中間區(qū)域節(jié)段(降釣素級分)的表位的單克隆抗體。為了可以進行對比考慮，將制造商指定為標準品的濃度ng/ml轉(zhuǎn)換成pmo1/1。典型的標準曲線如圖2所示。所述的測試具有功能性測定法靈敏度(FAS)為20pmo1/1,其被定義為這樣的濃度，在該濃度下，IO次獨立測試的平均值的變化系數(shù)為20%。認為，所述分析物PCT1-116在人EDTA血漿中測定的穩(wěn)定性通常足可以用于臨床實踐。但是，如果存在這樣的風險，即，由來自樣品的各自EDTA血漿不能在足夠短的時間內(nèi)進行測量，則需要向所述的樣品中加入針對二肽基-氨基肽酶IV(DAPIV)的合成抑制劑，從而防止DAPIV將PCT1-116降解成PCT3-116，而這也被包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)(例如Lys[Z(N02)]-四氫噻唑或Pro-Pro(p)[OPh-4Cl]2;參見WRENGERS，KAHNET，B0HU0NC，WEGLOHNERW，ANS0RGES，REINHOLDD:Amino—terminaltruncationofprocalcitonin，amarkerforsystemicbacterialinfections,bydipeptidylpeptidaseIV(DPIV)，F(xiàn)EBSLett2000;466:155-9)。此外，可任選地，如果其他酶有助于樣品中PCT1-116濃度的降低，當然還可以使用破壞性酶作用的其他抑制劑。II.2.臨床值的測量II.2.1.成功治療感染的動力學由于患者治療方案中的安全性由此增加，并減少在加護病房中昂貴的停留，所以理想的是早期且可靠地識別膿血癥患者的治療的成功。為了檢查這樣的問題，即，根據(jù)本發(fā)明的、使用了上文所述的夾層式測定法的PCT1-116的測量是否可以得到能夠區(qū)分那些PCT免疫反應性("PCT總和")傳統(tǒng)的測量的結(jié)果，采用了以下的過程每天，從8位膿血癥患者得到血漿樣品，其中所述的膿血癥患者在加護病房中獲得成功治療。在治療開始時以及其后的2天中測量PCT總和(通過傳統(tǒng)的B.R.A.H.M.SPCTLIA測量；參見上文)和PCT1-116。在測量開始時，PCT1-116的中間濃度為100.6pmol/l，PCT總和的濃度為591.8prao1/1(初始濃度的摩爾比為大約0.17)。與PCT總和的濃度相比，PCT1-116的濃度明顯下降的更快根據(jù)第0天的情況，在第1天，PCT1-116降低32%;第2天，PCT1-116降低52%。與此截然不同的是，在第1天，PCT總和的降低僅為11%，而第2天PCT總和的降低僅為30%(參見圖3)?？紤]到基于降鉀素原分泌的降低而盡可能快地識別成功治療的診斷目的，目前可以提出這樣的與時間有關的問題，即，在所述的時間后，上文所比較的兩種測定法能夠使降低情況被完全識別。如果考慮到內(nèi)部測定法的變化，大概真實的情況是降低大約20%可以認為是可靠的檢測。在PCT1-116的測量中，僅在0.6天之后便可檢測這種降低，但是在傳統(tǒng)的PCT免疫反應性(PCT總和)測量中只有在1.2天之后才能檢測到這種降低。因此，與PCT免疫反應性("PCT總和")的傳統(tǒng)測量相比，在PCT1-116的測量中，實質(zhì)上可以更快并且更可靠地檢測治療的成功。就對測量數(shù)據(jù)的進一步評價而言，針對每個患者和每個測量時間計算PCT1-116與PCT總和的各自的摩爾比。在進行觀察的3天中，以中值表示的所述比值由0.17降至0.15,再降至0.12(圖4)。所述的評價還反映了PCT1-116和PCT總和的不同的降解動力學。簡單地表述為，事實上PCT1-116的降低直接反應了其降解或低穩(wěn)定性，而"PCT總和"的降低則反映了PCT3-116的降解或其穩(wěn)定性。由于PCT1-116轉(zhuǎn)化為PCT3-116不應該較大程度地影響PCT總和測定中的測量，因為傳統(tǒng)的方法不能區(qū)分PCT1-116和PCT3-116，所以PCT1-116轉(zhuǎn)化為PCT3-116的速率不會顯著地影響PCT總和的濃度降低，這種情況基本上與樣品中積聚的更穩(wěn)定的PCT3-116所發(fā)生的降低相對應。上述考慮表明，PCT1-116與PCT總和的比值較小(即，在PCT1-116的濃度較低的同時，PCT總和的濃度相對的較高)則指示感染的結(jié)束，而PCT1-116與PCT總和的比值較大則指示接近PCT開始分泌的時間，并因此指示了高度急性的感染。上述觀察不僅涉及對進展情況的觀察，而且涉及在例如對門診患者進行緊急入院或醫(yī)學治療時對患者的感染狀態(tài)進行初始評估。II.2.2.在繼發(fā)感染情況下的動力學在膿血癥患者處于加護病房中的過程中，他們由于脆弱的免疫系統(tǒng)經(jīng)?；忌掀渌母腥荆@些感染特別是威脅生命的，并且可能具有致命的作用。對這種繼發(fā)感染檢測的越早，便可以更快更有效地啟動治療對策。但是，由于已知的內(nèi)毒素耐受性現(xiàn)象，繼發(fā)感染會導致PCT總和濃度發(fā)生不明顯的升高。早期檢測細菌再感染(在已經(jīng)臨時減少或者甚至終止的PCT分泌中，所述的細菌再感染與隨后發(fā)生的并不明顯的PCT升高有關)是特別復雜的，這是因為由于初次感染使得患者已經(jīng)具有相當高的PCT總和濃度，由于PCT3-116的穩(wěn)定性高，所以即使進行了成功的治療，PCT總和的濃度也是相對緩慢地減少。如上文所示，與PCT總和(其中主要的部分為PCT3-116)相比，PCT1-116具有基本上更快的體內(nèi)降解動力學。如果假定PCT1-116在其降解的第一個步驟中便被轉(zhuǎn)化為PCT3-116，則PCT1-116的濃度的降低(絕對值較低)與PCT總和的值的升高是不對應的。它們僅以新的PCT1-116的生成速率而升高。在已經(jīng)充分地經(jīng)受并且不再為急性感染的情況(即，在繼發(fā)感染之前)下，的PCT1-116的可測量濃度應該是相對較低的，但是由于PCT3-116的穩(wěn)定性(此時這種穩(wěn)定性可能主要幫助形成了PCT總和的測量濃度)，使得PCT總和的濃度的絕對值仍保持較高。因此，根據(jù)PCT1-116的測定值，可以在早期階段測定由繼發(fā)感染而誘導的、PCT分泌的隨后增多，而基于絕對項中PCT總和的、高得多的測量值，PCT分泌的增多是不可檢測的，或者是不可明確檢測的。對在PCT總和測量中一起測量的PCT1-116和PCT3-116濃度的考慮，得到這樣的結(jié)論，在由初次感染而導致的PCT3-116高濃度的相對緩慢的降低、以及由繼發(fā)感染而導致的PCT的隨后增多的影響下，不可能在總的PCT發(fā)生可測量的增多時立刻測定出PCT分泌的開始，而是僅僅在PCT總和濃度的降低發(fā)生很難測定的減少的初期來測定PCT分泌的開始，其中與PCT3-116的清除速率相比，所述的PCT總和濃度的降低發(fā)生很難測定的減少是更緩慢的。因此，進行研究以確定從所形成的PCT1-116的濃度發(fā)生升高或者降低至通常與穩(wěn)定性相關的、減少的PCT1-116的濃度以下(其與所形成的PCT總和的濃度基本不同)的意義上來說，所述的PCT1-116的濃度是否預示了在隨后的一天PCT總和隨后也發(fā)生了增多，作為繼發(fā)感染的跡象。每天，從在加護病房病房中平均停留10.8天的44名膿血癥患者中取得血漿，在所述的血漿中平行測定PCT總和以及PCT1-116,并在測定期間針對每個單獨的患者檢測其濃度曲線。觀察到，在隨后的一天PCT1-116的增多是PCT總和的增多的6倍，而PCT總和仍降低。在7種其他的情況(在各種情況下PCT總和發(fā)生連續(xù)減少)下，觀察到PCT1-116的濃度的降低發(fā)生減少，即，比其他樣品中發(fā)生的降低要慢，這與繼發(fā)感染的發(fā)生有關。PCT總和的濃度沒有發(fā)生顯著程度的變化。僅僅在隨后的一天出現(xiàn)了隨后發(fā)生的可檢測的PCT總和增多的跡象。在本發(fā)明的范圍內(nèi)還使用了那些濃度為"隱藏"增多的PCT1-116，而這種情況尚未顯現(xiàn)在監(jiān)測用于檢測繼發(fā)感染的治療膿血癥患者的過程中，使用了適用于該目的的合適的監(jiān)測和評價技術、以及數(shù)學模型來監(jiān)測PCT的總和?？傮w而言，據(jù)信，PCT1-116的降低(與PCT總和相比，其是減少的)或者甚至在隨后的一天PCT1-116發(fā)生增多預示PCT總和以高度特異性、甚至靈敏的方式發(fā)生增多(其表明發(fā)生了繼發(fā)感染)。鑒于上文所述的結(jié)果，本發(fā)明人考慮了根據(jù)本發(fā)明的方法來對PCT1-116進行的選擇性的測定，其為通過主要識別PCT3-116的測定方法來檢測PCT(總和)的備選方法。在所有的情況下都可以測定PCT1-116,其中已經(jīng)證明PCT(總和)的測定可用于醫(yī)學診斷領域中。具體而言，采用選擇性測定PCT1-116來用于診斷、差異診斷、風險分層、預后、疾病過程的估測以及治療測量的控制是本發(fā)明所預計的，或者被考慮特別用于與感染有關的人類患者，其中所述的感染特別為革蘭氏陰性或革蘭氏陽性細菌的感染、真菌的炎性和/或寄生蟲致病因子的感染，這些感染可以導致局部限定的或系統(tǒng)性的感染應答(例如膿血癥、嚴重的膿血癥和膿血癥休克)，以及在心力衰竭患者經(jīng)歷共病的情況下，以及另外用于遭受冠狀動脈病(CAD)的患者的分層和預后的風險。權(quán)利要求1.用于診斷目的的、測定降鈣素原和降鈣素原衍生物的免疫診斷方法，其特征在于在患者的生物學樣品中選擇性地測定那些分子形式的降鈣素原或由其衍生的降鈣素原部分肽，其中在所述的生物學樣品中還存在不被共同測定的降鈣素原3-116，并且該降鈣素原3-116不會顯著影響測量值，其中所述的部分肽具有在完整降鈣素原1-116(SEQIDNO1)的氨基末端的位置1和2處的氨基酸甘氨酸和脯氨酸(Ala-ProAP)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于使用至少一種抗體來進行測定，其中所述的抗體需要具有完整降鈣素原l-116序列(SEQIDN0:l)的位置1和2的氨基酸中至少1個的降鈣素原序列用于其特異性結(jié)合。3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于所述的抗體需要存在降鈣素原1-116完整序列(SEQIDNO:l)的位置1和2的2個氨基酸用于其特異性結(jié)合。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3的任意一項中的方法，其特征在于所述的至少1種抗體為單克隆抗體或多克隆抗體，例如通過親合層析純化的多克隆抗體。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4的任意一項中的方法，其特征在于所述的生物學樣品為生物學流體，其選自血液和血液級分，特別是血清或血漿、以及腦脊液(CSF)。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5的任意一項中的方法，其特征在于作為疾病診斷的部分來實施該方法，其中所述的疾病選自局部或全身感染、發(fā)炎、膿血癥和神經(jīng)退行性疾病。7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其特征在于在監(jiān)測和控制治療、或者在監(jiān)測一種所述的疾病的進程中來實施該方法。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7的任意一項中的方法，其特征在于該方法被設計為用于及時現(xiàn)場護理診斷的免疫層析方法，或者另一種加速測試。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8的任意一項中的方法，其特征在于作為多參數(shù)測定方法的部分來來實施該方法。10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其特征在于作為釆用了芯片技術的多參數(shù)測定方法的部分、和/或作為使用了計算機輔助評價測量結(jié)果的自動4匕方法的部分來實施該方法。11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其特征在于在多參數(shù)測定方法中，測定與膿血癥診斷有關的至少一種其他參數(shù)。12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其特征在于所述的與膿血癥診斷有關的一種或多種其他參數(shù)選自總的降4丐素原、降釣素原3-116、CA125、CA19-9、S100B、S100A蛋白質(zhì)、LASP-1、可溶性細胞角蛋白片段(具體為CYFRA21、TPS和/或可溶性細胞角蛋白-l片段(sCY1F))、肽類inflammin和CHP、激素原pro-ANP、pro-BNP、pro-腎上腺髓質(zhì)素、pro-內(nèi)皮素、pro-抗利尿激素及其可用于診斷的片段、甘氨酸N-?；D(zhuǎn)移酶(GNAT)、氨甲酰磷酸合成酶l(CPSl)和C反應蛋白(CRP)及其片段、以及細胞因子。13.僅與完整的降釣素原1至116(SEQIDNO:1)或降4丐素原衍生物選擇性結(jié)合的抗體，所述降鈣素原衍生物具有降鈣素原氨基酸序列或降釣素原氨基酸的部分序列，其中所述的部分序列具有完整降鈣素原1至116序列(SEQIDNO:1)的氨基末端的氨基酸1和2中的至少一個、優(yōu)選的是具有所述氨基酸1和2中的兩個。14.根據(jù)權(quán)利要求13的抗體，該抗體是通過使用抗原對動物免疫而獲得的，其中所述的抗原為與肽形成綴合體的形式，其中所述的肽是或者包含SEQIDNO:4所示的肽。15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的抗體，其為單克隆抗體。16.用于實施根據(jù)權(quán)利要求1至7的任意一項中的方法的試劑盒，除了常規(guī)的緩沖劑和洗滌液以外，所述的試劑盒至少包含-根據(jù)權(quán)利要求13、14和15的任意一項中的至少1種抗體，其是與固相結(jié)合形式的、或者經(jīng)標記或選擇性可標記形式；以及-肽形式的竟爭劑或標準化合物，其中所述的肽包含完整降鈣素原1至116(SEQIDN0:1)氨基酸序列中的至少氨基酸1至6，并且所述的肽選擇性地與至少1種抗體結(jié)合。17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其特征在于所述的竟爭劑與固相結(jié)合，或者是經(jīng)標記或選擇性可標記的。18.用于實施根據(jù)權(quán)利要求1至7的任意一項中的方法的試劑盒，除了常規(guī)的緩沖劑、洗涂液以及可任選的用于信號檢測或信號形成的物質(zhì)以外，所述的試劑盒至少包含-根據(jù)權(quán)利要求13、14和15的任意一項中的第一抗體；以及-第二抗體，其選擇性地與完整的降釣素原1至116(SEQIDNO:l)的、任何所需的氨基酸部分序列選擇性結(jié)合，其中所述的序列不包含降鈣素原氨基末端的氨基酸1和2。19.根據(jù)權(quán)利要求18的試劑盒，其中所述的2種抗體中的1種抗體以與固相結(jié)合的形式存在，而另一種抗體以經(jīng)標記或選擇性可標記的形式存在。20.根據(jù)權(quán)利要求18的試劑盒，其中2種抗體以適于分散于液相中的形式存在，第一標記成分是基于熒光或化學發(fā)光消滅或放大的、與所述的第一抗體結(jié)合的標記系統(tǒng)的部分，而該標記系統(tǒng)的所述第二標記成分與所述的第二抗體結(jié)合，這樣在所述的2種抗體與待檢測的肽片段結(jié)合后，便在所述的測量溶液中產(chǎn)生可以檢測所得的夾層式復合物的可測量信號。21.根據(jù)權(quán)利要求20的試劑盒，其中所述的標記系統(tǒng)包含與熒光或化學發(fā)光染料，特別是花青類型的染料組合的稀土穴狀化合物或螯合物。22.根據(jù)權(quán)利要求14至21的任意一項中的試劑盒，該試劑盒還包含額外的成分，即通過抑制二肽基-氨基肽酶IV(DAPIV;DPIV;CD26)的酶作用，用于穩(wěn)定生物學樣品的化合物。全文摘要本發(fā)明涉及用于診斷目的的、測定患者的生物學樣品中的降鈣素原和降鈣素原衍生物的免疫診斷方法，其中所述的診斷目的具體而言為監(jiān)測和控制治療情況，以及監(jiān)測局部或系統(tǒng)性細菌感染、發(fā)炎、膿血癥或神經(jīng)退行性疾病的進程，其中選擇性地測定那些分子形式的降鈣素原、或由其衍生的降鈣素原部分肽，其中所述的肽在完整降鈣素原1-116(SEQIDNO1)的氨基末端的位置1和2處具有氨基酸甘氨酸和脯氨酸(Ala-Pro，AP)，并且本發(fā)明還涉及實施上述方法的抗體和試劑盒。文檔編號G01N33/74GK101617230SQ200880005375公開日2009年12月30日申請日期2008年2月21日優(yōu)先權(quán)日2007年2月28日發(fā)明者A·貝格曼,J·施特魯克申請人:B.R.A.H.M.S股份公司